型例4及比较剂型例5的洗发水1个月后，测定头皮肩减少率。
[0221]试验开始前，通常用常规的洗发水清洗头发，然后采集洗发后累积两天的头皮肩， 并将采集的头皮肩的重量与分别用剂型例4及比较剂型例5的洗发水隔两天洗一次头发而 试验结束后累积两天的头皮肩的重量进行比较而评价。此时，将累积的头皮肩用真空吸入 装置直接从头皮采集，并且依据下述数学式7求出头皮肩减少率，并将其结果表示在下述表 25中。
[0222] 数学式7
[0223] 头皮肩减少率（％) =(试验开始前的头皮肩重量(mg)--个月后的头皮肩重量 (mg))/试验开始前的头皮肩重量(mg) X 100
[0224] 表25
[0226]从上述表26中可以知道，含有人参皂苷Mc的剂型例4显示出优异的头皮肩防止效 果。
[0227][试验例20]头皮瘙痒症防止效果的试验
[0228] 选定24名比较严重感觉到头皮瘙痒的25岁至45岁的男女，以每组12名分为两组， 并以三天一次的频率使用各剂型例4及比较剂型例5的洗发水两周后，通过下述评价基准对 头皮瘙痒症防止效果进行了评价，并将其结果表示在下述表26中。
[0229] [评价基准]
[0230]非常优异-5分 [0231 ]优异-4分
[0232] -般-3 分
[0233] 不良-2分 [0234]非常不良-!分
[0235]表26
[0237] ~从上述表26中可以知道，含有人参皂苷Mc的剂型例4对头皮瘙痒症的防止显示出 更优异的效果。
[0238] [试验例21]钾离子通道活性增加效果评价
[0239] 作为脱发治疗剂的米诺地尔已知为潜在的线粒体钾离子通道开放剂（KATP channel opener)，是在雄激素性脱发的治疗中使用的代表性药物。为了评价这种米诺地尔 的机制，使用了下述试验法。所述试验法为使用组成头皮真皮的成纤维细胞中的阻止Katp通 道的甲苯磺丁脲(SIGMA AIDRICH，T0891)进行处理，从而抑制细胞的增殖，并且再次打开钾 离子通道而恢复细胞增殖。
[0240] 为了评价作为本组合物的Katp通道开放剂的功能，本发明使用了作为成纤维细胞 系的小鼠胚胎成纤维细胞系（Mouse embryonic fi broblast cell line，NIH3T3:)。本细 胞系为用3T3方案(protocol)，对从NIH瑞士小鼠胚胎(Swiss mouse embryo)中分离的成纤 维细胞系进行自然永生化而得到的细胞系。所述细胞系，在含有10%FBS的DMEM(Gibco BRL，盖瑟斯堡，MD，美国）中，在维持5 % CO2，37°C的培养箱中培养24小时。将NIH3T3接种于 96孔板中，并在37°C的培养箱中培养24小时后，用2.5mM的甲苯磺丁脲进行处理，并且在10 分钟后，分别用作为阳性对照组的1 〇μΜ的米诺地尔和2.5ppm、5ppm及I Oppm浓度的人参皂苷 Mc进行处理，并且药物处理后经过48小时后，使用WST-I试剂盒(罗氏（Roche))测定细胞增 殖能力。结果表示在下述表27中。
[0241] 表 27
[0243] ~从上述表27中可以知道，用人参皂苷Mc处理时，成纤维细胞的增殖得到恢复，并且_ 细胞增殖能力依赖于处理的人参皂苷Mc的浓度而增加，并且可以确认用IOppm人参皂苷Mc 处理时，细胞增殖恢复到用米诺地尔处理时的水平。
[0244] [试验例22]人参皂苷Mc的黑色素生成促进效果试验
[0245] 在无血清细胞冻存培养基(RPMI培养基）中添加5%的牛胎儿血清、100IU的青霉素 G及0.2μΜ的对苯二甲酸(TPA)的培养基中，将黑色素细胞，以50，000细胞/孔，接种于24孔板 中。第二天，对接种的细胞，用IOppm或50ppm的最终浓度的作为试验物质的人参阜苷Mc处 理。将用0.1 %的DMSO处理的组作为阴性对照组，将用100μΜ的异丁基甲基黄嘌呤（IBMX)处 理的组作为阳性对照组，将上述各组在37°C温度下培养三天。培养后，用磷酸盐缓冲液 (PBS)清洗孔板，并在每孔中加入100μ1的IN NaOH后，溶解细胞中的黑色素。利用平板培养 测定仪(microplate reader)，在405nm下测定被溶解的黑色素的吸光度(协同效应2,酶标 仪(VT，美国）。将人参皂苷Mc的黑色素生成促进效果与对照组进行比较的结果表示在下述 表28中。
[0246] 表28
[0248] 从上述表28中可以知道，人参皂苷Mc促进黑素细胞的黑色素合成，从而增加黑色 素的生成，因此能够显示出优异的黑色素生成促进效果。
[0249] [试验例23]人参皂苷Mc在黑素细胞中的促进转录因子(MITF)及酪氨酸酶表达的 效果
[0250] 利用501mel细胞系，以500，000细胞/孔，接种于6孔板中，并且在各孔中，用0.1 % 的二甲基亚砜(DMSO)处理的作为阴性对照组，用100μΜ的IBMX处理的作为阳性对照组，以及 用IOppm的人生皂苷Mc处理的作为实验组，并在37°C温度下培养24小时、48小时及72小时 后，得到蛋白质。对于如此获得的蛋白质，利用MITF及酪氨酸酶进行蛋白印迹(Western Blot)法试验。蛋白质提取和蛋白印迹是通过本领域技术人员通常使用的标准方法来实施。 实施蛋白印迹后，将其结果中的阴性对照组设为100,并与该值进行比较而表示在下述表29 中。
[0251]表29
[0253] 如上述表29中所示，可以确认人参皂苷Mc在黑素细胞中提高MITF和酪氨酸酶蛋白 质的表达。
[0254] [试验例24]人参皂苷Mc的抗菌力评价
[0255] 为了评价人参皂苷Mc的抗菌力，实施了抗菌实验。具体的试验方法如下所述。
[0256] 实验中使用的金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)、大肠杆菌 (Escherichia coli)及铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是在膜蛋白酶大豆肉汤 培养基（Tryptic Soy Broth)中培养；白色念珠菌（Candida albicans)及黑曲霉 (Aspergillus niger)是在沙氏葡萄糖肉汤培养基（Sabouraud Dextrose Broth)中培养。 将培养液在各培养基中以1/1〇〇(白色念珠菌菌株是以1/10)进行稀释的稀释液作为试验菌 液来使用。对于黑曲霉，将制备成2X10 8cfu/ml的孢子悬浮液作为试验菌液。
[0257] 将在15ml的各培养基中添加0.15ml的试验菌液而混合好的混合液作为稀释溶液 来使用。
[0258] 在96孔板1号排中，以每孔16μ1的量分别加入IOppm的人参阜苷Mc，并且分别加入 184μ1的稀释溶液。在其它的孔中分别加入100μ1的稀释溶液。将1号排的混合液混合均匀 后，取出100μ1的混合液加入到2号排中，并混合均匀后，再次取出1 οομL的混合液加入到3号 排中。通过这种方式进行了二倍稀释。
[0259]金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及铜绿假单胞菌是在32°C的恒温槽中培养；白色念珠 菌及黑曲霉是在25°C的恒温槽中培养。
[0260] 48小时后，用悬浮率和显微镜来确认菌的增值与否，从而决定最小抑制浓度(MIC) 值，并将其结果表示在下述表30中。
[0261]表30
[0263] 如上述表30中所示，可以确认人参皂苷Mc对多种菌株显示出抗菌力，并且通过这 些可以预测人参皂苷Mc能够在组合物内作为天然防腐剂或抗菌剂而起作用。
【主权项】
1. 一种皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述皮肤外用剂组合物包含人参皂巧Me作为 有效成分。2. 如权利要求1所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述人参皂巧Me用下述化学式 1表不：3. 如权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述皮肤外用剂组合物含 有W组合物总重量计为0.001~50重量％的所述人参皂巧Me。4. 如权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于抗老化。5. 如权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于提高皮肤 弹力。6. 如权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于改善皮肤 皱纹。7. 如权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于保湿。8. 如权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于强化皮肤 屏障功能。9. 如权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于诱导皮肤 角质形成细胞的分化。10. 如权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于改善瘦 疮。11. 如权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于抗菌。12. 如权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于抗炎。13. 如权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于改善过敏 性皮肤。14. 如权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于改善血色 及肤色。15. 如权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于收缩毛 孔。16. 如权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于调节皮 脂。17. 如权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于改善皮肤 问题。18. 如权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于美白。19. 如权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于促进毛发 的生长。20. 如权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于防止白 发。21. 如权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于抗头皮 屑。22. 如权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于天然防腐 剂。
【专利摘要】本发明涉及一种含有人参皂苷Mc作为有效成分的组合物，所述组合物不仅能够提供抗老化、改善皮肤皱纹、美白、保湿改善效果，而且还能够提供抗炎、改善痤疮和皮肤问题，以及过敏症状的效果、收敛皮肤及收缩毛孔效果，并能够提供皮肤血色改善效果、促进毛发生长、改善白发、抗头皮屑及防腐效果。
【IPC分类】A61K31/70, A61P17/00, A61K31/704
【公开号】CN105555278
【申请号】CN201480029499
【发明人】金东泫, 柳权烈, 李沃澯, 廉明勋, 曺濬喆
【申请人】株式会社爱茉莉太平洋
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2014年4月24日
【公告号】WO2014175675A1