治疗骨关节炎的组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医学和生物医学工程领域，具体涉及一种治疗骨关节炎的生物制品及 其制备方法。
【背景技术】
[0002] 骨性关节炎是一种以关节软骨的变性、破坏及骨质增生为特征的慢性关节病，发 病率高，在老年人口中十分常见，60岁以上的人群中患病率可达50%，75岁以上的人群中则 达80%。骨关节炎患者的关节疼痛常使患者难以忍受，患者发病后致残率高。现有的治疗 骨关节炎的药物能在一定程度上延缓病程、改善患者症状，缓解患者疼痛，但不能逆转病理 过程，不能根治骨关节炎，且大部分药物副作用明显。而外科手术治疗主要通过关节镜（窥 镜）、开放手术或人工关节置换，虽然能暂时缓解疼痛，但长远效果（>1〇年）并不理想。干 细胞等细胞治疗法是目前最有希望彻底解决骨关节炎治疗的新方法。
[0003] 骨关节炎常发生软骨缺损，但软骨的自身修复能力有限，通常可以将软骨修复作 为骨关节炎治疗的最重要评价指标。近十年来，干细胞移植治疗骨关节炎已有大量研究报 道。干细胞注入骨关节炎关节后，能发挥免疫调节作用，炎症反应调节作用，减少疼痛；分泌 抗凋亡因子和抗纤维化因子抑制病情进展；分泌TGF-β、BMP_4等因子，促进内源性干细胞 软骨修复；还能分化为软骨细胞帮助修复软骨。
[0004] 目前骨关节炎的干细胞治疗研究大多采用骨髓来源的间充质干细胞，脂肪多能细 胞治疗骨关节炎也已有大量文献报道，临床前研究和临床研究显示骨髓间充质干细胞和脂 肪多能干细胞都有可能改善病情，并有增加软骨含量报道，但离完全恢复关节还有一定距 离。骨髓间充质干细胞获取需穿刺骨髓，对供体造成较大伤害，相比而言从脂肪获取多能细 胞更具优势，1)取材对人体损伤小；2)脂肪中具CFU-F形成能力的多能细胞含量高于1%， 而骨髓中小于〇. 001% ;3)脂肪来源丰富，多能细胞的含量多；4)脂肪来源细胞增殖能力较 骨髓间充质干细胞强。因此脂肪多能干细胞治疗骨关节炎更具优势。
[0005] 基质血管成分含有脂肪多能细胞，并含有多种其他类型细胞，最早是采用酶消化 方法从脂肪组织获得，可经过提取纯化分离出出脂肪多能干细胞。基质血管成分对骨关节 炎治疗也具有治疗效果，并且基质血管成分从分离到移植2-3小时，能减少移植时间，且价 格便宜，还能减少细胞培养中的风险，但是含有的脂肪多能细胞含量少。同时基质血管成分 中含有⑶34+⑶31-和⑶34+⑶31+的多能细胞，具有较强的促进血管再生能力，而经培养后 的脂肪多能细胞CD34+表达减少或消失。
[0006] 富含血小板的血浆（PRP)能分泌多种促进软骨恢复细胞因子，但在治疗骨关节炎 领域，PRP的作用存在争议，有研究报道其对软骨修复产生负面效果。另外，由于PRP的主 要成分为血小板和有核细胞，它们在关节腔或病变部位所停留和存活的时间关系到治疗效 果。
[0007] 高分子材料，譬如玻尿酸钠和胶原蛋白等不但可以作为支架和润滑剂减缓疼痛， 也可作为支架保留水分、细胞、以及其它有效成分，还可以起到延长这些有效成分在病变部 位存留的时间，增强治疗效果。
[0008] 综上所述，本领域尚缺乏一种成分优化，杂质含量少，有效成分含量高的的治疗骨 关节炎的液态制剂。
【发明内容】
[0009] 本发明的目的是提供一种成分优化，杂质含量少，有效成分含量高的治疗骨关节 炎的液态组合物。
[0010] 本发明的第一方面，提供了一种治疗动物骨关节炎的组合物，所述的组合物包括 以下组分：
[0011] a.任选的脂肪多能细胞组分；和/或
[0012] 软骨前体细胞组分；
[0013] b.支架材料；
[0014] c.抗炎药物；和
[0015] d.药学上可接受的载体。
[0016] 在另一优选例中，所述组合物为液态组合物。
[0017] 在另一优选例中，所述的组合物是注射剂。
[0018] 在另一优选例中，所述的药学上可接受的载体是注射用载体。
[0019] 在另一优选例中，所述的骨关节炎选自下组：膝骨关节炎、髋骨关节炎、踝骨关节 炎。
[0020] 在另一优选例中，所述的脂肪多能细胞组分是现制的或预制的。
[0021] 在另一优选例中，所述的脂肪多能细胞组分是自体脂肪多能细胞组分或异体脂肪 多能细胞组分。
[0022] 在另一优选例中，所述的脂肪多能细胞组分选自下组：从基质血管成分中纯化的 脂肪多能细胞、经培养扩增的脂肪多能细胞，或其组合。
[0023] 在另一优选例中，所述的经培养扩增的脂肪多能细胞是在无血清培养基或含血清 的培养基中进行扩增的。
[0024] 在另一优选例中，所述的脂肪多能细胞组分是即时制备或冻存复苏的。
[0025] 在另一优选例中，所述的脂肪多能细胞组分还可含有选自下组的细胞：脂肪细胞、 内皮细胞、平滑肌细胞、周细胞、成纤维细胞、肥大细胞、神经细胞、脂肪前体细胞、淋巴细 胞、血液细胞、基质细胞、巨噬细胞，或其组合。
[0026] 在另一优选例中，在所述脂肪多能细胞组分中，脂肪多能细胞含量占总细胞量的 0· 5~100%，较佳地为1~100%，更佳地为10~100%。
[0027] 在另一优选例中，所述的脂肪多能细胞组分是自体的或同种异体的。
[0028] 在另一优选例中，所述的脂肪多能细胞组分具有软骨分化潜能。
[0029] 在另一优选例中，所述的脂肪多能细胞组分中还含有细胞因子。
[0030] 在另一优选例中，所述的软骨前体细胞组分是自体的或同种异体的。
[0031] 在另一优选例中，所述的软骨前体细胞组分具有软骨分化潜能。
[0032] 在另一优选例中，所述的软骨前体细胞组分中还含有细胞因子。
[0033] 在另一优选例中，所述的细胞因子选自下组：TGF-P、PDGF、VEGF、IL-1、IL-6、TNF、 IRAP、CTGF、EGF、IGF、BFGF，或其组合。
[0034] 在另一优选例中，所述脂肪多能细胞组分在所述组合物中的浓度为 I X 103-5 X 108/mL，较佳地为 I X IO4-I X 108/mL，更佳地为 I X IO5-I X 107/mL。
[0035] 在另一优选例中，所述脂肪多能细胞组分在组合物中的浓度为IO3-IO8AiL,较佳地 为 IO4-IOVmL,更佳地为 105-107/mL。
[0036] 在另一优选例中，所述的脂肪多能细胞组分是⑶45-⑶235a-⑶31-⑶34+细胞，和 /或⑶45-⑶13+⑶36+⑶73+细胞富集的脂肪多能细胞组分。
[0037] 在另一优选例中，所述的软骨前体细胞组分是⑶45-⑶235a-⑶31-⑶34+细胞，和 /或⑶45-⑶13+⑶36+⑶73+细胞富集的含软骨前体细胞组分。
[0038] 在另一优选例中，所述的CD45-CD235a-CD31-CD34+细胞和/或 ⑶45-⑶13+⑶36+⑶73+细胞富集指所述的⑶45-⑶235a-⑶31-⑶34+细胞和/或 CD45-⑶13+⑶36+⑶73+细胞的含量占组分中细胞总量的15-100%。
[0039] 在另一优选例中，所述的脂肪多能细胞组分是⑶45-⑶235a-⑶31-⑶34+细胞，和 /或⑶45-⑶13+⑶36+⑶73+细胞富集的脂肪多能细胞组分。
[0040] 在另一优选例中，所述的CD45-CD235a-CD31-CD34+细胞和/或 ⑶45-⑶13+⑶36+⑶73+细胞富集指所述的⑶45-⑶235a-⑶31-⑶34+细胞和/或 ⑶45-⑶13+⑶36+⑶73+细胞的含量占组分中细胞总量的15-100%。
[0041] 在另一优选例中，所述的"⑶45-⑶235a-⑶31-⑶34+"细胞指含有⑶34细胞因子 而不含有⑶45、⑶235a和⑶31细胞因子。
[0042] 在另一优选例中，所述的组合物还包括选自下组的一种或多种成分：富含血小板 的血浆和/或脂肪干细胞培养上清液、维生素 B12、维生素 C。
[0043] 在另一优选例中，所述的富含血小板的血浆选自下组：活化后的PRP，未活化PRP 液体、PRP凝胶，或其组合。
[0044] 在另一优选例中，所述富含血小板的血浆中，血小板浓度范围为 0. 5 X IO6-L 5 X IOltVmL,且所述血浆中白细胞和红细胞的总浓度为彡IX 106/mL。
[0045] 在另一优选例中，所述富含血小板的血浆中，血小板浓度范围为5X 107-5XlO8/ HlLo
[0046] 在另一优选例中，所述的脂肪干细胞培养上清液中含有细胞因子。
[0047] 在另一优选例中，所述的脂肪干细胞培养上清液中含有选自下组的细胞因子： TGF- β、HGF、TGF-I、PDGF、VEGF、EGF、IGF、BFGF，或其组合。
[0048] 在另一优选例中，所述的脂肪干细胞培养上清液是灭活的脂肪干细胞培养上清 液。
[0049] 在另一优选例中，所述的脂肪干细胞培养上清液中不含细胞。
[0050] 在另一优选例中，所述的支架材料选自下组：玻尿酸钠、胶原蛋白、多糖，或其组 合。
[0051] 在另一优选例中，所述的多糖选自下组：透明质酸、透明质酸衍生物、右旋糖苷、褐 藻酸、壳多糖，或其组合。
[0052] 在另一优选例中，所述的支架材料是玻尿酸钠与胶原蛋白的组合。
[0053] 在另一优选例中，所述的玻尿酸钠与胶原蛋白先进行预混合。
[0054] 在另一优选例中，所述的抗炎药物选自下组：糖皮质激素类抗炎药、美洛昔康、罗 贝考昔，或其组合。
[0055] 在另一优选例中，所述脂肪多能细胞组分和/或软骨前体细胞在组合物中的总重 量比为5-95重量份，以组合物的总重量计；和/或
[0056] 所述的支架材料在组合物中的重量比为5-95重量份,较佳地为10-90重量份，以 组合物的总重量计；和/或
[0057] 所述抗炎药物的重量比为10-95重量份，以组合物的总重量计。
[0058] 在另一优选例中，所述富含血小板的血浆和/或脂肪干细胞培养上清液的总重量 比为0.1-10重量份，以组合物的总重量计。
[0059] 在另一优选例中，所述维生素 C的重量比为0. 001-10重量份，较佳地为0. 01-5重 量份，以组合物的总重量计。
[0060] 在另一优选例中，所述维生素 B12的重量比为0. 001-10重量份，较佳地为0. 01-5 重量份，以组合物的总重量计。
[0061] 在另一优选例中，所述的动物选自下组：灵长类动物、犬科动物、马科动物、兔科动 物。
[0062] 本发明的第二方面，提供了一种如本发明第一方面所述组合物的制法，所述方法 包括步骤：将各组分混合，制成组合物。