一种口腔生物膜制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及口腔医用材料领域，尤其涉及到一种口腔生物膜制备方法。
【背景技术】
[0002]胶原蛋白是一种生物性高分子物质，英文学名Collagen。在动物细胞中扮演结合组织的角色。为生物科技产业最具关键性的原材料之一，也是需求量十分庞大的最佳生医材料。其应用领域包括生物医材料、化妆品、食品工业、研究用途等。
[0003]胶原蛋白是细胞外基质的结构蛋白质，其分子在细胞外基质中聚集为超分子结构。分子量为300KD。胶原蛋白最普遍的结构特征是三螺旋结构。其由3条a链多肽组成，每一条胶原链都是左手螺旋构型。3条左手螺旋链叉相互缠绕成右手螺旋结构，即超螺旋结构闭胶原蛋白独特的三重螺旋结构，使其分子结构非常稳定，并且具有低免疫原性和良好的生物相容性等。结构决定性质，性质决定用途，胶原蛋白的结构的多样性和复杂性决定其在许多领域的重要地位。胶原蛋白产品具有良好的应用前景。
[0004]胶原蛋白以其本身的众多优点:生物相容性好、降解产物易被吸收，最后分解成氨基酸、二氧化碳和水，成为组织工程用生物材料的研究热点。
[0005]硫酸软骨素是细胞外基质中的一种糖胺聚糖，糖链由交替的葡萄糖醛酸和N-乙酰半乳糖胺(又称N-乙酰氨基半乳糖)二糖单位组成，通过一个似糖链街区连接到核心蛋白的丝氨酸残基上。硫酸软骨素存在于从线虫到人除植物外的所有生物中，发挥着许多重要的生理功能。虽然多糖的主链结构并不复杂，但就硫酸化程度、硫酸基和两种差异向异构糖醛酸再链内的分布来说，呈现高度的不均一性。硫酸软骨素的精细结构决定着功能的特异性和与多种蛋白质分子的相互作用。
[0006]从材料的选材方面来看，胶原蛋白和硫酸软骨素均为性能优良的组织工程生物材料，生物相容性良好，可降解吸收。从材料的结构方面来看，单层的薄膜或海绵材料，力学性能及降解适宜性等方面存在着一定的问题。
【发明内容】
[0007]本发明的目的是提供一种口腔生物膜制备方法，以解决现有技术的上述不足。
[0008]本发明的目的是通过以下技术方案来实现:
[0009]本发明提供了一种口腔生物膜制备方法，该制备方法包括下述步骤:
[0010]将I型胶原蛋白加入到0.2% -06%的乙酸溶液中配置成胶原乙酸溶胀液；
[0011]在配置好的胶原乙酸溶胀液中加入硫酸软骨素，搅拌配置成胶原-硫酸软骨素浆液；
[0012]将搅拌均匀的胶原-硫酸软骨素浆液倒入不锈钢冻干盘中，置于真空冷冻干燥机中进行第一次真空冷冻干燥；
[0013]将第一次真空冷冻干燥后的胶原-硫酸软骨素浆液利用压膜机压制成胶原复合薄膜；
[0014]在两层胶原复合薄膜中喷涂一层胶原-硫酸软骨素浆液，放入到真空冷冻干燥机内进行第二次真空冷冻干燥；
[0015]将第二次真空冷冻干燥后的胶原复合薄膜进行高温真空交联；
[0016]将交联后的胶原复合薄膜进行环氧乙烷灭菌，得到胶原-硫酸软骨素复合口腔生物膜。
[0017]优选的，所述I型胶原蛋白为从牛跟腱中提取的I型胶原蛋白，在加入到
0.2% -0.6%的乙酸溶液中时，控制I型胶原蛋白质量分数在0.3% -0.8%之间，在15°C _25°C温度下以每分钟16000r-20000r高速搅拌，配制成胶原乙酸溶胀液。
[0018]优选的，在所述配置好的胶原乙酸溶胀液中加入硫酸软骨素时，控制硫酸软骨素的质量分数在0.01% -0.05%之间，10C -20°c下以每分钟16000r_20000r高速搅拌，配制成胶原-硫酸软骨素衆液。
[0019]优选的，在将搅拌均匀的胶原-硫酸软骨素浆液倒入不锈钢冻干盘中时，倒入后的厚度为5mm±0.5mm。
[0020]优选的，在将胶原-硫酸软骨素浆液进行真空冷冻干燥时，采用梯度冷却的方式进行冷却。
[0021]优选的，所述经压膜机压制成的胶原复合薄膜的厚度为l_3mm。
[0022]优选的，所述高温真空交联为在90°C -110°C的高温真空干燥箱中进行高温真空交联。
[0023]优选的，所述的交联方式为物理交联，交联时间为24_36h。
[0024]本发明的有益效果为:(1)本发明采用牛跟腱为基材，经过除杂、清洗、酸碱盐及生物学处理，提取的高纯度胶原蛋白制作而成，具有良好的组织相容性，适宜可控的降解吸收性，低抗原性，良好的可塑性和力学性能。
[0025](2)采用两次真空冷冻干燥的方式的胶原-硫酸软骨素复合膜，为致密薄膜状材料，具有良好的力学性能，便于临床操作及使用要求。
[0026](3)用于口腔科手术后，其三维多孔结构为损伤组织的修复提供了组织工程支架，有利于细胞的侵入及分化生长，可诱导缺损组织的修复再生，其特定的厚度可以有效的阻止软组织的长入。
【附图说明】
[0027]下面根据附图对本发明作进一步详细说明。
[0028]图1是本发明实施例所述口腔生物膜制备方法的流程图。
【具体实施方式】
[0029]如图1所示，本发明实施例所述的一种口腔生物膜制备方法，该制备方法包括下述步骤:
[0030]步骤一、将I型胶原蛋白加入到0.2% -0.6%的乙酸溶液中配置成胶原乙酸溶胀液；
[0031]具体的，所述I型胶原蛋白为从牛跟腱中提取的I型胶原蛋白，在加入到
0.2% -0.6%的乙酸溶液中时，控制I型胶原蛋白质量分数在0.3% -0.8%之间，在15°C _25°C温度下以每分钟16000r-20000r高速搅拌，配制成胶原乙酸溶胀液。
[0032]步骤二、在配置好的胶原乙酸溶胀液中加入硫酸软骨素，搅拌配置成胶原-硫酸软骨素浆液；
[0033]具体的，在所述配置好的胶原乙酸溶胀液中加入硫酸软骨素时，控制硫酸软骨素的质量分数在0.01% -0.05%之间，10C -20°c下以每分钟16000r_20000r高速搅拌，配制成胶原-硫酸软骨素衆液。
[0034]步骤三、将搅拌均匀的胶原-硫酸软骨素浆液倒入不锈钢冻干盘中，置于真空冷冻干燥机中进行第一次真空冷冻干燥；
[0035]具体的，在将搅拌均匀的胶原-硫酸软骨素浆液倒入不锈钢冻干盘中时，倒入后的厚度为5_±0.5_。在将胶原-硫酸软骨素衆液进行真空冷冻干燥时，采用梯度冷却的方式进行冷却。
[0036]步骤四、将第一次真空冷冻干燥后的胶原-硫酸软骨素浆液利用压膜机压制成胶原复合薄膜；
[0037]具体的，所述经压膜机压制成的胶原复合薄膜的厚度为1-3_。
[0038]步骤五、在两层胶原复合薄膜中喷涂一层胶原-硫酸软骨素浆液，放入到真空冷冻干燥机内进行第二次真空冷冻干燥；
[0039]步骤六、将第二次真空冷冻干燥后的胶原复合薄膜进行高温真空交联；
[0040]具体的，所述高温真空交联为在90°C -110°C的高温真空干燥箱中进行高温真空交联。所述的交联方式为物理交联，交联时间为24-36h。
[0041]步骤七、将交联后的胶原复合薄膜进行环氧乙烷灭菌，得到胶原-硫酸软骨素复合口腔生物膜。
[0042]下面以具体的实施例对本发明实施例提供的口腔生物膜制备方法进行详细的解释。
[0043]实施例1
[0044]1.浆液制备
[0045]1.1原料解冻:
[0046]把自牛跟腱中提取的I型胶原蛋白自冷冻室取出，解冻。
[0047]1.2乙酸溶液制备:
[0048]取2_6ml乙酸至100ml锥形瓶加无菌水至1000ml,