部分显示出30 %以上的皮肤水分增加率。由此可以知道含有人参 皂苷Mc的本发明的组合物的皮肤保湿力效果优异。
[0114][试验例8]角质形成细胞分化促进效果测定
[0115] 如下所示，为了 了解人参皂苷Mc对角质形成细胞分化的促进效果，利用吸光度来 测定角质形成细胞分化时生成的角质化包膜(Cor nified Envelope，CE)量。
[0116] 首先，将从婴儿的表皮分离后并进行一次培养的人的角质形成细胞放入培养用烧 瓶中，使其附着于底部后，在培养液中用5ppm的浓度的人参皂苷Mc处理之后，培养5日直到 细胞长到底部面积的70~80%为止。此时，将低钙(0.03mM)处理组和高钙（1.2mM)处理组分 别作为阴性对照组和阳性对照组。然后获取上述培养的细胞，用磷酸盐缓冲盐水洗涤之后， 加入11111的含有2%十二烷基硫酸钠 (8〇(1;[11111(10(16071811]^3七6,303)和2〇1111浓度的二硫苏 糖醇(Dithiothr eitol，DTT)的IOmM浓度的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液(Tris-HCl， pH7.4)，并进行超声处理（sonication)、煮沸（boiling)、离心分离，再将沉淀悬浮于Iml PBS中，并测定在340nm下的吸光度(协同效果2,酶标仪(VT，美国）。另外，取出一部分所述超 声处理后的溶液，测定蛋白质含量，将其作为评价细胞分化程度的基准。并将其结果表示在 下述表9中。
[0117] 表9
[0119]^如上述表9所示，可以确认用人参皂苷Mc处理时，角质形成细胞的分化促进效果优 异。
[0120][试验例9]皮肤屏障功能恢复效果测定
[0121]为了测定人参皂苷Mc对由于皮肤损伤而受损的皮肤屏障功能恢复产生的效果，实 施了下述实验。对于10名成人男女的上臂，用胶带剥离(Tape Stripping)的方法，损伤皮肤 屏障，分别涂抹按照下述表10的组成制备的剂型例2及比较剂型例2两个组，用Vapometer (海豚(Delfin)，芬兰），每天测定1次经皮水分损失量(TWEL)的恢复程度，测定七天，并进行 了比较。这里的比较剂型例2为阴性对照组的载体(vehicle)。将其实验结果示于下述表11 中。表11的结果是将屏障损伤前和屏障损伤后的处理前的差异作为100%基准进行比较的 结果。
[0122]表10
[0126]从上述表11中可知，可以确认当使用不含有人参皂苷Mc的比较剂型例2处理时，随 着时间的推移，经皮水分损失量逐渐增加，相反，当使用含有人参皂苷Mc的剂型例2处理时， 经皮水分损失量以很快的速度恢复正常，并且屏障损伤得到恢复。
[0127][试验例10]血色改善效果
[0128] 为了评价根据本发明的化妆品组合物对促进皮肤血液循环的效果，利用激光多普 勒血流成像仪（Laser Doppler Perfusion Imager，LDPI;periscan PIM II，百灵威 (Perimed)(斯德哥尔摩，瑞典）），测定皮肤中血液循环程度。已知LDPI是测定皮肤中的血液 循环的仪器，并且其为目前广泛使用的仪器，是一种不仅可以测定皮肤毛细血管中的血液 的速度及量，而且可以测出小动脉和小静脉中的流动的非常灵敏的仪器。
[0129] 在恒温恒湿室里，用香皂洗脸之后，适应30分钟，并利用LDPI测定了初期值。首先， 用LDPI对平时手脚冰凉的30名女性的额头下方的初期血流量进行了测定。然后，使试验对 象使用1周所述剂型例1及比较剂型例1之后测定血流量，然后将测定的血流量和所述初期 测定值进行比较的结果(皮肤血流量变化)表示在下述表12中。
[0130] 表12
[0132] 从上述表12的结果中可以确认，根据本发明的化妆品组合物与不含有人参皂苷Mc 的比较剂型例1相比，使得皮肤血流量显著增加，并通过这种血液循环促进而使得气色得到 改善。这最终表明根据本发明的含有人参皂苷Mc的化妆品组合物能够对有效传递皮肤营养 成分，以及抑制并延缓皮肤老化做出贡献。
[0133] [试验例11]肤色改善效果
[0134] 为了了解所述剂型例1及比较剂型例1的肤色改善效果，使30名测试对象分别使用 (晚1次/日，共涂抹1周）之后，利用Facial Stage DM_3(茉莉特(Moritex)，日本)仪器评价 肤色改善程度。对于肤色改善率，采用皮肤的明度及色彩测定值，以及皮肤的明度及色彩变 化值来进行判断，并将其结果表示在下述表13中。明度及色彩变化值越高表示肤色得到改 善。
[0135]表13
[0137] 从表13的结果中可以确认，不含有根据本发明的人参皂苷Mc的比较剂型例1，未显 示出显著的肤色改善功效，相反，使用含有人参皂苷Mc作为有效成分的剂型例1，使用后的 肤色与使用前相比，得到很大改善。
[0138] [试验例12 ]收缩毛孔效果
[0139] 1.通过促进胶原蛋白的生物合成的收缩毛孔的效果
[0140] 将根据本发明的人参皂苷Mc对胶原蛋白的生物合成的促进效果与转化生长因子_ iHTGF-β)进行比较并进行了测定。首先，将成纤维细胞以每孔IO5个细胞的量接种于24孔 (well)中，并进行培养直至长到90%左右为止。将其用无血清细胞培养基(DMEM)培养24小 时之后，分别使用lOng/ml的溶于无血清培养基中的本发明的人参皂苷Mc和TGF-β进行处 理，并在CO 2培养器中培养24小时。取出它们的上清液，并利用原骨胶原型（I)酶联免疫吸附 测定（ELISA)试剂盒（原骨胶原型（I) (procollagen type(I) ;#MK101，TAKAR A(Shiga，日 本)来观察原骨胶原(procollagen)的增减与否，并将其结果示于下述表14中。将非处理组 设为100而对于胶原蛋白的合成能力进行对比。
[0141] 表14
[0143] 从上述表14的结果中可以确认，根据本发明的人参皂苷Mc与阳性对照组TGF-β相 比，显示出更高水平的优异的胶原蛋白合成能力。因此，可以确认根据本发明的人参皂苷Mc 通过增加毛孔周边的胶原蛋白生成量来收缩变宽的毛孔。
[0144] 2.收缩毛孔效果
[0145] 为了了解剂型例1及比较剂型例1的收缩毛孔效果，进行如下评价。选出20名毛孔 大小宽的男女测试对象，按每组10名分成两组，并按照组别每天在脸上涂抹剂型例1及比较 剂型例1的营养霜，共涂抹4周。按照以下方式来判断收缩毛孔的效果。拍摄实验前和4周后 的照片，并让专家通过肉眼进行评价。其结果表示在下述表15中（评价等级:0-完全没有收 缩;5-收缩很多）。
[0146] 表15
[0148]从上述表15的结果中可知，比较剂型例1没有收缩毛孔的效果，然而，剂型例1示出 能够用肉眼确认的收缩毛孔效果，从而可知本发明的人参皂苷Mc对收缩毛孔大小的效果优 异。
[0149][试验例13]皮脂分泌抑制效果
[0150] 1.通过抑制5α_还原酶活性的抑制皮肤分泌过多的效果
[0151] 为了确认5α-还原酶活性抑制效果，在HEK293_5aR2细胞中测定了 [14C]睾酮转化成 [14C]二氢睾酮(DHT: dihydrotestosterone)的比率。在HEK293细胞上转染p3x FLAG-CMV-5a R2之后，并按每孔2.5X105个细胞的量接种于24孔板中，并进行培养(Park et al.，2003，J DS. Vol. 31，pp. 191-98)。第二天换成添加有酶底物和抑制剂的新的培养基。将0.05yCi [14C] 睾酮(试剂盒(Amersham Pharmacia biotech)，英国）用作培养基底物。
[0152] 为了确认5α-还原酶活性抑制程度，加入人参皂苷Mc，并在37°C，5 %⑶满养器中 培养2小时。此时，将未加入人参皂苷Mc的组用作阴性对照组，将加入非那雄胺 (finasteride)的组用作阳性对照组。之后回收培养基，并用800μ1乙酸乙酯提取类固醇之 后，分离上部的有机溶剂层，并晾干之后，对剩余的残留物，再用50μ1乙酸乙酯溶解，并在硅 塑料薄膜硅胶60F254(Silica plastic sheet kieselgel60F254)上，使用乙酸乙酯-己烧 (1:1)作为溶剂来展开。
[0153] 将塑料试料在空气中干燥之后，为了测定同位素的量而使用了淋浴系统 (til·厶Al厶gj) s将干燥的塑料薄板和X射线薄膜一同加入到浴盒（扑厶外便月） 中，1周后测定留在薄膜上的睾酮和二氢睾酮的同位素量，然后根据下述数学式5及6,分别 算出转化率及阻碍率，并将其结果表示在下述表16中。
[0154] 数学式5
[0155] 转化率（％ ) =DHT区域中的放射能/总放射能X 100
[0156] 数学式6
[0157] 抑制率（％ )=[对照组的转化率-试验物质的转化率]/对照组的转化率X 100
[0158] 表16
[0160]从上述表16结果中可以确认，人参皂苷Mc可以有效地抑制5α-还原酶的活性，从而 阻断睾酮转化为二氢睾酮，并且显示出了与已知的抑制5α_还原酶活性的非那雄胺相比更 加优异的抑制效果。所述5α_还原酶使睾酮转化为二氢睾酮，从而与细胞质内的受体蛋白结 合而进入核内，从而活性化皮脂腺细胞并促进分化，从而使皮脂腺内的皮脂过度分泌。因 此，确认了人参皂苷Mc通过有效抑制5α-还原酶的活性来抑制皮脂的过多分泌。
[0161] 2.皮脂分泌抑制效果
[0162]为了了解所述剂型例1及比较剂型例1的皮脂分泌抑制效果，进行了如下评价。选 出30名认为皮脂分泌多的男女测试对象，在脸上皮肤的指定部位每天涂抹剂型例1及比较 剂型例1的营养霜，共涂抹4周。对于皮脂减少效果的判定，通过使用皮脂量测试仪 (Sebumete r SM810，C+K电子有限公司（C+K Electronic Co.)，德国）分别测定经过2周及4 周后的平均皮脂减少率（％ )，并将其结果表示在下述表17中。
[0163]表17
[0166] 从上述表17的结果中可知，本发明的含有人参皂苷Mc作为有效成分的剂型例1与 不含其的比较剂型例1相比，能有效地抑制过多分泌的皮脂。
[0167] [剂型例3及比较剂型例3~4]
[0168] 根据下述表18中显示的成分及含量(重量％)来制备剂型例3及比较剂型例3~4， 具体说明如下。剂型例3为混合人参皂苷Mc的物质，比较剂型例3为完全没有包改善含痤疮 皮肤的有效成分的物质，比较例4作为对于抗菌力的基准的标准物质，该物质含有多作为痤 疮治疗剂使用的红霉素(erythromycin)。
[0169] 剂型例3及比较剂型例3~4的制备方法如下。将下述表18的A项的成分完全