] 本申请还提供了一种制剂，其包括具有式（I)结构的异黄酮衍生物与药学上可接 受的辅料。本申请所述制剂中的辅料为本领域技术人员熟知的辅料，此处不再进行赘述。
[0052] 按照本发明，所述制剂的剂型为本领域技术人员熟知的剂型，此处不再进行详细 说明，作为优选方案，本申请所述制剂的剂型优选为颗粒剂、片剂、胶囊剂或丸剂。
[0053] 本申请提供了一种异黄酮衍生物及其应用，所述具有良好的水溶性，可以较好的 清除自由基，具有抗红细胞溶血的作用。
[0054]为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的异黄酮类衍生物的应用 进行详细说明，本发明的保护范围不受以下实施例的限制。
[0055] 实施例1
[0056] 1.1取2.542g (lOmmol)大豆甙元和4.827g无水K2C03置于100mL三口烧瓶中，再加入 0.1668(11111]1〇1)的1(1作催化剂，加入75111]^的无水丙酮，室温下搅拌6〇111；[11，然后加入8.31111^ (25mmol)溴乙酸乙酯，在N2保护环境下以80°C恒温加热回流，TCL监测反应进程。反应结束 后，旋蒸回收大部分丙酮，将残余物先用水洗至中性，再用40mL 2mo 1 /L的NaOH溶液充分搅 拌洗涤，过滤，最后再水洗至中性，得白色固体即为具有式(III)结构的异黄酮衍生物3.5g， 产率是82%。
[0057] 1.2取步骤I中所得的白色固体具有式（III)结构的异黄酮衍生物3g投入到20mL 5mol/L的Κ0Η溶液中，50°C恒温搅拌3小时，固体逐渐溶解，溶液变成浅黄色，将此反应物缓 慢倾倒入300mL冰水中，搅拌，过滤，然后在滤液中加入固体NaCl，剧烈搅拌，直到加入的 NaCl不再溶解，静置3小时，生成白色絮状沉淀，过滤，用饱和NaCl溶液洗涤。用5 %NaCl溶液 重结晶，得到2.45g目标产物即为具有式(I)结构的异黄酮衍生物，产率约为78%。对实施例 1中得到的具有式（I)结构的异黄酮衍生物的熔点进行检测，得到结果为:m.p. :318.2~ 319.5。。。
[0058] 利用核磁共振对实施例1中得到的具有式（I)结构的异黄酮衍生物进行分析，得到 核磁共振氢谱结果为：4匪以〇2〇，400MHz，δ): 7 · 71 (1H，d，Ar-H)，7 · 58(1H，s，-〇CH= )，7 · 39 (2H，d，Ar-H)，7.18(2H，d，Ar-H)，6.83(2H，d，Ar-H)，4.78(4H，s，-CH2_)。
[0059] 实施例2
[0060] 关于本发明具有式（I)结构的异黄酮衍生物的抗人血红细胞溶血性研究，是通过 该化合物对人血红细胞溶血率的影响来判断的。
[0061] 本发明实施例1中得到的具有式（I)结构的异黄酮衍生物样品的浓度为1.0乂1〇-3mo 1 /L，PBS缓冲溶液（NaC 1:15Ommo 1 /L、KH2P〇4:0 · 58mmo 1 /L、Na2HP〇4: 3 · 4mmo 1 /L)的 PH为 7.4。2，2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐(AAPH)的浓度为344mmol/L。
[0062]具体做法是：
[0063] 细胞悬浮液的制备:取5mL血液于离心试管中，以2000r/min的转速离心10分钟，弃 去上层液体，继续加入适量的roS，再离心，如此重复三次。在最后一次洗涤后，以2000r/min 的转速离心15min，以得到相同紧实的红细胞。用此红细胞配成5%的细胞悬浮液以备后续 实验。
[0064]实验步骤：取500yL的上述细胞悬浮液，然后加入不同体积的事先配好的样品溶 液，在37°C保温30min，再加入150yL AAPH，用PBS缓冲溶液定容到lmL，在37°C下育温 240min。血红素的特征吸收峰在540nm处，因此，试验时测量540nm波长处的紫外吸光度，可 反映人血红细胞的溶血程度。测试实验组和对照组体系吸光度时，都以PBS缓冲溶液作为参 照溶液。AAPH和roS缓冲溶液在540nm处没有吸收。实验体系具有式(I)结构的异黄酮衍生物 样品浓度依次为0、2、4、6、8、10、12、15、18、21*10- 5111〇1/1。每个浓度实验平行测三次，吸光度 取其平均值，得到育温相同时间下，溶血度随样品浓度变化的关系曲线图，如图1所示。由图 1可知，随着具有式(I)结构的异黄酮衍生物浓度的增加，人体红细胞的溶血度逐渐降低，说 明该异黄酮衍生物具有对人红细胞的抗溶血保护作用，且具有浓度依赖性。
[0065]溶血度按下式计算：
[0066] 溶血度 S(%)=A/A〇X100%
[0067] 其中：Ao为人体红细胞完全溶血时，在540nm处的吸光度值，A为各个实验浓度对应 的研究体系在540nm处的吸光度值。
[0068] 实施例3
[0069] 对照组:取500yL的上述细胞悬浮液，加入150yLAAPH，用ros缓冲溶液定容到lmL。 37°C下育温，每间隔30min测一次在540nm处的吸光度·
[0070] 实验组:取500yL的上述细胞悬浮液，加入150yL的所配的样品溶液(物质浓度为15 X10-5mol/L)，再加入150yLAAPH，用PBS缓冲溶液定容到1111匕37°(：下育温，每间隔30min测一 次在540nm处的吸光度。
[0071] 在实验过程中，对照组和实验组都分别平行测三次，结果取其平均值，得到溶血度 随时间的变化曲线图，如图2所示。由图2可知，实验开始1 OOmin后，在相同的时间点，对照组 的溶血度远比实验组要大得多，进一步说明，本发明中的具有式(I)结构的异黄酮衍生物具 有保护人血红细胞，有较强的抗人血红细胞溶血的作用。
[0072]以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对 于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行 若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
[0073]对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。 对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的 一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明 将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一 致的最宽的范围。
【主权项】
1. 一种具有式（I)结构的异黄酮衍生物在抗红细胞溶血上的应用； 其中，Μ为顺金属现顺土金属。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述Μ为Na、Mg、K或Ca。3. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述Μ为K。4. 一种具有式(I)结构的异黄酮衍生物， 其中，Μ为碱金属或碱土金属。5. -种具有式(I)结构的异黄酮衍生物的制备方法，其特征在于，包括： 将具有式(II)结构的大豆甙元与溴乙酸乙酯在无水碳酸钾的作用下反应，得到具有式 (III)结构的异黄酮衍生物； 将所述具有式（III)结构的异黄酮衍生物与碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物在溶 剂中反应，得到具有式(I)结构的异黄酮衍生物；6. -种具有式(I)结构的异黄酮衍生物在制备抗红细胞溶血药物上的应用，其中，Μ为碱金属或碱土金属。7. -种具有式（I)结构的异黄酮衍生物在制备预防和/或治疗抗红细胞溶血药物和/或 保健品上的应用， 其屮，M>J侧萊牌现侧工萊牌。8. -种制剂，其特征在于，包括具有式（I)结构的异黄酮衍生物与药学上可接受的辅 料，其中，Μ为碱金属或碱土金属。9.根据权利要求8所述的制剂，其特征在于，所述制剂的剂型为颗剂、片剂、胶囊剂或丸 剂。
【专利摘要】本发明提供了一种具有式(I)结构的异黄酮衍生物在抗红细胞溶血上的应用。本申请提供的异黄酮类衍生物具有良好的水溶性，可以较好的清除自由基，具有抗红细胞溶血的作用。实验结果表明，本申请提供的异黄酮衍生物具有良好的抗红细胞溶血的作用。
【IPC分类】A61P39/06, A61K9/20, A61K9/14, A61K31/352, A61K9/48, C07D311/36, A61P7/00
【公开号】CN105616399
【申请号】CN201610104664
【发明人】延玺, 刘红
【申请人】北京师范大学, 北京师大科技园科技发展有限责任公司
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2016年2月25日