专利名称：α-葡聚糖酶以及含有其的口腔护理组合物的制作方法
α-葡聚糖酶以及含有其的口腔护理组合物优先权本申请要求2008年4月11日提交的美国临时专利申请序列号No. 61/044，316的 优先权，其以其整体引入作为参考。
背景技术：
齿斑的形成导致龋齿、牙龈炎症、牙周病以及最终导致牙齿损失。齿斑是细菌、上 皮细胞、白细胞、巨噬细胞及其他口腔分泌液的混合物。细菌产生高度分枝的多糖(highly branched polysaccharides)，其与来自口腔的微生物一起形成齿斑继续增殖的粘性基质。随着齿斑继续积累，出现石头一样硬的白色或浅黄色沉积物。这些沉积物称为钙 斑、牙石或牙垢，其在唾液中由菌斑(plaque)和矿物例如钙形成。对预防和/或减少齿斑以及相关牙齿损坏的新方法有着持续的需要。
发明内容
一方面，提供了分离的α -葡聚糖酶，包含下述氨基酸序列，即(a)与天然Hypocea tawa的α -葡聚糖酶(SEQ ID NO 1的38-635位氨基酸残基)有至少99%同一性；或者 (b)与 Trichoderma konilangbra 的 α-葡聚糖酶(SEQ ID NO :3 的 38-627 位氨基酸残基) 有至少85%同一性。另一个方面中，提供了编码本发明α-葡聚糖酶的分离多核苷酸以及含有该分离 多核苷酸的重组核酸。还提供了含有该重组核酸的载体和宿主细胞。在另一个方面中，提供了细胞培养物。在一些实施方式中，该细胞培养物含有生长 培养基和上述宿主细胞的群体。细胞培养物可用于提供在适于分离的α-葡聚糖酶产生的 条件下维持细胞培养物以产生本发明的α-葡聚糖酶。如果α-葡聚糖酶是分泌的，这可 从生长培养基中收获。在另一个方面中，提供了产生蛋白质的方法，其包括在适于分离的α-葡聚糖酶 产生的条件下维持如上细胞的培养物。在一些实施方式中，该方法还包括从生长培养基中 收获α-葡聚糖酶。另一个方面中，提供了方法，其包括接受选自以下的分离的α-葡聚糖酶(a) 具有与成熟Hypocea tawa的α -葡聚糖酶(SEQ ID NO 1的38-635位氨基酸残基)有 至少99%同一性的氨基酸序列的α-葡聚糖酶；(b)具有与成熟里氏木霉(Trichoderma reesei)的α -葡聚糖酶(SEQ ID NO :2的38-622位氨基酸残基)有至少85%同一性的氨 基酸序列的α-葡聚糖酶；或者(c)具有与成熟Trichoderma konilangbra的α -葡聚糖 酶(SEQ ID NO 3的38-627位氨基酸残基)有至少85%同一性的氨基酸序列的α -葡聚 糖酶；以及将该分离的α “葡聚糖酶与口腔可接受的赋形剂混合，以制备口腔护理组合物。 在一些实施方式中，α-葡聚糖酶不同于里氏木霉的α-葡聚糖酶(SEQ ID NO :2的38-622 位氨基酸残基)。在一些实施方式中，该方法还包括包装该口腔护理组合物。在另一个方面中，提供口腔护理组合物，其包含(a) 口腔可接受的赋形剂；和(b)分离的α-葡聚糖酶。在一个相关方面中，提供了口腔护理组合物，其包含口腔可接受赋形剂和选自下 列的分离的α _葡聚糖酶(a)具有与成熟Hypocea tawa的α -葡聚糖酶(SEQ ID NO 1的 38-635位氨基酸残基)有至少99%同一性的氨基酸序列的α -葡聚糖酶；(b)具有与成熟 里氏木霉的α-葡聚糖酶(SEQID NO :2的38-622位氨基酸残基)有至少85%同一性的氨 基酸序列的α-葡聚糖酶；或者(c)具有与成熟Trichoderma koni Iangbra的α -葡聚糖 酶(SEQ ID NO 3的38-627位氨基酸残基)有至少85%同一性的氨基酸序列的α -葡聚 糖酶。在一些实施方式中，该α-葡聚糖酶不同于里氏木霉的α-葡聚糖酶(SEQ ID NO 2 的38-622位氨基酸残基)。在一些实施方式中，α-葡聚糖酶以组合物重量的0.0001%至5%的浓度存在于 该组合物中。在一些实施方式中，该口腔护理组合物还包含第二种酶。在特定实施方案中，该第 二种酶是脱氨酶、酯酶、糖苷酶、脂肪酶、氧化酶、过氧化物酶、蛋白酶、脲酶或纤维素酶。在一些实施方式中，该组合物配制成牙膏，尽管预见了其他的口腔护理制剂。在一 些实施方式中，该组合物例如包含增稠剂、表面活性剂、湿润剂和研磨剂中的至少一种。在另一个方面中，提供了方法，其中接受分离的α-葡聚糖酶，然后提供与口腔可 接受的赋形剂混合以制备口腔护理组合物。该口腔护理组合物可以包装。在另一个方面中，提供了包括在适于α -葡聚糖酶活性的条件下将本发明口腔护 理组合物与牙齿相接触的方法。该接触可以使用例如牙刷进行。在特定情况下，该方法导 致对齿斑的预防和/或减少。
图 1 显示来自 Hypocea tawa (SEQ ID N0:1)、里氏木霉(SEQ IDNO 2)； Trichoderma konilangbra (SEQ ID NO 3)和哈茨木霉(Τ· harzianum) (SEQ ID NO 4)的 α-葡聚糖酶的氨基酸序列比对，以及基于比对的共有序列(SEQ ID NO :5)。显示α -葡聚 糖酶的多个特征，例如信号序列、催化结构域、接头结构域以及葡聚糖结合结构域。图2汇总与多种无细胞培养溶液过夜孵育后获得的不溶葡聚糖水解物的HPLC分 析结果的表格。图3显示在ρΗ4· 5和pH6. O的来自表达里氏木霉(Τ· reesei)、H. tawa和 Τ. koni langbra的推定α -1,3-葡聚糖酶的里氏木霉培养物的上清的活性。天然α -葡聚 糖酶在宿主菌株中未检测到。葡聚糖水解反应物根据培养体积而不是蛋白质含量上样。定义除非本文中另有说明，否则所有技术和科学术语应为本领域中常规的含义。为清 楚起见定义以下术语。其他定义可出现在本说明书的其他地方。本文所用的术语“α-葡聚糖酶”指水解多糖中1，3-α-D-糖苷键的酶。本文所 述的α-葡聚糖酶具有根据IUBMB酶命名法的EC 3. 2. 1. 59的活性，可水解不溶的葡聚糖。 α -葡聚糖酶的系统命名为1，3 (1，3 ； 1，4) - α -D-葡聚糖3_葡聚糖水解酶。在某些出版物 中，此酶可能称为1，3- α -葡聚糖酶。注意，本发明的酶可具有除1，3- α -D-糖苷活性之外 的其他活性，包括但不限于1，2- α -D-糖苷活性。
本文所用的术语“口腔护理组合物”指成分混合物，在常规使用过程中其不是供有 意吞咽从而全身性施用特定治疗剂，而是保留在口腔中足够的时间以接触牙齿表面和/或 口腔组织，用以递送对口腔活性有益的试剂。口腔组合物可以是牙膏、洁齿剂、牙粉、牙凝 胶、龈下凝胶、漱口水、假牙产品、口喷雾、锭剂、口腔片剂、口香糖等等的形式。口腔组合物 还可以合并在条或膜上，用以直接施用或粘贴在口腔表面。除非另作说明，术语“洁齿剂”指膏剂、凝胶、固体或液体的口腔护理组合物制剂。 洁齿剂的实例有牙膏、牙齿凝胶和牙粉。洁齿剂可以是单相组合物或者可以是两种或更多 种分开的组合物的组合。洁齿剂可以是任何期望的形式，例如深条纹、表面条纹、多层、具有 包围膏剂的凝胶或者其任何组合。包含两种或更多种分开的组合物的洁齿剂中的每种组合 物可以包含于分配器中物理上分开的区室中并且并行分配。本文使用的术语“ 口腔科接受载体”指用于口腔护理组合物中的安全且有效的物 质。这些物质包括氟离子来源、抗钙物质、缓冲剂、研磨抛光物质、过氧化物来源、碱金属碳 酸氢盐、增稠物质、湿润剂、水、表面活性剂、二氧化钛、调味体系、甜味剂、木糖醇、着色剂及 其混合物。本文使用的术语“牙齿”或“牙”指天然牙齿以及假牙或牙科假体。本文使用的术语“牙釉质”指通常可见并且主要由包括羟基磷灰石 (hydroxylapatite)的矿物质构成的牙齿部分。牙釉质涵盖人和动物牙齿中的天然牙釉质 以及用于替代受损或脱落的牙齿部分的牙釉质样物质，包括用于此目的的树脂和瓷。本文使用的术语“牙石”和“牙垢”可互换地用于表示矿化齿斑沉积物。本文使用的术语“糖萼”指一些细菌、上皮细胞以及其他细胞产生的细胞外聚合 物，其在牙齿表面上形成包被，并作为菌斑附着的基质。本文使用的术语“菌斑”表示在牙齿表面上形成的生物膜。形成生物膜的 微生物主要是细菌，包括但不限于变形链球菌(Str印tococcus mutans)、厌氧链球菌 (Streptococcus anaerobes)、梭杆菌属物种(Fusobacterium spp.)禾口放线杆菌属物种 (Actinobacteria spp.)。菌斑可以在糖萼上形成，由其支持或者是其一部分。齿斑中存在的微生物全部是口腔中天然存在的，通常是无害的。但是，通过定期刷 牙无法除去菌斑意味着使得它们形成厚层。最靠近牙齿表面的那些微生物变为厌氧呼吸； 在此状态下它们开始产生酸。本文使用的术语“重组的”指野生型宿主细胞中不存在、不分泌或者表达模式改变 的多核苷酸或多肽。重组多肽和多核苷酸分别具有不同于野生型序列的序列，具有不同于 野生型多肽和多核苷酸的时间或空间表达模式，和/或以不同于野生型多肽和多核苷酸的 水平表达。重组分子可含有两种或多种以非天然发生的方式连接在一起的天然序列。重组 细胞含有重组多核苷酸或重组多肽。本文使用的术语“异源”指彼此通常不相连的元件。例如，如果宿主细胞产生异源 蛋白，该宿主细胞中通常不产生该蛋白质。同样地，有效连接异源编码序列的启动子是有效 连接在野生型宿主细胞中其通常不有效连接的编码序列的启动子。针对多核苷酸或蛋白质 的，术语“同源的”表示宿主细胞中天然的多核苷酸或蛋白质。本文使用的术语“蛋白质”和“多肽”可互换地用于表示肽键相连的氨基酸链。除 非另作说明，多肽以标准的N端至C端的方向书写。
本文使用的“信号序列”是蛋白质的N端部分存在的氨基酸序列，其有助于成熟形 式的蛋白质分泌出细胞。信号序列的定义是功能性的，尽管许多信号序列的结构是已知。成 熟形式的细胞外蛋白质缺乏信号序列，其在分泌过程中被切割掉了。本文使用的“编码序列”是编码多肽的DNA部分。本文使用的术语“核酸”涵盖DNA、RNA、杂化物以及合成或化学修饰的核酸，不论是 单链还是双链。术语“核酸”和“多核苷酸”可互换地用于表示由磷酸二酯、硫酸二酯或类 似键连接的核苷链。除非另作说明，多核苷酸以标准的5'至3'的方向书写。本文使用的“载体”指设计用以将核酸引入一个或多个宿主细胞的多核苷酸。载 体可在不同宿主细胞中自主复制，包括克隆载体、表达载体、穿梭载体、质粒、噬菌体颗粒、 表达盒等。本文使用的“表达载体”指包含蛋白质编码区域的DNA构建物，该编码区域与能够 实现蛋白质在合适宿主细胞中表达的合适控制序列有效连接。这些控制序列可包括实现转 录的启动子、控制转录产生mRNA的任选操纵子序列、编码mRNA上合适核糖体结合位点的序 列以及增强子和控制转录和翻译终止的其他序列。本文使用的“启动子”是引发下游核酸转录的调节序列。本文使用的术语“有效连接”指允许元件以所述形式或表观形式发挥功能的元件 排列。例如，如果启动子控制编码序列的转录，则启动子与编码序列有效连接。本文使用的术语“选择性/选择标记”指能够在宿主中表达的蛋白质，其使得易于 选择含有引入核酸或载体的那些细胞。选择标记的实例包括但不限于赋予抗微生物抗性的 蛋白质(例如潮霉素、博来霉素或氯霉素)和/或赋予代谢优势的基因，例如对于宿主细胞 的营养优势。本文使用的术语“来源于”涵盖术语“来自”、“获自”或者“可获自，，以及“分离自”。本文使用的“非致病”牛.物体是指对人来说非病原件(即，疾病或造成疾病的)的 生物体。本文使用的术语“回收的”、“分离的”和“分开的”指从与其天然相关联的至少一 种组分中移出的蛋白质、细胞、核酸或氨基酸。本文使用的术语“转化的”、“稳定转化的”和“转基因的”在针对细胞使用时表示 该细胞具有非天然(例如异源)核酸序列，其整合进其基因组或者作为附加体质粒维持多 代。本文使用的术语“表达”指基于基因的核酸序列产生多肽的过程。该过程包括转 录和翻译。在将核酸序列插入细胞内的背景中，本文使用的术语“引入”表示“转染”或“转化” 或“转导”，包括核酸序列并入真核或原核细胞，其中该核酸序列可并入细胞的基因组(例 如染色体、质粒、质体或线粒体DNA)，转化为自主复制子或者瞬时表达(例如转染的mRNA)。本文使用的术语“相容的，，表示特定组合物的成分能够合并(混合)，而没有显著 降低组合物中成分稳定性和/或效力的相互作用。 本文使用的术语“锭剂，，包括但不限于薄荷糖、锭剂、软锭剂、微胶囊和快速溶解 固体形式，包括冻干形式(饼、薄片、薄膜、片剂)和压制片剂。 本文使用的术语“快速溶解的固体形式”表示该固体剂型置于口腔或者含有牙科假体的容器中后在小于约60秒、小于约15秒、或者小于约5秒内溶解的固体剂型。数值范围涵盖定义其范围的数值。除非另作说明，本文中使用的所有百分比和比 值是基于具体口腔组合物的重量，而不是所递送的整个口腔制剂的重量。除非另作说明或 由上下文推知，没有数词修饰的形式包括了复数形式。为了便于阅读提供标题，而不应视为限制。除非另作说明或由上下文推知，一个标 题下面所包括的说明一般作为整体适用于全文。描述了示例性材料和方法，但是其他方法和材料可得到类似的或等同的结果。所 有专利和公开，包括这些专利和公开中公开的所有序列，通过引用明确地并入本文。
具体实施例方式描述了关于具有α -葡聚糖酶活性的多肽的组合物和方法。该组合物和方法可用 于降低或预防菌斑的形成，降低或预防促进形成菌斑的根本生理情况。Α.多肽、多核苷酸和宿主细胞本发明组合物和方法的一个方面涉及分离的α-葡聚糖酶。在一些实施方式中， α-葡聚糖酶包含与成熟Hypocea tawa的α -葡聚糖酶的氨基酸序列(SEQ ID NO :1的 38-635位氨基酸残基)具有至少98%同一性(例如至少99 %或99. 5 %同一性)的氨基 酸序列。在具体实施方案中，α -葡聚糖酶包含成熟H. tawa的α -葡聚糖酶的氨基酸序列 (SEQ ID NO 1的38-635位氨基酸残基)。在一些实施方式中，α -葡聚糖酶包含与成熟Trichoderma konilangbra的α -葡 聚糖酶的氨基酸序列(SEQ ID NO 3的38-627位氨基酸)有至少85%同一性(例如至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的同一性)的氨基酸序列。在具 体实施方案中，α “葡聚糖酶包含成熟Τ. konilangbra的α -葡聚糖酶的氨基酸序列(SEQ ID NO 3的38-627位氨基酸残基)。在一些实施方式中，α-葡聚糖酶包含与成熟里氏木霉的α-葡聚糖酶的氨基酸 序列(SEQ ID NO :2的38-622位氨基酸)有至少85%同一性(例如至少90%、91 %、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的同一性)的氨基酸序列。在具体实施方案中， α -葡聚糖酶包含不同于成熟里氏木霉的α -葡聚糖酶氨基酸序列(SEQ ID NO :2的38_622 位氨基酸)的氨基酸序列。在一些实施方式中，α-葡聚糖酶类似于但不同于野生型α-葡聚糖酶。例如，在 一些实施方式中，α -葡聚糖酶具有与成熟H. tawa的α -葡聚糖酶(SEQ ID NO :1的38_635 位氨基酸残基)有至少98%同一性但是不相同的氨基酸序列。同样地，在某些实施方案中， α -葡聚糖酶可具有与成熟里氏木霉或者Τ. konilangbra的α -葡聚糖酶(分别为SEQ ID NO :2的38-622位氨基酸或者SEQ ID NO 3的38-627位氨基酸)有至少85%同一性但是 不相同的氨基酸序列。已知有超过50种不同的α -葡聚糖酶的氨基酸序列，并保存于NCBI的Genbank数 据库，包括来自黑曲霉(Aspergillus niger)(登录号:XP_001390909. 1 ；GID 145236523)、 产紫青霉(Penicillium purpurogenum)(登录号AAF27912. 1 ；GID 6752866)、构巢裸 胞壳(Emericella nidulans)(登录号CAC48025. 1 ;GID :15072711)和新型隐球酵母 (Cryptococcusneoformans)(登录号AAW47079. 1 ；GID 57230770)的那些。以本专利申请的最早提交日，这些Genbank登录内容以其整体引入作为参考，包括其中的核酸和蛋白质 序列以及这些序列的注释。描述α-葡聚糖酶中保守的结构域的条目存放于NCBI的保守 结构域数据库中的 pfam03659 (Marchler-Bauer 等人 CDD :a conserved domain database for interactivedomain family analysis. (2007)Nucleic Acids Res. 35 :D237_40)。来 自裂殖酵母(S.pombe)的α-葡聚糖酶的序列以及α -葡聚糖酶结构的讨论见于Fuglsang 等人((2000) J. Biol. Chem. 275 :2009_18)。可得到对于下列的指导，即可改变氨基酸以产生H.taWa、里氏木霉和 T.konilangbra的野生型α-葡聚糖酶保留α -葡聚糖酶活性的变体，例如，通过比对这 些α-葡聚糖酶蛋白质的氨基酸序列，鉴定在蛋白质中相同位置而蛋白质之间不同的氨 基酸，以及将这些氨基酸从一个蛋白质转移到另一个。示例性序列对比显示于图1，以及 Fuglsang等人(见上文)。变体多肽可包含保守氨基酸取代，其保留所取代氨基酸的总电荷、疏水性/亲水 性和/或空间体积，同时赋予该多肽其他有益生物化学性质。保守取代的非限制性实例包 括下列组之间的取代Gly/Ala、Val/Ile/Leu、Lys/Arg、Asn/Gln、Glu/Asp、Ser/Cys/Thr 和 Phe/Trp/Tyr。这些及其他保守取代显示于下表。
初始氨基酸代码保守取代丙氨酸AD-Ala、Gly、β-Ala、L-Cys、D-Cys精氨酸RD-Arg, Lys. D-Lys,高精氨酸、D-高精氨酸、Met、lie , D-Met、 D-Ile、Orn、D-Orn天冬酰胺ND-Asn、Asp、D-Asp、Ghi、D-Glu> Gln、D-Gln天冬氨酸DD-Asp、D-Asn、Asn、Glu、D-Glu、 Gln > D-Gln半胱氨酸CD-Cys、S-Me-Cys、Met、D-Met、 Thr、D-Thr谷氨酰胺QD-Gln、Asn、D-Asn、Glu、D-Glu、 Asp、D-Asp谷氨酸ED-Glu、D-Asp、Asp、Asn、D-Asn、 Gln、D-Gln甘氨酸GAla、D-Ala、Pro、D-Pro、b-Ala、 Acp异亮氨酸ID-Ile、VaK D-Val、Leu、D-Leu、 Met、D-Met亮氨酸LD-Leu、Val、D-Val、Leu、D-Leu、 Met、D-Met赖氨酸KD-Lys、Arg、D-Arg、高精氛酸、 D-高精氨酸、Met、D-Met、lie, D-IIe、Orn、D-Orn蛋氨酸MD-Met、S-Me-Cys、lie、D-Ile、Leu、 D-Leu、Val、D-Val苯丙氨酸FD-Phe, Tyr, D-Thr, L-Dopa, His、 D-His、Trp、D-Trp、顺式-3,4，或者 5-笨基浦氨酸、反式-3,4或者5-苯基 脯氨酸脯氨酸PD-Pro、L-I-缘唑(thioazolidine)-4-欺 酸、D-或L-I-噁唑坑-4-欺酸丝氨酸SD-Ser, Thr, D-Thr,异-Thr、Met、 D-Me、Met(O)、D-Met(O)、L-Cys、 D-Cys
权利要求
1.分离的α-葡聚糖酶，其包含下列氨基酸序列(a)与成熟Hypoceatawa的α -葡聚糖酶(SEQ ID NO 1的38-635位氨基酸残基)有 至少99%同一性；或者(b)与成熟Trichoderma koniIangbra 的 α -葡聚糖酶(SEQ ID NO 3 的 38-627 位氨 基酸残基)有至少85%同一性。
2.编码权利要求1的分离的α-葡聚糖酶的分离的多核苷酸。
3.包含权利要求2的分离多核苷酸的重组核酸。
4.包含权利要求3的重组核酸的载体。
5.包含权利要求3的重组核酸的宿主细胞。
6.细胞培养物，其包含a)生长培养基；和b)权利要求5的细胞群体。
7.产生蛋白质的方法，其包括在适于所述分离的α-葡聚糖酶产生的条件下维持权利要求6的细胞培养物。
8.根据权利要求7的方法，其还包括从所述生长培养基中收获所述α-葡聚糖酶。
9.方法，其包括接受选自下列的α-葡聚糖酶(a)具有与成熟Hypoceatawa的α -葡聚糖酶(SEQ ID NO 1的38-635位氨基酸残 基)有至少99%同一性的氨基酸序列的α-葡聚糖酶；(b)具有与成熟里氏木霉的α-葡聚糖酶(SEQ ID NO 2的38-622位氨基酸残基)有 至少85%同一性的氨基酸序列的α-葡聚糖酶；或者(c)具有与成熟Trichoderma konilangbra 的 α-葡聚糖酶(SEQ IDNO :3 的 38-627 位 氨基酸残基)有至少85%同一性的氨基酸序列的α-葡聚糖酶；以及将所述分离的α-葡聚糖酶与口腔可接受的赋形剂混合，以制备口腔护理组合物。
10.根据权利要求9的方法，还包括 包装所述口腔护理组合物。
11.根据权利要求1的方法，其中α-葡聚糖酶不同于里氏木霉的α-葡聚糖酶(SEQ ID NO 2的38-622位氨基酸残基)。
12.口腔护理组合物，其包含a)口腔可接受赋形剂；和b)权利要求1的分离的α-葡聚糖酶。
13.口腔护理组合物，其包含 口腔可接受赋形剂；和选自下列的分离的α-葡聚糖酶(a)具有与成熟Hypoceatawa的α -葡聚糖酶(SEQ ID NO 1的38-635位氨基酸残 基)有至少99%同一性的氨基酸序列的α-葡聚糖酶；(b)具有与成熟里氏木霉的α-葡聚糖酶(SEQ ID NO 2的38-622位氨基酸残基)有 至少85%同一性的氨基酸序列的α-葡聚糖酶；或者(c)具有与成熟Trichoderma konilangbra 的 α-葡聚糖酶(SEQ IDNO :2 的 38-627 位氨基酸残基)有至少85%同一性的氨基酸序列的α-葡聚糖酶。
14.根据权利要求13的组合物，其中α-葡聚糖酶不同于里氏木霉的α-葡聚糖酶 (SEQ ID NO 2的38-622位氨基酸残基)。
15.根据权利要求12-14中任一项的口腔护理组合物，其中所述α-葡聚糖酶以所述组 合物重量的0. 0001%至5%的浓度存在于所述组合物中。
16.根据权利要求12-15中任一项的口腔护理组合物，其还包含第二种酶。
17.根据权利要求16的口腔护理组合物，其中所述第二种酶是脱氨酶、酯酶、糖苷酶、 脂肪酶、氧化酶、过氧化物酶、蛋白酶、脲酶或纤维素酶。
18.根据权利要求12-17中任一项的口腔护理组合物，其中所述组合物配制成牙膏。
19.根据权利要求12-18中任一项的口腔护理组合物，其中所述组合物包含增稠剂、表 面活性剂、湿润剂和研磨剂中的至少一种。
20.方法，其包括在适于所述α -葡聚糖酶活性的条件下将权利要求12-19中任一项的口腔护理组合物 与牙齿接触。
21.根据权利要求20的方法，其中所述接触使用牙刷进行。
22.根据权利要求20或21的方法，其中所述方法使得可以预防和/或减少菌斑。
全文摘要
本发明描述了来自Hypocea tawa、里氏木霉和Trichodermakonilangbra的分离的α-葡聚糖酶，以及含有它们的口腔护理组合物。该口腔护理组合物可用于预防或减少菌斑。
文档编号A61Q11/02GK101998849SQ200980112748
公开日2011年3月30日 申请日期2009年4月9日 优先权日2008年4月11日
发明者M·佩普森, S·兰茨, S·金 申请人:丹尼斯科美国公司