本发明属于植物栽培
技术领域：
，具体涉及一种嘉兰百合组培苗移栽用肥的制备方法。
背景技术：
：嘉兰百合，多年生攀援型草本花卉，原产我国云南南部、海南省及热带亚洲和非洲。我国云南西双版纳海拔1200m以下有野生零星分布。嘉兰具横走的根状茎，直径约2cm，淡黄褐色，常由顶芽出苗。一般于3月萌发生长，6月中旬始花，7至8月为盛花期，9至10月为种子成熟期。由于嘉兰块茎中富含秋水仙碱，在医药上可以用于治疗癌症、急性痛风和支气管炎等疾病，所以具有良好的市场前景。目前，嘉兰百合可用分株、组织培养和播种繁殖，但是嘉兰百合的繁殖系数非常低，分株难以满足市场的需求。播种繁殖则存在出苗率低、生长缓慢的问题，常常需要三年多才能开花。而组培繁殖虽然教分株、播种繁殖有较高的繁殖系数，但是组培苗存在移栽成活率低、生长缓慢等问题。因此如何克服现有技术的不足是目前涂料
技术领域：
亟需解决的问题。技术实现要素：本发明提供一种嘉兰百合组培苗移栽用肥的制备方法，该制备方法简单可靠，在嘉兰百合组培苗移栽时，采用该肥料可大大提高组培苗的成活率，开花时间也大大提前，具有良好的市场应用前景。本发明利用了鸡骨粉碎后的残渣和酶解液，实现了动物废料的再生利用，同时利用鸡骨酶解浓缩液负载于改性魔芋粉中，实现了提高嘉兰百合产量的目的。为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种嘉兰百合组培苗移栽用肥的制备方法，包括如下步骤：步骤（1），将鸡枞菌渣加入到重量是鸡枞菌渣重量4-5倍的水中，于40-50℃超声震荡20-40min，之后升温至70-75℃并向其中加入木瓜蛋白酶进行酶解，3-5h后，于90-95℃下灭酶，过滤，取滤液，得到鸡枞菌渣酶解液；木瓜蛋白粉的质量是鸡枞菌渣质量的0.5%-0.8%；步骤（2），将鸡骨粉碎后加入重量是鸡骨重量2-3倍的水中，升温至55-65℃时，向其中加入中性蛋白酶，于超声震荡条件下酶解50-80min，然后于90-95℃下灭酶，之后过滤，滤渣烘干，滤液浓缩至可溶性固形物含量为35-40°brix，得到鸡骨酶解滤渣和鸡骨酶解浓缩液；中性蛋白酶的质量是鸡骨质量的0.5%-0.8%；步骤（3），按照重量份数计，将鸡骨酶解滤渣8-10份、豆粕10-15份、稻壳8-12份、腐植酸2-5份、钠沸石粉1-3份加至鸡枞菌渣酶解液3-5份中，搅拌，加入微生物菌种，进行腐熟，得到腐熟物料；步骤（4），按照重量份数计，取魔芋粉25-35份、鸡骨酶解浓缩液12-16份和丙烯酰胺2-4份，加入至70-80vol.%的乙醇水溶液150-180份中，升温至45-50℃搅拌40-60min；再在氮气的保护下，加入引发剂1-2份，再加入3-6wt%稀硫酸2-6份，升温至75-80℃反应1-4h，将产物洗涤之后，抽滤，干燥，得到改性魔芋粉负载的鸡骨酶解浓缩液；步骤（5），按照重量份数计，将腐熟物料80-100份、改性魔芋粉负载的鸡骨酶解浓缩液18-20份、干燥的百部草粉碎物2-5份和麦饭石粉1-2份一起混合均匀后，造粒，即得。进一步，优选的是，步骤（2）中鸡骨粉碎至粒径不大于2mm。进一步，优选的是，步骤（3）中所述的微生物菌种为枯草芽孢杆菌、放线菌、酵母菌或双歧杆菌。进一步，优选的是，步骤（4）中引发剂是过氧化二苯甲酰、偶氮二异丁腈或过氧化苯甲酸叔丁酯中的一种。进一步，优选的是，步骤（3）中所述的微生物菌种是采用菌液的形式。进一步，优选的是，步骤（3）的腐熟步骤中，当物料内部温度大于55℃时翻堆；当温度下降至28℃后并不再升温时，腐熟结束。进一步，优选的是，干燥的百部草粉碎物粒径为100目-200目。本发明与现有技术相比，其有益效果为：本发明嘉兰百合组培苗移栽用肥的制备方法简单可靠，在嘉兰百合组培苗移栽时，采用该肥料可大大提高组培苗的成活率，成活率可提升至95%以上（传统方法成活率只在60%左右），从而产量大大增加；另外，开花时间也大大提前，提前至少5-7天，因此具有良好的市场应用前景。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。以下实施例中菌液的制备步骤是：（1）枯草芽孢杆菌菌液的制备：在无菌条件下，将枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)CICC23659接入到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基按重量百分数计为：淀粉5%、腐植酸钾1%、豆饼粉7.5%、磷酸氢二钾0.2%、硫酸铵0.1%、硫酸镁0.05%、三氯化铁0.005%、碳酸钙0.05%、酵母粉0.01%、硼酸0.005%，pH值调至7.2-7.4，在120℃左右进行灭菌20min；发酵过程中培养温度范围28-40℃，通入无菌空气（溶氧）并搅拌，无菌空气的通气量0.5-1.0L∕L·min，搅拌速度150-200rpm，罐压0.5kg∕cm2，耗氧培养48小时，得到的菌液中枯草芽孢杆菌斯氏亚种菌数≥2.0×109cfu/mL；（2）放线菌菌液的制备在无菌条件下，将白刺链霉菌（Streptomycesalbospinus）CGMCC7434接种到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基按重量百分数计为：葡萄糖2.9%、黄豆粉1.6%、可溶性淀粉4%、酵母粉1%、腐植酸钾1%、蛋白胨0.4%、硫酸镁0.05%、NaCl0.2%、碳酸钙0.5%，pH值调至7.5-8.0，在120℃左右进行灭菌20min；发酵过程中培养温度范围28-30℃，通入无菌空气（溶氧）并搅拌，无菌空气的通入量2-3L∕L·min，搅拌速度为150~210rpm，发酵时间60~130小时得到放线菌菌液发酵液，发酵后期将菌丝全部打碎成该菌的菌落形成单位，发酵液中该菌的菌落形成单位≥1.5×109cfu/mL；（3）酵母菌菌液的制备在无菌条件下，将产朊假丝酵母(Candidautilis)CICC1422接种到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基为常规YPD酵母培养基；发酵过程中培养温度为为25-40℃，通入无菌空气（溶氧）并搅拌，通风量为8-10L/L·min、发酵时间为36-72h、搅拌转速为200-300rpm，发酵液中该菌的菌落形成单位≥1.0×109cfu/mL；（4）双歧杆菌菌液的制备：在无菌条件下，将双歧杆菌（Lactococcuslactis）ACCC11054接种到液体培养基中，其中所述的培养基按重量百分数计为：番茄汁20%、可溶性淀粉0.05%、蛋白胨1.5%、氯化钠5.0g、酵母菌0.6%、葡萄糖2%，pH值调至7.2；发酵过程中培养温度范围30℃-35℃培养2-3天，得到菌数≥5.0×109cfu/ml的种子培养液，然后接种到50升含有5%（重量百分数）红糖的无菌水中，接种量为无菌水重量的2%，在溶氧量为5%即发酵罐中氧气的体积与发酵液的体积比为5%的条件下，25℃-30℃于密封罐中静置培养10-15天，得到菌数≥1.0×109cfu/ml的双歧杆菌菌液。本发明所述的干燥的百部草的含水率通常为6-8%。本发明滤渣烘干温度通常为50-70℃，烘干至恒重即可。实施例1一种嘉兰百合组培苗移栽用肥的制备方法，包括如下步骤：步骤（1），将鸡枞菌渣加入到重量是鸡枞菌渣重量4倍的水中，于40℃超声震荡20min，之后升温至70℃并向其中加入木瓜蛋白酶进行酶解，3h后，于90℃下灭酶，过滤，取滤液，得到鸡枞菌渣酶解液；木瓜蛋白粉的质量是鸡枞菌渣质量的0.5%；步骤（2），将鸡骨粉碎至粒径不大于2mm后加入重量是鸡骨重量2倍的水中，升温至55℃时，向其中加入中性蛋白酶，于超声震荡条件下酶解50min，然后于90℃下灭酶，之后过滤，滤渣烘干，滤液浓缩至可溶性固形物含量为35-40°brix，得到鸡骨酶解滤渣和鸡骨酶解浓缩液；中性蛋白酶的质量是鸡骨质量的0.5%；步骤（3），按照重量份数计，将鸡骨酶解滤渣8份、豆粕10份、稻壳8份、腐植酸2份、钠沸石粉1份加至鸡枞菌渣酶解液3份中，搅拌，加入微生物菌种0.3份，进行腐熟，当物料内部温度大于55℃时翻堆；当温度下降至28℃后并不再升温时，腐熟结束，得到腐熟物料；步骤（4），按照重量份数计，取魔芋粉25份、鸡骨酶解浓缩液12份和丙烯酰胺2份，加入至70vol.%的乙醇水溶液150份中，升温至45℃搅拌40min；再在氮气的保护下，加入过氧化二苯甲酰1份，再加入3wt%稀硫酸2份，升温至75℃反应1h，将产物洗涤之后，抽滤，干燥，得到改性魔芋粉负载的鸡骨酶解浓缩液；步骤（5），按照重量份数计，将腐熟物料80份、改性魔芋粉负载的鸡骨酶解浓缩液18份、干燥的百部草粉碎物2份和麦饭石粉1份一起混合均匀后，造粒，即得。其中，步骤（3）中所述的微生物菌种为枯草芽孢杆菌菌液。步骤（4）中干燥的百部草粉碎物粒径为100目-200目。实施例2一种嘉兰百合组培苗移栽用肥的制备方法，包括如下步骤：步骤（1），将鸡枞菌渣加入到重量是鸡枞菌渣重量5倍的水中，于50℃超声震荡40min，之后升温至75℃并向其中加入木瓜蛋白酶进行酶解，5h后，于95℃下灭酶，过滤，取滤液，得到鸡枞菌渣酶解液；木瓜蛋白粉的质量是鸡枞菌渣质量的0.8%；步骤（2），将鸡骨粉碎至粒径不大于2mm后加入重量是鸡骨重量3倍的水中，升温至65℃时，向其中加入中性蛋白酶，于超声震荡条件下酶解80min，然后于95℃下灭酶，之后过滤，滤渣烘干，滤液浓缩至可溶性固形物含量为35-40°brix，得到鸡骨酶解滤渣和鸡骨酶解浓缩液；中性蛋白酶的质量是鸡骨质量的0.8%；步骤（3），按照重量份数计，将鸡骨酶解滤渣10份、豆粕15份、稻壳12份、腐植酸5份、钠沸石粉3份加至鸡枞菌渣酶解液5份中，搅拌，加入微生物菌种0.8份，进行腐熟，当物料内部温度大于55℃时翻堆；当温度下降至28℃后并不再升温时，腐熟结束，得到腐熟物料；步骤（4），按照重量份数计，取魔芋粉35份、鸡骨酶解浓缩液16份和丙烯酰胺4份，加入至80vol.%的乙醇水溶液180份中，升温至50℃搅拌60min；再在氮气的保护下，加入过氧化二苯甲酰2份，再加入6wt%稀硫酸6份，升温至80℃反应4h，将产物洗涤之后，抽滤，干燥，得到改性魔芋粉负载的鸡骨酶解浓缩液；步骤（5），按照重量份数计，将腐熟物料100份、改性魔芋粉负载的鸡骨酶解浓缩液20份、干燥的百部草粉碎物5份和麦饭石粉2份一起混合均匀后，造粒，即得。其中，步骤（3）中所述的微生物菌种为双歧杆菌菌液。步骤（4）中干燥的百部草粉碎物粒径为100目-200目。实施例3一种嘉兰百合组培苗移栽用肥的制备方法，包括如下步骤：步骤（1），将鸡枞菌渣加入到重量是鸡枞菌渣重量4.5倍的水中，于44℃超声震荡36min，之后升温至73℃并向其中加入木瓜蛋白酶进行酶解，4.1h后，于92℃下灭酶，过滤，取滤液，得到鸡枞菌渣酶解液；木瓜蛋白粉的质量是鸡枞菌渣质量的0.6%；步骤（2），将鸡骨粉碎至粒径不大于2mm后加入重量是鸡骨重量2.5倍的水中，升温至60℃时，向其中加入中性蛋白酶，于超声震荡条件下酶解75min，然后于93℃下灭酶，之后过滤，滤渣烘干，滤液浓缩至可溶性固形物含量为35-40°brix，得到鸡骨酶解滤渣和鸡骨酶解浓缩液；中性蛋白酶的质量是鸡骨质量的0.7%；步骤（3），按照重量份数计，将鸡骨酶解滤渣9份、豆粕12份、稻壳10份、腐植酸4份、钠沸石粉2份加至鸡枞菌渣酶解液14份中，搅拌，加入微生物菌种0.5份，进行腐熟，当物料内部温度大于55℃时翻堆；当温度下降至28℃后并不再升温时，腐熟结束，得到腐熟物料；步骤（4），按照重量份数计，取魔芋粉28份、鸡骨酶解浓缩液15份和丙烯酰胺3份，加入至73vol.%的乙醇水溶液170份中，升温至47℃搅拌50min；再在氮气的保护下，加入过氧化二苯甲酰2份，再加入4wt%稀硫酸3份，升温至78℃反应2h，将产物洗涤之后，抽滤，干燥，得到改性魔芋粉负载的鸡骨酶解浓缩液；步骤（5），按照重量份数计，将腐熟物料90份、改性魔芋粉负载的鸡骨酶解浓缩液19份、干燥的百部草粉碎物4份和麦饭石粉2份一起混合均匀后，造粒，即得。其中，步骤（3）中所述的微生物菌种为放线菌菌液。步骤（4）中干燥的百部草粉碎物粒径为100目-200目。实施例4一种嘉兰百合组培苗移栽用肥的制备方法，包括如下步骤：步骤（1），将鸡枞菌渣加入到重量是鸡枞菌渣重量4.5倍的水中，于44℃超声震荡36min，之后升温至73℃并向其中加入木瓜蛋白酶进行酶解，4.1h后，于92℃下灭酶，过滤，取滤液，得到鸡枞菌渣酶解液；木瓜蛋白粉的质量是鸡枞菌渣质量的0.6%；步骤（2），将鸡骨粉碎至粒径不大于2mm后加入重量是鸡骨重量2.5倍的水中，升温至60℃时，向其中加入中性蛋白酶，于超声震荡条件下酶解75min，然后于93℃下灭酶，之后过滤，滤渣烘干，滤液浓缩至可溶性固形物含量为35-40°brix，得到鸡骨酶解滤渣和鸡骨酶解浓缩液；中性蛋白酶的质量是鸡骨质量的0.7%；步骤（3），按照重量份数计，将鸡骨酶解滤渣9份、豆粕12份、稻壳10份、腐植酸4份、钠沸石粉2份加至鸡枞菌渣酶解液14份中，搅拌，加入微生物菌种0.5份，进行腐熟，当物料内部温度大于55℃时翻堆；当温度下降至28℃后并不再升温时，腐熟结束，得到腐熟物料；步骤（4），按照重量份数计，取魔芋粉32份、鸡骨酶解浓缩液14份和丙烯酰胺3份，加入至74vol.%的乙醇水溶液170份中，升温至48℃搅拌44min；再在氮气的保护下，加入过氧化二苯甲酰2份，再加入4wt%稀硫酸3份，升温至78℃反应3h，将产物洗涤之后，抽滤，干燥，得到改性魔芋粉负载的鸡骨酶解浓缩液；步骤（5），按照重量份数计，将腐熟物料90份、改性魔芋粉负载的鸡骨酶解浓缩液19份、干燥的百部草粉碎物3份和麦饭石粉1份一起混合均匀后，造粒，即得。其中，步骤（3）中所述的微生物菌种为酵母菌菌液。步骤（4）中干燥的百部草粉碎物粒径为100目-200目。对比例1与实施例4的区别在于：鸡骨酶解浓缩液未经过改性魔芋粉负载，而是直接与其它原料混合。步骤（1），将鸡枞菌渣加入到重量是鸡枞菌渣重量4.5倍的水中，于44℃超声震荡36min，之后升温至73℃并向其中加入木瓜蛋白酶进行酶解，4.1h后，于92℃下灭酶，过滤，取滤液，得到鸡枞菌渣酶解液；木瓜蛋白粉的质量是鸡枞菌渣质量的0.6%；步骤（2），将鸡骨粉碎至粒径不大于2mm后加入重量是鸡骨重量2.5倍的水中，升温至60℃时，向其中加入中性蛋白酶，于超声震荡条件下酶解75min，然后于93℃下灭酶，之后过滤，滤渣烘干，滤液浓缩至可溶性固形物含量为35-40°brix，得到鸡骨酶解滤渣和鸡骨酶解浓缩液；中性蛋白酶的质量是鸡骨质量的0.7%；步骤（3），按照重量份数计，将鸡骨酶解滤渣9份、豆粕12份、稻壳10份、腐植酸4份、钠沸石粉2份加至鸡枞菌渣酶解液14份中，搅拌，加入微生物菌种0.5份，进行腐熟，当物料内部温度大于55℃时翻堆；当温度下降至28℃后并不再升温时，腐熟结束，得到腐熟物料；步骤（4），按照重量份数计，取魔芋粉32份和丙烯酰胺3份，加入至74vol.%的乙醇水溶液170份中，升温至48℃搅拌44min；再在氮气的保护下，加入过氧化二苯甲酰2份，再加入4wt%稀硫酸3份，升温至78℃反应3h，将产物洗涤之后，抽滤，干燥，得到改性魔芋粉；步骤（5），按照重量份数计，将腐熟物料90份、鸡骨酶解浓缩液9份、改性魔芋粉19份、干燥的百部草粉碎物3份和麦饭石粉1份一起混合均匀后，造粒，即得。其中，步骤（3）中所述的微生物菌种为酵母菌菌液。步骤（4）中干燥的百部草粉碎物粒径为100目-200目。采用本发明实施例1-4、对比例1及市售东方百合花底肥作为嘉兰百合组培苗移栽时的底肥，同时，采用传统嘉兰百合组培苗移栽用的有机肥（腐熟的农家肥）作为比较，移栽时采用传统方法，且保证肥料用量相同。以传统嘉兰百合组培苗移栽用的有机肥组作为对比，8个实验组（实施例1-4组、对比例1-3组及市售东方百合花底肥组）的移栽成活率、产量及开花时间的比较结果如下：移栽成活率提高，%产量增加，%开花时间提前，d实施例1组35756实施例2组36795实施例3组36.5857实施例4组37907对比例1组10252市售东方百合花底肥组280.5其中，移栽成活率提高的计算方法为实验组移栽成活率-对比组移栽成活率，做3次平行实验，取平均值；产量增加的计算方法为（实验组产量-对比组产量）/对比组产量×100%，做3次平行实验，取平均值；开花时间提前的计算方法为实验组开花时间-对比组开花时间，做3次平行实验，取平均值。由表1可以得知，由于嘉兰百合属于百合科嘉兰属，而其他的普通百合，如东方百合属于百合属，所属不同，而使得产品在使用过程中具有较大的差异性。同时，可以看出本发明实施例的效果远远优于对比例，这说明鸡骨酶解浓缩液负载于改性魔芋粉之后，可以延缓其释放过程，有利用嘉兰百合的产量增加。以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。当前第1页1 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