0.5[M+Na]+，1177.2[2M+Na]+。1HNMR(Pyridine-d5,400MHz)S8.25(1H， dd，J= 9. 6, 2. 4Hz)，7. 48 (1H，d，J= 2. 4Hz)，6. 35 (1H，d，J= 9. 6Hz)，4. 72 (1H，d，J= 8. 6Hz)，4. 46 (m，1H)，4. 28 (m，1H)，4. 22 (m，1H)，3. 88 (m，1H)，4. 55,4. 35 (m，2H)，3. 94 (s， 3H)，3. 83 (m，1H)，2. 50 (m，1H)，2. 18,1. 87 (m，2H)，2. 16,1. 45 (m，2H)，I. 79,1. 33 (m，2H)， I. 69,1. 51 (m，2H)，I. 28,1. 09 (m，2H)，2. 19 (m，1H)，I. 87 (m，1H)，I. 73 (m，1H)，I. 75 (m，1H)， I. 42(m，1H)，0? 89(s，3H)，0? 81 (s，3H)。13C匪R(Pyridine-d5,100MHz)S162. 1，149. 2， 147. 5, 123. 8,115.I，90. 9,84. 3,80. 5,80. 2,71. 7,71. 6,63. 6,62. 9,57.I，51. 4, 48. 8， 42. 2,40. 8, 37. 0, 36. 5, 35. 8, 32. 8, 31. 0, 29. 5, 29. 4, 27. 2, 23. 9, 23. 7, 22. 1，21. 6,17. 1。
[0027] 根据质谱、核磁共振信息，鉴定产物为蟾毒灵-3 0 -N-甲氧基-N- 0 -D-葡萄糖苷， 其化学式为C31H47NO9。
[0028] 蟾毒灵-3a-N-甲氧基-N-beta-D-葡萄糖苷（化合物2)的波谱数据=1H MMR(Pyridine-d5,300MHz)S8.33(dd，lH，J= 9.7,2.5Hz)，7.56(d，lH，J= 2.5Hz)， 6.44(d，lH，J= 9.7Hz)，4.90(d，lH，J= 8.7Hz)，4.57(m，lH)，4.39(m，lH)，4.31(m， 1H)，3. 98 (m，1H)，4. 63,4. 47 (m，2H)，4. 06 (s，3H)，2. 27,1. 93 (m，2H)，I. 90,1. 60 (m，2H)， 3. 66 (m，1H)，2. 58 (m，1H)，2. 07 (m，2H)，2. 26 (m，2H)，I. 02 (m，2H)，0? 97 (s，3H)，0? 89 (s， 3H)〇13CMlR(Pyridine-d5,75MHz)Sl62.1，149.2，147.5，123.9，115.1，91.4,84.2， 80. 5,80. 3,71. 7, 71. 3,63. 8,62. 9,62. 2, 51. 3,48. 7,42. 3,42. 0,40. 7,36. 5,35. 9,35. 3， 32. 9,32. 1,29. 4,27. 8,25. 2,23. 6,22. 4,21. 5,17.l〇ESI-MSm/zC31H47NO9：578. 4[M+H] +, 600. 3 [M+Na]+, 1177. 3 [2M+Na]+,HRMS(ESI)m/zC31H47NO9Na([M+Na]+) 600. 3145, cacl. 600. 3148。
[0029] 根据质谱、核磁共振信息，鉴定产物为蟾毒灵-3a-N-甲氧基-N-beta-D-葡萄糖 苷，其化学式为C31H47NO9。
[0030] 实施例2 :蟾毒灵-3P-N-甲氧基-N-P-D-葡萄糖苷（化合物1)和蟾毒 灵-3a-N-甲氧基-N-beta-D-葡萄糖苷（化合物2)的Na+A+-ATP酶抑制活性。
[0031]测试方法参见文献（Zhang,R.R. ;Tian,H.Y. ;Tan,Y.F. ;Chung,T.Y. ;Sun,X. H. ；Xia,X. ；Ye,ff.C. ,Middleton,M.A.；NatalyaF.；EsmannM. ；Tzen,J.T.C. ；Jiang,R. ff.Structures,chemotaxonomicsignificance,cytotoxicandNa+,K+_ATPase inhibitoryactivitiesofnewcardenolidesfromAsclepiascurassavica.Org. Biomol.Chem. 2014, 12 (44)，8919-8929.)，对化合物I和2进行活性评价，具体步骤如下：
[0032] (1)将活性测试溶液加入到96孔板中，每孔100yL，含有IOOmMNaCl，20mMKCl， ImMMgCl2，lmMEGTA，20mMTris-HCl，pH7.4,和 0.2ygofpurifiedNa+A+-ATP酶a1 或a2亚型。
[0033] (2)加入不同浓度的化合物I和2后，将96孔板37°C孵育15min。
[0034] (3)加入2mMATP-Mg启动酶促反应，并在37°C孵育15min。
[0035] (4)在每孔中加入冰冷的BI0M0LGreen试剂100yL，并室温放置20分钟，测试 620nm的吸光度。
[0036] 根据吸光度可计算释放出的磷酸的量，从而计算出化合物1和2对酶的抑制活性。 本实验测得蟾毒灵-3P-N-甲氧基-N-P-D-葡萄糖苷（化合物1)对Na+A+-ATP酶a1的 1(：5。为0.20±0.03 1^，对€12亚型的1(：5。为0.05±0.011^，对€[2亚型的选择性指数为 4. 0 ;蟾毒灵-3a-N-甲氧基-N-beta-D-葡萄糖苷⑵对a2亚型的IC5。均大于20uM，而相 同条件下阳性药地高辛（digoxin)的IC5。对a1、a2亚型的IC5。为分别为0.31 ±0.04yM 和0. 18±0. 03yM，对a2亚型的选择性指数为1. 72。可见，化合物1对Na+A+-ATP酶的抑 制活性强于化合物2及阳性药地高辛，并且，化合物1对对a2亚型的选择性指数显著强于 阳性药地高辛。
[0037] 实施例3 :蟾毒灵-3P-N-甲氧基-N-P-D-葡萄糖苷（化合物1)对斑马鱼的强 心作用
[0038] 本发明采用心脏带有绿色荧光（便于观察）的斑马鱼模型来研究其强心作 用(Huang,C.C. ；Monte,A. ；Cook,J.M. ；Kabir,M.S. ；Peterson,K.P.ZebrafishHeart FailureModelsfortheEvaluationofChemicalProbesandDrugs.AssayDrugDev. Technol. 2013, 11 (9-10)，561-572.)〇
[0039] 采用Tg(cmlc2:GFP)转基因斑马鱼（澳门大学），其受精卵由清晨雌雄鱼交配 获得。将受精卵分成四组（给药组、阳性对照组、阴性对照组、溶媒对照组）然后将各组 受精卵放于培养液中，28°C孵化。24h后，向培养液中加入多柔比星（0. 3yM)，并继续培 养24小时，造模），用数字化荧光倒置显微镜观察斑马鱼的心脏形态并测定心率以确定 心衰模型构建成功。然后，向给药组培养液中加入不同浓度的化合物1，阳性药对照组 中加入地高辛（0. 5yM)，溶媒对照组中加入0. 1 %的DMS0,并继续培养48小时后，用数 字化荧光倒置显微镜观察各化合物对受损心脏形态的恢复作用，并根据文献报道的方法 (Moore,F.B.G.；HoseyM. ；Bagatto,B.Cardiovascularsysteminlarvalzebrafish respondstodevelopmentalhypoxiainafamilyspecificmanner.Frontiersin Zoology, 2006, 3, 4.)测定每搏输出量（strokevolume)、心输出量（cardiacoutput)等心 脏功能指标来评价化合物的强心活性，结果见图2,给药组标记为" 1"。
[0040] 结果表明，用多柔比星造模后，斑马鱼的每博输出量减少为对照组的66. 7%，而 心输出量降低为对照组的67. 9%，表明造模成功。当加入浓度为0. 125,0. 25,0. 5,1. 0， 2. 0yM的蟾毒灵-3P-N-甲氧基-N-P-D-葡萄糖苷后，每博输出量显著增加，相对于模型 组，增加量分别为11. 1%，55. 6%，88. 9%，105. 5%和122. 2% (同样，斑马鱼的心输出量也 显著增加，增加量分别为21. 1%，47. 3%，78. 9%，100. 0%和115. 8%。在相同条件下，阳性 药地高辛（0.5yM)的每博输出量和心输出量的增加量分别为66. 7%和68. 4%。可见，本 发明蟾毒灵-3P-N-甲氧基-N-0 -D-葡萄糖苷的强心作用具有剂量依赖性，并且，在相同 浓度（0.5iiM)下，蟾毒灵-30-N-甲氧基-N-P-D-葡萄糖苷