专利名称：含哌啶结构的有机硫化合物，制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属药物合成领域，具体涉及新型化合物含哌啶结构的有机硫化合物，制备方法和应用。
背景技术：
γ-氨基丁酸(GABA)是哺乳类动物中枢神经系统(CNS)中的主要抑制性神经递质，与兴奋性的神经递质共同协调维持大脑的正常功能。据统计脑内约有20％～40％的突触以GABA为神经递质，GABA受多种亚型的GABA转运蛋白的精确调控。GAT-1亚型在皮层神经元突触前膜上高表达，是参与GABA重摄取的主要蛋白。位于GABA能神经元附近胶质细胞上的GAT具有终止抑制性突触信号传递，调节GABA能突触的功能。远离GABA能神经元胶质细胞上的GAT具有清除扩散出来的GABA的功能。此外，胶质细胞重摄取GABA对兴奋性末梢突触前的GABAB受体可能起调节作用。GABA被神经元突触前膜上的GAT重摄取，在突触前神经元可以被重复利用，减少了GABA的重新合成。GABA被胶质细胞上的GAT重摄取后，由GABA转氨酶迅速代谢。
在中枢神经系统疾病中，常会出现GABA能神经信号传递的降低，尤其是癫痫。在美国，约有250万人患有癫痫，其中约有80万人为部分性发作，每年新病人有12.5万人，且至少65万人用药后继续发生惊厥。WHO1995年的世界卫生报告有0.3亿人患癫痫。在中国癫痫发病率也较高，约900万左右，尤其是青少年。研究发现GAT-1目前已成为筛选抗癫痫药物的主要靶点。
Knud Erik Andersen等人认为在GABA转运体蛋白上存在着一含富正电荷的区域，因而可以假设如果在GABA转运蛋白抑制剂的化学结构中存在着一负电性部分，则可以与GABA转运体蛋白上的正电荷部分相互作用，而该负电性部分须存在于连接活性化合物的环状氨基酸的氮原子与两个芳基官能团的烃基侧链上。如SKF89976-A、Tiagabine等结构中的1，1-二芳基乙烯基官能团以及化合物CI-966结构中的二芳基甲醚官能团，NNC-711结构中的二芳基甲基肟醚官能团等都可以被认为是电负性基团。
动植物体内含有许多有机硫化合物，例如胱氨酸、半胱氨酸存在于蛋白质中，硫辛醇是一种辅酶，二烯丙基二硫化物存在于芥子油中等。生物体内的许多硫化物有着多种多样的生理功能，是生命活动所不可缺少的。如辅酶A在生物合成和代谢中的必不可少；含巯基的蛋白质，通过氧化-还原反应可使其分子具有一定的形状并直接影响其功能等。许多天然或人工合成的硫化物已是目前重要的药物，如常用的抗生素青霉素、头孢菌素，磺胺药，维生素B1等含硫有机物在解除病痛、挽救生命中起着重要作用；1，2-二巯基丙醇作为砷中毒、铅中毒及汞中毒的解毒剂；6-巯基嘌呤可治癌等。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有良好GAT-1抑制活性的新型含哌啶结构的有机硫化合物。
本发明对已知技术理解基础上推测，如果使连接烃链上的电负性增加，则可以增加化合物在体外对GABA转运蛋白的抑制作用；如果连接烃链上的电负性区域趋于该链的中心位置，则该化合物与二芳基丁烯基衍生物和二芳基甲醚衍生物相比在体外对GABA转运体的抑制作用将增加。
本发明根据基于有机硫化物存在着多种多样的生理活性，用硫原子取代Tiagabine结构中的1，1-二芳基乙烯基侧链中的碳原子可以形成硫醚化合物；将硫醚转化成砜或亚砜，改变烃基侧链的电负性，增加分子与受体结合，有利于改变生物活性。
本发明提供的含哌啶结构的有机硫化合物具有下述式I结构
其中，Ar1＝Ar2芳杂环或取代芳杂环；Ar1≠Ar2芳杂环或取代芳杂环；n＝0，1，2；m＝2，3，4。
本发明的优选化合物是具有下述1，2，3结构的化合物， 本发明所要解决的另一技术问题，是公开上述新型含哌啶结构的有机硫化合物的制备方法。
本发明实施例1，详细描述了化合物1的制备方法，制备过程如下式 化合物1的制备工艺包括以二苯甲酮为起始原料经还原反应、硫烷基化反应得到二苯基甲基取代的硫代乙醇5，该硫代乙醇5经卤置换反应得到相应的溴代物6，6与3-哌啶甲酸乙酯发生N-烃基化反应得到1-(2-二苯甲基硫代)乙基)哌啶-3-甲酸乙酯7，再经碱水解、盐酸成盐而得化合物8，8再经过氧化氢氧化而得1。
本发明实施例2，详细描述了化合物2的制备方法，制备过程如下式 化合物2的制备工艺包括以4，4-二甲基二苯甲酮为起始原料经还原反应、硫烷基化反应得到4，4-二甲基二苯基甲基取代的硫代乙醇10，该硫代乙醇10经卤置换反应得到相应的溴代物11，11与3-哌啶甲酸乙酯发生N-烃基化反应得到12，再经碱水解、盐酸成盐而得化合物13，13再经过氧化氢氧化而得2。
本发明实施例3，详细描述了化合物3的制备方法，该化合物的制备过程如下式
化合物3的制备工艺包括以二(3-甲基-2-噻吩)甲醇17为起始原料经硫烷基化反应得到取代的硫代丙醇18，该硫代丙醇18经卤置换反应得到相应的溴代物19，19与3-哌啶甲酸乙酯发生N-烃基化反应得到化合物20，再经碱水解、盐酸成盐而得化合物3。
本发明所要解决的另一技术问题是公开上述新型含哌啶结构的有机硫化合物在制备新型GAT-1抑制剂药物中的应用。
本发明化合物通过GABA转运蛋白(GAT-1)体外竞争性抑制结合实验测试，结果显示了一定的GAT-1抑制活性。本发明化合物可进一步制备GAT-1抑制剂，包括治疗神经性或精神性疾病如癫痫，焦虑，慢性疼痛或失眠的药物。
具体实施例方式实施例1合成化合物11)合成二苯甲醇(4)在100ml的反应瓶中加入5g NaOH及5g二苯甲酮，然后加入95％的乙醇50ml，再加入锌粉5g，搅拌反应，升温到70℃，反应3小时，冷却，过滤，用少量热乙醇洗涤滤饼，将滤液加到125ml的冰水中，然后用浓盐酸酸化，此时有大量的白色固体生成，冷却，抽滤，用冷水洗涤，得白色固体，干燥得4，4.35g，m.p.69℃，收率87％。
2)合成2-(二苯甲基硫代)乙醇(5)在50ml的反应瓶中加入二苯甲醇1.53g(8.14mmol)，巯基乙醇1.40ml(20.70mmol)，在0℃下滴加三氟醋酸3.40ml，后逐渐升到室温反应过夜，加入水20ml，二氯甲烷20ml，分层，有机相用5％NaOH溶液10ml洗涤，水(3×10ml)洗涤，食盐水(2×10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。蒸干溶剂，残余物中加入丙酮20ml，碳酸钾0.93g及水1ml，再搅拌过夜，蒸干溶剂，加入乙酸乙酯20ml，少量水洗，无水硫酸钠干燥。蒸干溶剂，残余物用硅胶柱层析(洗脱液石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)得5，油状物，1.59g，收率80％。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ2.02～2.03(br.，1H，-OH)，2.61～2.65(m，2H)，3.63～3.69(m，2H)，5.20(s，1H，-CHS-)，7.22～7.45(m，10H，PhH).ESI-MS267(M+Na)+，167[M-S(CH2)2OH]+.FT-IR(film)ν3375，2922，1450，1076，750，702.
3)二苯甲基-(2-溴乙基)硫烷(6)在干燥的50ml的反应瓶中加入三苯基磷3.49g(13.31mmol)，四溴化碳1.67g(5.00mmol)，咪唑1.13g(16.64mmol)，再加入无水二氯甲烷25ml，在冰水浴下滴加2-(二苯甲基硫代)乙醇50.81g(3.33mmol)的10ml二氯甲烷溶液，滴加完后逐渐升到室温反应6小时，加入水10ml，分层，用二氯甲烷(3×10ml)提取，有机相用水(1×10ml)及饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥。蒸干溶剂，残余物用硅胶柱层析(洗脱液正己烷)得6，0.79g，油状物，收率78％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.28(t，2H，J＝7.2Hz)，1.80(t，2H，J＝7.2Hz)，3.65(s，1H)，5.68～5.86(m，10H，ArH).FT-IR(film)ν3027，2926，1600，1494，1450，1193，1077，1031，749，700.
4)1-(2-二苯甲基硫代)乙基)哌啶-3-甲酸乙酯(7)二苯甲基-(2-溴乙基)硫烷60.69g(2.24mmol)溶于10ml丙酮中，加入3-哌啶甲酸乙酯0.35g(2.24mmol)，碘化钾37mg，碳酸钾0.31g，室温搅拌48小时，停止反应，滤除不溶物，蒸干滤液，硅胶柱层析(洗脱液正己烷∶乙酸乙酯＝3∶1)得7，0.61g，油状物，收率71％。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.24(t，3H，J＝7.2Hz，-COOCH2CH3)，1.37～1.41(m，1H)，1.50～1.54(m，1H)，1.64～1.69(m，1H)，1.89～1.96(m，2H)，2.06～2.16(m，1H)，2.50～2.58(m，5H)，2.65～2.69(m，1H)，2.88～2.91(m，1H)，4.07～4.14(q，2H，J＝6.9Hz，-COOCH2-)，5.21(s，1H，-CHS＝O)，7.18～7.43(m，10H，ArH).ESI-MS384(M+H)+.HRMS(ESI)Calcd for C23H29NO2S+H384.1990460，Found 384.1991763.IR(film)ν3028，2942，2804，1730，1467，1450，1180，1032，750，703.
5)合成1-(2-二苯甲基硫代)乙基)哌啶-3-甲酸盐酸盐(8)化合物70.57g溶于15ml无水乙醇中，滴加12N的氢氧化钠水溶液0.40ml，室温搅拌4小时，停止反应，冰浴冷却，用4N盐酸将PH值调至1～2，用二氯甲烷萃取(3×20ml)，有机相饱和食盐水洗(2×10ml)，无水硫酸钠干燥，蒸去溶剂，加入乙酸乙酯10ml，有白色固体析出，过滤，滤饼用少量乙酸乙酯洗涤，干燥得纯8，0.48g，白色固体，m.p.98～100℃，收率82％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.54～1.67(m，2H)，1.93～1.99(m，1H)，2.05～2.21(m，2H)，2.40～2.78(m，1H)，2.79～2.96(m，1H)，3.09～3.31(m，5H)，3.39～3.78(m，1H)，5.61(s，1H，-CHS＝O)，7.25～7.31(m，2H)，7.33～7.36(m，4H)，7.64～7.66(m，4H).ESI-MS354(M-HCl)-，390(M-H)-.HRMS(ESI)Calcd forC21H26ClNO2S-H390.1289890，Found 390.1289039.FT-IR(KCl)ν2530～2931(br.，-OH)，1728，1676，1450，1225，751，707.
6)1-(2-二苯甲基亚硫酰基)乙基)哌啶-3-甲酸盐酸盐(1)在25ml的反应瓶中，加入850mg，甲醇10ml，滴加30％H2O20.03ml，室温(15℃～18℃)下搅拌反应过夜，反应完全，加入2～3滴饱和Na2S2O3溶液，搅拌1小时，用二氯甲烷萃取(3×20ml)，有机相饱和食盐水洗(2×10ml)，无水硫酸钠干燥，蒸去溶剂，得到白色固体，用甲醇∶乙醚＝1∶10重结晶，得到化合物1，42mg，m.p.78～80C，收率81％。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.13～1.49(m，2H)，1.51～1.64(m，3H)，1.96～2.50(m，2H)，2.51～2.63(m，2H)，2.64～2.72(m，2H)，2.77～2.95(m，2H)，5.42(s，0.5H，-CHS＝O)，5.46(m，0.5H，-CHS＝O)，7.20～7.28(m，1H)，7.32～7.39(m，6H)，7.68～7.81(m，3H).ESI-MS370(M-HCl-H)-.HRMS(ESI)Calcd for C21H26ClNO3S-H406.1236840，Found 406.1238185.FT-IR(KCl)ν2939～3400(br.，-OH)，1714，1600，1495，1451，1396，1046，704.
实施例2合成化合物21)制备4，4-二甲基苯甲醇(9)在50ml的反应瓶中加入4，4-二甲基苯甲酮3.03g，再加入二氯甲烷10ml，甲醇20ml，在0℃下分批加入NaBH42.31g，反应很快完全，加入少量水及烯盐酸，用乙酸乙酯(3×30ml)提取，有机相用水(3×10ml)洗涤，食盐水(2×10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。蒸去溶剂，有大量白色固体生成，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶10重结晶，干燥，得到4，4-二甲基苯甲醇9，3.02g，m.p.71℃～73℃，收率99％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ2.32(s，6H，-CH3Ph)，5.79(s，1H，-CHOH)，7.13(d，4H，J＝7.8Hz，PhH)，7.25(d，4H，J＝8.1Hz，PhH).
2)制备2-(二(4-甲基苯基)甲基硫代)乙醇(10)在50ml的反应瓶中加入91.67g(7.88mmol)，巯基乙醇1.36ml(20.10mmol)，在0℃下滴加三氟醋酸3.30ml，后逐渐升到室温反应过夜，加入水20ml，二氯甲烷20ml，分层，有机相用5％NaOH溶液10ml洗涤，水(3×10ml)洗涤，食盐水(2×10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。蒸干溶剂，残余物中加入丙酮20ml，碳酸钾0.93g及水1ml，再搅拌过夜，蒸干溶剂，加入乙酸乙酯20ml，少量水洗，无水硫酸钠干燥。蒸干溶剂，残余物用硅胶柱层析(洗脱液石油醚∶乙酸乙酯＝8∶1)得10，油状物，1.86g，收率87％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ2.29(s，6H，-CH3Ph)，2.58(t，2H，J＝6.0Hz)，3.62(t，2H，J＝6.0Hz)，5.13(s，1H，-CHS-)，7.10(d，4H，J＝7.5Hz，PhH)，7.30(d，4H，J＝7.5Hz，PhH).ESI-MS295(M+Na)+，195[M-S(CH2)2OH]+.FT-IR(film)ν3370，3022，2922，1510，1410，1181，1047，809，765.
3)制备二(4-甲基苯基)甲基-(2-溴乙基)硫烷(11)在干燥的50ml的反应瓶中加入三苯基磷4.66g(17.79mmol)，四溴化碳2.23g(6.68mmol)，咪唑1.51g(22.24mmol)，再加入无水二氯甲烷25ml，在冰水浴下滴加2-(二苯甲基硫代)乙醇101.21g(4.45mmol)的10ml二氯甲烷溶液，滴加完后逐渐升到室温反应6小时，加入水10ml，分层，用二氯甲烷(3×10ml)提取，有机相用水(1×10ml)及饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥。蒸干溶剂，残余物用硅胶柱层析(洗脱液正己烷)得11，1.12g，油状物，收率75％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ2.31(s，6H，-CH3Ph)，2.82(t，2H，J＝8.1Hz)，3.36(t，2H，J＝7.5Hz)，5.15(s，1H，-CHS＝O)，7.11(d，4H，J＝7.8Hz，PhH)，7.31(d，4H，J＝7.5Hz，PhH).FT-IR(film)ν3024，2917，1509，1433，1193，821，759.
4)制备1-(2-二(4-甲基苯基)甲基硫代)乙基)哌啶-3-甲酸乙酯(12)二(4-甲基苯基)甲基-(2-溴乙基)硫烷110.99g(2.96mmol)溶于10ml丙酮中，加入(R)-3-哌啶甲酸乙酯0.46g(2.96mmol)，碘化钾49mg，碳酸钾0.41g，室温搅拌48小时，停止反应，滤除不溶物，蒸干滤液，硅胶柱层析(洗脱液正己烷∶乙酸乙酯＝5∶1)得12，1.09g，油状物，收率90％。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.20(t，3H，J＝7.8Hz，-COOCH2CH3)，1.27～1.37(m，1H)，1.48～1.55(m，1H)，1.66～1.74(m，2H)，1.90～1.97(m，2H)，2.06～2.13(m，1H)，2.30(s，6H，-CH3Ph)，2.48～2.53(m，4H)，2.67～2.70(m，1H)，2.89～2.93(m，1H)，4.07～4.14(q，2H，J＝6.9Hz，-COOCH2-)，5.14(s，1H，-CHS＝O)，7.10(d，4H，J＝7.8Hz，PhH)，7.30(d，4H，J＝8.4Hz，PhH).ESI-MS412(M+H)+.HRMS(ESI)Calcd for C25H33NO2S+H412.2306470，Found412.2304765FT-IR(film)ν3022，2941，2804，1732，1511，1448，1180，1153，808，765.
5)制备1-(2-二(4-甲基苯基)甲基硫代)乙基)哌啶-3-甲酸盐酸盐(13)化合物120.87g溶于15ml无水乙醇中，滴加12N的氢氧化钠水溶液0.44ml，室温搅拌4小时，停止反应，冰浴冷却，用4N盐酸将PH值调至1～2，用二氯甲烷萃取(3×20ml)，有机相饱和食盐水洗(2×10ml)，无水硫酸钠干燥，蒸去溶剂，加入乙酸乙酯10ml，有白色固体析出，过滤，滤饼用少量乙酸乙酯洗涤，干燥得纯13，0.48g，白色固体，m.p.94～96℃，收率82％。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.23～1.25(m，1H)，1.28～1.39(m，1H)，1.80～1.84(m，1H)，2.05～2.20(m，2H)，2.25(s，6H，-CH3Ph)，2.36～2.44(m，1H)，2.61～2.79(m，1H)，2.85～2.98(m，3H)，3.01～3.19(m，2H)，3.57～3.60(m，1H)，5.18(s，1H，-CHS＝O)，7.11(d，4H，J＝8.1Hz，PhH)，7.30(d，4H，J＝8.1Hz，PhH).ESI-MS382(M-HCl)-，418(M-H)-.HRMS(ESI)Calcd for C23H30ClNO2S-H418.1614230，Found 418.1613012.FT-IR(KCl)ν2537～2924(br.，-OH)，1728，1510，1453，1203，809，765.
6)制备1-(2-二(4-甲基苯基)甲基亚硫酰基)乙基)哌啶-3-甲酸盐酸盐(2)在25ml的反应瓶中，加入13100mg，甲醇10ml，滴加30％H2O20.06ml，室温(15℃～18℃)下搅拌反应过夜，反应完全，加入2～3滴饱和Na2S2O3溶液，搅拌1小时，用二氯甲烷萃取(3×20ml)，有机相饱和食盐水洗(2×10ml)，无水硫酸钠干燥，蒸去溶剂，得到白色固体，用甲醇∶乙醚＝1∶15重结晶，得到化合物2，90mg，收率82％，1HNMR(300MHz，C5D5N)1.18～1.38(m，3H)，1.52～1.73(m，2H)，1.96～2.08(m，2H)，2.19(s，6H，-CH3)，2.53～2.91(m，4H)，3.00～3.27(m，2H)，5.35(s，0.5H，-CHS＝O)，5.39(s，0.5H，-CHS＝O)，7.10～7.41(m，6H)，7.57～7.75(m，2H).ESI-MS434(M-H)-，398(M-HCl)-.HRMS(ESI)Calcd forC23H30ClNO3S-H434.1563770，Found 434.1562158.FT-IR(KCl)ν3000～3500(br.，-OH)，2963，2924，1623，1512，1430，1262，1098，1018，805.
实施例3合成化合物31)合成3-二(3-甲氧-2-噻吩基)甲基硫代)-1-丙醇(18)在50ml的反应瓶中加入二(3-甲基-2-噻吩)甲醇17(3.26mmol)，3-巯基-1-丙醇0.30ml(3.26mmol)，在0℃下滴加三氟醋酸1.00ml(12.30mmol)，后逐渐升到室温反应5小时，加入水10ml，二氯甲烷20ml，分层，有机相用5％NaOH溶液10ml洗涤，水(3×10ml)洗涤，食盐水(2×10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。蒸干溶剂，残余物中加入丙酮10ml，碳酸钾0.55g及水0.5ml，搅拌过夜，蒸干溶剂，加入乙酸乙酯20ml，少量水洗，无水硫酸钠干燥。蒸干溶剂，残余物用硅胶柱层析(洗脱液石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)得18，油状物，0.79g，收率94％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.82～1.86(m，2H)，2.22(s，6H，-CH3)，2.64(t，2H，J＝6.9Hz)，3.73(t，2H，J＝6.3Hz)，5.65(s，1H，-CHS-)，6.76(d，2H，J＝5.1Hz)，7.14(d，2H，J＝5.1Hz).ESI-MS321(M+Na)+，299(M+H)+.FT-IR(film)ν3100-3500(br.)，2922，2854，1434，1044，835，709.
2)合成二(3-甲氧-2-噻吩基)甲基-(3-溴丙基)硫烷(19)在干燥的50ml的反应瓶中加入三苯基磷3.70g(14.20mmol)，四溴化碳1.76g(5.31mmol)，咪唑1.30g(17.70mmol)，再加入无水二氯甲烷30ml，在冰水浴下滴加化合物18(3.54mmol)的10ml二氯甲烷溶液，滴加完后逐渐升到室温反应10小时，加入水20ml，分层，用二氯甲烷(3×20ml)提取，有机相用水(1×10ml)及饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥。蒸干溶剂，残余物用硅胶柱层析(洗脱液正己烷)得19，0.81g，油状物，收率72％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ2.07～2.12(m，2H)，2.23(s，6H，-CH3)，2.68(t，2H，J＝6.9Hz)，3.51(t，2H，J＝6.3Hz)，5.64(s，1H，-CHS＝O)，6.77(d，2H，J＝5.1Hz)，7.15(d，2H，J＝5.1Hz).ESI-MS207[M+-S(CH2)3Br].FT-IR(film)ν2959，2920，2854，1416，1240，1080，714.
3)合成化合物20化合物19(1.29mmol)溶于10ml丙酮中，加入3-哌啶甲酸乙酯0.31g(1.93mmol)，碘化钾32mg，碳酸钾0.27g，室温搅拌48小时，停止反应，滤除不溶物，蒸干滤液，硅胶柱层析(洗脱液正己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)得20，0.39g，油状物，收率76％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.26(t，3H，J＝6.9Hz，-COOCH2CH3)，1.43～1.55(m，2H)，1.66～1.82(m，3H)，1.89～1.98(m，2H)，2.08～2.11(m，1H)，2.18(s，6H，-CH3)，2.38～2.43(m，2H)，2.48～2.58(m，3H)，2.68～2.72(m，1H)，2.90～2.94(m，1H)，4.08～4.15(q，2H，J＝6.9Hz，-COOCH2-)，5.61(s，1H，-CHS＝O)，6.75～6.78(m，2H，ArH)，7.12(d，2H，J＝5.4Hz，ArH).ESI-MS438(M+H)+.HRMS(ESI)Calcd for C22H31NO2S3+H438.1589110，Found 438.1589678.FT-IR(film)ν2943，2807，1729，1446，1180，1153，1032，736，711.
4)合成化合物3化合物200.29g溶于5ml无水乙醇中，滴加12N的氢氧化钠水溶液0.20ml，室温搅拌6小时，停止反应，冰浴冷却，用4N盐酸将PH值调至1～2，用二氯甲烷萃取，有机相饱和食盐水洗(2×5ml)，无水硫酸钠干燥，蒸去溶剂，加入乙酸乙酯10ml，有白色固体析出，过滤，滤饼用少量乙酸乙酯洗涤，干燥后得化合物3，0.24g，淡黄色固体，m.p.116～118℃，收率68％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.41～1.57(m，1H)，1.74～1.85(m，1H)，1.85～1.94(m，3H)，2.17(s，6H，-CH3)，2.30～2.33(m，1H)，2.45～2.59(m，2H)，2.62～2.83(m，4H)，3.31～3.41(m，2H)，3.62～3.68(m，1H)，5.62(s，1H，-CHS＝O)，6.68～6.74(m，2H，ArH)，7.06(d，2H，J＝5.1Hz，ArH).ESI-MS410(M-HCl+H)+.HRMS(ESI)Calcd for C20H28ClNO2S3-HCl+H410.1272620，Found410.1276676.
实施例4.GABA转运蛋白(GAT-1)体外竞争性抑制结合实验1)使用的仪器与试剂仪器液闪记数仪(Beckman LS 5000TA)，恒温水浴锅，电子天平，移液枪，秒表。
试剂PPO2，5-二苯基噁唑(2，5-diphenyloxazole)；POPOP1，4-双-[5-苯基-2-噁唑基]苯(1，4-Bis-[5-phenyl-2-oxazoyl]-benzene)；含有10％小牛血清的RMPI 1640培养基；[3H]GABA(AmershamPharmacia Biotech)。
试剂配制PBS(磷酸缓冲盐溶液)在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl，0.2g KCl，1.44g Na2HPO4，和0.24g KH2PO4，用HCl调节溶液的pH至7.4，加水定容至1L，在15lbf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸气灭菌20分钟，保存于室温；HBS(10mM Hepes，100mM NaCl，pH8.0)；闪烁液(PPO 3.6g，POPOP 0.36g，二甲苯600ml，Triton X-100300ml)。
2)测定步骤(1)按已知方法制备GABA转运蛋白基因筛选细胞工程细胞株GABA转运蛋白基因是最早克隆的神经递质转运蛋白基因。目前，已克隆了四种GABA转运蛋白基因，它们属于Na+/Cl-转运蛋白家族。
将GAT-1基因克隆用细胞转染的方法转染到合适的表达载体(pCDNA3)上，将载体转入到真核CHO细胞中，通过大批细胞培养，使GAT-1基因克隆高表达量地表达于CHO(中国仓鼠卵母细胞)细胞中。通过测同位素摄取流量及West blot(抗体反应实验)以确定其表达量以及确定是否为目标蛋白(GAT-1)，从而获得单克隆细胞。将确定的GAT-1单克隆细胞经过传代细胞培养，即可以得到大批的用于实验所需的含有GAT-1转运蛋白基因的筛选细胞工程细胞株。
(2)测定GABA转运蛋白的活性在含有10％小牛血清的RMPI 1640培养基中培养D8细胞于48孔板(Costar)至平板铺满(大约每孔6万细胞)。弃培液，用PBS洗涤一次，吸去PBS溶液，每孔加入90μl HBS，25℃温育10分钟，每孔加入10μl HBS反应液(含50nM[3H]GABA)。25℃温育20分钟，用冰浴的PBS溶液洗涤三遍，用100μl 2N NaOH溶液裂解30分钟，吸取各孔的裂解液加入到1.6ml的闪烁液中，放入液闪记数仪中检测同位素的含量，测定GABA转运蛋白的活性＞10万DPM。
(3)药物筛选实验(SOP)i.将接种培养好的48孔细胞板甩去培养孔多余的培养液，吸干。
ii.每个培养孔用1×PBS洗一次，翻转，弃掉PBS，扣干。
iii.依次加HBS，阴性、阳性control每孔90μl，药物组每孔HBS+药物共90μl，室温放置10分钟。
iv.每孔加入预先配制好的10μl[3H]标记的同位素，室温放置20分钟(将1×PBS置于-20℃冰箱)。
v.冰PBS洗三次，吸干。
vi.每孔加入2N NaOH裂解液100μl，室温放置20分钟。
vii.将裂解液吸出并各自转至2ml圆底eppendorf管中，每孔加1.6ml闪烁液，颠倒混匀，装入5ml管中，置于液体闪烁仪上测定3HDPM。
(4)制备标准曲线实验分三组总结合组、非特异结合组、标准样品组。每组双复管或三复管。所测得的量分别为总结合量、非特异结合量、测得量。总结合量已转染GABA转运蛋白基因的CHO细胞对[3H]-GABA的结合数(未加药的结合数)；非特异结合量未转染GABA转运蛋白基因的CHO细胞对[3H]-GABA的结合数；测得量加药后的已转染GABA转运蛋白基因的CHO细胞对[3H]-GABA的结合数。总结合量减去非特异结合量得到特异结合量。
由下式求得标准样品对放射标记配体与GABA转运蛋白特异结合的抑制率抑制率(％)＝log[(测得量-非特异结合量)/(总结合量-非特异结合量)]*100％X＝-logM M浓度；Y＝log特异性结合率；-log(IC50)＝X(当Y＝log50)。
以浓度一效应对数作图法，以特异性结合抑制百分率的log值为纵坐标，以标准样品浓度的负对数为横坐标作图，得到浓度与抑制率关系的线性回归方程，计算得特异性结合抑制一半所需浓度IC50。
表1是本发明化合物的药理活性结果。
结果显示本发明化合物的活性明显高于阳性对照(R)-3-哌啶甲酸，表明具有GAT-1抑制活性。
表1
权利要求
1.式I的含哌啶结构的有机硫化合物， 其中，Ar1＝Ar2芳杂环或取代芳杂环；Ar1≠Ar2芳杂环或取代芳杂环；n＝0，1，2；m＝2，3，4。
2.根据权利要求1所述的含哌啶结构的有机硫化合物，其特征是具有结构II的化合物，
3.权利要求1或2的含哌啶结构的有机硫化合物在制备GAT-1抑制剂中的用途。
4.权利要求1或2的含哌啶结构的有机硫化合物在制备治疗神经性或精神性疾病药物中的用途。
5.权利要求1或2的含哌啶结构的有机硫化合物在制备治疗癫痫，焦虑，慢性疼痛或失眠药物中的用途。
全文摘要
本发明属药物合成领域，涉及式I结构的新型含哌啶结构的有机硫化合物，制备方法和抗肿瘤活性的应用。本发明根据基于有机硫化物存在着多种多样的生理活性，用硫原子来取代Tiagabine结构中的1，1－二芳基乙烯基侧链中的碳原子形成硫醚化合物，进一步将硫醚转化成砜或亚砜得到本发明化合物。本发明化合物通过GABA转运蛋白(GAT－1)体外竞争性抑制结合实验测试，结果显示了一定的GAT－1抑制活性。本发明化合物可进一步制备GAT－1抑制剂，包括治疗神经性或精神性疾病如癫痫，焦虑，慢性疼痛或失眠的药物。
文档编号C07D409/14GK1709890SQ200510026470
公开日2005年12月21日 申请日期2005年6月3日 优先权日2005年6月3日
发明者闻韧, 张建革, 林国强, 董肖椿, 徐林峰, 郑剑斌, 郭礼和 申请人:复旦大学