的溶液置于室温下放置 24h之后再进行相应的测定。
[0053] 实施例2
[0054]所述靶向乳腺癌干细胞的洛伐他汀硅质体含有如下重量百分比的组分： 洛伐他汀 〇.64mg 有机-无机复合脂质 4mg
[0055] 磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇20()0 l.llmg 二硬脂酰基磷脂酰胆碱 1.92mg；
[0056] 制备方法同实施例1。
[0057] 实施例3
[0058]所述靶向乳腺癌干细胞的洛伐他汀硅质体含有如下重量百分比的组分： 洛伐他汀 0.64mg 有机-无机复合脂质 3,36mg
[0059] 磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 1.12mg 二硬脂酰基磷脂酰胆碱 2.56mg;
[0060] 制备方法同实施例1。
[0061 ] 实施例4
[0062] 所述靶向乳腺癌干细胞的洛伐他汀硅质体含有如下重量百分比的组分： 洛伐他汀 0.64mg 有机-无机复合脂质 2.、8_mg
[0063] 磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 1.12mg 二硬脂酰基磷脂酰胆碱 3.2mg;
[0064] 制备方法同实施例1。
[0065]洛伐他汀硅质体各项指标检测 [0066] 实施例5粒径测试
[0067]分别配制0.5mg/mL的实施例1 一4洛伐他汀娃质体的水分散溶液，采用美国 Brookhaven公司的ZetaPALS测试娃质体的粒径、Zeta电位(见图3)。先超声分散15min，再将 其转移至样品池中在室温下进行测试，每个样品重复三次取平均值。测得粒径为128± 0 · 3nm，Zeta 电位为-23 · 1 ±0 · 8mV。
[0068]实施例6透射电镜测试
[0069] 将300目的铜网浸入到浓度为lmg/mL的新制备的洛伐他汀硅质体的水溶液中，吸 附Smin后用滤纸除去多余的样品，在室温下利用质量分数为4%的乙酸双氧铀水溶液进行 负染5min。然后用蒸馏水洗涤铜网，并且在空气中晾干。最后在透射电子显微镜下（型号H-7650)，在100KV的电压下进行透射电镜采图。
[0070] 实施例7包封率和载药量的测定
[0071] 配制洛伐他汀的无水乙醇母液(浓度为30mM)，逐级稀释至300μΜ、30μΜ、3μΜ、0.3μ Μ、0.03μΜ、0.003μΜ的洛伐他汀溶液，对每个样品进行高效液相色谱检测，设定的参数为： [0072] 流动相乙腈:水:三氟乙酸= 55:45:0.05，
[0073] 柱子：Merck LiChroCART RP_18(250mm X 4.6mm i.d.5mm)
[0074] 分别将洛伐他汀溶液的峰面积设定为纵坐标(Y)，洛伐他汀的浓度设定为横坐标 (X)，经计算得到回归方程：
[0075] Y = 5.14532+9538.11787X R2 = O.99992
[0076] 取新制备的洛伐他汀硅质体0.1 mL，（实施例1-4)，加入0.9mL的浓度为IM的盐酸溶 液，使用磁力搅拌器剧烈搅拌30min。室温放置过夜，使得包裹的洛伐他汀释放出来，用高效 液相色谱仪检测洛伐他汀的含量，通过以下公式计算样品的包封率和载药量：
[0077] ^ = χ1 初始投入洛伐他汀的质量 洛伐他汀硅质体中洛伐他汀的质直，ΛΛη/
[0078] 载药M =- -X100% 洛伐他汀和脂质的M质量
[0079]加入不同浓度DSPC所合成的洛伐他汀硅质体的药物包封率与载药量见图4。
[0080]实施例8药物释放性能测定
[0081]本发明中关于药物释放性能主要是通过透析袋的方法，将洛伐他汀硅质体溶液置 于透析袋中，并将其浸入到pH为7.4的磷酸缓冲溶液中，在37°C的环境下间隔一定的时间取 样，检测缓冲溶液中药物的量。然后计算洛伐他汀药物的释放比例。
[0082]具体为:取50ml的pH为7.4的PBS缓冲溶液置于烧杯中，然后将2mL新制备的洛伐他 汀硅质体水溶液加入到透析袋中，并且将上述透析袋放到含有TOS缓冲液的烧杯中，使用磁 力搅拌器搅拌。然后每隔一定时间（0，1，2,4,8，16,24,48,72,96，1201〇取出21^的溶液，用 pH为3.0的酸性乙醇溶液稀释后利用高效液相色谱检测。通过实施例7中的线性回归方程计 算取出溶液中洛伐他汀的量。然后通过以下公式计算药物的释放百分数。
[0083]
[0084] 其中上述的公式中C代表洛伐他汀累积释放率（％ );
[0085] Ve代表所取缓冲液体积，即2mL;
[0086] Vo代表加入缓冲溶液的总体积，即50mL;
[0087] Ci代表第i次取出的样品中洛伐他汀的浓度，yg/mL;
[0088] η代表取出样品的次数；
[0089] M代表2mL样品溶液中洛伐他汀的质量。
[0090]结果见图2,从释放结果中可以看出，在最开始的6h，药物的释放速度较快，约20% 的洛伐他汀得到释放;而在IOh后，只有30 %的洛伐他汀药物释放，并且在接下来的时间，药 物的释放速率缓慢，但是一直持续地实现药物释放。在120h后，将近70%的药物释放，计算 可得在IOh之后的IlOh内，只有40%的药物释放，而且曲线结果可以穿出在120h后仍呈现药 物缓慢释放的趋势。
[0091 ]实施例9洛伐他汀硅质体应用于三阴性乳腺癌效果对比实验 [0092]体外实验中，洛伐他汀与洛伐他汀硅质体对三阴性乳腺癌干细胞的杀伤效果均显 著优于对三阴性乳腺癌亲本细胞的杀伤效果(结果见图5) JTT法:常氧(21%)或缺氧（1%) 条件下培养细胞。取对数生长期的细胞接种到96孔板中，培养24h后，将细胞培养基去除。加 入200yL不同浓度的洛伐他汀溶液(利用新鲜的培养液进行稀释）、设置5个重复孔。分别孵 育24,48，72h后，向每个孔中加入20yL的CelITiter-Blue Cell ViabiIity(Promega，Cat# G8081)在37°C下继续孵育1 一 4h。利用酶标仪测定荧光560/590nm。
[0093]体内实验中，洛伐他汀硅质体对乳腺癌的抑制效果比未包裹的洛伐他汀更显著 (结果见图6):
[0094] (1)将三阴性乳腺癌细胞(MDA-MB-231细胞)进行裸鼠皮下荷瘤，I X IO6细胞八鼠；
[0095] (2)皮下荷瘤后一周开始给药，洛伐他汀给药方式为灌胃，洛伐他汀硅质体给药方 式为尾静脉注射，三天给药一次；
[0096] (3)每周检测两次肿瘤体积及体重；
[0097] (4)共给药三周。第五周处死裸鼠，取瘤，称重；
[0098] (5)实时比较不同组瘤体积变化。终点比较瘤体重量并拍照。
【主权项】
1. 一种靶向乳腺癌干细胞的洛伐他汀硅质体，其特征在于，所述洛伐他汀硅质体含有 如下重量百分比的组分： 洛伐他汀: 2% - 30 % 有机-无机复合脂质： 20% - 70% 磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇20:0齡 1%-20% 二硬脂酰基磷脂酰胆碱： 10%-60% 。2. 如权利要求1所述靶向乳腺癌干细胞的洛伐他汀硅质体，其特征在于，所述洛伐他汀 娃质体含有如下重量百分比的组分： 洛伐他汀： 8% - 10:% 有机-无机复合脂质： 36.46% - 60.42% 磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000; 10% - 15% 二硬脂酰基磷脂酰胆碱： 16.67% - 4L67%:。：3. 如权利要求1或2所述靶向乳腺癌干细胞的洛伐他汀硅质体，其特征在于，所述有机-无机复合脂质为含有磷脂长链和烷氧基结构的分子。4. 如权利要求3所述靶向乳腺癌干细胞的洛伐他汀硅质体，其特征在于，所述有机-无 机复合脂质的结构如式I所示：5. 如权利要求1或2所述靶向乳腺癌干细胞的洛伐他汀硅质体，其特征在于，所述洛伐 他汀娃质体粒径范围为20nm-500nm。6. 如权利要求1或2所述靶向乳腺癌干细胞的洛伐他汀硅质体，其特征在于，洛伐他汀 硅质体的囊泡表面共价覆盖Si-0-Si网格结构。7. 如权利要求1或2所述靶向乳腺癌干细胞的洛伐他汀硅质体的制备方法，其特征在 于，所述方法包括如下步骤： (1) 按权利要求1或2所述各组分的配比准备组分材料； (2) 将有机-无机复合脂质加入酸性乙醇溶液中35-45°C下水解，孵育25-35min，得溶 液A;所述有机-无机复合脂质与酸性乙醇溶液的质量体积比为（2-5): 1，质量体积比中质 量单位为mg，体积单位为mL; (3) 将磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000以及二硬脂酰基磷脂酰胆碱溶解于氯仿溶液中，得 溶液B，所述磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000与氯仿溶液的质量体积比为1:1，所述二硬脂酰基 磷脂酰胆碱与氯仿溶液的质量体积比为1:1，所述质量体积比中质量单位为mg，体积单位为 mL;将洛伐他汀溶解到无水乙醇中配成质量浓度为11一13mg/mL的溶液，得溶液C;将溶液B 和溶液C加入到溶液A中，得溶液D; (4) 将溶液D装于茄型瓶中并于30-45°C下水浴30min-lh，旋转蒸发8-12min去除有机 溶剂，使容器壁上形成均匀的固体脂质薄膜，然后继续旋转蒸发25min-35min除尽痕量的 氯仿； (5)将去离子水加入到步骤(4)所述的固体脂质薄膜中配成脂质浓度为1 一 2mg/mL，于 50-65°C下水浴，旋涡震荡得到均匀的混悬液，再超声处理后，得到负载洛伐他汀硅质体； (6)将负载洛伐他汀硅质体离心，得到洛伐他汀硅质体。8. 如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(5)所述旋涡震荡的时间为1 一 5min;所 述超声处理是依次进行水浴超声处理和探头超声处理，所述水浴超声处理的时间为10- 60min，所述探头超声处理是在30 %的输出振幅下超声处理5-lOmin。9. 如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤（6)所述离心条件为6000rpm，10 - 20min〇10. 如权利要求1-9任一项所述方法合成的洛伐他汀硅质体，其特征在于，该方法合成 的洛伐他汀硅质体具有缓释及靶向抑制乳腺癌干细胞特性作用，主要用于乳腺癌尤其三阴 性乳腺癌治疗用途。
【专利摘要】本发明公开了一种靶向乳腺癌干细胞的洛伐他汀硅质体及其制备方法，所述洛伐他汀硅质体含有如下重量百分比的组分：洛伐他汀：2％—30％，有机?无机复合脂质：20％—70％，磷脂酰乙醇胺?聚乙二醇2000：1％—20％，二硬脂酰基磷脂酰胆碱：10％—60％。所述洛伐他汀硅质体克服了现有技术中洛伐他汀药物生物利用率低的问题。
【IPC分类】A61P35/00, A61K47/34, A61K9/127, A61K47/24, A61K31/366
【公开号】CN105708800
【申请号】CN201610072500
【发明人】邓锡云, 戴志飞, 宋柳江, 林丽, 姚慧, 贺光春
【申请人】湖南师范大学
【公开日】2016年6月29日
【申请日】2016年2月2日