蟾毒灵-3β-N-甲氧基-N-β-D-葡萄糖苷在制备强心药物中的应用
【技术领域】
[0001 ] 本发明属于强心药物制备技术领域，特别涉及蟾毒灵-3 0 -N-甲氧基-N- 0 -D-葡 萄糖苷在制备强心药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 随着世界范围内的人口老龄化进程的加快，高血压、冠心病等常见心血管病发 病率逐年上升，因而心衰的患病率也逐渐升高。据统计，每年我国的心衰患者约万。Na+/ K+-ATP酶是强心留的作用靶标。强心留通过抑制Na+A+-ATP酶，使细胞内Na+浓度上升， 启动Na+-Ca+交换，使细胞内Ca+浓度上升，从而发挥强心作用。常用的强心留类药物有 地高辛、洋地黄毒苷、毛花苷丙、毒毛花苷K及福寿草总苷等，均为甲型强心留。其中地 高辛的应用已超过200年。这些药物在临床上用于治疗心力衰竭和某些心律失常，如 心房纤颤及心动过速等（Gheorghiade，M. ;Adams，K.F. ;Colucci，W.S.Digoxininthe managementofcardiovasculardisorders.Circulation, 2004, 109, 2959-2964.)〇 但 是甲型强心留类药物的安全窗口小，一般治疗量已经接近于中毒剂量的60%，故甲型强 心留的中毒案例时有发生（Chan，K.E. ;Lazarus，J.M. ;Hakim，R.M.Digoxinassociates withmortalityinESRD.J.Am.Soc.Nephrol，2010, 21，1550-1555.)。其中毒症状涉及 多个系统，心脏反应是强心留最严重、最危险的不良反应，约有40%的病例发生各种类 型的心律失常，也伴随胃肠道反应及中枢神经系统反应，如头痛、失眠及视觉障碍（The DigitalisInvestigationGroup.Theeffectofdigoxinonmortalityandmorbidity inpatientswithheartfailure.NewEngl.J.Med, 1997, 336, 525-533 ；Hallberg,P.； Lindback,J. ；Lindahl,B. ；Stenestrand,U. ；Melhus,H. ;RIKS_HIAgroup.Digoxin andmortalityinatrialfibrillation:aprospectivecohortstudy.Eur.J.Clin. Pharmacol, 2007, 63, 1201-1202.)。虽然已有多个甲型强心甾类药物应用于临床，但其安全 窗口小，故急需新型替代强心药物。
[0003] 前期研究已知，中药蟾酥中的蟾毒灵（bufalin)具有很好的Na+A+-ATP酶抑制活 性和强心活性（Tian,H.Y.，Luo,S.L.，Liu,J.S.，Wang,L.，Wang,Y.，Zhang,D.M.，Zhang,X. Q. ,JiangR.ff.；Yeff.C.C23SteroidsfromtheVenomofBufobufogargarizans.J.Nat. Prod, 2013, 76 (10)，1842-1847.)，但其水溶性差，并且，其对Na+A+-ATP酶aI和a2 亚型 的抑制作用相当。现代研究认为，Na+A+-ATP酶a1亚型广泛存在于人体内的各个组织中， 而a2亚型存在于心肌细胞中，因此，对a2亚型的选择性越高，其强心作用的安全性越好。 此外，已有专利报道一种蟾蜍留烯化合物3-表-蟾毒灵3-0-P-D-葡萄糖苷具有抗肿瘤作 用（中国发明专利号：200610023793. 4)，该化合物为氧苷（苷元与糖通过氧原子连接），糖 基处于3a位，专利中亦提到该类化合物可能具有强心、抗休克、抗病毒作用，但无具体数 据支持。
[0004] 为了克服上述现有技术的缺点与不足，本发明申请人合成了蟾毒灵-3 0-N-甲氧 基-N- 0 -D-葡萄糖苷⑴和蟾毒灵-3a-N-甲氧基-N- 0 -D-葡萄糖苷（2)。这两个化合 物为氮苷（苷元与糖通过氮原子连接）。化合物1的糖基位于3P位，而化合物2的糖基位 于3a位。抗肿瘤活性评价结果表明，这类化合物对肿瘤细胞的抑制活性强，而对正常细胞 的抑制作用弱（中国发明专利号：CN103288911B)。本发明申请人进一步深入研究发现，化 合物1亦具有显著的Na+A+-ATP酶抑制活性，其活性远强于糖基位于3a位的化合物2,并 且化合物1对a2亚型的选择性高，选择性指数为4. 0,高于阳性药地高辛。强心活性评价 表明，化合物1的活性均显著强于化合物2。
【发明内容】
[0005] 为了克服上述现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供蟾毒 灵-3P-N-甲氧基-N-P-D-葡萄糖苷在制备强心药物中的应用。
[0006] 本发明的目的通过下述方案实现：
[0007] 蟾毒灵-3P-N-甲氧基-N-P-D-葡萄糖苷在制备强心药物中的应用。
[0008] 所述蟾毒灵-3 0-N-甲氧基-N-0 -D-葡萄糖苷具有式（一）所示结构：
[0009]
[0010] 所述蟾毒灵-3 0 -N-甲氧基-N-P-D-葡萄糖苷（下文简称化合物1)为氮苷结构， 其中，苷元部分为蟾毒灵，糖基部分为P-D-葡萄糖（D-Glu)，氮原子上有甲氧基取代。
[0011] 所述的药物含有蟾毒灵-3 0 -N-甲氧基-N-P-D-葡萄糖苷、其药用盐和其溶剂化 物中的至少一种。
[0012] 所述的药物含有一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。
[0013] 所述的赋形剂可包括稀释剂、湿润剂、润滑剂、填充剂、防腐剂等。其中稀释剂可为 乳糖、淀粉、糊精、微晶纤维素、微粉硅胶等，润湿剂可为水和50~85%不同浓度的乙醇。
[0014] 所述的药物可以采用本领域的常规方法制备成各种剂型，如胶囊、丸剂、片剂、口 服液、颗粒剂、酊剂等口服给药的剂型及注射液等口服以外的给药剂型，如针剂等。
[0015] 本发明上述蟾毒灵-3 0 -N-甲氧基-N-P-D-葡萄糖苷的合成方法为：用氯铬酸吡 啶盐酸盐将蟾毒灵氧化为酮式衍生物，再与甲氧胺盐酸盐进行亲核加成反应后，脱去一分 子水生成肟式中间体，再与叔丁胺基甲硼烷盐酸盐复合物反应生成a和P两种构型的苷 元，最后将a和(6-构型的苷元与D-葡萄糖反应生成蟾毒灵-30-N-甲氧基-N-P-D-葡 萄糖苷和蟾毒灵-3a-N-甲氧基-N-P-D-葡萄糖苷，参见CN1032889IlB。
[0016] 本发明相对于现有技术，具有如下的优点及有益效果：
[0017] (1)本发明对蟾毒灵-3P-N-甲氧基-N-P-D-葡萄糖苷发掘了新的医疗用途，开 拓了一个新的应用领域。
[0018] (2)本发明的蟾毒灵-3P-N-甲氧基-N-P-D-葡萄糖苷安全性高，强心作用强，预 示着良好的药用前景。
[0019] (3)本发明的蟾毒灵-3P-N-甲氧基-N-P-D-葡萄糖苷的制备工艺简单，成本低， 产率高。
【附图说明】
[0020] 图1为蟾毒灵-3P-N-甲氧基-N-P-D-葡萄糖苷（化合物1)和蟾毒灵-3a-N-甲 氧基-N-P-D-葡萄糖苷（化合物2)的化学结构式。
[0021] 图2为蟾毒灵-3P-N-甲氧基-N-P-D-葡萄糖苷对斑马鱼心脏形态的影响。
[0022] 图3为蟾毒灵-3P-N-甲氧基-NI-D-葡萄糖苷的强心作用效果图。
【具体实施方式】
[0023] 下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限 于此。
[0024] 实验例1:瞻毒灵-3 0-N-甲氧基-N-0 -D-匍萄糖昔的合成
[0025] (1)反应底物蟾毒灵C3位羟基经氧化剂氯铬酸吡啶盐酸盐（PCC)氧化，生成 C3位成酮的Bufalone，该步反应在室温即可，收率较高（产率90%) ;(2)后者与甲氧胺 盐酸盐经亲和加成-消除反应，生成C3位连有甲氧基的亚胺结构的蟾毒灵衍生物2a/b， Bufaloneoximes，反应较为彻底，收率较高（产率90% ); (3)H亏式混合物Bufaloneoximes 经还原剂叔丁胺甲硼烷盐酸盐还原，生成C3位构型相异的异构体化合物3a和3P，反应在 冰浴冷却下进行，收率约60%，其中，中间体摩尔比约为3a:3P=2:1，两异构体可通过硅 胶柱分离；(4)将3P、3a构型的异构体与葡萄糖进行糖基化反应，从而合成C3位连有葡 萄糖基的氮苷型蟾毒灵糖基化产物，即蟾毒灵-3P-N-甲氧基-N-P-D-葡萄糖苷（化合物 1，产率为40% )和蟾毒灵-3a-N-甲氧基-N-P-D-葡萄糖苷（化合物2,产率为48% )。 具体操作参见CN103288911B。结构式见图1。
[0026] 蟾毒灵-3P-N-甲氧基-N-P-D-葡萄糖苷（化合物1)的波谱数据：ESI-MSm/ z:578.4[M+H]+，60