定量的丙酬溶液，充分振摇，400化pm 离屯、20min，收取沉淀，获得初步纯化的粗多糖。
[0030] 采用苯酪-浓硫酸法检测多糖含量，具体步骤如下：取经过脱蛋白、脱色素及脱酪 处理的粗多糖样品，用蒸馈水溶解成15mg/mL的粗多糖水溶液，测量时再做100倍稀释。之后 按照样品、5%苯酪溶液、浓硫酸为2:1:5的比例添加试剂，混匀5min后，沸水浴加热15min， 冷却。处理好的待检样品在490nm处测量吸光度值。标准曲线采用葡萄糖为标准品绘制。经 检测本发明提取的玫瑰多糖含量为85.4%。
[0031] 本发明的有益效果在于：
[0032] 1、本发明W秀丽隐杆线虫作为阿尔茨海默症病理模型进行实验，结果表明：玫瑰 多糖对罹患阿尔茨海默症的秀丽隐杆线虫具有显著的治疗作用。表现在对AD秀丽隐杆线虫 肌肉内AP过度表达引起的麻搏表型具有显著的抑制作用，即玫瑰多糖对秀丽隐杆线虫阿尔 茨海默症病理模型具有显著的治疗作用，提示玫瑰多糖具有治疗阿尔茨海默症的潜力，可 在制备治疗阿尔茨海默症的药物中应用，亦可在制备预防阿尔茨海默症的保健品中应用。
[0033] 2、玫瑰常用于提取玫瑰精油，玫瑰多糖可从玫瑰提取过精油的玫瑰花渣中提取获 得，从而大大地提升了玫瑰的价值。
[0034] 下面结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不 局限于W下所述。
【附图说明】
[0035] 图1玫瑰多糖延缓AD秀丽隐杆线虫的肌肉麻搏
[0036] C-表示空白对照组。
【具体实施方式】
[0037] 实施例一玫瑰多糖的制备方法
[0038] 本发明使用水提醇沉法制备玫瑰多糖:称取玫瑰或玫瑰花渣12.5g，加水250mL，浸 泡20min后，加热煮沸并保持30分钟，1000 Orpm离屯、IOmin，获得上清液。重复S次收集上清 液共得350mL，加入5倍量的无水乙醇室溫沉淀12h，1000化pm离屯、5min，收集沉淀，待溶剂挥 干，收得固体，即为粗多糖。多糖收率约为1.3%。共得650mg粗多糖。
[0039] 粗多糖脱蛋白：称取IOOmg粗多糖粉末，用IOmL蒸馈水溶解，加入1/5体积氯仿:正 下醇(5:1)，剧烈振荡，4000转/分钟，离屯、20分钟，弃沉淀，重复多次直至离屯、后溶剂介面无 沉淀。
[0040] 粗多糖脱色素:取脱蛋白后的粗多糖粉末，加入10倍量65%的乙醇，55°C水浴提取 f5h，4000巧m离屯、5min，弃上清。
[0041] 粗多糖脱酪：取脱色素之后的粗多糖粉末，加入一定量的丙酬溶液，充分振摇， 400化pm离屯、20min，收取沉淀。经过初步纯化后获得多糖85mg。
[0042] 采用苯酪-浓硫酸法检测多糖含量，具体步骤如下：取经过脱蛋白、脱色素及脱酪 处理的粗多糖样品，用蒸馈水溶解成15mg/mL的粗多糖水溶液，测量时再做100倍稀释。之后 按照样品、5%苯酪溶液、浓硫酸为2:1:5的比例添加试剂，混匀5min后，沸水浴加热15min， 冷却。处理好的待检样品在490nm处测量吸光度值。标准曲线采用葡萄糖为标准品绘制。经 检测本发明提取的玫瑰多糖含量为85.4%。
[0043] 实施例二玫瑰多糖延缓AD秀丽隐杆线虫的肌肉麻搏
[0044] 1.生物材料
[0045] (1)秀丽隐杆线虫化4176购自化enorhabditis Genetics Center(CGC);为转基因 品系，在25°C溫度诱导下肌肉特异性表达人类A&-42，A&-42在肌肉组织聚集，最终导致线虫 麻搏，本实施例采用秀丽线虫化4176株系作为筛选抗AD药物的病理模型。
[0046] (2)大肠杆菌0P50(尿喀晚渗漏突变株），购自化enorhabditis Genetics Center (CGC)，作为秀丽隐杆线虫的食物。
[0047] 2.试剂
[004引 （1)固体NGM(化matode Growth Medium)培养基成分与制作（Wl升为例）：
[(K)加]固体NGM培养基配制好后，121°C下高压恒溫灭菌20min，在无菌操作台下加入5mg/ mL胆固醇1血，IM MgSOdmL, IM化CI2I血摇匀，趁热倒入已灭菌的9cm培养板，约20血/板。静 置等待培养基凝固，备用。
[0051] (2)M9 液配方
[0化3] (3)裂解液的配制:6.4%NaQ0溶液和IM NaOH溶液按体积比1:1混合。
[0054] 3.配制含有玫瑰多糖的NGM平板
[0055] 将玫瑰多糖W无菌水稀释，加入NGM培养基的终浓度分别为0.01mg/mL，0.1mg/mL 和Img/mL，将NGM倒入各平板，静置等待培养基凝固。在培养基上均匀涂布大肠杆菌0P50作 为线虫的食物。
[0化6] 4.实施步骤
[0057] (1)线虫的培养：
[0058] 将线虫接在涂有大肠杆菌0P50的固体NGM板上，然后置于16°C的培养箱中培养，当 线虫长到成虫时进行同步化处理。
[0059] (2)线虫同步化：
[0060] 挑选含有大量成虫并且有部分线虫卵已经解出的NGM培养基，用M9液将线虫从培 养基上冲下，转移到离屯、管中，静置使线虫自由沉降至管底，弃上清。视线虫量多少向离屯、 管中加入裂解液，在縱祸揽拌器上振荡5-7分钟待线虫全部断裂时停止满旋，并分装于 1.5mL离屯、管中，用M9溶液洗线虫卵S次。
[0061] (3)实验组设置
[0062] 空白对照组(C):无菌水
[0063] 0.0 lmg/ml玫瑰多糖组;0.1 mg/ml玫瑰多糖组；Img/ml玫瑰多糖组。
[0064] (4)玫瑰多糖对秀丽隐杆线虫化4176的作用
[0065] 将同步化后分装于离屯、管中的线虫卵转移到涂布有0P50并混合有不同浓度玫瑰 多糖的NGM培养皿中，玫瑰多糖的终浓度分别为O. OImg/ml、O. Img/m巧日Img/ml，空白对照组 涂布有0P50并加有与玫瑰多糖组等体积无菌水的NGM培养皿，每个培养皿60条线虫，每个药 物浓度设置=个平行，16°C培养3天至L3期。
[0066] 为了使线虫表达A0，将L3期线虫转在25°C下进行诱导，34h后开始计数线虫麻搏条 数。每两小时计数一次，直至所有线虫都麻搏(麻搏是指机械刺激线虫身体时，线虫不能运 动或者只有头部运动）。
[0067] (5)实验结果
[0068] 图中纵坐标表示没有麻搏的秀丽隐杆线虫占的百分比，在同一个时间点，此值越 大，表明该处理组中没有麻搏的秀丽隐杆线虫比例越大，即药物延缓麻搏的作用越强。
[0069] 玫瑰多糖对秀丽隐杆线虫AD病理模型的肌肉麻搏具有显著的延缓作用，并且延缓 作用与玫瑰多糖呈浓度依赖关系，运表明玫瑰多糖具有抗AD作用（图1)。
[0070] 通过W上实施例证明，玫瑰多糖对秀丽隐杆线虫阿尔茨海默症病理模型具有显著 的治疗作用，提示本发明所述玫瑰多糖具有治疗阿尔茨海默症的潜力，可在制备治疗阿尔 茨海默症的药物中应用，亦可在制备预防和辅助治疗阿尔茨海默症的相关保健品中应用。
【主权项】
1. 玫瑰多糖在制备治疗阿尔茨海默症的药物中的应用。2. 如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述玫瑰多糖作为药效成分的药物制剂为胶 囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液、丸剂。3. 玫瑰多糖在制备预防和辅助治疗阿尔茨海默症的保健品中的应用。4. 如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述玫瑰多糖作为有效成分的保健品剂型为 胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液、丸剂。
【专利摘要】本发明属于中药技术领域，提供一种玫瑰多糖的应用，具体涉及玫瑰多糖在制备治疗阿尔茨海默症的药物中的应用。该玫瑰多糖对秀丽隐杆线虫阿尔茨海默症病理模型具有显著的治疗作用，提示本发明所述玫瑰多糖具有治疗阿尔茨海默症的潜力，可在制备治疗阿尔茨海默症的药物中应用，亦可在制备预防和辅助治疗阿尔茨海默症的相关保健品中应用。
【IPC分类】A23L33/00, A61K36/738, A61K31/715, A61P25/28
【公开号】CN105477008
【申请号】CN201510937615
【发明人】不公告发明人
【申请人】甘肃东方天润玫瑰科技发展有限公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年12月16日