h，制得多巴胺接枝氧化海藻酸钠中间体，装入截留分子量为3500Da的透析袋中，用蒸馏水透析1天后，取截留液在压力OPa、温度-100°C条件下冷冻干燥48h，然后将冻干产物溶于pH为7.0的PBS或浓度为0.lmol/L、pH为7.0的硼酸钠溶液中，配成质量浓度为5%的溶液，即得A液；
(3)1型胶原溶液的制备:将一定质量的I型胶原粉剂溶解在浓度为0.lmol/L的醋酸溶液中，在4°C下搅拌使之完全溶解，然后用0.2mol/L的氢氧化钠溶液中和pH至6.0，最终配成浓度为5mg/mL的I型胶原溶液，即得B液；
(4)使用前首先用质量浓度为3%的双氧水或酶活性单位为10U/mL的辣根过氧化物酶清洗伤口，然后将上述A、B两液按照1:1的体积比均匀混合后立即涂覆到伤口处，120s内即可形成凝胶，可牢固粘附于伤口表面。
[0015]实施例2
(1)氧化海藻酸钠的制备:称取10g海藻酸钠，分散于50mL无水乙醇中，再避光称取4g的高碘酸钠溶于50mL蒸馏水中，两者混合，在30°C条件下避光磁力搅拌反应6h，加入20mL乙二醇终止反应lh，最后用蒸馏水透析2天，将截留物在15000rmp下离心20min，除去沉淀，将上清液在压力10Pa、温度-50°C条件下冷冻干燥60h，即制得氧化海藻酸钠；
(2)多巴胺接枝氧化海藻酸钠溶液的制备:称取一定质量的氧化海藻酸钠，溶于pH为5.5的MES缓冲液中，配成质量浓度为6%的氧化海藻酸钠溶液;在氮气保护下，将一定质量比例的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶于上述氧化海藻酸钠溶液中，使得氧化海藻酸钠与H)C和NHS的投料质量比为1:2:0.5,30°C下反应25min，再加入一定质量比例的多巴胺，使得氧化海藻酸钠与多巴胺投料质量比为1:0.6，30°C继续反应14h，制得多巴胺接枝氧化海藻酸钠中间体，装入截留分子量为8000Da的透析袋中，用蒸馏水透析2天后，取截留液在压力10Pa、温度-50°C条件下冷冻干燥60h，然后将冻干产物溶于口11为7.4的？83或浓度为0.311101/1、？!1为7.4的硼酸钠溶液中，配成质量浓度为10%的溶液，即得A液；
(3)1型胶原溶液的制备:将一定质量的I型胶原粉剂溶解在浓度为0.3mol/L的甲酸溶液中，在10°C下搅拌使之完全溶解，然后用0.3mol/L的氢氧化钠溶液中和pH至7.0，最终配成浓度为10mg/mL的I型胶原溶液，即得B液；
(4)使用前首先用质量浓度为10%的双氧水或酶活性单位为20U/mL的辣根过氧化物酶清洗伤口，然后将上述A、B两液按照1:1.5的体积比均匀混合后立即涂覆到伤口处，90s内即可形成凝胶，可牢固粘附于伤口表面。
[0016]实施例3
(1)氧化海藻酸钠的制备:称取10g海藻酸钠，分散于100mL无水乙醇中，再避光称取6g的高碘酸钠溶于100mL蒸馏水中，两者混合，在40°C条件下避光磁力搅拌反应10h，加入30mL乙二醇终止反应2h，最后用蒸馏水透析3天，将截留物在20000rmp下离心30min，除去沉淀，将上清液在压力20Pa、温度-30°C条件下冷冻干燥72h，即制得氧化海藻酸钠；
(2)多巴胺接枝氧化海藻酸钠溶液的制备:称取一定质量的氧化海藻酸钠，溶于pH为6.5的MES缓冲液中，配成质量浓度为10%的氧化海藻酸钠溶液;在氮气保护下，将一定质量比例的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶于上述氧化海藻酸钠溶液中，使得氧化海藻酸钠与EDC和NHS的投料质量比为1:3:1，40°C下反应40min，再加入一定质量比例的多巴胺，使得氧化海藻酸钠与多巴胺投料质量比为1:1.0，40°C继续反应24h，制得多巴胺接枝氧化海藻酸钠中间体，装入截留分子量为14000Da的透析袋中，用蒸馏水透析3天后，取截留液在压力20Pa、温度-30°C条件下冷冻干燥72h，然后将冻干产物溶于pH为8.0的PBS或浓度为0.5mol/L、pH为8.0的硼酸钠溶液中，配成质量浓度为20%的溶液，即得A液； (3)1型胶原溶液的制备:将一定质量的I型胶原粉剂溶解在浓度为0.5mol/L的盐酸溶液中，在20°C下搅拌使之完全溶解，然后用0.5mol/L的氢氧化钠溶液中和pH至8.0，最终配成浓度为15mg/mL的I型胶原溶液，即得B液；
(4)使用前首先用质量浓度为30%的双氧水或酶活性单位为40U/mL的辣根过氧化物酶清洗伤口，然后将上述A、B两液按照1:2的体积比均匀混合后立即涂覆到伤口处，30s内即可形成凝胶，可牢固粘附于伤口表面。
【主权项】
1.一种新型生物医用粘合剂主要含有氧化海藻酸钠、多巴胺和I型胶原三种基质，其关键性能指标如下: 外观:红褐色或红橙色，凝胶状物； 重金属含量:< 10yg/g(m/m)； 水蒸气透过率:37°C，35%相对湿度条件下粘合剂的水蒸气透过率为1000?2500g/m2.24h； 平衡溶胀率:<2g/g湿胶； 粘合力:猪皮搭接剪切强度不低于50kPa; 细胞毒性:细胞毒性反应不大于I级； 无菌试验:无菌； 致敏试验:无迟发型超敏反应； 皮内反应试验:原发性刺激指数PI I <0.4。2.权利要求1所述的一种新型生物医用粘合剂，特征在于，其制备方法包括如下步骤: (1)氧化海藻酸钠的制备:称取log海藻酸钠，分散于25?100mL无水乙醇中，再避光称取2?6g的高碘酸钠溶于25?100mL蒸馏水中，两者混合，在20?40°C条件下避光磁力搅拌反应2?10h，加入10?30mL乙二醇终止反应0.5?2h，最后用蒸馏水透析1?3天，将截留物在10000?20000rmp下离心10~30min，除去沉淀，将上清液在压力0?20Pa、温度-100~-30°C条件下冷冻干燥48?72h，即制得氧化海藻酸钠； (2)多巴胺接枝氧化海藻酸钠溶液的制备:称取一定质量的氧化海藻酸钠，溶于MES缓冲液中，配成质量浓度为2%?10%的氧化海藻酸钠溶液;在氮气保护下，将一定质量比例的Ι-Ο-二甲氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺盐酸盐 (EDC) 和 N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS) 溶于上述氧化海藻酸钠溶液中，20?40°C下反应10?40min，再加入一定质量比例的多巴胺，20?40°C继续反应8?24h，制得多巴胺接枝氧化海藻酸钠中间体，装入截留分子量为3000?3500Da或8000?14000Da的透析袋中，用蒸馈水透析1?3天后，取截留液在压力0?20Pa、温度-100?-30°C条件下冷冻干燥48?72h，然后将冻干产物溶于PBS或硼酸钠溶液中，配成质量浓度为5%?20%的溶液，即得A液； (3)1型胶原溶液的制备:将一定质量的I型胶原粉剂溶解在一定浓度的无机酸或有机酸溶液中，在4?20°C下搅拌使之完全溶解，然后用0.2?0.5mol/L的氢氧化钠溶液中和pH至5.0?8.0，最终配成浓度为5?15mg/mL的I型胶原溶液，即得B液； (4)使用前首先用质量浓度为3%?30%的双氧水或酶活性单位为10?40U/mL的辣根过氧化物酶清洗伤口，然后将上述A、B两液按照1:1?2的体积比均匀混合后立即涂覆到伤口处，30?120s内即可形成凝胶，可牢固粘附于伤口表面。3.根据权利要求2所述一种新型生物医用粘合剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的海藻酸钠粘均分子量为200~350kDa;氧化后的海藻酸钠糖醛基单元占海藻酸钠总糖醛酸单元的摩尔百分数10%?70%。4.根据权利要求2所述一种新型生物医用粘合剂的制备方法，其特征在于，所述的MES缓冲溶液的pH为4.5-6.5，PBS缓冲液pH为7.0-8.0,硼酸钠溶液浓度为0.1-0.5mol/L，pH为7.0-8.0；所述氧化海藻酸钠与EDC和NHS的投料质量比为1.0:0.8-3.0:0.2-1.0,氧化海藻酸钠与多巴胺投料质量比为1.0:0.3?1.0，产物中多巴胺接枝率为5%?40%。5.根据权利要求2所述一种新型生物医用粘合剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述I型胶原来源于猪皮、牛皮、猪腱或牛腱之一种，其分子量30万道尔顿以上，具有完整的三股螺旋结构，羟脯氨酸含量不小于总蛋白质含量的9%(m/m)，溶解I型胶原时所用酸液为甲酸溶液、醋酸溶液、硫酸溶液或盐酸溶液之一种，酸液浓度为0.1~0.5mol/L。6.权利要求2所述一种新型生物医用粘合剂的使用方法，其特征在于，步骤(4)中所述粘合剂涂覆到伤口的涂覆量为0.1-0.3mL/mm2o
【专利摘要】本发明公开了一种能够与伤口产生原位交联的生物医用粘合剂及其制备方法。其特点是，首先，用高碘酸钠氧化海藻酸钠制得氧化海藻酸钠，将其溶于MES缓冲液中，在氮气保护下，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺同样溶于上述MES缓冲液中，接着加入多巴胺，反应8~24h后，透析、冻干，将反应产物溶于PBS或硼酸钠溶液中，即得A液；再将I型胶原溶于酸液中，溶液pH中和至5~8，即得B液。使用前先用双氧水或辣根过氧化物酶预处理伤口，然后将A、B液混合后立即涂覆到创面伤口处，30~120s即可形成凝胶，牢固粘附于伤口表面。该粘合剂在体内湿润环境下有较强的粘附力，兼具填充、密封和止血功能，生物相容性好，可生物降解，能促进伤口愈合。
【IPC分类】A61L26/00, A61L24/04, A61L24/00
【公开号】CN105477678
【申请号】CN201510985265
【发明人】但卫华, 崔国廉, 但年华, 刘新华
【申请人】四川大学
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年12月25日