一种异叶青兰挥发油的制备方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种异叶青兰挥发油的制备方法及其应用，与现有抗病毒合成药相比，其毒性低，安全可靠，药效作用强，而且异叶青兰原料丰富，价廉，萃取工艺简单，制备成本低，可以制成各种剂型。
【专利说明】一种异叶青兰挥发油的制备方法及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属中药邻域，涉及一种抗呼吸道病毒药物，具体涉及异叶青兰挥发油在制备抗呼吸道病毒药物中的用途。
【背景技术】
[0002]藏药异叶青兰为唇形科植物异叶青兰(Dracocephalum heterophyllum Benth)的干燥地上部分，属多年生草本植物，又名白花枝子花、白花夏枯草、吉孜青保(藏药名)，新疆维语称马尔赞居西、祖帕尔。异叶青兰地上部分具有清泻肝热的功效，是维族、藏族用于治疗咳喘病和胃病的传统用药。主要用于治疗黄疸性发烧、肝热、热性病头痛、眼翳、口腔溃疡、支气管炎、高血压等多种病症。是藏药部颁标准收录品种。异叶青兰分布于山西，内蒙古，宁夏，甘肃，四川西北部、西部，青海，西藏及新疆；生于山地草原及半荒漠的多石干燥地区，青海甘肃以东分布于海拔1100-2800米间，以西则可达5000米，新疆则在2200-3100米间，资源丰富。
[0003]异叶青兰全草含有挥发油、黄酮、多糖、帖类、木脂素等成分，值得进行开发利用。 王李梅通过对异叶青兰地上全草进行了系统的化学成分研究，共分离得到21个化合物，并对分离得到的化合物进行了体外抗氧化活性研究，结果表明，黄酮类化合物和苯丙素类化合物均具有较强的抗氧化活性[山东大学硕士论文2011]。罗智敏等应用HPLC测定不同产地异叶青兰中齐墩果酸和乌苏甲酯的含量，为异叶青兰药材的质量标准建立提供参考[《分析试验室》，2009，28 (zl) 8-10]。余江柳等采用分光光度法 ，以芦丁为标准品测定异叶青兰中的总黄酮含量，确定异叶青兰总黄酮提取工艺的研究。秦波等采用毛细管气相色谱-质谱联用法对异叶青兰挥发性化学成分进行了研究，经毛细管色谱分离出184多个峰，共确认了其中154种成分，所鉴定化合物的含量占全油的的83.52% [《天然产物研究与开发》 2000年12(1)4-11期]。任爱梅等对异叶青兰化学成分及抑菌活性研究进行了分析，从甲醇提取物中分离得到9个化合物，其中化合物4对金黄色葡萄球菌有弱的抑制作用[《中草药》2011,42(4)38-41]
[0004]目前病毒性疾病给人类的生命和健康造成了严重危害，从天然药物中开发研制新的抗病毒药物成为热点。临床上常用多种类型的抗病毒西药除了对病毒有抑制作用外，或多或少都存在细胞毒作用，长期用药还易产生耐药性，病毒株也会发生变异成为新的耐药菌株，这使现有抗病毒西药的临床应用和新的抗病毒西药的研发面临巨大的挑战。而在我国中医、藏医长期的临床实践中，应用传统中草药和藏药治疗病毒性疾病取得了卓越成效， 但缺乏有关有效化学成份以及药理学作用，抗病毒活性以及机制的研究。运用现代药理学理论去研究传统民族药，筛选分离有效化合物，明确其药效学作用及机制，是目前抗病毒药物研究的热点和难点。
[0005]流行性感冒病毒，简称流感病毒，甲、乙、丙三型，引起人和动物流感。甲型流感病毒是反复流行最为频繁和引起流感全球流行的重要病原体。近些年来，H1N1，H7N9流感病毒的流行肆虐，造成严重危害，引起社会的恐慌。流感病毒呈球形或丝状，球形直径80-20nm，新分离株丝状多于球形，是有包膜，单链分片段的RNA病毒。流感病毒包膜刺突的表面结构为血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)。血凝素(HA)柱状，为三聚体，它基本上以相同的间距覆盖了病毒的全部表面。是病毒保护性抗原。神经氨酸酶(NA)是四个亚单位组成的四聚体，并不平均分布在病毒表面，聚合成群，与病毒释放有关。流感的爆发流行主要由病毒抗原漂移(antigenic drift)和抗原转换(antigenic shift)引起,抗原漂移(antigenic drift)因HA或NA的点突变造成，变异幅度小，属量变，引起局部中、小型流行。抗原转换 (antigenic shift)因HA或NA的大幅度变异造成,属质变,导致新亚型的出现,引起世界性的暴发流行。近些年来，爆发流行的甲型HlNl流感，以及最新H7N9流感均是由变异后的新型甲型流感病毒所引起的急性呼吸道传染病。
[0006]呼吸道合胞病毒(RSV)是一个世界范围内婴幼儿最常见的呼吸道感染的病原体。 目前，对RSV的防治仍无有效的疫苗和药物。RSV是有包膜的单股负链RNA病毒，包膜刺突为G蛋白，RSV感染婴幼儿致细支气管炎和细支气管肺炎，感染成人致上呼吸道感染，通过手、污染物品和呼吸道传播，易在冬季流行，是医源性感染的重要病原体。RSV在呼吸道上皮细胞内增殖，支气管坏死物与粘液、纤维蛋白粘连在一起，易导致气道阻塞，可并发严重的细支气管炎和肺炎，感染后免疫力不强，不能防止再感染，至今未有有效的预防疫苗。
[0007]在藏医药长期的临床实践中，应用传统藏药治疗病毒性疾病取得了卓越成效，藏医认流感的易感人群为青壮年，是由赤巴之邪引起的热性传染疾病之一。异叶青兰是清热解毒类药物，传统藏医中用来治疗淋巴结炎、肺热咳嗽，瘟病时疫。因此，从传统藏药中开发更好的抗呼吸道病毒药物具有重要的应用价值和市场前景。
[0008]本发明提供了一种异叶青兰挥发油可以在制备抗病毒药物中应用，与现有抗病毒合成药相比，其毒性低，安全可靠，药效作用强，而且异叶青兰原料丰富，价廉，萃取工艺简单，制备成本低，可以制成各种剂型。
【发明内容】
[0009]本发明提供一种异叶青兰 挥发油的制备方法，该方法包括以下步骤:
[0010]第一步，称取200g异叶青兰全草，切碎成约Icm长，加入2000ml圆底烧瓶，采用 95°C水蒸汽，蒸馏1.5h，收集馏出液。
[0011]第二步，用150ml无水乙醚分三次萃取馏出液，合并有机相约120ml。
[0012]第三步，取7g无水Na2SO4干燥有机相加入步骤二中所得的有机相中。；
[0013]第四步，在38°C下水浴蒸发溶剂乙醚，回收馏出液乙醚，并收集烧瓶中黄色油状物，得到异叶青兰挥发油0.1804g ；；
[0014]第五步，将第四步所制得的异叶青兰挥发油在_20°C保藏，用紫外照射30min灭菌，既得。
[0015]一种异叶青兰挥发油的制备方法，所制得的异叶青兰挥发油可用于制备抗呼吸道病毒药物。
[0016]有益效果:
[0017]本发明所提供的异叶青兰挥发油可以在抑制病毒吸附，预防病毒侵染，抑制病毒基因复制、直接灭活病毒等多环节发挥明显的抗病毒作用，故而异叶青兰挥发油及提取物可以在制备抗病毒药物中应用。本发明提供的异叶青兰挥发油及提取物可以在制备抗病毒药物以以单味或者复方方式制备成药物组合物。尤其是以单味或者复方方式在制备治疗呼吸道病毒感染的药物组合物中应用。由于软胶囊、硬胶囊、滴丸、片剂、分散片、颗粒剂、注射液、口服液、栓剂等药物剂型的制备是本领域的研究人员所能理解的，可以方便地实现异叶青兰挥发油及提取物与相应载体组合而制备成各种药物剂型；软胶囊、或硬胶囊、或滴丸、 或片剂、或分散片、或颗粒剂、或注射液、或口服液、或栓剂。
[0018]本发明的优点在于:
[0019]1、异叶青兰为纯藏药，毒性低，安全性高。
[0020]2、异叶青兰挥发油及提取物可以在抑制病毒吸附，预防病毒侵染，抑制病毒基因复制、直接灭活病毒等多环节发挥明显的抗呼吸道病毒作用，异叶青兰挥发油及提取物可以在制备抗呼吸道病毒药物中应用。具有明显抗流感病毒，抗腺病毒的作用。
[0021]3、能够治疗呼吸道疾病，有很好的药用前景。
[0022]4、原料丰富、价廉、萃取工艺简单、制备成本低，可以方便地制备成各种剂型。 【具体实施方式】
[0023]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
[0024]实施例一异叶青兰挥发油及提取物的制备
[0025](一)异叶青兰挥发油的制备
[0026]取适量异叶青兰全草(碎成约Icm长)加入2000ml圆底烧瓶，通水蒸汽，用水蒸汽蒸馏1.5h，收集馏出液；用无水乙醚少量多次萃取馏出液，收集有机相；加无水Na2SO4干燥有机相；将有机相在沸石存在的情况下常压蒸馏，回收馏出液乙醚，收集烧瓶中黄色油状物，得到异叶青兰挥发油；将挥发油在-20°C保藏，用前紫外照射30min灭菌。
[0027](二)异叶青兰分级提取物的制备
[0028]将异叶青兰在酒精中浸泡7天，期间经常搅动浸出有效成分。析出上清液，用旋转蒸发仪回流蒸发回收酒精，得到总浸膏。将总浸膏用500ml蒸馏水溶解，用石油醚萃取，将石油醚相回流蒸发，收集剩余液体即石油醚提取物；将剩余水相用乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯相回流蒸发，收集剩余液体即乙酸乙酯提取物；将剩余水用正丁醇萃取，将正丁醇相回流蒸发，收集剩余液体即正丁醇提取物；剩余的水相回流蒸发，收集剩余液体即为水相。收集四种提取物室温静置干燥，4°C保藏，用紫外照射30min灭菌。
[0029]实施例二异叶青兰挥发油气质联用分析
[0030]异叶青兰挥发油成分用气相色谱-质谱分析(Trace DSQ GC-MS联用仪,美国热电公司)。气相色谱条件为:色谱柱DB-5ms ;柱长:30m ;液膜厚度:0.25 y m ;内径:0.25mm ;载气:He ;流速:1.0mL / min ;柱温:程序升温40?250°C (10°C / min),恒温20min ;进样量 IuLo质谱条件:分流模式进样，分流比30:1 ;进样口温度:250°C ;辅助线温度:280°C ;离子源温度:250°C ;电离方式:EI ;电子能量:70eV ;电子倍增管电压:1256kV ;采集方式:扫描；扫描质量范围:40?600amu。
[0031]用气-质联用对挥发油进行分析，各种成分的保留时间(按先后顺序)、名称、分子式、相对百分含量及符合度见表I。异叶青兰挥发油得率0.083% (W / W)。从异叶青兰挥发油中初步鉴定了 40个化合物。其中有19个组分含量大于1%，占挥发油总量的 87.53%。含量较高的有桉叶油素(22.18% )，6，6-二甲基-二环[3.1.1]庚-2-烯-2-甲醇(11.28% )，顺式萜品醇(11.11% )，4-(1-甲基乙基)-苯甲醛(5.79% )，[1S-(1，
2，5) ]-4，6，6-三甲基-二环[3.1.1]庚-3-烯-2-醇(4.91%),4-(1-甲基乙基)-2-环乙烯-1-酮(4.74%)，[13-(1，3，5)]-6，6-二甲基-2-亚甲基-二环[3,1,1]庚烷 _3_ 醇 (4.13% )，(1,2, 5)-2,6,6-甲基-二环[3，1，1]庚烷-3-酮(4.03% )。异叶青兰挥发油含萜69.20%，其中萜醇占34.45%，单萜28.76%、倍半萜5.99%。
[0032]表I异叶青兰挥发油化学成分
[0033]
【权利要求】
1.一种异叶青兰挥发油的制备方法，其特征在在于该方法包括以下步骤:第一步，称取200g异叶青兰全草，切碎成约Icm长，加入2000ml圆底烧瓶，采用95°C水蒸汽，蒸馏1.5h，收集馏出液；第二步，用150ml无水乙醚分三次萃取馏出液，合并有机相约120ml:第三步，取7g无水Na2SO4干燥有机相加入步骤二中所得的有机相中；第四步，在38 °C下水浴蒸发溶剂乙醚，回收馏出液乙醚，并收集烧瓶中黄色油状物，得到异叶青兰挥发油0.1804g ；第五步，将第四步所制得的异叶青兰挥发油在_20°C保藏，用紫外照射30min灭菌，既得。
2.如权利要求 1所述一种异叶青兰挥发油的制备方法，所制得的异叶青兰挥发油可用于制备抗呼吸道病毒药物。
【文档编号】A61P11/00GK103436364SQ201310377188
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2013年8月26日 优先权日:2013年8月26日
【发明者】张春江 申请人:兰州大学