r>[0028] 异叶青兰粗组分与微孔树脂比例为I g :30 mL。
[0029] 减压干燥条件是指真空度为0. 06 MPa，温度为60°C。
[0030] 实施例2 异叶青兰活性精细组分的分离方法，包括以下步骤： ⑴提取： 将5. 0 Kg异叶青兰全草阴干、粉碎后，用其质量20倍体积浓度为95%的乙醇溶液浸泡 15个小时，在80°C温度下加热回流提取4次，每次3小时，经减压干燥得异叶青兰醇提物 968. 2 g〇
[0031] 其中：减压干燥条件是指真空度为0. 09 MPa，温度为50°C。
[0032] ⑵硅胶柱层析分离： 将异叶青兰醇提物经硅胶柱色谱分离，用20倍柱体积的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂 洗脱，按每份200 mL收集馏分，采用薄层色谱检测，其中展开剂为石油醚、乙酸乙酯按I : 1 的体积比（mL/ mL)混合而成的混合溶剂，显色剂为体积浓度10%的浓硫酸乙醇溶液，合并 收集Rf值为〇. 1~〇. 6的馏分，该馏分经减压干燥，即得呈黄褐色粉末状的异叶青兰粗组分 567. 9 g〇
[0033] 其中：石油醚-乙酸乙酯的混合溶剂是指石油醚和乙酸乙酯按7 :3的体积比（mL/ mL)混合而成。
[0034] 减压干燥条件是指真空度为0. 09 MPa，温度为50°C。
[0035] ⑶微孔树脂除杂： 将异叶青兰粗组分用其质量10倍的体积分数为90%的甲醇溶液溶解，过滤得到滤液， 该滤液上微孔树脂柱分离，用3倍柱体积且体积分数为90%的甲醇溶液洗脱，收集90%的 甲醇溶液洗脱物，该90%的甲醇溶液洗脱物经减压干燥，即得呈黄色的异叶青兰精细组分 483. 6 g〇
[0036] 其中：微孔树脂是指MCI型树脂柱。
[0037] 异叶青兰粗组分与微孔树脂比例为I g :30 mL。
[0038] 减压干燥条件是指真空度为0. 09 MPa，温度为50°C。
[0039] 实施例3 异叶青兰活性精细组分的分离方法，包括以下步骤： ⑴提取： 将2. 0 Kg异叶青兰全草阴干、粉碎后，用其质量8倍体积浓度为95%的乙醇溶液浸泡 12个小时，在85°C温度下加热回流提取2次，每次3小时，经减压干燥得异叶青兰醇提物 390. 5 g〇
[0040] 其中：减压干燥条件是指真空度为0. 08 MPa，温度为55°C。
[0041] ⑵硅胶柱层析分离： 将异叶青兰醇提物经硅胶柱色谱分离，用15倍柱体积的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂 洗脱，按每份150 mL收集馏分，采用薄层色谱检测，其中展开剂为石油醚、乙酸乙酯按I : 1 的体积比（mL/ mL)混合而成的混合溶剂，显色剂为体积浓度10%的浓硫酸乙醇溶液，合并 收集Rf值为〇. 1~〇. 6的馏分，该馏分经减压干燥，即得呈黄褐色粉末状的异叶青兰粗组分 228.9 g〇
[0042] 其中：石油醚-乙酸乙酯的混合溶剂是指石油醚和乙酸乙酯按3 :7的体积比（mL/ mL)混合而成。
[0043] 减压干燥条件是指真空度为0. 08 MPa，温度为55°C。
[0044] (3)微孔树脂除杂： 将异叶青兰粗组分用其质量8倍的体积分数为95%的甲醇溶液溶解，过滤得到滤液，该 滤液上微孔树脂柱分离，用4倍柱体积且体积分数为95%的甲醇溶液洗脱，收集95%的甲醇 溶液洗脱物，该95%的甲醇溶液洗脱物经减压干燥，即得呈黄色的异叶青兰精细组分187. 4 g°
[0045] 其中：微孔树脂是指HP20型树脂柱。
[0046] 异叶青兰粗组分与微孔树脂比例为I g :30 mL。
[0047] 减压干燥条件是指真空度为0. 08 MPa，温度为55°C。
[0048] 上述实施例1~3所制得的异叶青兰精细组分在肝病治疗中的应用是指：该异叶青 兰活性精细组分作为有效组分按常规方法与药学上可接受的任何载体制成各类抗病毒性 肝炎、急性重型肝炎、肝功能衰竭、自身免疫性肝炎、药物性肝损伤和肝硬化的药用制剂。
【主权项】
1. 异叶青兰活性精细组分的分离方法，包括以下步骤： ⑴提取： 将异叶青兰全草阴干、粉碎后，用其质量8~20倍体积浓度为95%的乙醇溶液浸泡10~15 个小时，在80~90°C温度下加热回流提取2~4次，每次3小时，经减压干燥得异叶青兰醇提 物； ⑵硅胶柱层析分离： 将所述异叶青兰醇提物经硅胶柱色谱分离，用1〇~20倍柱体积的石油醚-乙酸乙酯混 合溶剂洗脱，按每份1〇〇~200 mL收集馏分，采用薄层色谱检测，其中展开剂为石油醚、乙酸 乙酯按1 :1的体积比混合而成的混合溶剂，显色剂为体积浓度10%的浓硫酸乙醇溶液，合 并收集Rf值为〇. 1~〇. 6的馏分，该馏分经减压干燥，即得呈黄褐色粉末状的异叶青兰粗组 分； ⑶微孔树脂除杂： 将所述异叶青兰粗组分用其质量5~10倍的体积分数为90~100%的甲醇溶液溶解，过滤 得到滤液，该滤液上微孔树脂柱分离，用3~5倍柱体积且体积分数为90°/『100%的甲醇溶液 洗脱，收集90°/『100%的甲醇溶液洗脱物，该90°/『100%的甲醇溶液洗脱物经减压干燥，即得 呈黄色的异叶青兰精细组分；所述异叶青兰粗组分与所述微孔树脂比例为I g:30 mL。2. 如权利要求1所述的异叶青兰活性精细组分的分离方法，其特征在于：所述减压干 燥条件是指真空度为〇. 〇6~0. 09 MPa，温度为50~60°C。3. 如权利要求1所述的异叶青兰活性精细组分的分离方法，其特征在于：所述步骤⑵ 中石油醚-乙酸乙酯的混合溶剂是指石油醚和乙酸乙酯按7 :3~3 :7的体积比混合而成。4. 如权利要求1所述的异叶青兰活性精细组分的分离方法，其特征在于：所述步骤⑶ 中微孔树脂是指HP20SS型树脂柱、MCI型树脂柱、HP20型树脂柱中的任意一种。5. 如权利要求1所述的异叶青兰活性精细组分的分离方法制得的异叶青兰精细组分 在肝病治疗中的应用，其特征在于：该异叶青兰活性精细组分作为有效组分按常规方法与 药学上可接受的任何载体制成各类抗病毒性肝炎、急性重型肝炎、肝功能衰竭、自身免疫性 肝炎、药物性肝损伤和肝硬化的药用制剂。
【专利摘要】本发明涉及一种异叶青兰活性精细组分的分离方法，该方法包括以下步骤：⑴提取：将异叶青兰全草阴干、粉碎后，用乙醇溶液浸泡后加热回流提取，经减压干燥得异叶青兰醇提物；⑵硅胶柱层析分离：将异叶青兰醇提物经硅胶柱色谱分离，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，采用薄层色谱检测，合并收集Rf值为0.1~0.6的馏分，该馏分经减压干燥，即得呈黄褐色粉末状的异叶青兰粗组分；⑶微孔树脂除杂：将异叶青兰粗组分用甲醇溶液溶解，过滤得到滤液，该滤液上微孔树脂柱分离，经洗脱、减压干燥，即得呈黄色的异叶青兰精细组分。本发明工艺简单、有效成分质量稳定、易规模化生产。同时，本发明该公开了该异叶青兰精细组分在肝病治疗中的应用。
【IPC分类】A61P31/20, A61P1/16, A61K36/53, A61P31/14
【公开号】CN104983789
【申请号】CN201510412314
【发明人】王启兰, 陶燕铎, 党军, 张莉, 王蒲, 文怀秀, 史强强, 卢晓华, 郑威
【申请人】中国科学院西北高原生物研究所
【公开日】2015年10月21日
【申请日】2015年7月15日