一种中药组合物及其应用与制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药领域，尤其涉及一种中药组合物及其应用与制备方法。
【背景技术】
[0002] 黄褐斑俗称"蝴蝶斑"，"肝斑"或者"妊娠斑"，一种获得性色素沉着皮肤病，表现为 色素对称性沉着，主要发生在面部，以颧部、颊部、鼻、前额、颏部为主，轻者为淡黄色或浅褐 色；重者呈深褐色或浅黑色。多发于中青年女性，是临床上常见而又难以治愈的皮肤病之 一。流行病学显示黄褐斑多发生于女性，而且随年龄增长，病情加重。并且大多数患者伴有 不同程度的月经失调、失眠、心烦易怒等内分泌及植物神经功能紊乱，给患者带来生活及精 神方面诸多烦恼和痛苦。
[0003] 中医学认为，黄褐斑的发生多由于肾阴不足，肾水不能上承，或肝郁气结、肝失条 达，郁久化热，灼伤阴血，致使颜面气血失和而发病。临床上黄褐斑患者常出现月经不调、腰 膝酸软等肾阴不足之证，或表现出性格抑郁、情志不畅、急躁易怒等肝气不舒症状。而现代 医学认为，黄褐斑主要是由于黑色素在皮肤内增多而引起，黑素细胞增多和黑色素生成增 多是引起黑色素增多的两个主要因素。紫外线、内分泌、遗传、氧自由基、微生物等因素是引 起黑色素增多的因素。另外，还有研宄发现，黄褐斑的形成与下列因素有关：内分泌失调、妊 娠雌激素和孕激素水平、口服避孕药、子宫卵巢疾病、遗传因素、氧自由基、紫外线照射、血 清铜含量、甲乙型肝炎、胆囊炎、酪氨酸功能障碍、化妆品、光毒性药物、抗癫痫药及情绪波 动等。
[0004] 因此，从中医辨证论治的角度，大多是理气活血，疏肝解郁，调和心脾等整体辨证 论治治疗本病，从现代医学治疗的角度，主要从抑制黑色素的生成酶即酪氨酸酶，调节体内 雌孕激素水平，清除自由基和脂质过氧化物等方面治疗。
[0005] 目前市场上流通的声称具有祛斑作用的产品种类繁多，既包括定位于美容修饰作 用的膏霜、乳液、水剂型态的化妆品，也包括胶囊、口服液等用于内服的保健食品，此外，还 有一些针对皮肤病变而产生的斑点为治疗目的的外用药品。这些产品中，大多数包括中药 组合物或中药提取物的组合物。中药或中药提取物配伍是否合理决定着这些产品能够起到 很好的治疗黄褐斑是作用。不合理的配方不但不能达到治疗黄褐斑的作用，反而可能会导 致黄褐斑的加重。
[0006] 因此，进一步开发配伍合理，能够有效治疗黄褐斑的中药组合物十分必要。
【发明内容】
[0007] 有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种能够有效治疗黄褐斑的中药组 合物及其应用制备方法。
[0008] 本发明提供了一种中药组合物，由以下原料制得：葛根、当归、白芍、牡丹皮和茯 苓。
[0009] 在本发明的实施例中，本发明提供的中药组合物由以下质量份的原料制得：葛根 1份~8份、当归1份~10份、白苟1份~6份、牡丹皮1份~8份、茯苳1份~6份。
[0010] 在一些实施例中，本发明提供的中药组合物由以下质量份的原料制得：葛根3 份~5份、当归4份~6份、白芍2份~4份、牡丹皮3份~5份、茯苓2份~4份。
[0011] 在一些实施例中，本发明提供的中药组合物由以下质量份的原料制得：葛根4份、 当归5份、白芍3份、牡丹皮4份、茯苓3份。
[0012] 在一些实施例中，本发明提供的中药组合物由以下质量份的原料制得：葛根5份、 当归6份、白芍4份、牡丹皮5份、茯苓4份。
[0013] 在一些实施例中，本发明提供的中药组合物由以下质量份的原料制得：葛根3份、 当归4份、白芍2份、牡丹皮3份、茯苓2份。
[0014] 黑色素是一种生物多聚体，广泛存在于人和动物的皮肤、毛发和眼睛中。黑色素的 生成与酪氨酸酶密切相关，其主要发生在黑色素细胞中。黑色素的的形成过程大致如下：体 内酪氨酸在酪氨酸酶催化下形成3, 4-二羟基苯丙氨酸（即多巴）、多巴进一步氧化形成多 巴醌、多巴醌经多聚合反应与氧化反应生成多巴色素、多巴色素又经一系列羟化反应、脱羧 反应、氧化反应形成5,6-吲哚醌，再与其他中间产物结合形成黑色素。因此，黄褐斑的形成 与黑色素细胞活性以及体内存在的酪氨酸酶活性密切相关，鉴于此，本发明在相关的药效 实验过程中选择了检测小鼠 B-16黑素瘤细胞活性、酪氨酸酶活性以及黑色素生成量来探 讨本专利发明组合物对于黄褐斑的祛除效果。
[0015] 本发明通过比较不同拆方组的结果发现缺葛根、当归、白芍、牡丹皮、茯苓对于抑 制小鼠 B-16黑素瘤细胞活性、酪氨酸酶活性以及黑色素生成的作用依次减弱，且葛根、当 归、白芍的添加与否对于结果具有显著影响。说明，本发明提供的中药组合物具有合理的配 方，其中各组分缺一不可。
[0016] 本发明提供的中药组合物在制备祛除黄褐斑的产品中的应用。
[0017] 实验结果表明：（1)本发明组合物在极低浓度时，可刺激B16细胞的增殖；但当其 浓度介于50 μ g/ml-350 μ g/ml时，随浓度增高，抑制作用增强；当本发明组合物浓度大于 350 μ g/ml时，对B-16黑色素瘤细胞增殖的抑制作用趋于平衡，不再增强；（2)本发明组合 物在极低浓度时，对酪氨酸酶活性有一定促进作用，但当其浓度介于100 μ g/ml-300 μ g/ml 时，随浓度增高，抑制作用增强；当本发明组合物浓度大于300 μ g/ml时，对酪氨酸酶活性 抑制作用趋于平衡，不再增强；（3)本发明组合物在极低浓度时，对黑色素生成有一定促进 作用，但当其浓度介于50 μ g/ml-100 μ g/ml时，随浓度增高，抑制作用增强；当本发明组合 物浓度大于100 μ g/ml时，对黑色素生成抑制作用趋于平衡，不再增强。可见，本发明提供 的中药组合物能够抑制小鼠 B-16黑素瘤细胞活性、酪氨酸酶活性以及黑色素生成，表明本 发明提供的中药组合物能够具有去除黄褐斑的作用。
[0018] 在本发明的实施例中，祛黄褐斑的产品为口服产品。
[0019] 作为优选，口服产品的剂型为片剂、丸剂、胶囊剂、饮液或颗粒剂。
[0020] 作为优选，祛黄褐斑的产品为保健品、食品或药物。
[0021] 本发明还提供了一种祛除黄褐斑的产品，包括本发明提供的中药组合物。
[0022] 作为优选，祛除黄褐斑的药物包括本发明提供的中药组合物及药学上可接受的辅 料。
[0023] 优选的，药学上可接受的辅料为：稀释剂、吸收剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑 剂、包衣材料或胶囊材料中任一种或两者以上的组合。
[0024] 作为优选，祛除黄褐斑的保健品包括本发明提供的中药组合物及保健品中可接受 的辅料。
[0025] 优选的，保健品中可接受的辅料为：微晶纤维素、二氧化硅、预胶化淀粉、硬脂酸 镁、交联羧甲基纤维素钠、甲基硅油、乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、甜菊糖苷、玉米淀粉、小麦 淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄芪胶、聚乙烯吡咯烷酮或磷酸钙中任一种或两者以上 的组合。
[0026] 作为优选，祛除黄褐斑的食品包括本发明提供的中药组合物及食品中可接受的原 料和辅料。
[0027] 优选的，辅料为柠檬酸、苹果酸、山梨酸钾、马铃薯淀粉、玉米淀粉、小麦淀粉、微晶 纤维素、乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇、甜菊糖甙、羟丙纤维素、羧甲基纤维素钠、明胶、大豆 油、黄芪胶、氯化钠、氯化钾或磷酸钙。
[0028] 优选的，原料为蜂蜜、蜂王浆或蜂胶。
[0029] 本发明提供的中药组合物的制备方法，包括：将葛根、当归、白芍、牡丹皮和茯苓以 水提取后浓缩，得到中药组合物。
[0030] 作为优选，水的质量为葛根、当归、白芍、牡丹皮和茯苓质量之和的10倍。
[0031] 作为优选，提取的时间为2h，温度为90~100°C。
[0032] 作为优选，提取的次数为2次。
[0033] 作为优选，浓缩采用真空浓缩。
[0034] 作为优选，浓缩至密度为I. 2g/mL~I. 5g/mL。
[0035] 本发明提供了一种中药组合物，由以下原料制得：葛根、当归、白芍、牡丹皮和茯 苓。本发明通过比较不同拆方组的结果发现缺葛根、当归、白芍、牡丹皮、茯苓对于抑制小鼠 B-16黑素瘤细胞活性、酪氨酸酶活性以及黑色素生成的作用依次减弱，且葛根、当归、白芍 的添加与否对于结果具有显著影响。说明，本发明提供的中药组合物具有合理的配方，其中 各组分缺一不可。
【具体实施方式】
[0036] 本发明提供了一种中药组合物及其应用与制备方法，本领域技术人员可以借鉴本 文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术 人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳 实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对本文所述的方 法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0037] 本发明采用的原料皆为普通市售品，皆可由市场购得。
[0038] 其中，小鼠 B-16黑素瘤细胞株，由华神集团提供；
[0039] 酶标仪：Bio_Rad，Model 550 ;
[0040] 尚;L·、机：LDZ5_2，北足医用尚;L·、机J~ ；
[0041] 倒置显微镜：Nikon DEAPHOT Fx-35DX ;
[0042] 二氧化碳细胞培养箱：BNA-311，ESPEC ;
[0043] 精密电子天平（精密度0.0 lg) :EB-3200D，日本岛津；
[0044] 电子天平（精密度0.0 Olg) :JA1003A，上海精天电子仪器有限公司；
[0045] 离心沉淀器：80_2,上海手术器械厂；
[0046] 连续定量可调移动移液枪：10ul-100ul、20ul-200ul、100-1000ul、l-5ml，芬兰雷 勃 Finnpipette ;
[0047] 石英紫外线杀菌灯：扬州通达卫生器械有限公司；
[0048] 智能立式不锈钢灭菌器：LDZM-40KCS，上海申安医疗器械有限公司；
[0049] SOD试剂：南京建成生物工程研宄所提供，批号20031225 ;
[0050] MDA试剂：南京建成生物工程研宄所提供，批号20031226 ;
[0051] 硫化钠：500g/瓶，化学纯，成者化学试剂厂，批号980923 ;
[0052] 生理盐水：0· 9%氯化钠注射液，500ml :4. 5g。国药准字H51021158,四川科伦大药 厂有限责任公司，批号20030921-18 ;
[0053] RPMI-1640 :GIBC0 公司；
[0054] 胎牛血清、胎牛血清：HyClone公司；
[0055] L多巴：美国Slpa公司产品，批号D9628 ;
[0056] 胰蛋白酶：上海华美生物公司产品，批号2186 ;
[0057] MTT，SDS，ConA，琼脂：Sigma 公司；
[0058] 另有谷氨酰胺，青霉素，庆大霉素，Tris Base及其它国产分析纯试剂。
[0059] 下面结合实施例，进一步阐述本发明：
[0060] 实施例1中药组合物的制备
[0061] 取葛根40g、当归50g、白芍30g、牡丹皮40g、茯苓30g，清洗干净后备用；加1900g 饮用水，100°C，提取2次，每次2小时，过滤得滤液；将滤液进行真空浓缩至密度为I. 2g/ cm3~I. 5g/cm3,获得中药组合物。
[0062] 实施例2中药组合物的制备
[0063] 取葛根50g、当归60g、白芍40g、牡丹皮50g、茯苓40g，清洗干净后备用；加2400g 饮用水，100°C，提取2次，每次2小时，过滤得滤液；将滤液进行真空浓缩至密度为I. 2g/ mL~I. 5g/mL，获得中药组合物。
[0064] 实施例3中药组合物的制备
[0065] 取