β-胡萝卜素顺反异构体分离鉴定的方法
【专利摘要】本发明涉及一种β-胡萝卜素的分离鉴定方法，属于食品添加剂及其制备方法领域。所述的β-胡萝卜素顺反异构体分离鉴定的方法，其特征在于包括以下步骤：精确称取微胶囊化β-胡萝卜素，用温水复溶，取用丙酮∶石油醚(1∶1)混合溶剂反复提取至水层无色，用分液漏斗除去水层，合并有机相，加入少量无水硫酸钠脱水，然后转移至容量瓶中，定容摇匀后进行0.45μm微滤，用氮气吹干并用有机复溶剂复溶，然后采用C18柱为固定相，并以有机溶液为流动相，将复溶后的β-胡萝卜素样品在柱温30℃、流速O.6mL/min条件下分别进样分离。对每分离出来的异构体蜂进行紫外扫描，记录其光谱信号并计算Q值。依据吸收峰位置和Q值确定β-胡萝卜素异构体的种类。本发明所述的分离鉴定方法具有分离效果好、鉴定度高、操作简便等特点。
【专利说明】β-胡萝卜素顺反异构体分离鉴定的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种β -胡萝卜素的分离鉴定方法，属于食品添加剂及其制备方法领 域。
【背景技术】
[0002] β -胡萝卜素是具有8个类异戊二烯结构的碳氢化合物。其分子的两端是具有两 个类异戊二烯单位的六元环，中间是由四个类异戊二烯单位组成的碳链，分子中间反转排 列，存在共轭双键发色基团。由予双键的顺反异构，使得β_胡萝卜素存在很多异构体（理 论上达272种，实际上要少得多）。β -胡萝卜素具有很多生理活性，但其不同异构体的生理 活性存在一定差别：（1)不同β_胡萝卜素异构体的维A原活力不周，13-顺和9-顺β-胡 萝卜素的A原分别只有全反式β -胡萝卜素的53%和38% ; (2)在人血液中的浓度不 同；（3) β -胡萝卜素的抗氧化性、抗癌性能与它的多个双键的顺反异构情况有关。此外， β_胡萝卜素异构体的不同仅仅是双键顺反异构的位置、数目不同，其分离签定难度较大。 因而β-胡萝卜素顺反异构体酌分离鉴定已经引起众多研究者的兴趣。
【发明内容】
[0003] 本发明旨在提供一种分离效果好、鉴定度高、操作简便的β -胡萝卜素顺反异构 体分离鉴定的方法。
[0004] 本发明所述的β -胡萝卜素顺反异构体分离鉴定的方法，包括以下步骤： 精确称取微胶囊化β-胡萝卜素，用温水复溶，取用丙酮：石油醚（1 :1)混合溶剂反 复提取至水层无色，用分液漏斗除去水层，合并有机相，加入少量无水硫酸钠脱水，然后转 移至容量瓶中，定容摇匀后进行0. 45 μ m微滤，用氮气吹干并用有机复溶剂复溶，然后采用 C18柱为固定相，并以有机溶液为流动相，将复溶后的β-胡萝卜素样品在柱温30°C、流速 0.6mL/min条件下分别进样分离。对每分离出来的异构体蜂进行紫外扫描，记录其光谱信号 并计算Q值。依据吸收峰位置和Q值确定β-胡萝卜素异构体的种类。
[0005] 优选的，本发明所述的有机复溶剂为体积比为70:30 :15的正已烷-甲醇-丙酮混 合溶剂。
[0006] 更优选的，本发明所述的流动相有机溶液为体积比为15 :80 :5的甲醇-乙腈-四 氢呋喃混合溶液。
[0007] 胡萝卜素的顺式异构体包括单顺式异构体和双顺式异构体。其中单顺式中的 9_顺异构体、13-顺异构体是比较常见的，全反式β-胡萝卜素在微胶囊化过程中会发生一 定程度的异构化，产生的异构体以9-顺异构体、13-顺异构体为主。本发明采用采用HPLC 法分离β -胡萝卜素异构体时，以β -胡萝卜素异构体的保离时间比α 1、α 2、α 2 / α 1， 以此判别β -胡萝卜素异构体的分离效果。在蜂宽相近的情况下，α1、α 2、α2 / α?最 小的一个值如果离1.000比较远，就说明三种异构体的分离程度较好。
[0008] 由于胡萝卜素的各种异构体在紫外-可见波长范围内有明显的吸收，而 DAD(二极管阵到检测器）不仅可以在一定波长下检测色谱出蜂，同时还可以对任意峰进行 紫外扫描记录各峰的光谱信息，因而很多研究者都采用DAD来鉴别β -胡萝卜素顺反异构 体。本发明采用DAD鉴定β-胡萝卜素顺反异构体，不仅节省时间，样品量要求少，而且各 异构体的光谱信息差别较大，所得结果也是可靠的。
[0009] 经测定，本发明所述的分离鉴定方法具有分离效果好、鉴定度高、操作简便等特 点。
【具体实施方式】
[0010] 实施例一： 精确称取0. 25g微胶囊化β -胡萝卜素，用IOOml温水复溶，取IOmL用丙酮：石油醚 (1 :1)混合溶剂反复提取至水层无色，用分液漏斗除去水层，合并有机相，加入少量无水硫 酸钠脱水，然后转移至50ml容量瓶中，定容摇匀后进行0. 45 μ m微滤，移取IOmL用氮气吹 干并用正已烷-甲醇-丙酮（70:30:15)混合溶剂复溶至10mL，铝箔纸包裹，冷藏备用。然 后采用C18柱为固定相，以甲醇-乙腈-四氢呋喃（15 :80 :5)为流动相，将溶解的β-胡萝 卜素样品在柱温30°C、流速0. 6mL/min条件下进样分离。对每分离出来的异构体蜂进行紫 外扫描，记录其光谱信号并计算Q值。依据吸收峰位置和Q值确定β-胡萝卜素异构体的 种类。
[0011] 实施例二：分离效果测定 按上述方法进行β-胡萝卜素异顺反异构体进行分离后，进行分离效果测定，测定结 果如表-1所示。
[0012] 表-1分离效果测定表
【权利要求】
1. 胡萝卜素顺反异构体分离鉴定的方法，其特征在于包括以下步骤： 精确称取微胶囊化胡萝卜素，用温水复溶，取用丙酮：石油醚（1:1)混合溶剂反 复提取至水层无色，用分液漏斗除去水层，合并有机相，加入少量无水硫酸钠脱水，然后转 移至容量瓶中，定容摇匀后进行0. 45 i! m微滤，用氮气吹干并用有机复溶剂复溶，然后采用 C18柱为固定相，并以有机溶液为流动相，将复溶后的胡萝卜素样品在柱温30°C、流速 0. 6mL/min条件下分别进样分离； 对每分离出来的异构体蜂进行紫外扫描，记录其光谱信号并计算Q值； 依据吸收峰位置和Q值确定0-胡萝卜素异构体的种类。
2. 如权利要求1所述的胡萝卜素顺反异构体分离鉴定的方法，其特征在于所述的 有机复溶剂为体积比为70 :30 :15的正已烷-甲醇-丙酮混合溶剂。
3. 如权利要求1所述的胡萝卜素顺反异构体分离鉴定的方法，其特征在于所述的 流动相有机溶液为体积比为15 :80 :5的甲醇-乙腈-四氢呋喃混合溶液。
【文档编号】G01N1/34GK104316483SQ201410565238
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年10月22日 优先权日:2014年10月22日
【发明者】李勇, 刘文斌 申请人:西安米亿生物科技有限公司