研究所生产。四氯化碳(分析纯，天津市红岩化学试剂厂，批号 20091208);橄榄油（山东鲁花集团有限公司）；牛清蛋白（北京希凯创新科技有限公司）；考 马斯亮蓝G250(上海化学试剂公司分装厂);联苯双酯(万邦德制药集团股份有限公司，批号 A02141113)用0. 5% CMC-Na溶液配混悬液做阳性对照。
[0021] 1.3主要仪器：UV2000型紫外可见分光光度计(尤尼可上海仪器有限公司）； MultiskanG0全波长酶标仪（ThermoElectron) ;LRH_150恒温培养箱(上海一恒科技有限 公司）；TGL-16高速离心机(江苏金坛市中大仪器厂)。
[0022] 1.4实验方法：取健康昆明小鼠70只，雌雄各半，4 ~ 6周龄，体重20 ± 2g，将 小鼠随机分为7组，每组10只。分别为空白组，模型组，联苯双酯组(用作阳性对照)，益智 叶乙酸乙酯部位萃取物高、低两个剂量组，益智叶正丁醇部位萃取物高、低两个剂量组。除 模型组和空白组外，其它组分别每天灌胃相应药物，每天1次，连续8天。
[0023] 第8天药后2h，除空白组外，其它组造模(按照0. 1mL/10g体重腹腔注射0.4% 四氯化碳橄榄油溶液）；禁食不禁水16h后，摘眼球取血，分离血清，0 ~3°C保存，按照南京 建成生物工程研究所生产的试剂盒说明书，测定血清中GPT和GOT酶的活力，结果见表2和 图1。快速分离肝脏，制备10%和1%的匀浆液，离心取上清液，〇~3°C保存，用考马斯亮蓝法 测定10%和1%组织匀浆液的蛋白含量，并测10%肝匀浆中MDA含量和1%肝匀浆中S0D活 力，结果见表3和图2、3。
[0024] 1.5实验结果 表2益智叶萃取物对急性肝损伤小鼠血清GOT和GPT的影响（'x土 & =10)
由表2和图1的试验结果可以看出：与空白组相比，模型组的GPT和GOT活力均有极显 著的升高（代〇. 001)，说明肝损伤模型造模成功；其余5个治疗组的这两项指标均有极显著 升高（At). 001)。
[0025] 治疗组与模型组相比，乙酸乙酯部位萃取物高剂量组的GPT活力无显著性差异 (/M). 05)，但GOT活力极显著的降低（代0. 001);乙酸乙酯部位萃取物低剂量组的GPT活力 显著性降低（代〇. 05)，GOT活力极显著降低（K0. 001);正丁醇部位萃取物高剂量组的GPT 活力无显著性差异（乃〇. 05)，但GOT活力非常显著性的降低（K0. 01);正丁醇部位萃取物 低剂量组的GPT和GOT活力均非常显著性降低（代0. 01);阳性对照联苯双酯组的GPT活力 有极显著的降低（代〇. 001)，GOT活力显著性降低（代0. 05)。
[0026] 与阳性对照联苯双酯组相比，乙酸乙酯部位萃取物高剂量组GPT活力非常显著性 升高（代0. 01)，GOT活力显著性降低（代0. 05);乙酸乙酯部位萃取物低剂量组的GPT活力 无显著性差异（/M). 05)，GOT活力显著性降低（K0. 05);正丁醇部位萃取物高剂量组的GPT 活力非常显著性升高（K0. 01)，GOT活力无显著性差异（/M). 05);正丁醇部位萃取物低剂 量组的这两项指标均无显著性差异（乃〇. 05)。
[0027] 表3益智叶萃取物对急性肝损伤小鼠MDA和S0D的影响（'x土 & /?= 10)
由表3和图2、3的试验结果可以看出：与空白组相比，模型组的MDA含量极显著升高 (K0. 001)，SOD活力显著降低（K0. 05);乙酸乙酯部位萃取物低剂量组和正丁醇部位萃取 物高剂量组的MDA含量和SOD活力均非常显著的升高（K0. 01);其它组的这两项指标与空 白组比较无显著性差异（/M). 05)。
[0028] 治疗组与模型组相比，乙酸乙酯部位萃取物高剂量组的MDA含量极显著性降低 (K0. 001)，S0D活力极其显著性升高（K0. 001);乙酸乙酯部位萃取物低剂量组和正丁醇部 位萃取物高剂量组的MDA含量与模型组比较均无显著性差异（/M). 05)，而S0D活力极显著 升高（K0. 001);正丁醇部位萃取物低剂量组的MDA含量极显著性降低（K0. 001)，S0D活 力显著性升高（代〇. 05);阳性对照联苯双酯组的MDA含量非常显著性降低（K0. 01)，但S0D 活力无显著性差异（乃〇. 05)。
[0029] 与阳性对照联苯双酯组相比，给予样品溶液的四组的MDA含量均无显著性差异 (/M). 05)，而乙酸乙酯部位萃取物的高、低剂量组和正丁醇部位萃取物的高剂量组的S0D 活力均有非常显著性升高（代〇. 01)。
[0030] 综上可以说明：益智叶的乙酸乙酯部位萃取物在口服剂量为400mg/Kg时，可以显 著的降低四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠肝组织中的MDA含量，升高其S0D活力；并可以显 著的降低小鼠血清中的GOT活力，但对GPT活力的降低效果不显著。而益智叶的正丁醇部 位萃取物在口服剂量为l〇〇mg/Kg时，可以显著降低小鼠肝中的MDA含量，升高S0D活力；并 可以显著降低小鼠血清中GPT和GOT活力。因此，益智叶乙酸乙酯部位萃取物和正丁醇部 位萃取物具有较好的保肝护肝作用，可以用来制备保肝护肝药物，尤其是制备具有保护急 性肝损伤的药物。
【主权项】
1. 益智叶提取物在制备预防、治疗肝损伤保健品或药物上的应用。2. 如权利要求1所述益智叶提取物在制备预防、治疗肝损伤保健品或药物上的应用， 其特征在于：所述益智叶提取物为益智叶的乙酸乙酯部位萃取物和/或正丁醇部位萃取 物。3. 如权利要求2所述益智叶提取物在制备预防、治疗肝损伤保健品或药物上的应用， 其特征在于：所述益智叶提取物是由如下方法制得：将益智叶加入到乙醇中，加热提取，提 取液经浓缩干燥得乙醇总浸膏；将乙醇总浸膏分散于水中，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取， 萃取液挥干溶剂，分别得到乙酸乙酯部位萃取物、正丁醇部位萃取物。4. 如权利要求3中所述益智叶提取物在制备预防、治疗肝损伤保健品或药物上的应 用，其特征在于：制备乙醇总浸膏时，加入的乙醇浓度为75V%，加热温度不超过55°C，加热 提取3次，每次3h。
【专利摘要】本发明属于中药技术领域，具体涉及益智叶提取物在制备预防、治疗肝损伤保健品或药物上的应用。该益智叶提取物为其乙酸乙酯部位萃取物和/或正丁醇部位萃取物。本发明采用了四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠模型，考察其保肝活性。实验结果表明：益智叶乙酸乙酯部位萃取物和正丁醇部位萃取物均能显著的降低肝损伤小鼠血清中MDA含量和GOT活力，并升高SOD活力；且正丁醇部位萃取物对GPT活力也能够显著降低，说明抗脂质过氧化可能是其主要作用机制之一，可用来制备保肝护肝药物，尤其是制备具有保护急性肝损伤的药物。
【IPC分类】A61K36/9062, A61P1/16
【公开号】CN105213920
【申请号】CN201510650426
【发明人】康文艺, 王金梅, 朱晓娣, 余琦, 何楠
【申请人】河南大学
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年10月10日