作为细胞增殖抑制剂的2-碳环氨基-4-咪唑基嘧啶的制作方法

专利名称：作为细胞增殖抑制剂的2-碳环氨基-4-咪唑基嘧啶的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有CDK抑制活性的式(I)的化合物的任何和全部互变异构形式。
同样要理解的是，式(I)的某些化合物可以以溶剂化形式及非溶剂化物形式存在，如水合形式。要理解的是，本发明包括具有CDK抑制活性的所有这类溶剂化形式。
可变基团的具体值如下。此类值可以在适当时与上文或下文中所限定的任何定义、权利要求和实施方案一起使用。
环A是5-7元饱和碳环。
环A是5或6元饱和碳环。
环A是环己基。
环A是环戊基 环A是环戊基或环己基。
R1选自氨基、氨磺酰基氨基或基团-R6-R7；其中 R6选自-N(R15)-、-N(R16)C(O)-、-N(R18)C(O)O-或-N(R25)SO2-；其中R15、R16、R18和R25独立地为氢或C1-6烷基； R7选自C1-6烷基或杂环基；其中R7可以任选在碳上被一个或多个R27取代；且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，该氮可以任选被选自R28的基团取代； R27选自C1-6烷基或杂环基-R30-；其中如果所述杂环基含有-NH-部分，该氮可以任选被选自R32的基团取代； R28和R32是C1-6烷氧基羰基；且 R30是直接键。
R1选自羧基、氨基、氨磺酰基氨基或基团-R6-R7；其中 R6选自-N(R15)-、-C(O)-、-C(O)O-、-N(R16)C(O)-、-C(O)N(R17)-、-N(R18)C(O)O-、-N(R22)SO2N(R23)-或-N(R25)SO2-；其中R15、R16、R17、R18、R22、R23和R25独立地为氢或C1-6烷基； R7选自C1-6烷基或杂环基；其中R7可任选在碳上被一个或多个R27取代；且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，该氮可以任选被选自R28的基团取代； R27选自C1-6烷基、N，N-(C1-6烷基)2氨基或杂环基-R30-；且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，该氮可以任选被选自R32的基团取代； R28和R32独立地选自C1-6烷基和C1-6烷氧基羰基；和 R30是直接键。
R1选自氨基、氨磺酰基氨基或基团-R6-R7；其中 R6选自-N(R15)-、-N(R16)C(O)-、-N(R18)C(O)O-或-N(R25)SO2-；其中R15、R16、R18和R25独立地为氢或甲基； R7选自甲基、乙基、丙基、叔丁基或哌啶基；其中R7可任选在碳上被一个或多个R27取代；且其中所述哌啶基可任选在氮上被选自R28的基团取代； R27选自甲基、哌啶基-R30-、哌嗪基-R30-或吗啉代-R30-；其中所述哌啶基或哌嗪基可以任选在氮上被选自R32的基团取代； R28和R32是叔丁氧基羰基；且 R30是直接键。
R1选自羧基、氨基、氨磺酰基氨基或基团-R6-R7；其中 R6选自-N(R15)-、-C(O)-、-C(O)O-、-N(R16)C(O)-、-C(O)N(R17)-、-N(R18)C(O)O-、-N(R22)SO2N(R23)-或-N(R25)SO2-；其中R15、R16、R17、R18、R22、R23和R25独立地为氢或甲基； R7选自甲基、乙基、丙基、叔丁基、高哌嗪基或哌啶基；其中R7可以任选在碳上被一个或多个R27取代；且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，该氮可以任选被选自R28的基团取代； R27选自甲基、N，N-二甲基氨基、吡咯烷基-R30-、哌嗪基-R30-、哌啶基-R30-或吗啉代-R30-；且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，该氮可以任选被选自R32的基团取代； R28和R32独立地选自甲基和叔丁氧基羰基；且 R30是直接键。
R1选自氨基、氨磺酰基氨基、叔丁氧基羰基氨基、甲磺酰基氨基、二甲基氨基、(4-吗啉代丁酰基)氨基、2-(哌啶-4-基)乙酰基氨基、2-(N-叔丁氧基羰基哌啶-4-基)乙酰基氨基、3-(哌嗪-4-基)丙酰基氨基、3-(1-叔丁氧基羰基哌嗪-4-基)丙酰基氨基、3-(哌啶-4-基)丙酰基氨基、3-(N-叔丁氧基羰基哌啶-4-基)丙酰基氨基、4-甲基-哌啶-4-基羰基氨基N-叔丁氧基羰基-4-甲基-哌啶-4-基羰基氨基、2-(哌啶-3-基)乙酰基氨基和2-(N-叔丁氧基羰基哌啶-3-基)乙酰基氨基。
R1选自氨基、羧基、甲氧基羰基、氨磺酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-(2-二甲基氨基乙基)氨基甲酰基、N-(2-吡咯烷-1-基乙基)氨基甲酰基、N，N-二甲基氨磺酰基氨基、叔丁氧基羰基氨基、甲磺酰基氨基、二甲基氨基、(4-吗啉代丁酰基)氨基、2-(哌啶-4-基)乙酰基氨基、2-(N-叔丁氧基羰基哌啶-4-基)乙酰基氨基、3-(哌嗪-4-基)丙酰基氨基、3-(1-叔丁氧基羰基哌嗪-4-基)丙酰基氨基、3-(哌啶-4-基)丙酰基氨基、3-(N-叔丁氧基羰基哌啶-4-基)丙酰基氨基、4-甲基-哌啶-4-基羰基氨基、N-叔丁氧基羰基-4-甲基-哌啶-4-基羰基氨基、2-(吡咯烷-1-基)乙基磺酰基氨基、2-(二甲基氨基)乙基磺酰基氨基、3-(吡咯烷-1-基)丙基磺酰基氨基、3-(吡咯烷-1-基)丙酰基氨基、1-甲基高哌嗪-4-基羰基、2-(哌啶-3-基)乙酰基氨基、3-(二甲基氨基)丙酰基氨基和1-甲基哌啶-4-基羰基氨基、2-(N-叔丁氧基羰基哌啶-3-基)乙酰基氨基。
q是0。
R1、(R2)q和环A一起形成3-(2-二甲基氨基乙基氨基甲酰基)环戊基、3-(2-吡咯烷-1-基乙基氨基甲酰基)环戊基、3-(4-甲基1，4-二氮杂环庚烷-1-羰基)环戊基、3-(甲基氨基甲酰基)环戊基、3-羧基环戊基、3-(2-二甲基氨基乙基磺酰基氨基)环戊基、3-(2-吡咯烷-1-基乙基磺酰基氨基)环戊基、3-(3-二甲基氨基丙酰基氨基)环戊基、3-[(1-甲基哌啶-4-羰基)氨基]环戊基、3-氨基环戊基、3-甲磺酰氨基环戊基、3-(2-二甲基氨基乙基氨基甲酰基)环己基、3-(2-吡咯烷-1-基乙基氨基甲酰基)环己基、3-(2-吡咯烷-1-基乙基磺酰基氨基)环己基、3-(3-二甲基氨基丙酰基氨基)环己基、3-(3-吡咯烷-1-基丙酰基氨基)环己基、3-(3-吡咯烷-1-基丙基磺酰基氨基)环己基、3-(4-甲基1，4-二氮杂环庚烷-1-羰基)环己基、3-(甲基氨基甲酰基)环己基、3-[(1-甲基哌啶-4-羰基)氨基]环己基、3-氨基环己基、3-羧基环己基、3-甲磺酰氨基环己基、3-甲氧基羰基环己基、4-(2-二甲基氨基乙基氨基甲酰基)环己基、4-(2-吡咯烷-1-基乙基氨基甲酰基)环己基、4-(2-吡咯烷-1-基乙基磺酰基氨基)环己基、4-(3-二甲基氨基丙酰基氨基)环己基、4-(3-哌嗪-1-基丙酰基氨基)环己基、4-(3-吡咯烷-1-基丙酰基氨基)环己基、4-(3-吡咯烷-1-基丙基磺酰基氨基)环己基、4-(4-甲基1，4-二氮杂环庚烷-1-羰基)环己基、4-(4-吗啉代丁酰基氨基)环己基、4-(二甲基氨磺酰基氨基)环己基、4-(甲基氨基甲酰基)环己基、4-(氨磺酰基氨基)环己基、4-(叔丁氧基羰基氨基)环己基、4-[(1-甲基哌啶-4-羰基)氨基]环己基、4-[(4-甲基-1-叔丁氧基羰基-哌啶-4-羰基)氨基]环己基、4-[(4-甲基哌啶-4-羰基)氨基]环己基、4-[[2-(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)乙酰基]氨基]环己基、4-[[2-(4-哌啶基)乙酰基]氨基]环己基、4-[[2-[1-叔丁氧基羰基-3-哌啶基]乙酰基]氨基]环己基、4-[[2-[3-哌啶基]乙酰基]氨基]环己基、4-[[2-[1-叔丁氧基羰基-3-哌啶基]乙酰基]氨基]环己基、4-[[2-[3-哌啶基]乙酰基]氨基]环己基、4-[3-(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)丙酰基氨基]环己基、4-[3-(4-哌啶基)丙酰基氨基]环己基、4-[3-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)丙酰基氨基]环己基、4-氨基环己基、4-羧基环己基、4-二甲基氨基环己基和4-甲磺酰氨基环己基。
R3是卤素。
R3是氟。
R3是氯。
R3是溴。
R3是氰基。
R3是氨基。
n是0。
n是1。
n是0或1。
R4是异丙基。
R5是甲基。
因此在本发明的进一步方面中，提供了式(I)的化合物(如上所述)或其可药用盐或体内可水解酯，其中 环A是5-7元饱和碳环； R1选自氨基、氨磺酰基氨基或基团-R6-R7； q是0； n是0； R4是异丙基； R5是甲基； R6选自-N(R15)-、-N(R16)C(O)-、-N(R18)C(O)O-或-N(R25)SO2-；其中R15、R16、R18和R25独立地为氢或C1-6烷基； R7选自C1-6烷基或杂环基；其中R7可以任选在碳上被一个或多个R27取代；且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，该氮可以任选被选自R28的基团取代； R27选自C1-6烷基或杂环基-R30-；其中如果所述杂环基含有-NH-部分，该氮可以任选被选自R32的基团取代； R28和R32是C1-6烷氧基羰基；且 R30是直接键。
因此在本发明的进一步方面中，提供了式(I)的化合物(如上所述)或其可药用盐或体内可水解酯，其中 环A是5或6元饱和碳环； R1选自羧基、氨基、氨磺酰基氨基或基团-R6-R7； q是0； R3是卤素； n是0或1； R4是异丙基； R5是甲基； R6选自-N(R15)-、-C(O)-、-C(O)O-、-N(R16)C(O)-、-C(O)N(R17)-、-N(R18)C(O)O-、-N(R22)SO2N(R23)-或-N(R25)SO2-；其中R15、R16、R17、R18、R22、R23和R25独立地为氢或C1-6烷基； R7选自C1-6烷基或杂环基；其中R7可以任选在碳上被一个或多个R27取代；且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，该氮可以任选被选自R28的基团取代； R27选自C1-6烷基、N，N-(C1-6烷基)2氨基或杂环基-R30-；且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，该氮可以任选被选自R32的基团取代； R28和R32独立地选自C1-6烷基和C1-6烷氧基羰基；且 R30是直接键。
因此在本发明的进一步方面中，提供了式(I)的化合物(如上所述)或其可药用盐或体内可水解酯，其中 环A是环戊基或环己基； R1选自氨基、羧基、甲氧基羰基、氨磺酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-(2-二甲基氨基乙基)氨基甲酰基、N-(2-吡咯烷-1-基乙基)氨基甲酰基、N，N-二甲基氨磺酰基氨基、叔丁氧基羰基氨基、甲磺酰基氨基、二甲基氨基、(4-吗啉代丁酰基)氨基、2-(哌啶-4-基)乙酰基氨基、2-(N-叔丁氧基羰基哌啶-4-基)乙酰基氨基、3-(哌嗪-4-基)丙酰基氨基、3-(1-叔丁氧基羰基哌嗪-4-基)丙酰基氨基、3-(哌啶-4-基)丙酰基氨基、3-(N-叔丁氧基羰基哌啶-4-基)丙酰基氨基、4-甲基-哌啶-4-基羰基氨基、N-叔丁氧基羰基-4-甲基-哌啶-4-基羰基氨基、2-(吡咯烷-1-基)乙基磺酰基氨基、2-(二甲基氨基)乙基磺酰基氨基、3-(吡咯烷-1-基)丙基磺酰基氨基、3-(吡咯烷-1-基)丙酰基氨基、1-甲基高哌嗪-4-基羰基、2-(哌啶-3-基)乙酰基氨基、3-(二甲基氨基)丙酰基氨基和1-甲基哌啶-4-基羰基氨基、2-(N-叔丁氧基羰基哌啶-3-基)乙酰基氨基； q是0； R3是卤素； n是0或1； R4是异丙基； R5是甲基。
在本发明的另一方面中，本发明的优选化合物是实施例的任一种或其可药用盐或体内可水解酯。
在本发明的另一方面中，本发明的特定化合物是实施例2、3、6、45、46、47、54、56、57和58的任一种或其可药用盐或体内可水解酯。
本发明的优选方面是与式(I)的化合物或其可药用盐相关的那些。
本发明的另一方面提供了制备式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯的方法，该方法(其中可变基团除非另行指明如式(I)中所定义)包含 方法a)式(II)的嘧啶
其中L是可置换基团；与式(III)的胺的反应
或 方法b)使式(IV)的化合物
与式(V)的化合物反应
其中T是O或S；Rx可以相同或不同并选自C1-6烷基；或 方法c)使式(VI)的嘧啶
与式(VII)的化合物反应
其中Y是可置换基团； 且此后如果必要 i)将式(I)的化合物转化成式(I)的另一化合物； ii)除去任何保护基； iii)形成可药用盐或体内可水解酯。
L是可置换基团，L的合适的值是例如卤素或磺酰氧基，例如氯、溴、甲烷磺酰氧基或甲苯-4-磺酰氧基。
Y是可置换基团，L的合适的值是例如卤素或磺酰氧基，例如溴、碘或三氟甲烷磺酰氧基。优选地，Y是碘基。
上述反应的具体反应条件如下。
方法a)式(II)的嘧啶和式(III)的胺可以在25-200℃，特别是60-160℃的温度下在合适的溶剂，如四氢呋喃、N-甲基吡咯烷酮或异丙基醇中一起反应，或可以无掺杂地一起反应。该反应可以在合适的碱，如N，N-二异丙基乙基胺、氢化钠或碳酸钾存在下进行。
式(II)的嘧啶，其中L是氯，可以根据方案1制备
方案1 式(III)的胺是市售化合物，或它们是文献中已知的，或它们通过本领域已知的标准方法制备。
方法b)式(IV)的化合物和式(V)的化合物在合适的溶剂如N-甲基吡咯烷酮或丁醇中在100-200℃，优选150-170℃的温度下一起反应。该反应优选在合适的碱，如氢化钠、甲醇钠或碳酸钾存在下进行。
式(V)的化合物可以根据方案2制备
方案2 式(IV)和(Va)的化合物是市售化合物，或它们是文献中已知的，或它们通过本领域中已知的标准方法制备。
方法c)式(VI)的化合物和式(VII)的胺可以在方法a中所述的条件下一起反应。
式(VI)的化合物的合成描述在方案1中。
式(VII)的化合物是市售化合物，或它们是文献中已知的，或它们通过本领域中已知的标准方法制成。
要认识到，本发明的化合物中各种环取代基的一些可以在上述方法之前或在上述方法后立即通过标准芳族取代反应引入或通过传统的官能团改性产生，并且就这样包含在本发明的方法方面中。这类反应和改性包括，例如，通过芳族取代反应、取代基的还原、取代基的烷基化和取代基的氧化来引入取代基。这类程序的试剂和反应条件是化学工艺中公知的。芳族取代反应的具体实例包括使用浓硝酸引入硝基；使用例如酰基卤和路易斯酸(如三氯化铝)在Friedel Crafts条件下引入酰基；使用烷基卤和路易斯酸(如三氯化铝)在Friedel Crafts条件下引入烷基；和引入卤代基团。改性的具体实例包括通过例如在加热下在盐酸存在下用镍催化剂催化氢化或用铁处理来将硝基还原成氨基；将烷基硫基氧化成烷基亚磺酰基或烷基磺酰基。
也要认识到，在本文提到的一些反应中，可能必须/最好保护化合物中的任何敏感基团。必须或最好保护的情况和合适的保护方法是本领域技术人员已知的。可以根据标准实践使用传统保护基(例如参见T.W.Green，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley and Sons，1991)。因此，如果反应物包括如氨基、羧基或羟基的基团，可能最好保护本文提到的一些反应中的基团。
对氨基或烷基氨基合适的保护基是，例如，酰基，例如烷酰基，如乙酰基，烷氧基羰基，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基或叔丁氧基羰基，芳基甲氧基羰基，例如苄氧基羰基，或芳酰基，例如苯甲酰基。上述保护基的脱保护条件必须随保护基的选择而变。由此，可以例如通过用合适的碱如碱金属氢氧化物，如氢氧化锂或氢氧化钠水解来除去例如酰基，如烷酰基或烷氧基羰基或芳酰基。或者，可以例如通过用合适的酸，如盐酸、硫酸或磷酸或三氟乙酸处理来除去酰基，如叔丁氧基羰基，并可以例如通过在催化剂如碳载钯上氢化或通过用路易斯酸例如三(三氟乙酸)硼处理来除去芳基甲氧基羰基，如苄氧基羰基。对伯氨基合适的另一保护基是例如，可以通过用烷基胺，例如二甲基氨基丙基胺，或用肼处理来除去的邻苯二甲酰基。
对羟基合适的保护基是例如，酰基，例如烷酰基，如乙酰基，芳酰基，例如苯甲酰基，或芳基甲基，例如苄基。上述保护基的脱保护条件必须随保护基的选择而变。因此，例如，可以例如通过用合适的碱如碱金属氢氧化物，如氢氧化锂或氢氧化钠水解来除去例如酰基，如烷酰基或芳酰基。或者，可以例如通过在催化剂如碳载钯上氢化来除去芳基甲基，如苄基。
对羧基合适的保护基是例如，可以例如通过与碱如氢氧化钠水解来除去的酯化基团，如甲基或乙基，或可以例如通过用酸，例如有机酸如三氟乙酸处理来除去的叔丁基，或可以例如通过在催化剂如碳载钯上氢化来除去的苄基。
保护基可以在合成中的任何方便的阶段使用化学工艺中公知的传统技术除去。
如上所述，本发明中定义的化合物具有被认为由化合物的CDK抑制活性产生的抗细胞增殖活性，如抗癌活性。这些性质可以例如使用下列程序评估 检验法 使用下列缩写- HEPES是N-[2-羟基乙基]哌嗪-N′-[2-乙烷磺酸] DTT是二硫苏糖醇 PMSF是苯基甲基磺酰基氟 该化合物在体外激酶检验法中在96孔格式中使用亲近闪烁检验法(SPA-获自Amersham)测试以测量[γ-33-P]-三磷酸腺苷并入试验底物(GST-视网膜母细胞瘤蛋白质；GST-Rb)的情况。在各孔中装入要测试的化合物(在DMSO和水中稀释以校正浓度)并在对比孔中装入作为抑制剂对照物的roscovitine或作为正对照物的DMSO。
在各孔中加入在25微升培养缓冲剂中稀释的大约0.2微升CDK2/细胞周期蛋白E部分纯化酶(其量取决于酶活性)，然后加入20微升GST-Rb/ATP/ATP33混合物(含有在培养缓冲剂中的0.5微克GST-Rb和0.2μM ATP和0.14μCi[γ-33-P]-三磷酸腺苷)，并将所得混合物温和摇振，然后在室温下培养60分钟。
然后在各孔中加入150微升含有(0.8毫克/孔的蛋白质A-PVT SPA珠(Amersham))、20pM/孔的抗谷胱甘肽转移酶，Rabbit IgG(获自Molecular Probes)、61mM EDTA和50mM含0.05％叠氮化钠的HEPESpH7.5的停止液。
将板用Topseal-S板密封剂密封，放置2小时，然后在2500rpm，1124xg.下旋转5分钟。在Topcount上读取该板，每孔读取30秒。
用于稀释酶和底物混合物的培养缓冲剂含有50mM HEPES pH7.5、10mM MnCl2、1mM DTT、100μM钒酸钠、100μM NaF、10mM甘油磷酸钠，BSA(1mg/ml最终量)。
试验底物 在该检验法中，仅使用一部分视网膜母细胞瘤蛋白质(Science 1987Mar13；235(4794)1394-1399；Lee W.H.，Bookstein R.，Hong F.，Young L.J.，Shew J.Y.，Lee E.Y.)，融合到GST标签上。进行视网膜母细胞瘤基因编码氨基酸379-928(获自视网膜母细胞瘤质粒ATCC pLRbRNL)的PCR，并将该序列克隆到pGEx2T融合载体上(Smith D.B.和Johnson，K.S.Gene 67，31(1988)；其含有用于可诱导表达的tac促进剂、用在任何大肠埃希氏菌宿主中的内部1ac Iq基因、和用于凝血酶裂解的编码区(获自Pharmacia Biotech，其用于扩增氨基酸792-928)。将这一序列再克隆到pGEx2T上。
使用标准可诱导表达技术在大肠埃希氏菌(BL21(DE3)pLysS细胞)中表达由此获得的视网膜母细胞瘤792-928序列，并如下提纯。
大肠埃希氏菌糊再悬浮在10毫升/克NETN缓冲剂(50mM Tris pH7.5，120mM NaCl，1mM EDTA，0.5％v/v NP-40，1mM PMSF，1微克/毫升亮抑酶肽，1微克/毫升抑肽酶和1微克/毫升抑胃肽)中并且每100毫升匀浆超声处理2 x 45秒。在离心后，将上清液加载到10毫升谷胱甘肽琼脂糖柱(Pharmacia Biotech，Herts，UK)上并用NETN缓冲剂洗涤。在用激酶缓冲剂(50mM HEPES pH 7.5，10mM MgCl2，1mM DTT，1mMPMSF，1微克/毫升亮抑酶肽，1微克/毫升抑肽酶和1微克/毫升抑胃肽)洗涤后，将该蛋白质用在激酶缓冲剂中的50mM还原谷胱甘肽洗脱。汇集含有GST-Rb(792-927)的馏分，并对着激酶缓冲剂渗析过夜。使用8-16％Tris-Glycine凝胶(Novex，San Diego，USA)通过十二烷基硫酸钠(SDS)PAGE(聚丙烯酰胺凝胶)分析最终产物。
CDK2和细胞周期蛋白E 通过使用HeLa细胞和活化T细胞mRNA作为模板的逆转录酶-PCR分离CDK2和细胞周期蛋白E的开放阅读框，并克隆到昆虫表达载体pVL1393(获自Invitrogen 1995目录号V1392-20)中。然后在昆虫SF21细胞系统(Spodoptera Frugiperda细胞，来自Fall Army Worm的卵巢组织-可购得)中双表达CDK2和细胞周期蛋白E[使用标准病毒Baculogold同时感染技术]。
细胞周期蛋白E/CDK2的实例制造 下列实例提供了在SF21细胞中制造细胞周期蛋白E/CDK2的细节(在TC100+10％FBS(TCS)+0.2％Pluronic中)，对于细胞周期蛋白E& CDK2的各病毒，具有双感染MOI3。
使用在滚瓶培养中生长至2.33 x 106个细胞/毫升的SF21细胞以0.2x 10E6个细胞/毫升培养10 x 500毫升滚瓶。将该滚瓶在roller rig上在28℃下培养。
在3天(72小时)后，计数细胞，且发现2个瓶子的平均值为1.86x 10E6个细胞/毫升(99％存活)。然后将该培养物用双病毒在对各病毒而言MOI 3下感染。
将病毒在添加到培养物中之前混合在一起，并将培养物送回rollerrig 28℃。
在感染后2天(48小时)后，收取5升培养物。收取时的总细胞数为1.58 x 10E6个细胞/毫升(99％存活)。将该细胞在250毫升份额(lots)中在Heraeus Omnifuge 2.0RS中在2500rpm，4℃下旋转30分钟。弃置上清液。
CDK2和细胞周期蛋白E的部分共提纯 将Sf21细胞再悬浮在溶胞缓冲剂(50mM Tris pH 8.2，10mM MgCl2，1mM DTT，10mM甘油磷酸酯，0.1mM原钒酸钠，0.1mM NaF，1mMPMSF，1微克/毫升亮抑酶肽和1微克/毫升抑肽酶)中并在10毫升Dounce匀浆器中匀浆2分钟。在离心后，将上清液加载到Poros HQ/M1.4/100阴离子交换柱(PE Biosystems，Hertford，UK)上。在0-1M NaCl梯度(在溶胞缓冲剂减去蛋白酶抑制剂中操作)开始时共洗脱CDK2和细胞周期蛋白E超过20倍柱体积。使用抗-CDK2和抗-细胞周期蛋白E抗体(Santa Cruz Biotechnology，California，US)通过蛋白质印迹法检测共洗脱。
以类似方式，可以构造用于评估CDK1和CDK4的抑制的检验法。CDK2(EMBL Accession No.X62071)可以与细胞周期蛋白A或细胞周期蛋白E(见EMBL Accession No.M73812)一起使用，且这种检验法的进一步细节包含在PCT国际公开No.WO99/21845中，其相关Biochemical & Biological Evaluation部分经此引用并入本文。
尽管式(I)的化合物的药理学性质随结构变化而变，但通常可以在IC50浓度或在250μM至1nM剂量下验证式(I)的化合物具有的活性。
在上述体外检测法中测试时，实施例4的CDK2抑制活性测得为IC50＝159nM。
根据本发明的另一方面，提供了包含如上文定义的式(I)的嘧啶衍生物或其可药用盐或体内可水解酯以及可药用稀释剂或载体的药学组合物。
该组合物可以是适用于口服(如片剂或胶囊剂形式)、适用于作为无菌溶液、悬浮液或乳状液肠胃外注射(包括静脉内、皮下、肌肉内、血管内或输液)、适用于作为油膏或乳霜局部给药、或适用于作为栓剂直肠给药的形式。
一般而言，上述组合物可以使用传统赋形剂以传统方式制备。
式(I)的化合物通常以在5-5000毫克/平米动物身体面积，即大约0.1-100毫克/公斤范围内的单位剂量施用于温血动物，这通常提供了治疗有效剂量。单位剂型，如片剂或胶囊剂通常含有例如1-250毫克活性成分。优选地，使用在1-50毫克/公斤范围内的日剂量。但是，日剂量必须随所治疗的主体、具体给药途径和要治疗的疾病严重程度而变。相应地，最佳剂量可以由治疗任何特定患者的医师决定。
根据本发明的另一方面，提供了如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯在人体或动物体治疗方法中的用途。
我们已经发现，本发明中定义的化合物、或其可药用盐或体内可水解酯是有效的细胞周期抑制剂(抗细胞增殖剂)，该性能被认为来自其CDK抑制性。相应地，本发明的化合物预计可用于治疗完全或部分由CDK酶介导的疾病或病状，即该化合物可用于在需要这类治疗的温血动物中产生CDK抑制作用。因此，本发明的化合物提供了治疗恶性细胞增殖的方法，其以CDK酶的抑制为特征，即该化合物可用于产生完全或部分由CDK的抑制介导的抗增殖和潜在的细胞凋亡作用。特别地，通过抑制CDK2、CDK4和/或CDK6，尤其是CDK2来防止进入或通过S期，和通过抑制CDK1来防止进入或通过M期，由此产生抑制作用。还预计通过抑制CDK1、CDK7、CDK8，特别是CDK9来下调RNA聚合酶II活性从而产生细胞凋亡作用。本发明的这种化合物预计具有宽范围的抗癌性能，因为CDK牵涉在许多常见的人癌症中，如白血病和乳癌、肺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌和卵巢癌。因此，本发明的化合物预计对这些癌症具有抗癌活性。另外预计本发明的化合物对一系列白血病、淋巴恶性肿瘤和在如肝、肾、前列腺和胰腺的组织中的实体瘤，如癌和肉瘤具有活性。特别地，本发明的这类化合物预计有利地减缓如结肠、乳腺、前列腺、肺和皮肤的原生和再发实体瘤的生长。更特别地，本发明的这类化合物或其可药用盐或体内可水解酯预计抑制与CDK相关的那些原生和再发实体瘤的生长，尤其是在其生长和扩散方面显著依赖于CDK的那些肿瘤，包括例如结肠、乳腺、前列腺、肺、外阴和皮肤的某些肿瘤。
进一步预计到，本发明的化合物对多种其它病状中的其它细胞增殖疾病具有活性，包括白血病、纤维增生性和分化性失调症、牛皮癣、类风湿性关节炎、卡波济氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性肾病、粉瘤、动脉粥样硬化、动脉再狭窄、自身免疫性疾病、急性和慢性炎症、骨病和伴有视网膜血管增生的眼病。
因此，根据本发明的这一方面，提供了用作药物的如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯。
在本发明的另一方面中，提供了如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯在用于产生细胞周期抑制作用的药物制造中的用途。
在本发明的一个方面中，在提到细胞周期抑制作用时，这是指CDK1的抑制。在本发明的另一方面中，这是指CDK2的抑制。在本发明的另一方面中，这是指CDK4的抑制。在本发明的另一方面中，这是指CDK5的抑制。在本发明的另一方面中，这是指CDK6的抑制。在本发明的另一方面中，这是指CDK7的抑制。在本发明的另一方面中，这是指CDK8的抑制。在本发明的另一方面中，这是指CDK9的抑制。
在本发明的另一方面中，提供了如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯在用于产生抗细胞增殖作用的药物制造中的用途。
在本发明的另一方面中，提供了如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯在用于产生CDK2抑制作用的药物制造中的用途。
在本发明的另一方面中，提供了如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯在癌症治疗药物的制造中的用途。
在本发明的另一方面中，提供了如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯在白血病或淋巴恶性肿瘤或乳癌、肺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肝癌、肾癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、外阴癌、皮肤癌或卵巢癌的治疗药物的制造中的用途。
根据本发明的另一特征，提供了如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯在癌症、纤维增生性和分化性失调症、牛皮癣、类风湿性关节炎、卡波济氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性肾病、粉瘤、动脉粥样硬化、动脉再狭窄、自身免疫性疾病、急性和慢性炎症、骨病和伴有视网膜血管增生的眼病的治疗药物的制造中的用途。
在本发明的另一方面中，提供了在需要这种治疗的温血动物中产生细胞周期抑制作用的方法，其包括对所述动物施用有效量的如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯。
在本发明的另一方面中，提供了在需要这种治疗的温血动物中产生抗细胞增殖作用的方法，其包括对所述动物施用有效量的如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯。
在本发明的另一方面中，提供了在需要这种治疗的温血动物中产生CDK2抑制作用的方法，其包括对所述动物施用有效量的如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯。
在本发明的另一方面中，提供了在需要这种治疗的温血动物中治疗癌症的方法，其包括对所述动物施用有效量的如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯。
在本发明的另一方面中，提供了在需要这种治疗的温血动物中治疗白血病或淋巴恶性肿瘤或乳癌、肺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肝癌、肾癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、外阴癌、皮肤癌或卵巢癌的方法，其包括对所述动物施用有效量的如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯。
在本发明的另一方面中，提供了在需要这种治疗的温血动物中治疗癌症、纤维增生性和分化性失调症、牛皮癣、类风湿性关节炎、卡波济氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性肾病、粉瘤、动脉粥样硬化、动脉再狭窄、自身免疫性疾病、急性和慢性炎症、骨病和伴有视网膜血管增生的眼病的方法，其包括对所述动物施用有效量的如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯。
在本发明的另一方面中，提供了包含如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯和可药用稀释剂或载体的药学组合物。
在本发明的另一方面中，提供了用作药物的包含如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯和可药用稀释剂或载体的药学组合物。
在本发明的另一方面中，提供了用于产生细胞周期抑制作用的包含如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯和可药用稀释剂或载体的药学组合物。
在本发明的另一方面中，提供了用于产生抗细胞增殖作用的包含如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯和可药用稀释剂或载体的药学组合物。
在本发明的另一方面中，提供了用于产生CDK2抑制作用的包含如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯和可药用稀释剂或载体的药学组合物。
在本发明的另一方面中，提供了用于治疗癌症的包含如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯和可药用稀释剂或载体的药学组合物。
在本发明的另一方面中，提供了用于治疗白血病或淋巴恶性肿瘤或乳癌、肺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肝癌、肾癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、外阴癌、皮肤癌或卵巢癌的包含如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯和可药用稀释剂或载体的药学组合物。
在本发明的另一方面中，提供了用于治疗癌症、纤维增生性和分化性失调症、牛皮癣、类风湿性关节炎、卡波济氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性肾病、粉瘤、动脉粥样硬化、动脉再狭窄、自身免疫性疾病、急性和慢性炎症、骨病和伴有视网膜血管增生的眼病的包含如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯和可药用稀释剂或载体的药学组合物。
在本发明的另一方面中，提供了如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯在产生细胞周期抑制作用中的用途。
在本发明的另一方面中，提供了如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯在产生抗细胞增殖作用中的用途。
在本发明的另一方面中，提供了如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯在产生CDK2抑制作用中的用途。
在本发明的另一方面中，提供了如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯在癌症治疗中的用途。
在本发明的另一方面中，提供了如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯在白血病或淋巴恶性肿瘤或乳癌、肺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肝癌、肾癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、外阴癌、皮肤癌或卵巢癌的治疗中的用途。
根据本发明的另一特征，提供了如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯在癌症、纤维增生性和分化性失调症、牛皮癣、类风湿性关节炎、卡波济氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性肾病、粉瘤、动脉粥样硬化、动脉再狭窄、自身免疫性疾病、急性和慢性炎症、骨病和伴有视网膜血管增生的眼病的治疗中的用途。
通过抑制基本S-期引发活性(如CDK2引发)来防止细胞进入DNA合成也可用于保护身体的正常细胞免受周期特异性药剂的毒性。CDK2或4的抑制在正常细胞中防止进展到该细胞周期，这可以限制在S-期、G2或有丝分裂中发挥作用的周期特异性药剂的毒性。这种保护可以防止通常与这些药剂相关的脱发。
因此，在本发明的另一方面中，提供了用作细胞保护剂的如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯。
因此，在本发明的另一方面中，提供了用于防止由用药剂治疗恶性病症引起的脱发的如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯。
已知造成脱发的治疗恶性病症的药剂的实例包括烷基化剂，如异环磷酰胺和环磷酰胺；抗代谢物，如氨甲喋呤、5-氟脲嘧啶、吉西他滨和阿糖胞苷；长春花生物碱和类似物，如长春新碱、长春灭瘟碱、长春地辛、长春瑞滨；紫杉烷类药物，如紫杉醇和多西紫杉醇；拓扑异构酶I抑制剂，如irintotecan和托泊替康；细胞毒素抗生素，如阿霉素、柔红霉素、米托蒽醌、放线菌素-D和丝裂霉素；和其它，如依托扑沙和维甲酸。
在本发明的另一方面中，式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯可以与一种或多种上述药剂联合给药。在这种情况下，式(I)的化合物可以通过系统或非系统方式给药。特别地，式(I)的化合物可以通过非系统方式给药，例如局部给药。
因此，在本发明的另一特征中，提供了预防在温血动物如人中用药剂治疗一种或多种恶性病症过程中的脱发的方法，其包括对所述动物施用有效量的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯。
在本发明的另一特征中，提供了预防在温血动物如人中用药剂治疗一种或多种恶性病症过程中的脱发的方法，其包括与有效量的所述药剂同时、相继或单独地对所述动物施用有效量的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯。
根据本发明的另一方面，提供了用于防止由用药剂治疗恶性病症引起的脱发的药学组合物，其包含式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯，和所述药剂，以及可药用稀释剂或载体。
根据本发明的另一方面，提供了包含式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯，和已知引起脱发的用于治疗恶性病症的药剂的试剂盒。
根据本发明的另一方面，提供了一种试剂盒，其包含 a)第一单位剂型的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯； b)第二单位剂型的已知引起脱发的用于治疗恶性病症的药剂；和 c)含有所述第一和第二剂型的容器装置。
根据本发明的另一特征，提供了式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯在制造用于防止在用药剂治疗恶性病症过程中的脱发的药物中的用途。
根据本发明的另一方面，提供了用于防止脱发的联合治疗，包括任选与可药用稀释剂或载体一起对温血动物如人施用有效量的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯，并同时、相继或单独施用有效量的治疗恶性病症的药剂。
如上所述，特定细胞增殖疾病的治疗性或预防性治疗所需的剂量大小必须随所治疗的主体、给药途径和要治疗的疾病严重程度而变。考虑在例如1-100毫克/千克，优选1-50毫克/千克范围内的单位剂量。
上文定义的CDK抑制活性可以作为单一疗法使用或除了本发明的化合物外还可以包括一种或多种其它物质和/或治疗。这种联合治疗可以通过该治疗的各组成部分的同时、相继或单独施用来实现。在医药肿瘤学领域中，常见实践是使用不同形式的治疗的组合来治疗各癌症患者。在医药肿瘤学中，除了上文定义的细胞周期抑制治疗外，这种联合治疗的其它组成部分可以是外科手术、放射疗法或化学疗法。这类化学疗法可以包括三种主要类型的治疗剂 (i)通过与上文定义的那些相同或不同的机制发挥作用的其它细胞周期抑制剂； (ii)细胞生长抑制剂，如抗雌激素药(例如它莫西芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、iodoxyfene)、孕激素(例如醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制药(例如阿那曲唑、来曲唑、vorazole、依西美坦)、抗孕激素药、抗雄激素药(例如氟他米特、尼鲁米特、比卡鲁胺、醋酸环丙氯地孕酮)、LHRH激动剂和拮抗剂(例如醋酸性瑞林、luprolide)、睾丸激素5α-二氢还原酶的抑制剂(例如非那雄胺)、抗侵袭药(例如，类似马立马司他的金属蛋白酶抑制剂和尿激酶纤溶酶原激活药受体功能的抑制剂)和生长因子功能的抑制剂(此类生长因子包括例如血小板源生长因子和肝细胞生长因子，此类抑制剂包括生长因子抗体、生长因子受体抗体、酪氨酸激酶抑制剂和丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂)；和 (iii)如医药肿瘤学中所用的抗增殖/抗肿瘤药及其组合，如抗代谢物(例如类似氨甲蝶呤的抗叶酸物、类似5-氟脲嘧啶的氟嘧啶类药、嘌呤和腺苷类似物、阿糖胞苷)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环类药，如阿霉素、道诺霉素、表柔比星和伊达比星、丝裂霉素-C、放线菌素、光神霉素)；铂衍生物(例如顺铂、卡波铂)；烷基化剂(例如氮芥、美法仑、瘤可宁、白血福恩、环磷酰胺、异环磷酰胺、亚硝基脲、噻替哌)；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱，如长春新碱，和紫杉类药物，如紫杉醇、多西紫杉醇)；拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素，如足叶乙甙和替尼泊甙、安吖啶、托泊替康)。根据本发明的这一方面，提供了包含如上定义的式(I)的化合物和如上定义的用于联合治疗癌症的另外抗肿瘤物质的药学产品。
除了它们在治疗药物中的用途外，式(I)的化合物及其可药用盐也可用作作为新治疗剂研发的一部分在实验室动物如猫、狗、兔子、猴子、大鼠和小鼠中的用于评测细胞周期活性抑制剂的影响的体外和体内试验系统的开发和标准化中的药理学工具。
在上述其它药学组合物、过程、方法、用途和药物制造特征中，本文所述的本发明的化合物的替代性和优选实施方案也适用。
实施例 现在通过下列非限制性实施例阐述本发明，其中，除非另行指明 (i)温度以摄氏度(℃)给出；操作在环境温度下，即18-25℃的温度下进行； (ii)有机溶液在无水硫酸镁上干燥；使用旋转蒸发器在减压(600-4000帕斯卡；4.5-30mmHg)以及最多60℃的浴温下进行溶剂蒸发； (iii)色谱法是指在硅胶上的快速色谱法；薄层色谱法(TLC)在硅胶板上进行； (iv)一般而言，通过TLC监测反应过程，且反应时间仅举例给出； (v)最终产物具有令人满意的质子核磁共振(NMR)谱和/或质谱数据； (vi)收率仅举例给出，且不一定是通过努力的工艺开发可获得的那些；如果需要更多材料，重复制备； (vii)当给出NMR数据时，除非另行指明，其对主要诊断质子而言是δ值形式，相对于内标四甲基硅烷(TMS)以百万分之份数(ppm)表示，使用全氘二甲亚砜(DMSO-d6)作为溶剂在300MHz下测定； (viii)化学符号具有它们的常见含义；使用SI单位和符号； (ix)溶剂比率以体积:体积(v/v)项给出；且 (x)质谱使用直接曝光探针以化学电离(CI)模式用70电子伏特的电子能量运行；其中所示电离通过电子冲击(EI)、快速原子轰击(FAB)或电喷雾(ESP)实现；给出m/z的值；通常，只报道显示母体质量的离子； (xi)除非另行指明，没有拆分含有不对称取代碳和/或硫原子的化合物； (xii)当一种合成被描述为与之前的实施例中所述的类似时，所用的量是之前的实施例中所用的那些的毫摩尔比率当量。
(xvi)已经使用下列缩写 BOC叔丁氧基羰基； IPA异丙醇； THF四氢呋喃； DIPEA N，N-二异丙基乙胺； DMFN，N-二甲基甲酰胺； EtOAc 乙酸乙酯； MeOH 甲醇； 醚(ether) 二乙醚； HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1-3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐； DCM二氯甲烷； DMSO 二甲基亚砜；和 TFA三氟乙酸； (xvii)过滤用的PTFE过滤器由

制造并由0.45μM膜过滤杯构成。这些可获自Fisher-Scientific UK(Part Code 09730155)；和 (xviii)当提到SCX-2柱时，这是指用于吸附碱性化合物的“离子交换”萃取筒，即含有苯磺酸基强阳离子交换吸附剂的聚丙烯管，其根据制造商指示使用，获自International Sorbent Technologies Limited，Dyffryn Business Park，Hengeod，Mid Glamorgan，UK，CF82 7RJ。
实施例1 反式-N-[4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己基]氨基甲酸叔丁酯 合并2-氯-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶(方法2，1.9克，8毫摩尔)、反式-N-(4-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯(2.58克，12毫摩尔)、三乙胺(3.35毫升，24毫摩尔)和IPA(20毫升)并在回流(85℃)下加热5天。冷却至环境温度后，该混合物凝固。将反应混合物用IPA稀释并将所得沉淀物过滤并用IPA洗涤。蒸发滤液并用IPA研制，过滤收集第二批材料。将这两个沉淀物合并，溶解在DCM/MeOH中，滤出不溶材料，并使溶液通过短二氧化硅垫，用0-10％MeOH/DCM梯度洗脱。合并含产物的馏分并蒸发产生白色固体状的标题化合物(1.68克，50％)。NMR(400.132MHz，CDCl3)1.22(m，4H)，1.38(s，9H)，1.48(d，6H)，2.05(m，4H)，2.50(s，3H)，3.40(m，1H)，3.69(m，1H)，4.32(m，1H)，4.83(m，1H)，5.54(m，1H)，6.64(d，1H)，7.23(s，1H)，8.12(d，1H)；MH+415。
实施例2 N-[反式-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，4-二胺 将反式-N-[4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己基]氨基甲酸叔丁酯(实施例1，1.68克，4毫摩尔)悬浮在二氧杂环己烷(20毫升)中，加入在二氧杂环己烷中的4M HCl(20毫升)，并将反应混合物在环境温度下搅拌3天。滤出所得沉淀物并溶解在水中，用2M NaOH水溶液中和至pH9，并用DCM(2 x 75毫升)萃取。将有机相通过PTFE杯重力过滤并蒸发溶剂。将含水相用2M HCl水溶液酸化至pH4，然后添加到用MeOH预处理的50克SCX-2柱中。将该柱用水(2倍柱体积)、MeOH(1倍柱体积)冲洗，产物用MeOH中的2M氨洗脱。将洗脱液与之前的有机相合并，并蒸发溶剂以产生透明树胶。在残留物中加入醚并再蒸发溶剂，对所得材料施以高真空以产生白色泡沫状的标题化合物(1.26克，99％)。1H NMR(400.132MHz，CDCl3)1.17(m，6H)，1.49(d，6H)，1.85(m，2H)，2.07(m，2H)，2.50(s，3H)，2.68(m，1H)，3.69(m，1H)，4.82(m，1H)，5.58(m，1H)，6.64(d，1H)，7.24(s，1H)，8.11(d，1H).MH+315。
实施例3 N-[反式-4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己基]甲磺酰胺 向N-[反式-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，4-二胺(实施例2，60毫克，0.2毫摩尔)在DCM(2毫升)中的溶液中加入三乙胺(0.08毫升，0.57毫摩尔)，然后加入甲基磺酰氯(0.019毫升，0.25毫摩尔)在DCM(1毫升)中的溶液。将所得溶液在环境温度下搅拌2小时，用水洗涤，并通过PTFE杯重力过滤。蒸发溶剂并将残留物溶解在DCM中，在二氧化硅上提纯，用浅梯度0-5％MeOH/DCM然后5％MeOH/DCM洗脱。合并含产物的馏分并蒸发产生白色固体状的标题化合物(20毫克，26％)。NMR(400.132MHz，CDCl3)1.31(m，4H)，1.49(d，6H)，2.11(m，4H)，2.50(s，3H)，2.92(s，3H)，3.29(m，1H)，3.71(m，1H)，4.07(d，1H)，4.82(m，1H)，5.50(m，1H)，6.66(d，1H)，7.24(s，1H)，8.12(d，1H)；MH+393。
实施例4 反式-N′，N′-二甲基-N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，4-二胺 向N-[反式-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，4-二胺(实施例2，60毫克，0.2毫摩尔)在THF(2毫升)中的溶液中加入乙酸(0.011毫升，0.2毫摩尔)，然后加入37％甲醛水溶液(1毫升)。将反应混合物在环境温度下搅拌30分钟。加入三乙酰氧基硼氢化钠(121毫克，0.6毫摩尔)并将反应搅拌2小时。蒸发溶剂并将残留物用饱和碳酸氢钠水溶液中和，用DCM萃取，通过PTFE杯重力过滤并蒸发有机萃取物。将所得材料溶解在DCM中，并在二氧化硅上提纯，用10％在MeOH/DCM中的2M氨洗脱。合并含产物的馏分并蒸发成透明树胶。加入醚并再蒸发以产生玻璃状的白色固体状的标题化合物(28毫克，41％)。NMR(400.132MHz，CDCl3)1.23(m，4H)，1.49(d，6H)，1.93(m，2H)，2.13(m，3H)，2.24(s，6H)，2.50(s，3H)，3.67(m，1H)，4.83(m，1H)，5.58(m，1H)，6.64(d，1H)，7.24(s，1H)，8.11(d，1H)；MH+343。
实施例5 N-[反式-4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己基]-4-吗啉-4-基-丁酰胺 合并N-[反式-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，4-二胺(实施例2，60毫克，0.2毫摩尔)、4-吗啉-4-基丁酸盐酸盐(方法3，38毫克，0.23毫摩尔)、HATU(87毫克，0.23毫摩尔)、DIPEA(0.13毫升，0.76毫摩尔)和DMF(2毫升)并在环境温度下搅拌过夜。蒸发溶剂且残留物在DCM(2毫升)和饱和碳酸氢钠水溶液(2毫升)之间分配，通过PTFE杯重力过滤并蒸发DCM。将所得材料溶解在DCM中并在二氧化硅上提纯，用MeOH中的梯度0-5％2M氨洗脱。合并含产物的馏分并蒸发产生白色固体状的标题化合物。(61毫克，68％)。NMR(400.132MHz，CDCl3)1.25(m，4H)，1.49(d，6H)，1.77(m，2H)，1.97(m，3H)，2.10(m，2H)，2.19(m，2H)，2.37(m，2H)，2.43(m，2H)，2.50(s，3H)，2.96(m，2H)，3.71(m，5H)，4.83(m，1H)，5.52(m，1H)，5.73(m，1H)，6.65(d，1H)，7.23(s，1H)，8.12(d，1H)；MH+470。
实施例6 4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)-2-[[反式-4-(氨磺酰基氨基)环己基]氨基]嘧啶 合并N-[反式-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，4-二胺(实施例2，70毫克，0.22毫摩尔)、磺酰胺(214毫克，2.23毫摩尔)和二氧杂环己烷(2毫升)并在回流下加热16小时。使反应冷却至环境温度并用水(50毫升)、饱和碳酸氢钠水溶液(50毫升)和DCM(100毫升)稀释。过滤不溶材料并用水洗涤，将有机相进一步用水洗涤，然后蒸发并与滤出的不溶材料合并。将合并的材料用醚研制，并过滤所得固体以产生米色固体状的标题化合物(64毫克，73％)。NMR(400.132MHz)1.31(m，4H)，1.50(d，6H)，1.97(m，4H)，2.50(s，3H)，3.05(m，1H)，3.62(m，1H)，5.72(m，1H)，6.45(m，3H)，6.78(d，1H)，7.00(m，1H)，7.35(s，1H)，8.18(d，1H)；MH+394。
实施例7 2-[[反式-4-(二甲基氨磺酰基氨基)环己基]氨基]-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶 将三乙胺(0.08毫升，0.6毫摩尔)添加到溶解在DCM(1毫升)中的N-[反式-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，4-二胺(实施例2；63毫克，0.2毫摩尔)溶液中。逐滴添加二甲基氨磺酰氯(0.03毫升，0.24毫摩尔)在DCM(1毫升)中的溶液，并将该溶液在环境温度下搅拌16小时。追加二甲基氨磺酰氯(0.03毫升，0.24毫摩尔)并将反应再搅拌3小时。然后加入水(2毫升)，将反应混合物摇振并通过PTFE杯重力过滤。将所得溶液在二氧化硅上提纯，用梯度0-5％MeOH/DCM洗脱，以产生无色固体状的标题化合物(19毫克，23％)。NMR(400.132MHz，CDCl3)1.27(m，4H)，1.48(d，6H)，2.10(m，4H)，2.50(s，3H)，2.73(s，6H)，3.17(m，1H)，3.69(m，1H)，4.15(m，1H)，4.92(m，1H)，5.51(m，1H)，6.65(d，1H)，7.23(s，1H)，8.11(d，1H)；MH+422。
实施例8 4-[[反式-4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己基]氨基甲酰基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯 合并N-[反式-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，4-二胺(实施例2,100毫克，0.32毫摩尔)、1-((1，1-二甲基乙氧基)羰基)-4-哌啶乙酸(93毫克，0.38毫摩尔)、HATU(145毫克，0.38毫摩尔)、DIPEA(0.22毫升，1.27毫摩尔)和DMF(4毫升)并在环境温度下搅拌过夜。蒸发溶剂并使所得材料在DCM(2毫升)和饱和碳酸氢钠水溶液(2毫升)之间分配，通过PTFE杯重力过滤并蒸发。将所得材料溶解在DCM中并在二氧化硅上提纯，用浅梯度0-5％MeOH/DCM洗脱。合并含纯净产物的馏分，并蒸发。NMR(400.132MHz，CDCl3)1.05(m，2H)，1.23(m，4H)，1.38(s，9H)，1.49(d，6H)，1.63(m，2H)，1.91(m，1H)，1.99(m，4H)，2.10(m，2H)，2.50(s，3H)，2.65(m，2H)，3.73(m，2H)，4.01(m，2H)，4.83(m，1H)，5.17(m，1H)，5.50(m，1H)，6.65(d，1H)，7.24(s，1H)，8.13(d，1H)；MH+540。
实施例9-13 通过实施例8的程序并在相同规模下，使用适当的酸原材料制备下列化合物。
实施例14 N-[反式-4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己基]-2-(4-哌啶基)乙酰胺 将4-[[反式-4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己基]氨基甲酰基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(实施例8，～200毫克，～0.38毫摩尔)溶解在DCM(3毫升)中并加入等体积的TFA。将反应混合物在环境温度下搅拌3小时，然后添加到用MeOH(2倍柱体积)预湿的5g SCX-2柱中。该柱含有MeOH(2倍柱体积)，然后将产物用MeOH中的2M氨洗脱，并将碱性洗脱液蒸发产生玻璃状的标题化合物(52毫克，31％)。NMR(500.133MHz)1.29(m，2H)，1.39(m，4H)，1.51(d，6H)，1.80(m，2H)，1.98(m，3H)，2.06(m，2H)，2.48(s，3H)，2.86(m，2H)，3.23(m，2H)，3.57(m，1H)，3.71(m，1H)，5.60(m，1H)，6.73(d，1H)，7.28(s，1H)，8.16(d，1H)；MH+440。
实施例15-19 通过实施例14的程序并在相同规模下，使用所示原材料制备下列化合物。
实施例20 N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，4-二胺 将2-氯-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶(方法2；1.19克)与1，4-二氨基环己烷(顺式/反式异构体混合物；1.14克)和三乙胺(0.5克)一起在DMA(3.0毫升)中在95℃下加热3小时。将混合物冷却，然后用2M碳酸钠水溶液(20毫升)稀释，并用DCM(200毫升)萃取。将有机层干燥，过滤，然后在真空中浓缩。将残留物在二氧化硅上提纯，用DCM中的0-20％MeOH然后用0.5％三乙胺/20％MeOH/DCM洗脱以产生无色固体状的标题化合物(顺式/反式异构体的8:1混合物)(0.94克，54％)。NMR(400.13MHz，CDCl3)1.20-2.20(m，16H)，2.57(s，3H)，2.75-2.95(m，1H)，3.75-4.00(m，1H)，4.95-5.20(m，1H)，5.65(m，1H)，6.71(d，1H)，7.31(s，1H)，8.19(d，1H).MH+315。
实施例21 N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，3-二胺 以与实施例20类似的方式并在类似规模下，使用1，3-二氨基环己烷(顺式/反式异构体混合物)代替1，4-二氨基环己烷(顺式/反式异构体混合物)，与2-氯-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶(方法2)一起，制备标题化合物(以顺式/反式异构体的2:1或1:2混合物形式)。NMR(400.13MHz，CDCl3)1.03-1.43(m，2H)，1.55(m，6H)，1.60-2.30(m，8H)，2.56(s，3H)，2.84-3.10(m，1H)，3.88-4，29(m，1H)，5.15(m，1H)，5.63(m，1H)，6.71(m，1H)，7.30(s，1H)，8.18(d，1H)；MH+315. 实施例22 3-二甲基氨基-N-[4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己基]丙酰胺 将N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，4-二胺(实施例20；95毫克)与3-(二甲基氨基)丙酸盐酸盐(70毫克)和DIPEA(97毫克)一起在DMF(1.0毫升)中在环境温度下搅拌。然后加入HBTU(171毫克)并将该溶液搅拌16小时。将混合物通过RPHPLC提纯以产生无色固体状的标题化合物(41毫克，33％)。NMR(400.13MHz，CDCl3+D2O)1.55(m，8H)，1.70(m，4H)，1.95(m，2H)，2.35(m，8H)，2.60(m，5H)，4.00(m，2H)，5.65(m，1H)，6.75(m，1H)，7.30(m，1H)，8.20(m，1H)；MH+414。
实施例23-24 通过实施例22的程序并在相同规模下，使用适当的胺制备下列化合物。
实施例25-27 通过实施例22的程序并在相同规模下，使用N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，3-二胺(实施例21)和适当的酸制备下列化合物。
实施例28 N-[4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己基]甲磺酰胺 将在DCM(1毫升)中的甲基磺酰氯(35毫克)在环境温度下逐滴添加到N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，4-二胺(实施例20；95毫克)和三乙胺(46毫克)在DCM(3.0毫升)中的搅拌溶液中。在1小时后，加入氨水(25％，0.5毫升)并将该混合物在真空中浓缩，然后溶解在温DMSO(1毫升)中并用水(15毫升)稀释。过滤所形成的固体，用水洗涤，并在真空中干燥产生无色固体状的标题化合物(21毫克，17％)。MH+393。
实施例29 N-[4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己基]-2-吡咯烷-1-基-乙磺酰胺 将N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，4-二胺(实施例20；95毫克)和DIPEA(117毫克)溶解在DCM(3毫升)中并冷却至-10℃。逐滴添加在DCM(2毫升)中的2-氯乙烷磺酰氯(54毫克)并将反应升温至环境温度并搅拌30分钟。加入吡咯烷(86毫克)并将反应搅拌16小时，然后在真空中浓缩。将残留物溶解在DMF(1毫升)中并通过RPHPLC提纯产生无色固体状的标题化合物(43毫克，30％)。NMR(400.13MHz，CDCl3)1.55(d，6H)，1.55-1.95(m，12H)，2.60(m，7H)，3.00(t，2H)，3.19(t，2H)，3.64(m，1H)，3.94(m，1H)，5.05(d，1H)，5.60(m，2H)，6.74(d，1H)，7.32(s，1H)，8.20(d，1H)；MH+476。
实施例30 N-[4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己基]-3-吡咯烷-1-基-丙烷-1-磺酰胺 将N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，4-二胺(实施例20；95毫克)和DIPEA(117毫克)溶解在DCM(3毫升)中并冷却至-10℃。逐滴加入在DCM(2毫升)中的3-氯丙烷磺酰氯(59毫克)并将反应升温至环境温度并搅拌30分钟。将反应在真空中蒸发，然后加入吡咯烷(0.5毫升)并将反应在环境温度下搅拌3天。将反应在真空中浓缩并通过RPHPLC提纯产生无色胶状的标题化合物(104毫克，70％)。NMR(400.13MHz，CDCl3)1.30-2.25(m，20H)，2.55(m，9H)，3.12(t，2H)，3.30-3.60(m，1H)，3.70-4.05(m，1H)，4.85-5.40(m，2H)，5.60(m，1H)，6.73(m，1H)，7.30(m，1H)，8.20(m，1H)；MH+490。
实施例31 N-[3-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己基]甲磺酰胺 将N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，3-二胺(实施例21；95毫克)与三乙胺(46毫克)一起在DCM(3毫升)中在环境温度下搅拌。逐滴加入在DCM(1.0毫升)中甲烷磺酰氯(35毫克)并将该混合物搅拌1小时。加入氨水(25％，0.5毫升)并将该混合物用DCM稀释。将有机层用水洗涤两次，干燥，过滤并浓缩产生树胶。用醚研制产生无色固体状的标题化合物(47毫克，39％)。NMR(400.13MHz，CDCl3)1.05-2.50(m，8H)，1.57(m，6H)，2.58(s，3H)，2.98(m，3H)，3.37-3.83(m，1H)，3.85-4.27(m，1H)，4.63(m，1H)，5.00-5.20(m，1H)，5.55(m，1H)，6.73(d，1H)，7.33(m，1H)，8.20(d，1H)；MH+393。
实施例32 N-[3-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己基]-2-吡咯烷-1-基-乙磺酰胺 通过29的程序并在相同规模下，使用N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，3-二胺(实施例21)制备标题化合物。NMR(400.13MHz，CDCl3)1.05-1.15(m，2H)，1.35-2.15(m，16H)，2.50(m，7H)，2.95(t，2H)，3.15(t，2H)，3.40-3.80(m，1H)，3.85-4.25(m，1H)，4.90-5.70(m，3H)，6.74(m，1H)，7.31(2s，1H)，8.20(m，1H)；MH+476。
实施例33 N-[3-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己基]-3-吡咯烷-1-基-丙烷-1-磺酰胺 通过实施例30的程序并在相同规模下，使用N-[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，3-二胺(实施例21)制备标题化合物。NMR(400.13MHz，CDCl3)1.05-1.25(m，2H)，1.40-2.20(m，18H)，2.50(m，9H)，3.10(m，2H)，3.35-3.80(2m，1H)，3.80-4.30(2m，1H)，4.90-5.70(m，3H)，6.73(m，1H)，7.30(2s，1H)，8.20(m，1H)；MH+490。
实施例34 4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己烷-1-羧酸锂盐 将(E)-3-二甲基氨基-1-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)丙-2-烯-1-酮(方法24，WO 03/076436；1.55克)与顺式-4-carbamimidamido环己烷-1-羧酸苄酯(方法8；1.93克)一起在2-甲氧基乙醇(10毫升)中回流16小时。将反应混合物冷却，然后用EtOAc稀释并过滤。将滤液用饱和NaHCO3水溶液、盐水洗涤两次，然后干燥，过滤并浓缩产生油。将该油溶解在MeOH(20毫升)中，然后与LiOH一起在水(10毫升)中在环境温度下搅拌16小时。将该混合物浓缩，然后在水和EtOAc之间分配。浓缩含水相，然后施加到Amberlite XAD2树脂(未官能化聚苯乙烯)柱中。用水中的梯度0-10％乙腈洗脱，并蒸发馏分，产生黄色泡沫状的标题化合物(顺式/反式异构体的2:1或1:2混合物)(1.2克，49％)。MH+344。
注意，这些条件和LiOH水解造成紧邻酸的手性中心的差向异构化。
实施例35 N-甲基-4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己烷-1-羧酰胺 将4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己烷-1-羧酸锂盐(实施例34；175毫克)与甲胺(2M在THF中，0.75毫升)和DIPEA(129毫克)一起在DMF(1.5毫升)中在环境温度下搅拌。加入HBTU(285毫克)并将该溶液搅拌16小时。将该混合物通过RPHPLC提纯产生固体标题化合物(73毫克，41％)。NMR(400.13MHz，CDCl3+D2O)1.20-2.30(m，9H)，1.50(m，6H)，2.55(m，3H)，2.82(m，3H)，3.70-4.10(m，1H)，5.60(m，2H)，6.71(m，1H)，7.30(m，1H)，8.18(m，1H)；MH+357。
实施例36-38 通过实施例35的程序并在相同规模下，使用适当的胺制备下列化合物。
实施例39 3-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己烷-1-羧酸甲酯 将2-氯-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶(方法2；1.42克)与3-氨基环己烷-1-羧酸甲酯盐酸盐(顺式/反式混合物；2.09克)和三乙胺(2.2克)一起在DMA(5毫升)中在95℃下加热24小时。将反应冷却，加入饱和NaHCO3水溶液(50毫升)，并将含水层用EtOAc(150毫升)萃取。将有机层用水、盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。将残留物用醚-异己烷(1:1)研制以产生固体，将其滤出并干燥以产生无色固体状的标题化合物(顺式/反式异构体的～1:1混合物)(1.44克，67％)。NMR(400.13MHz，CDCl3)1.20(m，1H)，1.40(m，3H)，1.55(2d，6H)，1.95(m，2H)，2.10(d，1H)，2.40(m，2H)，2.57(s，3H)，3.67(s，3H)，3.85(m，1H)，5.00(s，1H)，5.63(s，1H)，6.72(d，1H)，7.31(s，1H)，8.19(d，1H)；MH+358。
实施例40 3-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己烷-1-羧酸锂盐 将3-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己烷-1-羧酸甲酯(实施例39；1.43克)溶解在MeOH(10毫升)中并与LiOH(0.11克)一起在水(5毫升)中在环境温度下搅拌16小时。将该混合物用固体二氧化碳丸粒中和，然后蒸发至干以产生固体标题化合物(1.4克)。MH+344。
实施例41-44 通过实施例35的程序并在相同规模下，使用3-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己烷-1-羧酸锂盐(实施例40)和适当的胺制备下列化合物。
实施例45 反式-N-[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，4-二胺 将2-氯-5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶(方法5；100毫克，0.39毫摩尔)和反式-1，4-二氨基环己烷(2毫升体积的固体)通过微波辐射在200℃下加热(熔体反应)30分钟。在相同规模下重复反应，然后将反应物合并在二氧化硅上提纯，用梯度0-20％MeOH/DCM洗脱。再在二氧化硅上提纯，用梯度0-10％(MeOH中的2M氨)/DCM洗脱，产生无色泡沫状的标题化合物(245毫克，94％)。NMR(400.132MHz，CDCl3)1.18(m，4H)，1.36(m，2H)，1.49(d，6H)，1.85(m，2H)，2.05(m，2H)，2.53(s，3H)，2.67(m，1H)，3.60(m，1H)，4.75(m，1H)，5.56(m，1H)，7.46(d，1H)，8.06(d，1H)；MH+333。
实施例46 5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)-2-[[反式-4-(氨磺酰基氨基)环己基]氨基]嘧啶 合并反式-N-[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，4-二胺(实施例45；126毫克，0.38毫摩尔)、磺酰胺(546毫克，5.68毫摩尔)和二氧杂环己烷(3毫升)并加热至回流过夜。将反应混合物冷却至环境温度，并将沉淀的固体过滤，用MeOH(2×5毫升)、水(2×5毫升)洗涤，并干燥产生乳霜固体状的标题化合物(77毫克，49％)。NMR(400.132MHz)1.29(m，4H)，1.50(d，6H)，1.92(m，2H)，2.00(m，2H)，2.50(s，3H)，3.05(m，1H)，3.55(m，1H)，5.54(m，1H)，6.46(m，3H)，7.04(m，1H)，7.32(d，1H)，8.32(d，1H)；MH+412。
实施例47 反式-N-[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]-N′，N′-二甲基-环己烷-1，4-二胺 通过实施例4的程序并在相同规模下，使用反式-N-[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，4-二胺(实施例45)，制备标题化合物。NMR(400.132MHz，CDCl3)1.22(m，4H)，1.49(d，6H)，1.92(m，2H)，2.11(m，3H)，2.23(s，6H)，2.53(s，3H)，3.58(m，1H)，4.75(d，1H)，5.56(m，1H)，7.46(d，1H)，8.06(d，1H)；MH+361。
实施例48 (3R)-3-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环戊烷-1-羧酸 将(1S，3R)-3-carbamimidamido环戊烷-1-羧酸甲酯(方法7；1.33克，7.18毫摩尔)和(E)-3-二甲基氨基-1-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)丙-2-烯-1-酮(方法24，WO 03/076436；1.32克，5.96毫摩尔)在2-甲氧基乙醇(20毫升)中在回流下加热6小时。将反应混合物冷却，蒸发，然后在DCM(100毫升)和水(100毫升)之间分配。将有机相分离，用盐水洗涤，干燥，过滤并蒸发产生黄色油，将其溶解在THF(10毫升)、MeOH(10毫升)和水(5毫升)中。加入氢氧化锂(284毫克，11.86毫摩尔)并在搅拌16小时后，蒸发溶剂，并使残留物在EtOAc(50毫升)和水(50毫升)之间分配。向含水相中加入2M HCl以调节至pH4。将含水层用EtOAc(2×50毫升)萃取并将合并的有机萃取物用盐水洗涤，干燥，过滤并蒸发产生黄色固体。也蒸发含水层以产生黄色树胶。合并这两种产物并在二氧化硅上提纯，用DCM中的梯度0-15％MeOH洗脱，以产生浅黄色固体状的标题化合物(顺式/反式异构体的～1:1混合物)(563毫克，29％)。NMR(500.133MHz，373K)1.49(m，6H)，1.55-1.68(m，1H)，1.73-2.24(m，5H)，2.46(s，3H)，2.71-2.93(m，1H)，4.22-4.36(m，1H)，5.62(m，1H)，6.59-6.68(m，1H)，6.74(m，1H)，7.27(m，1H)，8.17(d，1H)；MH+330。
注意紧邻酸的位置在反应过程中外消旋。
实施例49-52 通过实施例35的程序并在相同规模下，使用(3R)-3-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环戊烷-1-羧酸(实施例48)和适当的胺制备下列化合物。
实施例53 顺式-N-[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环戊烷-1，3-二胺 将顺式-1，3-二氨基环戊烷二盐酸盐(方法9；2.06克)溶解在MeOH(250毫升)中，然后加入KOH(1.34克)在MeOH(50毫升)中的溶液。将该悬浮液过滤并蒸发滤液以产生油状的顺式-1，3-二氨基环戊烷(1.2克；游离碱)。将2-氯-5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶(方法5；2.04克)与顺式-1，3-二氨基环戊烷(1.2克)和DIPEA(2.06克)一起在DMA(14毫升)中在125℃下搅拌和加热2小时。此后浓缩该混合物，然后用2M碳酸钠水溶液稀释，并用DCM萃取。将有机层干燥，过滤并在二氧化硅上提纯，用DCM中的0-10％MeOH然后2％三乙胺/15％MeOH/DCM洗脱，产生无色胶状的标题化合物(1.62克，63％产率)。NMR(400.13MHz，CDCl3)1.40(m，1H)，1.57(m，7H)，1.79(m，1H)，1.99(m，2H)，2.21(m，1H)，2.59(s，3H)，3.54(m，1H)，4.30(m，1H)，5.61(m，1H)，5.82(d，1H)，7.52(d，1H)，8.13(d，1H)；MH+319。
实施例54至55 通过实施例22的程序并在相同规模下，使用顺式-N-[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环戊烷-1，3-二胺(实施例53)和适当的酸制备标题化合物。
实施例56 N-[顺式-3-[[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环戊基]甲磺酰胺 将顺式-N-[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环戊烷-1，3-二胺(实施例53；128毫克)与三乙胺(61毫克)一起在DCM(4毫升)中在环境温度下搅拌。逐滴加入在DCM(1毫升)中的甲烷磺酰氯(46毫克)并将该混合物搅拌1小时。加入氨水(25％，0.5毫升)，然后将该混合物蒸发至干，并将残留物通过RPHPLC提纯产生固体标题化合物(94毫克，60％)。NMR(400.13MHz，CDCl3)1.55(d，6H)，1.60(m，1H)，1.82(m，2H)，2.10(m，2H)，2.52(m，1H)，2.60(s，3H)，2.97(s，3H)，3.90(m，1H)，4.18(m，1H)，5.05(d，1H)，5.18(d，1H)，5.55(m，1H)，7.53(d，1H)，8.14(d，1H)；MH+397。
实施例57至58 通过实施例29的程序并在相同规模下，使用顺式-N-[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环戊烷-1，3-二胺(实施例53)和适当的胺制备标题化合物。
原材料制备 方法1 4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-醇 将4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-胺(方法39，WO2003/076436，5克，23毫摩尔)在惰性气氛下溶解在70％AcOH-水(145毫升)中。在环境温度下经过5分钟逐滴添加在水(10毫升)中的亚硝酸钠(5.52克，80毫摩尔)，产生温和放热。将反应混合物缓慢加热至60℃，并在此温度下保持3小时。将反应混合物冷却至环境温度并用40％NaOH水溶液中和至pH7，用EtOAc(250毫升×5)萃取并将合并的萃取物干燥并蒸发产生灰白色固体状的标题化合物(8.2克，43％)。NMR(400.132MHz，CDCl3)1.51(d，6H)，2.03(s，3H)，2.54(s，3H)，5.93(m，1H)，6.60(d，1H)，7.57(m，2H)；MH+219。
方法2 2-氯-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶 合并4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-醇(方法1，8.2克，29.4毫摩尔)、氧氯化磷(120毫升)和五氯化磷(6.6克)并在回流下加热18小时。蒸发过量氧氯化磷，将残留物溶解在DCM中，并在冰和水中搅拌。通过添40％氢氧化钠水溶液来使该混合物达到pH11。分离有机和含水相并将有机相用盐水洗涤，干燥和蒸发。将所得材料溶解在DCM中并在用浅梯度0-5％MeOH/DCM洗脱的二氧化硅上色谱分离。合并含产物的馏分并蒸发产生浅棕色胶状标题化合物(5.8克，84％)。NMR(400.132MHz)1.53(d，6H)，2.50(s，3H)，5.27(m，1H)，7.72(s，1H)，7.79(d，1H)，8.62(d，1H)；MH+237。
方法3 4-吗啉-4-基丁酸盐酸盐 将4-溴丁酸乙酯(67毫升，0.5M)逐滴添加到吗啉(175毫升，2M)在无水甲苯(1升)中的溶液中。将反应混合物在60℃下搅拌4小时，然后在环境温度下搅拌过夜。将反应混合物在0℃下过滤，并蒸发滤液。将所得材料用60-80汽油研制并蒸发产生橙色油(91.4克)，将其减压蒸馏以产生清澈油(73.2克)b.p.90.2℃/3-4mm Hg。将所得油在18％HCl(aq)(1升)中在回流下加热16小时。蒸发酸，留下粘稠的固体，其在用醚研制后产生白色固体(75.25克)，其从冰乙酸/丙酮中重结晶以产生白色结晶固体状的标题化合物(56.43克，53％)m.p.181-3℃。
方法4 5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-醇乙酸酯 将5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-胺(方法17，WO2006/064251中；4克，17毫摩尔)在惰性气氛下溶解在70％AcOH-水(108毫升)中。在环境温度下经5分钟逐滴加入在水(8毫升)中的亚硝酸钠(4.08克，59.2毫摩尔)。使反应混合物缓慢升温至60℃。在3小时后，将反应混合物冷却，然后用40％NaOH水溶液中和至pH7。将含水层用EtOAc(6×300毫升)萃取，将合并的有机物干燥，过滤并蒸发产生黄色固体状的标题化合物(4.07克，81％)。NMR(400.132MHz)1.48(d，6H)，1.91(s，3H)，2.50(s，3H)，5.44(m，1H)，7.47(d，1H)，8.29(d，1H)；MH+237。
方法5 2-氯-5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶 将5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-醇乙酸酯(方法4；4克，13.5毫摩尔)悬浮在氧氯化磷(25毫升)中并加热至90℃3.5小时。将反应混合物在真空中浓缩，然后将残留物溶解在DCM(25毫升)中并与冰/水(50毫升)一起搅拌。将该混合物在冰水浴中冷却，用40％NaOH水溶液中和至pH 8，然后加入水和DCM(50毫升)并分离有机层。将含水层用DCM(75毫升)萃取，然后将合并的有机物用盐水洗涤，干燥，过滤并蒸发产生棕色油。通过二氧化硅上的用50％EtOAc/异己烷洗脱的快速色谱法提纯，产生黄色油状的标题化合物，其静置时结晶(2.84克，83％)。NMR(400.132MHz，CDCl3)1.54(d，6H)，2.54(s，3H)，5.34(m，1H)，7.69(m，1H)，8.32(m，1H)；MH+255。
方法6 (1S，3R)-3-氨基环戊烷-1-羧酸甲酯盐酸盐 将亚硫酰氯(0.062毫升，8.57毫摩尔)在惰性气氛下经2-3分钟逐滴添加到冷却的(盐/冰浴)无水MeOH(10毫升)中。搅拌2-3分钟后，一次性加入固体形式的(1S，3R)-3-氨基环戊烷-1-羧酸(997毫克，7.72毫摩尔)。将反应混合物在冷却下搅拌1小时，然后在环境温度下搅拌3小时。蒸发溶剂，将残留物用醚/EtOAc研制。过滤收集所得固体，干燥产生白色固体状的标题产物(1.3克，94％)。NMR(400.132MHz)1.62-1.80(m，2H)，1.86-1.98(m，3H)，2.26(m，1H)，2.86(m，1H)，3.47(m，1H)，3.63(s，3H)，8.22(br s，3H)。
方法7 (1S，3R)-3-carbamimidamido环戊烷-1-羧酸甲酯 将(1S，3R)-3-氨基环戊烷-1-羧酸甲酯盐酸盐(方法6；1.29克，7.18毫摩尔)溶解在乙腈(35毫升)中并用三乙胺(3.0毫升，21.52毫摩尔)处理。加入1H-吡唑-1-甲脒盐酸盐(2.1克，14.33毫摩尔)并将反应混合物在70℃(内部温度)下加热4小时。使反应混合物冷却过夜，然后蒸发成黄色粘稠油，将其用饱和NaHCO3水溶液(～50毫升)处理。将混合物在静置前摇振30-40分钟。生成的所得沉淀物通过抽吸过滤收集，用水洗涤并在抽吸下干燥2小时，然后转移到真空炉中并在真空下，在55℃下干燥3小时以产生白色固体状的标题化合物(1.61克，100％)。NMR(400.132MHz，)1.44-1.62(m，2H)，1.81-1.98(m，3H)，2.26(m，1H)，2.80(m，1H)，3.61(s，3H)，3.82(m，1H)。
方法8 顺式-4-carbamimidamido环己烷-1-羧酸苄酯 通过方法7的程序并在相同规模下，使用顺式-4-氨基环己烷-1-羧酸苄酯(步骤A，WO 06/073589中的实施例2)代替(1S，3R)-3-氨基环戊烷-1-羧酸甲酯盐酸盐(方法6)，制备标题化合物。NMR(400.132MHz)1.51(m，2H)，1.63-1.80(m，6H)，2.58(m，1H)，3.61(m，1H)，5.12(s，2H)，7.36(m，5H)，7.80(br.s，4H)。
方法9 顺式-环戊烷-1，3-二胺二盐酸盐 将2，3-二氮杂双环[2.2.1]庚烷二盐酸盐(Tetrahedron Lett.，2002，43，5551；4.06克)在EtOH-水(1:1；80毫升)中在10％活性碳上的钯(2克)存在下在40℃下氢化7小时。通过硅藻土过滤催化剂，并将滤液蒸发至干以产生固体标题化合物(4.1克，100％)。NMR(400.13MHz，DMSO+D2O)1.60(1H，m)，1.78(2H，m)，2.02(2H，m)，2.47(1H，m)，3.53(2H，m)。
实施例59 下面例示在人体内发挥治疗性或与预防性作用的含有式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯(下文化合物X)的代表性药物剂型 注意 上述制剂可以通过制药领域公知的传统程序获得。片剂(a)-(c)可以通过传统方式进行肠溶包衣，例如以提供乙酸邻苯二甲酸纤维素包衣。
权利要求
1.式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯
其中
环A是5-7元饱和碳环，其中环A的两个原子可任选通过桥相连；
R1选自羧基、氨基、氨磺酰基、氨磺酰基氨基、氨基甲酰基、基团-R6-R7或任选含有附加的氮、氧或硫原子的氮连接的4-7元饱和环；其中所述环可任选在碳上被一个或多个R8取代；且其中如果所述环含有附加的氮原子，该氮可以任选被R9取代；
R2选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、羧基、氨基甲酰基、巯基、氨磺酰基、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6烷酰基、C1-6烷酰氧基、N-(C1-6烷基)氨基、N，N-(C1-6烷基)2氨基、C1-6烷酰基氨基、N-(C1-6烷基)氨基甲酰基、N，N-(C1-6烷基)2氨基甲酰基、其中a是0至2的C1-6烷基S(O)a、C1-6烷氧基羰基、N-(C1-6烷基)氨磺酰基、N，N-(C1-6烷基)2氨磺酰基、C1-6烷基磺酰基氨基、碳环基-R10-或杂环基-R11-；其中R2可任选在碳上被一个或多个R12取代；且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，该氮可以任选被选自R13的基团取代；
q是0-4；其中R2的值可以相同或不同；
R3选自卤素、氰基或氨基；
n是0至2，其中R3的值可以相同或不同；
R4选自乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、环丙基、环丙基甲基、1-环丙基乙基、环丁基甲基、环戊基或环丁基；其中R4可以任选在碳上被一个或多个R14取代；
R5选自甲基、乙基、异丙基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基甲基、环丙基甲基或环丙基；
R6选自-O-、-N(R15)-、-C(O)-、-C(O)O-、-N(R16)C(O)-、
-C(O)N(R17)-、-N(R18)C(O)O-、-N(R19)C(O)N(R20)-、-S(O)r-、-OC(O)N(R21)SO2-、-N(R22)SO2N(R23)-、-SO2N(R24)-、-N(R25)SO2-、-C(O)N(R39)SO2-或-SO2N(R40)C(O)-；其中R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R39和R40独立地为氢或任选被一个或多个R26取代的C1-6烷基，且r为0-2；
R7选自C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、碳环基或杂环基；其中R7可以任选在碳上被一个或多个R27取代；且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，该氮可以任选被选自R28的基团取代；
R8、R12、R26和R27独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、羧基、氨基甲酰基、巯基、氨磺酰基、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6烷酰基、C1-6烷酰氧基、N-(C1-6烷基)氨基、N，N-(C1-6烷基)2氨基、C1-6烷酰基氨基、N-(C1-6烷基)氨基甲酰基、N，N-(C1-6烷基)2氨基甲酰基、其中a为0至2的C1-6烷基S(O)a、C1-6烷氧基羰基、N-(C1-6烷基)氨磺酰基、N，N-(C1-6烷基)2氨磺酰基、C1-6烷基磺酰基氨基、碳环基-R29-或杂环基-R30-；其中R8、R12、R26和R27彼此独立地可任选在碳上被一个或多个R31取代；且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，该氮可以任选被选自R32的基团取代；
R9、R13、R28和R32独立地选自C1-6烷基、C1-6烷酰基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷氧基羰基、氨基甲酰基、N-(C1-6烷基)氨基甲酰基、N，N-(C1-6烷基)氨基甲酰基、苄基、苄氧基羰基、苯甲酰基和苯基磺酰基；其中R9、R13、R28和R32彼此独立地可任选在碳上被一个或多个R33取代；且
R10、R11、R29和R30独立地选自直接键、-O-、-N(R34)-、-C(O)-、-N(R35)C(O)-、-C(O)N(R36)-、-S(O)s-、-SO2N(R37)-或-N(R38)SO2-；其中R34、R35、R36、R37和R38独立地选自氢或C1-6烷基，且s为0-2；
R14选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、羧基、氨基甲酰基、巯基、氨磺酰基、C1-6烷氧基、C1-6烷酰基、C1-6烷酰氧基、N-(C1-6烷基)氨基、N，N-(C1-6烷基)2氨基、C1-6烷酰基氨基、N-(C1-6烷基)氨基甲酰基、N，N-(C1-6烷基)2氨基甲酰基、其中a为0至2的C1-6烷基S(O)a、C1-6烷氧基羰基、N-(C1-6烷基)氨磺酰基、N，N-(C1-6烷基)2氨磺酰基和C1-6烷基磺酰基氨基；
R31和R33独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、羧基、氨基甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、环丙基、环丁基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基、N，N-二甲基氨基甲酰基、N，N-二乙基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N，N-二甲基氨磺酰基、N，N-二乙基氨磺酰基或N-甲基-N-乙基氨磺酰基。
2.如权利要求1所述的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯，其中环A是环戊基或环己基。
3.如权利要求1或2所述的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯，其中R1选自羧基、氨基、氨磺酰基氨基或基团-R6-R7；其中
R6选自-N(R15)-、-C(O)-、-C(O)O-、-N(R16)C(O)-、-C(O)N(R17)-、
-N(R18)C(O)O-、-N(R22)SO2N(R23)-或-N(R25)SO2-；其中R15、R16、R17、R18、R22、R23和R25独立地为氢或C1-6烷基；
R7选自C1-6烷基或杂环基；其中R7可以任选在碳上被一个或多个R27取代；且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，该氮可以任选被选自R28的基团取代；
R27选自C1-6烷基、N，N-(C1-6烷基)2氨基或杂环基-R30-；其中如果所述杂环基含有-NH-部分，该氮可以任选被选自R32的基团取代；
R28和R32独立地选自C1-6烷基和C1-6烷氧基羰基；和
R30是直接键。
4.如权利要求1-3任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯，其中q为0。
5.如权利要求1-4任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯，其中R3是卤素。
6.如权利要求1-5任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯，其中n是0或1。
7.如权利要求1-6任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯，其中R4是异丙基。
8.如权利要求1-7任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯，其中R5是甲基。
9.式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯
其中
环A是环戊基或环己基；
R1选自氨基、羧基、甲氧基羰基、氨磺酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-(2-二甲基氨基乙基)氨基甲酰基、N-(2-吡咯烷-1-基乙基)氨基甲酰基、N，N-二甲基氨磺酰基氨基、叔丁氧基羰基氨基、甲磺酰基氨基、二甲基氨基、(4-吗啉代丁酰基)氨基、2-(哌啶-4-基)乙酰基氨基、2-(N-叔丁氧基羰基哌啶-4-基)乙酰基氨基、3-(哌嗪-4-基)丙酰基氨基、3-(1-叔丁氧基羰基哌嗪-4-基)丙酰基氨基、3-(哌啶-4-基)丙酰基氨基、3-(N-叔丁氧基羰基哌啶-4-基)丙酰基氨基、4-甲基-哌啶-4-基羰基氨基、N-叔丁氧基羰基-4-甲基-哌啶-4-基羰基氨基、2-(吡咯烷-1-基)乙基磺酰基氨基、2-(二甲基氨基)乙基磺酰基氨基、3-(吡咯烷-1-基)丙基磺酰基氨基、3-(吡咯烷-1-基)丙酰基氨基、1-甲基高哌嗪-4-基羰基、2-(哌啶-3-基)乙酰基氨基、3-(二甲基氨基)丙酰基氨基和1-甲基哌啶-4-基羰基氨基、2-(N-叔丁氧基羰基哌啶-3-基)乙酰基氨基；
q是0；
R3是卤素；
n是0或1；
R4是异丙基；
R5是甲基。
10.式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯
选自
5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)-2-[[反式-4-(氨磺酰基氨基)环己基]氨基]嘧啶；
N-[顺式-3-[[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环戊基]甲磺酰胺；
N-[顺式-3-[[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环戊基]-2-吡咯烷-1-基-乙磺酰胺；
4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)-2-[[反式-4-(氨磺酰基氨基)环己基]氨基]嘧啶；
反式-N-[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，4-二胺；
2-(二甲基氨基)-N-(顺式-3-{[5-氟-4-(1-异丙基-2-甲基-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基}环戊基)乙磺酰胺；
N-[反式-4-[[4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环己基]甲磺酰胺；
反式-N-[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]-N′，N′-二甲基-环己烷-1，4-二胺；
N-[(顺式)-3-[[5-氟-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基]环戊基]-1-甲基-哌啶-4-羧酰胺；和
N-[反式-4-(2-甲基-3-丙-2-基-咪唑-4-基)嘧啶-2-基]环己烷-1，4-二胺。
11.制备如权利要求1所述的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯的方法，该方法包含
方法a)式(II)的嘧啶
其中L是可置换基团；与式(III)的胺的反应
或
方法b)使式(IV)的化合物
与式(V)的化合物反应
其中T是O或S；Rx可以相同或不同并选自C1-6烷基；或方法c)使式(VI)的嘧啶
与式(VII)的化合物反应
其中Y是可置换基团；
且此后如果必要
i)将式(I)的化合物转化成式(I)的另一化合物；
ii)除去任何保护基；
iii)形成可药用盐或体内可水解酯。
12.药学组合物，其包含如权利要求1-10任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯，和可药用稀释剂或载体。
13.如权利要求1-10任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯，用作药物。
14.如权利要求1-10任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯在用于产生抗细胞增殖作用的药物制造中的用途。
15.如权利要求1-10任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯在用于产生CDK2抑制作用的药物制造中的用途。
16.如权利要求1-10任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯在癌症治疗药物的制造中的用途。
17.如权利要求1-10任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯在白血病或淋巴恶性肿瘤或乳癌、肺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肝癌、肾癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、外阴癌、皮肤癌或卵巢癌的治疗药物的制造中的用途。
18.如权利要求1-10任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯在癌症、纤维增生性和分化性失调症、牛皮癣、类风湿性关节炎、卡波济氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性肾病、粉瘤、动脉粥样硬化、动脉再狭窄、自身免疫性疾病、急性和慢性炎症、骨病和伴有视网膜血管增生的眼病的治疗药物的制造中的用途。
19.在需要这种治疗的温血动物中产生抗细胞增殖作用的方法，其包括对所述动物施用有效量的如权利要求1-10任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯。
20.在需要这种治疗的温血动物中产生CDK2抑制作用的方法，其包括对所述动物施用有效量的如权利要求1-10任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯。
21.在需要这种治疗的温血动物中治疗癌症的方法，其包括对所述动物施用有效量的如权利要求1-10任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯。
22.在需要这种治疗的温血动物中治疗白血病或淋巴恶性肿瘤或乳癌、肺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肝癌、肾癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、外阴癌、皮肤癌或卵巢癌的方法，其包括对所述动物施用有效量的如权利要求1-10任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯。
23.在需要这种治疗的温血动物中治疗癌症、纤维增生性和分化性失调症、牛皮癣、类风湿性关节炎、卡波济氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性肾病、粉瘤、动脉粥样硬化、动脉再狭窄、自身免疫性疾病、急性和慢性炎症、骨病和伴有视网膜血管增生的眼病的方法，其包括对所述动物施用有效量的如权利要求1-10任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐或体内可水解酯。
全文摘要
描述了式(I)的化合物，其具有细胞周期抑制活性。
文档编号C07D403/00GK101454312SQ200780019158
公开日2009年6月10日 申请日期2007年5月24日 优先权日2006年5月26日
发明者C·琼斯, M·帕斯, D·拉奇 申请人:阿斯利康(瑞典)有限公司