专利名称：动态逆流提取虎杖中白藜芦醇的工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种动态逆流提取虎杖中白藜芦醇的工艺。
背景技术：
虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.)为蓼科草质状小灌木，其根茎中含 有大量的芪类化合物白藜芦醇(Resveratrol)和白藜芦醇苷(又名虎杖苷)，白藜芦醇的化 学名称为3，4'，5-三羟基二苯乙烯，天然白藜芦醇常以苷元和苷的两种形式存在。白藜芦 醇苷的活性不同于白藜芦醇，但人体内含有葡萄糖苷酶，在消化过程，可以将白藜芦醇苷水 解为白藜芦醇，从而发挥白藜芦醇对人体的生理功能。经研究证明白藜芦醇具有抗癌、治疗 心血管疾病、降血脂、抗血小板凝集、抗氧化和抗自由基、抗菌、美容等作用，是一种目前广 泛使用的药品原料、保健品、美容产品以及食品的添加保健成分。目前，从虎杖中提纯白藜芦醇大多采用常规溶剂提取方法，主要包括浸渍法、渗漉 法、水提煎煮法、回流提取法等，随着技术的不断改进以及新型提取设备的研制，一些现代 的提取方法也用于白藜芦醇的提取，常见的主要有生物酶法提取、微波辅助提取法、超声波 辅助提取法、超临界CO2流体萃取法等。罐组式动态逆流提取工艺，是将两个以上的动态提取罐机组串联，提取溶剂沿着 罐组内各罐药料的溶质浓度梯度逆向地由低向高顺次输送通过各罐，并与药料保持一定提 取时间并多次套用。此技术主要利用了固液(药材与溶剂)两相中有效成分的浓度梯度差， 逐级将药材中有效成分扩散至起始浓度较低的提取溶剂中，达到最大限度转移药材中有效 成分的目的。采用罐组式逆流提取工艺，能有效地利用固液两相的浓度梯度，增大浓度差， 提取速率快，提取液的浓度增高，提取周期短，提取的同时利用药材本体作滤层，可提高澄 明度。
发明内容
本发明的目的就是提供一种能耗低、时间短、溶剂用量少、产率高的动态逆流提取 虎杖中白藜芦醇的工艺。本发明的动态逆流提取虎杖中白藜芦醇的工艺，包括以下步骤1、动态逆流提取取干燥虎杖，粉碎，过40目筛，称取3-7等份，以3-7只提取罐 为一组，将等份的虎杖分别放入3-7只提取罐，每罐依次常温下循环提取3次，每次提取时 间均为0. 5-2小时，动态提取的搅拌频率为20-200转/分钟，第一提取罐第一次提取加入 6-10倍量pH为8-12的碱性水提取液，第二次及第三次提取分别加入3-6倍量水，将第一提 取罐第一次提取的药液过滤后放入储液罐备用，第二次提取的药液作为第二提取罐第一次 提取的溶剂，提取后将药液过滤备用，第三次提取的药液作为第二提取罐第二次提取的溶 齐 ，提取所得药液作为第三提取罐第一次的提取溶剂，即每只提取罐第ν次提取所加溶剂 均为上一提取罐第Ν+1次的提取液，第二提取罐、第三提取罐、第N提取罐的第一次提取在 加入上一提取罐药液的基础上分别补充1-3倍量碱性水提取液，收集每个提取罐的第一次提取的药液；2、将所得提取液在pH 2-5,500C -100°C的条件下，水解1_5小时，反应后，冷却，备 用；3、将水解产物分散于5-10倍重量的50% -100%乙醇中，加0. 5-1倍重量活性碳 加热回流搅拌1-2小时，静置，冷却，取上清液，浓缩得浸膏；4、将上述步骤处理得到的浸膏加水分散，过滤，取滤液，按流速为l_4BV/h上已预 处理好的大孔吸附树脂，以1-6倍柱床体积的蒸馏水洗脱，流速为l_4BV/h，弃去水洗脱液， 再以1-6倍柱床体积的60% -100%乙醇按l-4BV/h的速度洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并
浓缩至稠膏，干燥，得干浸膏，为白藜芦醇粗品；5、将上步收集到的白藜芦醇粗品，用硅胶柱色谱分离纯化，混合溶剂梯度洗脱，再 用乙醇重结晶2次得到白色结晶状白藜芦醇纯品。本发明动态逆流提取虎杖中白藜芦醇的工艺具有以下几个优点1、采用罐组式动态逆流提取代替了传统的单罐式多次提取，确保罐组间较大的有 效成分浓度差，大大增加了提取推动力，加快了提取速率，缩短了提取周期，罐组式提取通 过溶剂的反复利用，提高了最终溶剂中有效成分的浓度，降低后续浓缩耗能，与传统的提取 工艺相比，提取溶剂用量至少减少45 %，相应的节约热能约60 %，提取率提高20 %，而且随 着罐组数的增加，这种优势愈加明显。2、采用搅拌式动态提取代替了传统的静态提取，可以有效避免虎杖粉末的粘锅糊 化；3、通过酸催化水解反应可大大提高虎杖中白藜芦醇的含量，提高了资源的利用率。4、应用醇沉、活性碳脱色、大孔吸附树脂技术分离纯化白藜芦醇，分离效果理想， 工艺简单。5、采用正相硅胶色谱精制白藜芦醇粗品，获得含量高达98%白藜芦醇纯品。具体实施方法实施例1 取干燥虎杖药材，粉碎，过40目筛，称取三份，每份100g，分别置提取罐1、2、3内。 在1号罐中加入10倍量PH = 10的氢氧化钠水溶液，室温，开启搅拌装置，使达到100转/ 分钟的转速，提取1小时，过滤提取液，储存，作为储液1 ；在1号罐中加入8倍量室温pH = 10的氢氧化钠水溶液，采用与上次提取相同的条件进行第二次提取，1小时后，关闭电源， 将提取液转移至2号罐，并对2号罐补充3倍量室温pH = 10的氢氧化钠水溶液，密封，开 启搅拌装置，使之按照1号罐的提取条件提取1小时，过滤提取液，储存，作为储液2 ；再将 1号罐第二次提取的药液转移至2号罐后，向1号罐中加入8倍量pH = 10的氢氧化钠水 溶液，按前次提取的条件进行最后一次提取，1小时提取结束，将提取液转移至2号罐，并对 1号罐进行排渣操作，按照上次的条件进行2号罐第二次提取，将其提取所得药液迅速转移 至3号罐，并对3号罐补充3倍量pH = 10的氢氧化钠水溶液，按上述条件进行提取，得储 液3 ；以此类推，2号罐的第三次提取液作为3号罐的第二次提取溶剂进行提取，得储液4 ； 向3号罐中加入8倍量pH = 10的氢氧化钠水溶液，进行第三次提取，得储液5 ；将上述储 液合并，得总提取液，白藜芦醇苷与白藜芦醇提取总量为20. 4mg/g。将粗提物用50%硫酸调节PH= 2，70°C搅拌水解1小时，冷却，静置24小时，过滤，水洗至中性得含有白藜芦醇的 浸膏。将水解得到的白藜芦醇浸膏分散在70%的乙醇中，再取活性炭，用少量70%乙醇浸 泡并加热回流6min，冷却后，一并加入物料中，70%乙醇总加入量为物料的8倍(W/V)。搅 拌1. 5小时，放置24小时，吸滤上部清液，再用6倍70%乙醇洗涤沉淀，离心或吸滤，合并清 液，减压回收乙醇，得浸膏。将上述得到的浸膏水分散，以3BV/h上预处理过的大孔吸附树 脂柱进行吸附分离，先用水洗脱，再以水_乙醇系统梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集 白藜芦醇段洗脱液，减压浓缩除去乙醇，得到白藜芦醇粗品，含量为50.5%。取白藜芦醇粗 品，用少量乙酸乙酯溶解、上样量为硅胶的1/40(W/W)。以石油醚乙酸乙酯(5 1)为洗 脱液，lOmL/min流速进行梯度洗脱，将含有白藜芦醇的馏分合并，浓缩，乙醇重结晶两次，得 白色晶体，即白藜芦醇，经HPLC测定产物纯度为98%，提取率为0. 92%。实施例2:取干燥虎杖药材，粉碎，过40目筛，称取五份，每份100g，分别置提取罐1、2、3、4、 5内。在1号罐中加入8倍量pH = 8的氢氧化钠水溶液，室温，开启搅拌装置，使达到150 转/分钟的转速，提取1. 5小时，过滤提取液，储存，作为储液1 ；在1号罐中加入6倍量室 温PH = 8的氢氧化钠水溶液，采用与上次提取相同的条件进行第二次提取，1. 5小时后，关 闭电源，将提取液转移至2号罐，并对2号罐补充2倍量室温pH = 8的氢氧化钠水溶液，密 封，开启搅拌装置，使之按照1号罐的提取条件进行，提取1. 5小时。过滤提取液，储存，作 为储液2 ；再将1号罐第二次提取的药液转移至2号罐后，向1号罐中加入6倍量pH = 8的 氢氧化钠水溶液，按前次提取的条件进行最后一次提取，1.5小时候提取结束，将提取液转 移至2号罐，并对1号罐进行排渣操作，按照上次的条件进行2号罐第二次提取，将其提取 所得药液迅速转移至3号罐，并对3号罐补充2倍量pH = 8的氢氧化钠水溶液，按上述条 件进行提取，得储液3 ；以此类推，4号罐的第三次提取液作为5号罐的第二次提取溶剂进行 提取，得储液6 ；向5号罐中加入6倍量pH = 8的氢氧化钠水溶液，进行第三次提取，得储 液7 ；将上述储液合并，得总提取液，白藜芦醇苷与白藜芦醇提取总量为18. 6mg/g。将粗提 物用50%硫酸调节pH = 4，60°C搅拌水解2小时，冷却，静置24小时，过滤，水洗至中性得 含有白藜芦醇的浸膏。将水解得到的白藜芦醇浸膏分散在80%的乙醇中，再取活性炭，用 少量80%乙醇浸泡并加热回流5min，冷却后，一并加入物料中，80%乙醇总加入量为物料 的6倍(W/V)。搅拌2小时，放置24小时，吸滤上部清液，再用4倍80 %乙醇洗涤沉淀，离 心或吸滤，合并清液，减压回收乙醇，得浸膏。将上述得到的浸膏水分散，以2BV/h上预处理 过的大孔吸附树脂柱进行吸附分离，先用水洗脱，再以水_乙醇系统梯度洗脱，薄层色谱法 跟踪检测，收集白藜芦醇段洗脱液，减压浓缩除去乙醇，得到白藜芦醇粗品，含量为51.2%。 取白藜芦醇粗品，用少量乙酸乙酯溶解、上样量为硅胶的1/40(W/W)。以石油醚乙酸乙酯 (6 1)为洗脱液，lOmL/min流速进行梯度洗脱，将含有白藜芦醇的馏分合并，浓缩，乙醇重 结晶两次，得白色晶体，即白藜芦醇，经HPLC测定产物纯度为98%，提取率为0. 89%。
权利要求
一种动态逆流提取虎杖中白藜芦醇的工艺，其特征在于它包括以下步骤(1)、动态逆流提取取干燥虎杖，粉碎，过40目筛，称取3-7等份，以3-7只提取罐为一组，将等份的虎杖分别放入3-7只提取罐，每罐依次常温下循环提取3次，每次提取时间均为0.5-2小时，动态提取的搅拌频率为20-200转/分钟，第一提取罐第一次提取加入6-10倍量pH为8-12的碱性水提取液，第二次及第三次提取分别加入3-6倍量水，将第一提取罐第一次提取的药液过滤后放入储液罐备用，第二次提取的药液作为第二提取罐第一次提取的溶剂，提取后将药液过滤备用，第三次提取的药液作为第二提取罐第二次提取的溶剂，提取所得药液作为第三提取罐第一次的提取溶剂，即每只提取罐第N次提取所加溶剂均为上一提取罐第N+1次的提取液，第二提取罐、第三提取罐、第N提取罐的第一次提取在加入上一提取罐药液的基础上分别补充1-3倍量碱性水提取液，收集每个提取罐的第一次提取的药液；(2)、将所得提取液在pH 2-5、50℃-100℃的条件下，水解1-5小时，反应后，冷却，备用；(3)、将水解产物分散于5-10倍重量的50％-100％乙醇中，加0.5-1倍重量的活性碳加热回流搅拌1-2小时，静置，冷却，取上清液，浓缩得浸膏；(4)、将上述步骤处理得到的浸膏加水分散，过滤，取滤液，按流速为1-4BV/h上已预处理好的大孔吸附树脂，以1-6倍柱床体积的蒸馏水洗脱，流速为1-4BV/h，弃去水洗脱液，再以1-6倍柱床体积的60％-100％乙醇按1-4BV/h的速度洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并浓缩至稠膏，干燥，得干浸膏，为白藜芦醇粗品；(5)、将上步收集到的白藜芦醇粗品，用硅胶柱色谱分离纯化，混合溶剂梯度洗脱，再用乙醇重结晶2次得到白色结晶状白藜芦醇。
全文摘要
一种利用动态逆流提取虎杖中白藜芦醇的工艺。它是将虎杖干料粉碎，加入一定的碱性水溶剂，采用罐组式动态逆流方式进行提取，提取液酸水解将白藜芦醇苷转化为白藜芦醇，将水解产物一次用醇沉、活性炭脱色的方法出去部分杂质；再用大孔吸附树脂进行纯化，最后用硅胶柱色谱及重结晶精制，可得98％的白藜芦醇产品。本发明制得的白藜芦醇的收率为0.92％，并且可使提取溶剂用量至少减少45％，相应的节约热能约60％，提取率提高20％。
文档编号C07C39/21GK101811939SQ20101016660
公开日2010年8月25日 申请日期2010年5月7日 优先权日2010年5月7日
发明者刘立鼎, 朱亦凡, 聂韡, 金晓春 申请人:南昌京林生物科技有限公司