化合物。
[0074] 根据本发明的药物组合物适当地制备用于全身、局部、经口或鼻内施用。药物组合 物的这些施用方式允许活性物质的快速和不复杂的摄取。例如，对于经口施用，固体和/或 液体药剂可以直接施用，或可替代地可以在施用前溶解和/或稀释。在一个实施方案中，药 物组合物是液体，特别是水性组合物。
[0075] 根据本发明的药物组合物可以适当地制备用于静脉内、动脉内、肌内、血管内、腹 膜内或皮下施用。例如，可以使用注射或输液。直接施用到血流内具有下述优点：组合物的 活性物质分布遍及全身用于全身疗法，并且快速到达靶组织。在一个实施方案中，药物组合 物制备用于静脉内施用，并且可以采取液体形式。
[0076] 本发明的ACE2多肽可以用于治疗如本领域关于含锌的ACE2多肽有先例的各种疾 病。
[0077] 根据本发明的第六个方面，提供了用于疗法中的ACE2多肽或ACE2多肽群体，例如 用于治疗各种疾病和状况。还提供了治疗各种疾病和状况的方法，其包括给有此需要的患 者施用有效量的本发明的ACE2多肽或ACE2多肽群体。本发明进一步提供了本发明的ACE2 多肽或ACE2多肽群体在制造用于治疗各种疾病和状况的药剂中的用途。各种疾病和状况 如下更详细地进行描述。
[0078] 本发明的ACE2多肽或ACE2多肽群体可以用于治疗或预防高血压(包括血压升 高)、充血性心脏衰竭、慢性心脏衰竭、急性心脏衰竭、收缩性心脏衰竭、心肌梗塞、动脉硬 化、肾疾病、肾功能衰竭、以及肺疾病例如成人呼吸窘迫综合征（ARDS)、急性肺损伤（ALI)、 慢性阻塞性肺疾病（C0PD)、肺动脉高血压、肾纤维化、慢性肾功能衰竭、急性肾功能衰 竭、慢性肾功能衰竭、急性肾损伤和多器官功能障碍综合征(例如如引入本文作为参考的 W02004/000367中公开的，参见第7页第23行到第8页，第3行和第21页，第3行到第26 行)。本发明的ACE2多肽或ACE2多肽群体可以用于降低血压。优选地，治疗是心脏或肾或 肺或血管。本发明提供了通过施用本发明的ACE2多肽或ACE2多肽群体，来治疗心脏疾病、 肺疾病和肾疾病、高血压和多器官功能障碍综合征。肺疾病包括但不限于ARDS、ALI、C0PD、 肺炎、哮喘、慢性支气管炎、肺气肿、囊性纤维化、间质性肺病、原发性肺动脉高压、肺栓塞、 肺结节病、肺结核、肺癌、动脉粥样硬化、多囊性肾疾病（PKD)、肺水肿和任选的肺高渗。肾疾 病包括但不限于肾纤维化、慢性肾功能衰竭、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭和急性肾损 伤。
[0079] 本发明涉及炎症的治疗处理或预防，如引入本文作为参考的W02009/076694中公 开的，参见第4页和第5页的第一段。炎症优选为组织或器官的局部炎症和/或全身炎症。 基于一般机制，能够治疗慢性和急性炎症两者。特别地，炎症可以包括但不限于风湿病、败 血症、骨关节炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮病或混合结缔组织病。这些状况可 以通过机械或化学的细胞损伤或组织损伤或伤口、感染，特别是病原体例如病毒、细菌或真 菌，通过植入物包括器官植入物和通过药剂引起。在一个实施方案中，炎症通过感染引起。
[0080] 炎症还可以包含自身免疫疾病。疾病可以是例如抗肾小球基底膜病、神经系统的 自身免疫疾病、系统性红斑狼疮（SLE)、阿狄森氏病、抗磷脂综合征、IgA肾小球肾炎、古德 帕斯丘综合征、朗爱二氏肌无力综合征、特发性紫癜、自身免疫性甲状腺炎、类风湿性关节 炎、胰岛素依赖型糖尿病、天疱疮、自身免疫性溶血性贫血、杜林疱疹样皮炎、膜性肾小球肾 炎、格雷夫斯病、交感性眼炎、自身免疫性多内分泌腺疾病、多发性硬化和/或赖特氏病。
[0081] 本发明涉及纤维化的治疗，如引入本文作为参考的W02009/086572第3页，第四 段至第6页第一段中公开的。在一个实施方案中，纤维化是组织或器官的局部纤维化。此 类器官特异性纤维化包括但不限于肝纤维化、肺纤维化、结缔组织纤维化、特别是肌隔纤维 化、肾纤维化、以及皮肤纤维化，例如与炎症-硬皮病组合。纤维化可以是内脏器官的纤维 化，例如肝、肾、肺、心脏、胃、肠、胰腺、腺体、肌肉、软骨、腱、韧带或关节。囊性纤维化或风湿 性纤维化是一类纤维化。在另一个实施方案中，纤维化与炎症同时出现，例如肝炎(炎性肝 疾病)。在另一个实施方案中，纤维化与器官移植相关。
[0082] 纤维化优选归于细胞外基质组分，特别是蛋白质例如胶原的过量沉积。胶原是结 缔组织，特别是细胞外基质的结构蛋白质。特别与SMA(平滑肌肌动蛋白）标记物组合的胶 原形成与纤维化进展直接关联。根据本发明，已观察到通过ACE2有效抑制胶原沉积。
[0083] 另外，基于一般机制，慢性纤维化的治疗也是可能的。特别地，纤维化可以通过机 械或化学的细胞或组织损伤或伤口、癌症或肿瘤、感染，特别是病原体例如病毒、细菌或真 菌，通过植入物包括器官植入物以及药剂引起。感染可以是器官特异性的，例如特别是由于 HCV的肝炎病毒感染。可以用本发明的ACE2多肽治疗的其他优选的纤维化疾病包括例如原 发性或继发性纤维化，特别是通过自身免疫应答引起的纤维化，奥蒙德病(腹膜后纤维化)。
[0084] 本发明涉及如例如W02009/086572中公开的肝疾病治疗。在一些实施方案中，纤 维化或肝疾病与炎症同时出现，例如肝炎(炎性肝疾病)。
[0085] 本发明涉及肿瘤疾病和癌症的治疗，例如如引入本文作为参考的W02009/124330 中公开的，参见第6页到第9页，第五段。优选地，肿瘤疾病选自生殖道的肿瘤疾病特别是 卵巢癌、睾丸癌、前列腺癌或乳癌，消化道的肿瘤疾病特别是胃癌、肠癌、直肠癌、胰腺癌、食 道癌和肝癌、肾癌、肺癌、黑素瘤或成神经细胞瘤。
[0086] 在另一个实施方案中，本发明涉及糖尿病包括糖尿病肾病的治疗。
[0087] 本发明通过下述图和实施例进一步举例说明，而不限制于本发明的这些具体实施 方案。 实施例
[0088] 实施例1:ACE2标准 ACE2制剂如先前所述（W0 2008/151347,参见实施例1)获得，以等摩尔的锌/蛋白质 比使用。这种1:1的比率通过锌含量的定量氨基酸分析和ICP-MS分析加以证实。ICP如下 进行：在分析前，将样品用ΗΝ03 (超级纯，1:100v/v)稀释且酸化(这导致轻微混浊，但不影 响测量的结果)。根据GNORMENISO17294-2,通过电感耦合质谱法测定锌含量。
[0089] 这种材料用于完全酶促活性的ACE2的标准。因此，对于研究锌或其他金属对酶促 活性的影响的所有进一步比较研究，活性设为100%。
[0090] 实施例2 :锌的耗尽 在含有150mMNaCl和50μΜZnClJ^ 100mM甘氨酸缓冲液pH: 7. 5中配制的2. 0mgACE2 (例如如实施例1中所述制备的；400μL)与100μL0. 5MEDTA，pH8. 0混合，以 获得100mMEDTA的最终浓度。样品中总锌浓度是约100μΜ。这获得1:1000的锌与EDTA摩尔比（即一千倍过量的EDTA)。将溶液轻轻混合且在室温下温育14小时。
[0091] 通过使用Vivaspin浓缩器装置的缓冲液更换，通过添加含有300mMNaCl的1ml 50mMMES-缓冲液pH6. 5,来执行EDTA的去除。将这再重复两次。
[0092] 最终体积为190μL，并且该样品中的ACE2浓度通过其在280nm处的吸光度测量 为8.2mg/ml，并且通过使用163,680 1/molXcm的消光系数进行计算。
[0093] 锌耗尽的ACE2通过尺寸排阻层析进行分析，如图1中所示。分子量通过与GF标 准（甲状腺球蛋白、IgG、卵清蛋白和肌球蛋白）直接比较进行测定，并且发现为270640Da。 ACE2作为单重峰在8. 4分钟的保留时间洗脱。在12分钟保留后的信号是由于小缓冲液组 分。这项研究证实酶制剂的完整性，因为ACE2作为单重峰洗脱，并且相应地，在锌去除期间 未发生蛋白质的聚集或断裂。有趣的是，不含锌的ACE2制剂是稳定的，并且不聚集或崩解。
[0094] 实施例3 :ACE2活性的锌依赖性 ACE2的酶促活性在添加和不添加锌的反应缓冲液以及人肝素血浆中进行研究，以 模拟全身施用后的情形。分别的对照为不含锌的相同缓冲液。荧光标记的ACE2底物 Mca-Ala-Pro-Lys-DNP用于定量酶促活性。DNP(二硝基苯基）部分猝灭天然肽的Mca (甲氧基-香豆素-乙酸）荧光，但在通过ACE2切割后，荧光信号变得可检测。在温育 约30分钟后，所有样品均用凡0以1:10的比稀释。最后，将50μL每种样品与50μL Mca-Ala-Pro-Lys-DNP(用MES-NaCl缓冲液1:5预稀释）混合，并且在作为发射波长的430 nm和作为激发波长的320nm处立即测量。记录荧光时间曲线，并且初始斜率用于定量分 别的ACE2活性。结果展示于图2中。对于每种样品标绘测量的时间依赖性相对荧光单位 (RFU)。使曲线与二阶多项式曲线y=B0 +Bit+B2t2拟合，其中B1是分别的曲线在t=0时 的初始斜率。B1值显示于表1中且对应于最大切割活性。
[0095] 表1:ACE2活件分析
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[0096] 单独的人血浆以及在MES缓冲液中的Zn耗尽的ACE2不将荧光标记的底物切割至 任何显著程度。最大活性分别为4±4和25±4FU/分钟。这得出结论人血浆未显示重要的 固有ACE2活性，并且Zn耗尽的ACE2丧失其酶促活性。与这个观察形成对比，含有Zn2+的 ACE2样品显示在MES缓冲液中的强活性（708 ±8FU/分钟)。这种活性在人血浆中几乎加倍 (1436±18FU/分钟）。对MES缓冲液添加0. 5mg/mlZn2+使ACE2活性增加直到1176±27FU/分钟，并且几乎完全恢复Zn耗尽的ACE2的活性（1139 ± 25FU/分钟）。
[0097] 有趣的是，锌耗尽的ACE2在人血浆中变得完全酶促活性（1254±12FU/分钟），而 无需Zn2+的任何外来添加。当与含Zn的ACE2之一相比较时，这种活性的几乎相同的。
[0098] 实施例4 :ACE2活性的金属离子依赖性 ACE2的酶促活性也在不同组的反应缓冲液中进行研究，所述反应缓冲液补充有不同的 金属离子，以便将Zn2+替换为其他带正电的金属离子。如前所述的相同的荧光标记的ACE2 底物Mca-Ala-Pro-Lys-DNP用于定量所得到的酶促活性。因此，耗尽的ACE2用MES-NaCl 缓冲液预稀释至 2(^g/ml的浓度。通过用 50μΜΖη2+、25μΜC〇2+、50μΜNi2+、50μΜFe2+、 25μΜFe3+、5〇PMPb2+、50μΜMg2+、50μΜMn2+和50μΜCu2+溶液稀释，生成含有 10、5、2.5、 1.25、0. 63、0. 31、0. 15和0. 063Pg/mlACE2的系列稀释，并且温育30分钟。将50μL每种 样品与50μL底物Mca-Ala-Pro-Lys-DNP(用MES-NaCl缓冲液1:5预稀释）混合，并且在 作为发射波长的430nm和作为激发波长的320nm处立即测量。记录荧光时间曲线，并且 初始斜率用于定量分别的ACE2活性。对于每种样品标绘时间依赖性相对荧光单位（RFU)。 使曲线与二阶多项式曲线y=B0 +Bit+B2t2拟合，其中B1是分别的曲线在t=0时的初始 斜率。B1对应于最大活性，并且值显示于表2中。
[0099]表2:金属离子依赖件ACE2活件
[0100] 锌耗尽的ACE2是酶促失活的。在10Pg/mlACE2和5〇μΜZn2+ (对应于1:250的 摩尔比)的浓度时，显示最高的特异性ACE2活性，并且因此设为100%。用Co2+ (78%)和Ni2+ 以及Pb2+达到可比较的活