一种丹参酮ⅱa磺酸钠脂质体及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物制剂学领域，特别涉及一种载药脂质体。更具体地说，本发明涉及一种丹参酮II A磺酸钠脂质体及其制备方法。
【背景技术】
[0002]丹参酮II A是传统活血化瘀中药丹参的主要有效成分。丹参酮II A经磺化成盐形成丹参酮II A磺酸钠(DS-201)，这是目前临床用于冠心病、心绞痛、心肌梗塞、脑动脉和视网膜动脉及外周静脉血栓形成等疾病治疗的有效药物，它具有抗动脉粥样硬化、缩小心肌梗死面积、显著增加冠脉血流量，减慢心率，增加心肌收缩力等作用。
[0003]有关DS-201的研宄已经明确了它的舒血管作用与BKca通道激活相关，研宄还表明了其作用特征，包括其作用的Ca2+的相关性以及由于对L-型钙通道的抑制而间接抑制对BKca的激活作用。采用膜片钳灵敏的测定手段表明，内面向外式膜片，20?150 ymol/L的DS-201可以使BIUS性增加5.4?173.2倍。因此，上述研宄表明DS-201主要在细胞内发挥BK Jt活作用。
[0004]目前主要采用以下两种方法来促进DS-201在细胞膜离子通道内侧激活通道的作用。(I)通过增加胞外给药浓度，但DS-201对细胞膜钙通道有抑制作用，通过增加胞外药物浓度的办法只会导致胞内Ca2+浓度的降低而抑制激活。(2)研宄表明DS-201的BKca作用与其磺酸盐基团有关，因此可以通过结构修饰来增加DS-201进入胞内的量，以此增强BKJt活作用；但是对DS-201进行结构修饰会因对磺酸盐基团的影响，一定程度上改变DS-201对BKea的激活作用，降低其药效。若要避开药物的其它作用选择性获得该药在胞内侧的激活效应，必须设计DS-201的药物投递系统。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于克服现有技术中所存在的上述不足，提供一种丹参酮II A磺酸钠脂质体。该脂质体的主要成分包括丹参酮II A磺酸钠(DS-201)、磷脂和胆固醇，药物活性成分DS-201包埋在脂质体中，可以避开药物的其他作用，直接将DS-201原药递送到细胞膜内侧发挥出明显激活BKca的作用。
[0006]本发明的再一目的是提供所述丹参酮II A磺酸钠脂质体的制备方法。
[0007]为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案:
[0008]本发明所述的丹参酮II A磺酸钠脂质体，它的组分主要包括丹参酮II A磺酸钠、磷脂和胆固醇，各组分的重量份配比为丹参酮II A磺酸钠0.20?0.35份、磷脂25?40份、胆固醇4?8份。
[0009]在所述丹参酮II A磺酸钠脂质体中，丹参酮II A磺酸钠为药物活性成分，磷脂和胆固醇为构成脂质体膜的基本成分。
[0010]本发明所述的DS-201脂质体属于大单室脂质体，是以磷脂和胆固醇为膜材构成单室的双层脂质膜的封闭囊泡，胆固醇分布在脂质膜双分子层的内部，DS-201的葡萄糖溶液包裹于双层脂质膜构成的囊泡室中。申请人经多次实验发现，当DS-201脂质体包括上述重量份配比的组分时，DS-201包裹于脂质体室内，形成的DS-201脂质体是类似生物膜结构的囊泡，对正常细胞无损害和抑制作用，具有细胞亲和性，吸附于靶细胞周围使药物透过靶细胞，也可通过融合进入细胞内，经溶酶体消化释放药物，将DS-201原药递送到细胞膜内侦拨挥出明显激活BlU乍用。
[0011]进一步优选地，所述各组分的重量份配比为丹参酮II A磺酸钠0.25?0.29份、磷脂30?35份、胆固醇5?7份。
[0012]最佳优选地，所述各组分的重量份配比为丹参酮II A磺酸钠0.29份、磷脂33份、胆固醇6份。
[0013]优选地，所述磷脂为大豆磷脂、大豆卵磷脂或卵磷脂。大豆磷脂主要含有卵磷脂(约34.2% )、脑磷脂(约19.7% )、肌醇磷脂(约16.0% )、磷酯酰丝氨酸(约15.8% )、磷脂酸(约3.6% )及其他磷脂(约10.7% )。
[0014]本发明所述丹参酮II A磺酸钠脂质体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤:
[0015](I)按比例分别称取丹参酮II A磺酸钠、磷脂、胆固醇；将磷脂溶解于氯仿中，配制成磷脂的氯仿溶液；将胆固醇溶解于氯仿中，配制成胆固醇的氯仿溶液；将葡萄糖溶解于水中，配制成等渗葡萄糖溶液，然后将丹参酮II A磺酸钠溶解于等渗葡萄糖溶液中，配制成丹参酮II A磺酸钠的葡萄糖溶液；
[0016](2)将磷脂的氯仿溶液和胆固醇的氯仿溶液加入到烧瓶中，水浴超声；然后置于旋转蒸发仪上，水浴温度设置为20?30°C，除去氯仿，在瓶底形成乳白色薄膜；
[0017](3)将丹参酮II A磺酸钠的葡萄糖溶液加入到烧瓶中，在摇床上振荡，得到脂质体混悬液；
[0018](4)对步骤(3)得到的脂质体混悬液进行探头超声，形成橙色透明液体；过滤，收集滤液，得到丹参酮II A磺酸钠脂质体。
[0019]其中，葡萄糖等渗溶液的质量百分数为5 %，作为水合介质。
[0020]优选地，所述磷脂的氯仿溶液中磷脂的浓度为9?12mg/ml。大豆磷脂能较快溶于氯仿；但是当磷脂的浓度小于9mg/ml，药物的包封率低；当磷脂的浓度大于12mg/ml，药物的包封率不再上升且形态不好、稳定性差。最佳优选地，所述磷脂的氯仿溶液中磷脂的浓度为 10mg/mlo
[0021]优选地，所述胆固醇的氯仿溶液中胆固醇的浓度为9?12mg/ml。胆固醇能较快溶于氯仿，但是当胆固醇的浓度小于9mg/ml，会导致脂质双层的流动性降低，脂质膜的通透性变大，影响脂质双分子层的稳定性，从而降低脂质体的包封率；当胆固醇的浓度大于12mg/ml，胆固醇会竞争性地结合磷脂的亲脂性区域，导致脂质体的载药率降低，并导致磷脂的脂肪酸链僵化，影响脂质体膜的稳定性，进而降低脂质体的包封率。最佳优选地，所述胆固醇的氯仿溶液中胆固醇的浓度为10mg/ml。
[0022]优选地，所述丹参酮II A磺酸钠的葡萄糖溶液中丹参酮II A磺酸钠的浓度为150?240 ymol/L。当DS-201的浓度小于150 μ mol/L，药物的包封率不高；iDS_201的浓度大于240 μ mol/L，脂质体的包封率下降。最佳优选地，所述丹参酮II A磺酸钠的葡萄糖溶液中丹参酮II A磺酸钠的浓度为200 μ mol/L。
[0023]优选地，所述水浴超声为在20?30°C水浴中超声3?5min ;超声功率为120?200ffo水浴超声起到混合溶解的作用。水浴超声的温度高于30°C，会使脂质氧化，低于25°C会降低溶解的效果。当超声时间短于3min，会导致混合不均匀；当超声时间长于5min，会使脂质氧化。最佳优选地，所述水浴超声为在25°C水浴中超声3min ;超声功率为150W。
[0024]优选地，所述旋转蒸发仪的旋转速度为4?8转/min (rpm)，旋转时间为1.5?3h。当旋转蒸发仪的旋转速度低于4rpm，形成的脂质膜较厚；当旋转速度高于8rpm，形成的脂质膜不均勾。最佳优选地，所述旋转蒸发仪的旋转速度为6rpm，旋转时间为2h。
[0025]优选地，所述步骤(3)中的振荡时间为25?40min，可以使薄膜充分溶胀水合。脂质发生溶胀并被一层层洗脱，大多数形成了多层脂质体。最佳优选地，所述震荡时间为30mino
[0026]优选地，所述步骤(4)探头超声的方法为:设置功率为80?120W;采用循环超声，每次超声18?22s，间隔8?13s，循环40?60次。本发明采用低功率短时间的间隔循环超声，将粒径较大的多层脂质体进一步分散为粒径较小的单层脂质体，不仅使得到的脂质体粒径较小且较均一，同时可防止探头超声过程中的物质变性问题。最佳优选地，所述探头超声的方法为:设置功率为100W ;采用循环超声，每次超声20s，间隔10s，循环50次。
[0027]优选地，所述步骤(4)中采用0.22 μm—次性针式过滤器过滤。既可以控制粒径又可以得到无菌的效果。
[0028]优选地，所述步骤(4)中得到的丹参酮II A磺酸钠脂质体在3?5°C下避光贮存。
[0029]与现有技术相比，本发明的有益效果在于:本发明所述脂质体采用丹参酮II A磺酸钠(DS-201)、磷脂、胆固醇为原料，并调节各原料的重量份配比，将药物活性成分丹参酮II A磺酸钠包埋在脂质体中，药物产品质量高，粒径均匀，稳定性好，包封率高，溶出性好，可以避开药物的其他作用，对正常细胞无损害和抑制作用，具有细胞亲和性，吸附于靶细胞周围使药物透过靶细胞，也可通过融合进入细胞内，经溶酶体消化释放药物，将DS-201原药直接递送到细胞膜内侧发挥出明显激活BKca作用，提高了药物的生物利用度，疗效显著。
[0030]本发明所述丹参酮II A磺酸