专利名称：：胰岛素样生长因子在制备美容化妆品中的用途的制作方法
技术领域：
：本发明提供了胰岛素样生长因子的新用途，尤其是公丌了胰岛素样生长因子在制备美容化妆品中的用途，同时还提供了其生产工艺，属于生物美容制品
技术领域：
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背景技术：
：胰岛素样生长因子(Insulin-likeGrowthFactor,简称IGF)主要含有两种活性蛋白，即胰岛素样生长因子一I(IGF-I)和胰岛素样生长因子一II(IGF-II)，另外与其发挥作用相关的还有两类特异性受体及六种结合蛋白。IGF-I是一个含有70个氨基酸的单链碱性蛋白，分子量7649Da，耐热；而IGF-II则为一含67个氨基酸的单链弱酸性蛋白，分子量为7471Da,对0.1%SDS稳定。两者70%以上同源，功能与生物学活性相似。IGF是一种对机体生长发育及代谢具有广泛调节作用的分泌蛋白，生物体内能合成和分泌IGF的细胞有18种之多，其中肝脏为主要合成场所。与其它激素不同，IGF在血液中主要以结合蛋白形式存在，因此其半衰期较长。IGF作为一种强烈的促合成因子，进入血液之后与胰岛素样生长因子结合蛋白结合，可调节骨细胞功能的代谢；促进人体对氨基酸的吸收，促进蛋白质的合成，改善营养状态；调节IGF-1受体水平，降低血糖浓度；维持神经细胞和神经胶质的存活，保护神经；舒张血管，调节心脏功能；促进淋巴组织增生，提高机体免疫功能等。现其应用研究主要限于疾病治疗(如侏儒症、骨质疏松症、肌萎缩侧索硬化、糖尿病后期神经保护、神经损伤疾病的修复治疗、促进创伤组织的修复等)、人工细胞培养的促生长剂及抗衰老的保健品等方面，尚未发现有关IGF美容功能的研究报导。
发明内容本发明公开了胰岛素样生长因子在制备美容化妆品中的用途，从根本上改善皮肤的生理状态，促进皮肤组织的修复和代谢。本发明提供的含有胰岛素样生长因子的美容化妆品，主要活性成分为胰岛素样生长因子0.55mg/100ml。本发明含有胰岛素样生长因子的美容化妆品，其特征在于每100ml中含胰岛素样生长因子0.55mg、活性稳定剂48g、活性促进剂0.33g、蛋白酶抑制剂0.10.6g、透皮吸收促进剂O.12g。所用的活性稳定剂为透明质酸、甘露醇、右旋糖苷的任意一种；所用的活性促进剂为水溶性胶原蛋白。所用的蛋白酶抑制剂为硼酸亮氨酸、硼酸缬氨酸、硼酸丙氨酸、N-乙酰半胱氨酸中的任意一种。所用的透皮吸收促进剂为月桂氮卓酮、丙二醇、巯基乙酸钙中的任意一种。所述的美容化妆品的制备方法，包括以下步骤按上述比例将活性成分、活性稳定剂、活性促进剂和/或活性稳定剂和/或蛋白酶抑制剂和/或透皮吸收促进剂，用低温纯化水配制成水溶液，并置于冰浴中；将上述配制而得的水溶液，分装到西林瓶中，将胶塞半加塞，置于真空冷冻干燥机中进行冻干。冻干工艺及条件为开启真空冷冻干燥机，对制品进行预冷，将制品温度降至-60°C，降温时间为4-5小时。启动真空泵，将箱内真空度抽至0.3Mbar。加温，升华，升华时间为14-18小时，升华完毕，压塞，箱内充入无菌气体，开箱，取出制品，轧盖，入库。产品形式为冻干粉加专用溶媒，使用时需用专用溶媒作溶解剂。本发明还提供了与上述美容化妆品其配合使用的溶媒，由以下重量份数比的原料制成透皮吸收促进剂O.12份、蛋白酶抑制剂0.10.6份、活性稳定剂48份、丙三醇2~6份、pH5.07.4PBS溶液加至100份。按上述比例将透皮吸收促进剂、蛋白酶抑制剂、活性稳定剂混合，用PBS溶液溶解，加入丙三醇，混匀，分装，加塞，用流通蒸汽灭菌后即得。专用溶媒的制备工艺为将透皮吸收促进剂、蛋白酶抑制剂、活性稳定剂，用pH5.07.4PBS溶液溶解，加入丙三醇，混匀，分装，加塞，用10(TC流通蒸汽灭菌30分钟后即得。活性稳定剂可用其中的一种或几种，但三种活性稳定剂及一种活性促进剂同时使用效果最佳。透皮吸收促进剂及蛋白酶抑制剂在组方中每次一般只用其中的一H也可几种合用，其效果类似。以下实验表明本发明的美容效果1材料活性成分IGF，为市售品，也可采用基因工程法自行生产。用前要进行活性测定，活性测定的方法为MTT细胞增殖法。活性稳定剂透明质酸、甘露醇、右旋糖苷。市售，化学纯。活性促进剂水溶性胶原蛋白，市售，纯度大于95%。蛋白酶抑制剂硼酸亮氨酸、硼酸缬氨酸、硼酸丙氨酸、N-乙酰半胱氨酸，市售，化学纯。透皮吸收促进剂佐恩(月桂氮卓酮，Azone)、丙二醇、巯基乙酸钙。市售，化学纯。蛋白酶胃蛋白酶、胰蛋白酶，市售，化学纯。2方法2.1冻干粉制剂的制造参见上文2.2专用溶媒的制造参见上文2.3抗蛋白酶降解试验实验品将上述制造的含有活性成分IGF的冻干粉制剂用专用溶媒溶解，制成水溶液，并测定其IGF的活性，以此活性值作为100%。活性测定的方法同上。对照品除不含有蛋白酶抑制剂外，其余同实验品。用纯化水制成水溶液，并测定其IGF的活性，以此活性值作为100%。蛋白酶溶液将胃蛋白酶及胰蛋白酶，用纯化水配成含1%胃蛋白酶及1%的胰蛋白酶的混合水溶液。分别取实验品及对照品各20ml，分别加入蛋白酶溶液0.5ml，混匀，置37'C水浴中孵育，分别于不同的时间取样，进行活性测定。2.4稳定性试验取上述制得的含有IGF的冻干粉制剂，分别置于室温及7'C冰箱中，分别于放置不同的时间后取样，进行含量及活性测定。2.5美容效果试验实验品含有IGF的冻干制剂空白对照品不含IGF的冻干制剂市售对照品市售某品牌嫩肤去皱美容产品实验品及空白对照品，在使用前均用专用溶媒溶解，之后，涂布于面部皮肤，并用特定的方法(超声波导入)进行皮肤导入。分别进行如下美容效果试验2.5.1嫩肤、去皱试验选取4055岁老年人120人，男女各半。随机分为3组，每组40人，男女各半。每组分别使用上述实验品或对照品，隔闩一次，连续2个月，然后分别评价其嫩肤、去皱的美容效果。2.5.2祛斑试验选取2635岁面部有色斑的女性80人，随机分为2组，每组40人。每组分别使用上述实验品或空白对照品，隔日一次，连续2个月，然后分别评价其祛斑效果。2.53祛痘试验选取1825岁面部有青春痘的人80人，男女各半，随机分为2组，每组40人，男女各半。每组分别使用上述实验品或空白对照品，隔R—次，连续2个月，然后分别评价其祛痘效果。2.5.4安全性试验在上述嫩肤去铍试验、祛斑试验及祛痘试验中，同时观察其对皮肤的刺激性、过敏性及其它不良反应。3结果3.1冻干粉制剂的制造结果经上述工艺制造出来的冻干粉制剂，外观呈疏松的块状或粉状，呈白色或类白色。加专用溶媒极易溶解，溶解后呈澄清透明的溶液。经微生物学检测，未检出活的微生物，为无菌溶液。超过国家有关化妆品的卫生标准。3.2专用溶媒的制造结果经上述工艺制造出来的专用溶媒，外观澄清透明。经微生物学检测，未检出活的微生物，为无菌溶液。超过国家有关化妆品的卫生标准。3.3抗蛋白酶降解试验结果表1抗蛋白酶降解试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>由上表可以看出，实验组在37'C温度下与胃蛋白酶及胰蛋白酶共同作用30分钟后，其活性基本不下降，作用1小时后，其活性仍降低很少。而对照组在与蛋白酶共同作用10分钟后，其活性即只剩原来的百分之十以下。结果说明，本发明之制品具有良好的抗蛋白酶降解作用。而用本品进行美容护肤时，制品在皮肤上停留并导入的时间不会超过IO分钟，故本发明之制品的抗蛋白酶降解作用的时间是足够的。3.4稳定性试验结果表2稳定性试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>从上表可以看出，本发明之制品，在常温放置及7"C下放置至36个月时，其含量均未见明显变化；在常温下放置至18个月时，其活性未见明显变化；在7'C下放置至30个月时，其活性仍未见明显变化。结果表明，本发明之制品，可在常温下保存18个月，如置于7。C以下，则保存时间更长，可长达2.5年以上。3.5美容效果试验结果3.5.1嫩肤、去皱试验结果表3嫩肤、去皱试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>由上表可以看出，IGF具有良好的嫩肤去皱效果；不含有IGF的空白对照组，没有嫩肤去铍的效果；IGF的美容效果显著优于市售对照品组。3.5.2祛斑试验结果表4祛斑试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>由上表可以看出，IGF组具有较好的祛斑效果。3.5.3祛痘试验结果表5祛痘试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>100由上表可以看出，IGF组具有较好的祛痘效果。本发明将IGF应用于美容时，解决了三个难以解决的问题，否则其将无法实际应用。即:(1)IGF在常温下难以保持其生物学活性。在常温下放置短时间后，其即失去其生物学活性，故其生产、运输、保存都成为不可逾越的鸿沟，使其实际应用难以实现。另外，其发挥生物学活性需特定的pH值、离子强度及温度，故制成霜剂等常见化妆品剂型，其将不具有任何生物学活性。(2)IGF易被蛋白酶降解而失去活性。IGF的化学本质为蛋白多肽类，人皮肤表面存在大量的蛋白酶，在IGF接触皮肤后，会很快被皮肤表面的蛋白酶降解而失去活性。(3)IGF难以透皮吸收。IGF是大分子生物活性物质，在正常情况下，其难以透过皮肤进行吸收。本发明的有益效果在于将IGF用于外用美容，通过补充促进皮肤细胞代谢和增殖的生物活性因子，从根本上改善皮肤的生理状态，促进皮肤组织的修复和代谢；使皮肤异常细嫩年轻；淡化色斑，平复皱纹；且安全可靠，无副作用。故美容效果显著。将透皮吸收促进剂应用于IGF的美容组方中，解决了IGF难以透皮吸收的问题，显著地提高了其美容效果。将蛋白酶抑制剂应用于IGF的美容组方中，解决了IGF易被蛋白酶降解的问题，保持了IGF的活性，促进了IGF的完整吸收，显著地提高了其美容效果。将IGF制成冻干粉制剂，解决了其在常温下易失去活性的问题。该配方制成的冻干粉制剂，可在常温下可保持活性18个月；在07'C冷库中，可保持活性2.5年以上。故可常温运输和保存，如置于冷库或冰箱中保持，效果更佳。解决了IGF的生产、运输和保存时无法保持活性的问题，使IGF的实际应用成为现实。具体实施例方式通过以下实施例进一歩举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。主要材料活性成分IGF。可自行制造，也可外购获得。自行制造的主要工艺过程为将IGF工程菌在发酵罐内发酵，离心去除菌体，将培养液上清进行盐析，离心，取沉淀。将沉淀复溶，甩层析法进行纯化，收集IGF峰，置-2(TC低温冰柜中冻存。取样进行纯度及活性测定。活性稳定剂透明质酸、甘露醇、右旋糖苷，市售，化学纯。活性促进剂水溶性胶原蛋白，市售，纯度大于95%。蛋白酶抑制剂硼酸亮氨酸、硼酸缬氨酸、硼酸丙氨酸、N-乙酰半胱氨酸，市售，化学纯。透皮吸收促进剂佐恩(月桂氮卓酮，Azone)、丙二醇、巯基乙酸钙。市售，化学纯。冻干粉实施例实施例1:量取IGF5mg、透明质酸l6g、甘露醇38g、右旋糖苷38g、水溶性胶原蛋白16g、硼酸亮氨酸O.10.6g、丙二醇O.5lg、纯化水加至100ml;将上述各成分溶解于低温纯化水中，分装，冻干，即得。实施例2:量取IGF1mg、透明质酸l6g、甘露醇38g、右旋糖苷388g、水溶性胶原蛋白16g、硼酸缬氨酸0.10.6g、左恩0.12g、硼酸丙氨酸0.10.6g、巯基乙酸钙O.12g、纯化水加至100ml，将上述各成分溶解于低温纯化水中，分装，冻干，即得。实施例3:量取IGF2mg、bFGF0.12万AU、甘露醇38g、右旋糖苷38g、水溶性胶原蛋白16g、N-乙酰半胱氨酸0.10.6g、纯化水加至100ml，将上述各成分溶解于低温纯化水中，分装，冻干，即得。实施例4:量取IGF3mg、甘露醇38g、右旋糖苷38g、透明质酸16g、纯化水加至100ml，将上述各成分溶解于低温纯化水中，分装，冻干，即得。实施例5:量取IGF4mg、甘露醇38g、右旋糖苷38g、透明质酸16g、纯化水加至100ml，将上述各成分溶解于低温纯化水中，分装，冻干，即得。实施例6-量取IGF2.5mg、甘露醇38g、右旋糖苷38g、透明质酸16g、纯化水加至100ml，将上述各成分溶解于低温纯化水中，分装，冻干，即得。实施例7:量取IGF3.5mg、甘露醇38g、右旋糖苷38g、透明质酸16g、纯化水加至100ml，将上述各成分溶解于低温纯化水中，分装，冻干，即得。专用溶媒实施例实施例8:左恩lg，硼酸亮氨酸O.lg，透明质酸4g，甘露醇6g，丙三醇3ml。用pH5.07.4PBS溶解并最后加至100ml，分装，灭菌即可。实施例9:巯基乙酸钙2g，硼酸缬氨酸0.2g，透明质酸5g，甘露醇4g，右旋糖苷3g，丙三醇2ml。用pH5.07.4PBS溶解并最后加至100ml，分装，灭菌即可。实施例10:丙二醇1.5ml，硼酸丙氨酸0.2g，透明质酸6g，甘露醇5g，右旋糖苷2g，丙三醇2ml。用pH5.07.4PBS溶解并最后加至100ml，分装，灭菌即可。权利要求1、胰岛素样生长因子在美容化妆品中的应用。2、一种含有胰岛素样生长因子的美容化妆品，主要活性成分为胰岛素样生长因子0.55mg/100ml。3、根据权利要求2所述的美容化妆品，其特征在于每100ml中含:胰岛素样生长因子活性稳定剂活性促进剂蛋白酶抑制剂透皮吸收促进剂0.55mg48g0.33g0.10.6g0.12g。4、一种与权利要求1、2、3所述美容化妆品其配合使用的溶媒，由以下重量份数比的原料制成透皮吸收促进剂O.12份、蛋白酶抑制剂0.10.6份、活性稳定剂48份、丙三醇26份、pH5.07.4PBS溶液加至100份。全文摘要本发明公开了胰岛素样生长因子在制备美容化妆品中的用途，同时还提供了其生产工艺。本发明利用生物技术美容，将胰岛素样生长因子用于外用美容，通过补充促进皮肤细胞代谢和增殖的生物活性因子，从根本上改善皮肤的生理状态，促进皮肤组织的修复和代谢；可使皮肤异常细嫩年轻，淡化色斑，平复皱纹，美容效果显著，且安全可靠，无副作用。文档编号A61Q19/00GK101513382SQ20091006668公开日2009年8月26日申请日期2009年3月25日优先权日2009年3月25日发明者冯来坤申请人:冯来坤