，点板观测，收集有效成分段，待内酯洗脱完毕后，换乙酸乙酯:乙醇=3:1洗脱，点板观测，收集有效成分段。将含有有效成分的洗脱段分别浓缩，得到:产品I (银杏内酯)3.38，内酯含量70.9% ;产品
II(银杏黄酮)8.43g，黄酮含量71.5%。
[0029]实施例三
[0030]将10公斤水(内含400g碳酸氢钠)加入密闭容器中加热煮沸，投入新鲜银杏叶子2kg，蒸煮灭酶15分钟。将叶子取出，采用90%乙醇70°C提取一次，过滤，滤渣采用80%乙醇70°C提取一次，过滤，合并提取液，浓缩至比重1.1，调至中性，放置过滤，上清液拌入1/3倍量聚酰胺干燥。另取1.72kg聚酰胺和0.28kg氧化铝装柱，采用石油醚:乙酸乙酯=3:2淋洗，将上述烘干样品加入柱子顶端，继续采用石油醚:乙酸乙酯=3:2洗脱，点板观测，收集有效成分段，待内酯洗脱完毕后，换乙酸乙酯:乙醇=4:1洗脱，点板观测，收集有效成分段。将含有有效成分的洗脱段分别浓缩，得到:产品I (银杏内酯)3.118，内酯含量75.2%;产品II (银杏黄酮)8.54g，黄酮含量74.6%。
[0031]实施例四
[0032]将10公斤水(内含600g氨水)加入密闭容器中加热煮沸，投入新鲜银杏叶子2kg，蒸煮灭酶30分钟。将叶子取出，采用90%乙醇70°C提取一次，过滤，滤渣采用80%乙醇70°C提取一次，过滤，合并提取液，浓缩至比重1.1，调至中性，放置过滤，上清液拌入1/3倍量聚酰胺干燥。另取0.75kg聚酰胺和0.25kg氧化铝装柱，采用石油醚:乙酸乙酯=1:2淋洗，将上述烘干样品加入柱子顶端，继续采用石油醚:乙酸乙酯=1:2洗脱，点板观测，收集有效成分段，待内酯洗脱完毕后，换乙酸乙酯:乙醇=6:1洗脱，点板观测，收集有效成分段。将含有有效成分的洗脱段分别浓缩，得到:产品I (银杏内酯)3.lg，内酯含量72.3%;产品II (银杏黄酮)8.82g，黄酮含量70.5%。
[0033]实施例五
[0034]将10公斤水(内含100g碳酸氢钠)加入密闭容器中加热煮沸，投入新鲜银杏叶子2kg，蒸煮灭酶20分钟。将叶子取出，采用90%乙醇70°C提取一次，过滤，滤渣采用80%乙醇70°C提取一次，过滤，合并提取液，浓缩至比重1.1，调至中性，放置过滤，上清液拌入1/3倍量聚酰胺干燥。另取1.6kg聚酰胺和0.4kg氧化铝装柱，采用石油醚:乙酸乙酯=1:1淋洗，将上述烘干样品加入柱子顶端，继续采用石油醚:乙酸乙酯=1:1洗脱，点板观测，收集有效成分段，待内酯洗脱完毕后，换乙酸乙酯:乙醇=10:1洗脱，点板观测，收集有效成分段。将含有有效成分的洗脱段分别浓缩，得到:产品I (银杏内酯)3.26g，内酯含量70.6%；产品II (银杏黄酮)8.79g，黄酮含量72.1%。
[0035]实验所用原料银杏黄酮含量0.34%，银杏内酯含量0.12%。经过大量实验结果可以得出，本发明所述方法所得产品的回收率均大于88%，产品中黄酮含量大于70%，内酯含量大于70% ;因此，该方法产品含量高，回收率高，适合于工业化生产。
【主权项】
1.一种从银杏叶中提取分离银杏黄酮和银杏内酯的方法，其特征在于，包括以下步骤: 步骤1灭酶工艺 将碱水加入密闭容器中加热至沸腾，然后加入银杏叶蒸煮灭酶，得到处理后的银杏叶；所述碱水为碳酸氢钠溶液或氨水； 步骤2提取工艺 将步骤1所得的银杏叶用乙醇溶液提取，将提取渣再用乙醇溶液提取，合并提取液浓缩处理，调至中性，放置产生沉淀，取上清液备用； 步骤3柱纯化工艺 向步骤2所得上清液中加入聚酰胺，搅拌均匀，烘干，另取聚酰胺和氧化铝混合填料装柱，采用石油醚和乙酸乙酯混合溶剂淋洗，将烘干的产物加入柱顶部，继续采用石油醚和乙酸乙酯混合溶剂洗脱，点板观测，分段收集有效成分，将含有有效成分的洗脱段浓缩，得到银杏内酯；待内酯洗脱完毕后，用乙酸乙酯和乙醇混合溶剂洗脱，点板观测，分段收集有效成分，将含有有效成分的洗脱段浓缩，得到银杏黄酮。2.根据权利要求1所述的从银杏叶中提取分离银杏黄酮和银杏内酯的方法，其特征在于:在提取工艺中是将步骤1所得的银杏叶用质量浓度为90%的乙醇溶液提取，将提取渣再用质量浓度为80%的乙醇溶液提取合并提取液浓缩处理，调至中性，放置产生沉淀，取上清液备用。3.根据权利要求2所述的从银杏叶中提取分离银杏黄酮和银杏内酯的方法，其特征在于，所述步骤1具体是:将碱水加入密闭容器中加热至沸腾，然后加入银杏叶蒸煮灭酶5-30min，得到处理后的银杏叶；所述银杏叶与碱水的质量比为1:5 ;所述银杏叶和碱水中碱的质量比为1:0.05-0.3。4.根据权利要求3所述的从银杏叶中提取分离银杏黄酮和银杏内酯的方法，其特征在于:所述碱水为碳酸氢钠溶液。5.根据权利要求1-4任一所述的从银杏叶中提取分离银杏黄酮和银杏内酯的方法，其特征在于:所述步骤1中银杏叶和碱水中碱的质量比为1:0.2。6.根据权利要求2所述的从银杏叶中提取分离银杏黄酮和银杏内酯的方法，其特征在于，所述步骤2具体是:将步骤1所得的银杏叶用质量浓度为90%的乙醇溶液提取1-2次，将提取渣用质量浓度为80%的乙醇溶液提取1-2次，合并提取液浓缩处理，浓缩比重至1.1，调至中性，放置产生沉淀，沉淀经过滤后，取上清液备用。7.根据权利要求2所述的从银杏叶中提取分离银杏黄酮和银杏内酯的方法，其特征在于，所述步骤3具体是:向步骤2所得上清液中加入聚酰胺，搅拌均匀，烘干，另取聚酰胺和氧化铝混合填料装柱，采用石油醚和乙酸乙酯混合溶剂淋洗，将烘干的产物加入柱顶部，继续采用石油醚和乙酸乙酯混合溶剂洗脱，点板观测，分段收集有效成分，将含有有效成分的洗脱段浓缩，得到银杏内酯；待内酯洗脱完毕后，用乙酸乙酯和乙醇混合溶剂洗脱，点板观测，分段收集有效成分，将含有有效成分的洗脱段浓缩，得到银杏黄酮；所述步骤2所得上清液和聚酰胺质量比为3:1，所述原料与聚酰胺和氧化铝混合填料的质量比为1:0.5-1.5，所述聚酰胺与氧化铝的质量比为10-3:1，所述石油醚和乙酸乙酯洗脱体积比为2:1-4，所述乙酸乙酯和乙醇洗脱体积比为3-10:1。8.根据权利要求7所述的从银杏叶中提取分离银杏黄酮和银杏内酯的方法，其特征在于:所述原料与聚酰胺和氧化铝混合填料的质量比为1:1，所述聚酰胺与氧化铝的质量比为6:1，所述石油醚和乙酸乙酯洗脱体积比为3:2，所述乙酸乙酯和乙醇洗脱体积比为4:1。
【专利摘要】本发明提供一种从银杏叶中提取分离银杏黄酮和银杏内酯的方法，包括三个步骤：灭酶工艺、提取工艺和柱纯化工艺；本发明将新鲜银杏叶采用碱水蒸煮灭酶，可以将原料鲜银杏叶中的酶迅速灭活，而且采用碱水浸泡可以将原料中的银杏黄酮最大程度地游离出来，将蒸煮后残留的碱水液加入提取有机溶剂中，有利于后续提取完全，提高产品收率。
【IPC分类】A61K36/16, A61K127/00
【公开号】CN105412167
【申请号】CN201510847892
【发明人】王晓莹, 肖红, 郭文华, 张瑜
【申请人】陕西嘉禾生物科技股份有限公司
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年11月27日