专利名称：人类乳头瘤病毒(hpv)衣壳蛋白l1多肽及其制备与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种多肽，具体地说是一种人类乳头瘤病毒(HPV)衣壳蛋白Ll多肽及 其制备与应用。
背景技术：
宫颈癌是一种严重影响妇女健康的疾病。全球范围内，宫颈癌是第二大妇女 常见肿瘤，在一些发展中国家甚至居于首位，每年新发病例接近50万(Valdespino VM, Valdespino VE. . Curr Op in Obstet Gynecol，2006，18 :35_40·)。近年来，人类乳头瘤病 毒(HPV)感染被认为是宫颈癌发生的主要病因。Warlboomers等在1999年对22个国家的 1035例宫颈癌标本的研究发现，人乳头瘤病毒(Human papillomavirus, HPV)的检出率为 99.7%。从1933年第一例人乳头瘤病毒(HPV)被发现，到目前已确定的人类乳头瘤病毒亚 型已有200余种。按致病力的高低分为高危型和低位型，高危型包括HPV16，18，31，33，35， 39，45，51，52，56，58，59，63，78，82等，主要与宫颈鳞状上皮内不典型增生以及宫颈癌的发 生有关；低危型包括朋￥6，11，40，42，44，54，61，70，72，81等，主要与生殖道疣状物的发生 有关。有研究表明，感染了高危型HPV的女性发展为宫颈上皮内瘤变(CIN)或宫颈癌的风 险高出了 HPV 阴性的女性 100 倍(von Knebel DM. Eur J Cancer 2002 ；38 2229~42)。HPV 感染是宫颈上皮内瘤变(CIN)发生发展的必要因素，但流行病学的调查表明，CINI和CINII 进展为CINIII或宫颈癌的几率是9%和22%。大部分的CINI和CINII的病人会自动恢复， 而机体对HPV病毒的清除是病变消退的主要原因。随着巴氏涂片、液基细胞学等检查的普 及，大大提高了宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌的检出率。但也常导致过度治疗和相关并 发症，加重病人心理和经济负担，临床亟需新的检测手段分流低危和高危病人。近年来人们 发现了一些与宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌发生发展有关的标志物，如P16、Ki67、HPVLl 等。其中HPVLl蛋白占HPV表面蛋白的90%以上，被认为是机体识别并清除病毒的主要靶 点。大量研究表明，随着宫颈鳞状上皮内病变(SIL)的进展，病变组织HPV-Ll衣壳蛋白表 达呈现下降的趋势。人类乳头瘤病毒(HPV)为不全封闭式病毒，成熟HPV病毒由环状双链DNA核心及 蛋白衣壳组成，无包膜结构。HPV病毒基因组主要分为3个区①早期基因区(Early，E区)， 编码与病毒转录、翻译和与细胞转化有关的蛋白。②晚期基因区(Late，L区)，包括L1、L2 基因，分别编码病毒的衣壳蛋白Li、L2。③非编码的上游调节区(URR)，含有调节病毒DNA 复制及转录的增强子、沉默子等。HPV病毒衣壳呈对称的二十面体，直径50-55nm。Ll蛋白 为HPV病毒的主要结构蛋白，L2蛋白为次要结构蛋白。每个病毒含72个由Li、L2组成的 壳蛋白单位，而每个壳蛋白单位由5个位于外围的Ll蛋白和一个位于中心的L2蛋白构成。 Ll蛋白分子量约55KDa，在不同HPV型别中高度保守，是主要的属特异性抗原。HPV病毒感染宿主以后，常经过一个无症状的潜伏期。此后，因病毒自身致病性的 高低和宿主免疫状态的不同，病毒或者继续潜伏，或者开始复制。HPV病毒在感染人体细胞 后有两种复制方式一种为将HPV病毒DNA整合到宿主细胞DNA的固定复制方式，另一种则以病毒DNA宿主细胞核内的寄生性的流动式的复制方式。一般而言，HPV引起良性或癌前 病变早期病毒基因组DNA是以游离的形式存在，而HPV基因组整合入宿主染色体是其致癌 的重要标志。近年来大量研究表明，HPV病毒蛋白Ll的表达能反映宫颈鳞状上皮内病变 (SIL)的预后及进展，Ll蛋白的表达与宫颈鳞状上皮内病变的程度以及预后呈负相关。 Heejeong Lee ^RM, ^^M^MX^&^M7^. (low squamous intraepithelial lesion, LSIL)患者HPV Ll蛋白的表达的几率，明显高于宫颈高鳞状上皮内病变(high squamous intraepithelial lesion,HSIL)和宫颈癌(分别为 75. 8%，40%，40% )，且感染了低危型 HPV患者的细胞涂片Ll蛋白的阳性率高于感染了高危型患者的细胞涂片(分别为88. 9%， 70. 8 % ) (Heejeong Lee, M. D. , Kyung-Ji Lee, M. D. , Chan-Kwon Jung, Μ. D. Diagnostic Cytopathology, 2008, 36 (12) :864_867)。Melsheimer 等的研究也发现，HSIL 患者 HPV Ll 蛋白的表达水平与LSI患者比较显著下降(Melsheimer P, Kaul S, Dobeck S, et al. Acta Cytologica，2003，47 124-128.)。Griesser在一项前瞻性研究中发现(平均随访时间22. 8 个月，随访其细胞学涂片或锥切组织病理结果)，84例伴hrHPV感染的轻到中度宫颈上皮不 典型增生病例中，HPV Ll蛋白阳性者只有31%进展为CIN II (cervical intraepithelial neoplasia II，II度宫颈上皮内瘤变)或CIN III ；而HPV Ll蛋白表达阴性者中，76. 4%进 展为CIN II，CIN III，或微侵癌，提示在低到中度不典型鳞状上皮病变中，HPVLl蛋白阴性 病例比阳性病例更倾向于进展(Griesser H, Sander H, Hilfrich R, et al. Anal Quant Cytol Histol，2004，26 (5) :241_245.)。D. Rauber 等在对 279 例感染了 hrHPV 且经细胞 学和组织学证实为CINI和CINII的病人随访了 25个月后发现HPVL1阳性的病人49. % 恢复，41. 5%的病人病情呈保持状态，只有9. 4%的病人进展；而在HPVLl阴性的病例中 恢复、保持现状和进展的比例分别是33. 3 %、40. 7 %、25. 9 % (D. Rauber，G. Mehlhorn, P. A.Fasching, M. W. Beckmann, S. Ackermann.European Journal of Obstetrics & Gynecology andReproductive Biology 140(2008)258—262)。 Tomomi Yoshida ^RMM HPV Ll衣壳蛋白与P16联合应用，可使CIN患者预后的预测更为准确，他将Ll (_)/pl6(+) 定义为高危型，Ll(+)/pl6(+)定义为中间型，Ll(+)/pl6(-)定义为低危型，Ll(-)/pl6(_) 定义为低危型或无CIN证据型。以上研究强烈提示，HPVLl蛋白可作为判断CINI或CINII病 人予页后的标志物(Yoshida T, Sano T, Yoshida T, Sano T, Kanuma T, Owada N, et al. Cancer Cytopathology 2008; 114 (2) :83_88)。宫颈组织HPV Ll蛋白表达预测癌前病变进展的机制①HPV衣壳蛋白Ll是公认的机体免疫系统对HPV进行攻击的主要靶点，而当 HPVLl蛋白表达下降或不表达时，病毒可逃避机体的免疫攻击和清除(免疫逃逸)，导致持 续感染，从而病变持续或进展为癌；②研究发现，随着SIL的进展，病毒基因组整合入宿主基因组的比例显著增加。 在CINI及CINII中只有5-15%的HPVDNA与宿主DNA整合，而在CINIII中这一比例高达 50% -94%，在基因整合过程中，HPV Ll基因与其启动子可能被分隔或是HPV Ll基因被破 坏，从而导致HPV Ll基因的转录翻译受阻，Ll蛋白表达减少，因此，病毒基因整合可能是导 致Ll蛋白表达的原因，换言之，HPVLl蛋白表达下降可能提示病毒基因组的整合增加，而后 者与SIL的进展密切相关；
③也有文献指出HPV Ll基因水平的甲基化修饰与宫颈病变有关。Turan发现在 宫颈鳞癌中HPV-18L1基因甲基化水平显著高于正常宫颈细胞中HPV-18L1基因甲基化水 平，推断HPV-18L1基因的甲基化可能是导致Ll蛋白表达下降的原因(Turan T5Kalantari M, Calleja-Macias IE, et al. Virology, 2006 ；349 175-183. Turan T, Kalantari M, Cuschieri K, et al. Virology，2007，361 185-193.)。Kalantari M 等也有类似的发 M (Kalantari M, Calleja-Macias IE, Tewari D, et al. J Virol Dec,2004,78 (23) 12762-12772.)。综上所述，HPVLl阳性可以作为CINI或CINII病人预后较好的一个指标，单独检 测HPV Ll蛋白或者与其它筛查抗体联合检测可作为预测HPV相关SIL病变临床转归的新 手段，从而为临床对HPV感染患者进行分流提供实验室依据。
发明内容
本发明的目的是提供一条高度保守的人类乳头瘤病毒衣壳蛋白Ll多肽，以及该 多肽的制备和应用。本发明提供的人类乳头瘤病毒(HPV)衣壳蛋白Ll多肽，由含N端--Cys Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Thr Tyr lie His-—C端所示的氨基酸序列组成；进一步由含N 端一Cys Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Thr Tyr lie His—C 端所示的氨基酸序列组 成，且长度小于50个氨基酸；再进一步，多肽的氨基酸序列为N端一Cys Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Thr Tyr lie His—C 端所示；或者是由 N 端一Cys Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Thr Tyr lie His—C端所示的氨基酸序列取代、缺失或叠加一个或多个氨基酸所 组成。本发明是通过对18种低危和高危HPV亚型(6，11，16，18，52，58等)的Ll蛋白表 位预测和多序列比对，筛选出的一条非常保守且位于蛋白质表面，长度为12个氨基酸，序 列为 N端一Cys Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Thr Tyr lie His—C端的多肽，以其诱 导产生的抗体可以与多型别HPVLl反应，可用于多种型别HPVLl的检测，尤其是在人类宫颈 癌癌前病变检测中的应用，针对这一肽段的抗体还可用于多型别HPVLl的纯化、制备。本发明提供的上述人类乳头瘤病毒外衣壳蛋白Ll多肽，具体可应用于以下几个 方面以所述人类乳头瘤病毒外衣壳蛋白Ll多肽为作为诱导物，诱导制备多克隆抗血 清或单克隆抗体。多克隆抗血清或单克隆抗体可用于各型HPV及HPVLl的检测。以所述的人类乳头瘤病毒外壳蛋白Ll多肽的氨基酸序列进行变换后，或者功能 肽段为本氨基酸序列，或者功能肽段为进行变换后的序列为诱导物，诱导制备多克隆抗血 清或单克隆抗体。克隆抗血清或单克隆抗体可用于各型HPV及HPVLl的检测。以所述的人类乳头瘤病毒衣壳蛋白Ll多肽为基本结构单元，以连接短肽或氨基 酸连接，形成具有多个重复结构的蛋白或长肽，再将此蛋白或长肽作为诱导物，诱导制备多 克隆抗血清或单克隆抗体。多克隆抗血清或单克隆抗体可用于各型HPV及HPVLl的检测。以所述的人类乳头瘤病毒衣壳蛋白Ll多肽与具有佐剂效应的蛋白相连接，再将 此连接后的蛋白作为诱导物，诱导制备多克隆抗血清或单克隆抗体，用于各型HPV及HPVLl的检测。以所述的人类乳头瘤病毒衣壳蛋白Ll多肽与化学佐剂或生物佐剂混合后，再将 此混合物作为诱导物，诱导制备多克隆抗血清或单克隆抗体。多克隆抗血清或单克隆抗体 可用于各型HPV及HPVLl的检测。以上述的诱导物所诱导制备的多克隆血清或单克隆抗体用以多型别人类乳头瘤 病毒或HPVLl的检测、分离、纯化，用于各型HPV及HPVLl的检测。以所述的人类乳头瘤病毒衣壳蛋白Ll多肽作为被检测物，制备用于检测多型别 HPV感染患者血清、体液、组织中的抗HPVLl蛋白抗体，或者经HPVLl蛋白免疫的哺乳类或非 哺乳类动物免疫血清、体液、组织中的抗HPVLl蛋白抗体的诊断试剂。
图1显示的是免疫细胞化学检测多肽抗血清结果图；图2显示的是免疫组织化学检测多肽抗血清结果图；图3显示的是Western blot检测多肽抗血清结果图；图4显示的是中和实验检测多肽抗血清结果图。图5显示的是中和实验检测多肽抗血清结果图。 图6是细胞学在宫颈癌防治中的应用示意图。在图1中，图1-A、a为宫颈腺癌Hela细胞株，图2_B、b为宫颈鳞癌Siha细胞株。 图1_A、B为以多肽抗血清为抗体，图l-a、b为以阴性对照组兔血清为抗体。Ll蛋白主要在 细胞核中表达，细胞浆中少量表达。由图1可以看出多肽抗血清能和宫颈癌细胞株HeLa和 SiH中的Ll蛋白结合，而对照组则不能。在图2中，图2-A、a为尖锐湿疣图片，图2_A、b为CINII-III图片，图2_C、c为 CINI图片，图2-D、d为HPV(+)宫颈炎图片，图2-E为HPV(-)的宫颈炎图片。图2_A、B、C、 D、E为以多肽抗血清为抗体，图2-a、b、c、d为以阴性对照组兔血清为抗体。Ll蛋白主要在 细胞核中表达，细胞浆中少量表达。由图2可以看出多肽抗血清能和尖锐湿疣、CIN以及宫 颈炎中的Ll蛋白结合，而对照组则不能，HPV阴性的宫颈炎也不能。在图3中，HPVLl蛋白分子量在55Kd左右，图3显示多肽抗血清能与siha和hela 细胞中的Ll蛋白结合，在50+Kd处出现条带。在图4中，图4-A、a为宫颈腺癌细胞株Hela，图4_B、b为宫颈鳞癌细胞株Siha。 图4A、B为以多肽抗血清与无关多肽的混合物为抗体，图4a、b为以多肽抗血清与本发明说 提供的多肽为抗体。在图5中，图5_A、a为尖锐湿疣图片，5_B、b为CINI图片，5_C、c为CINII-III图 片，5-D、d为HPV (+)宫颈炎图片，图5中A、B、C、D为以多肽抗血清与无关多肽的混合物为 抗体，图5中a、b、c、d为以多肽抗血清与本发明提供的多肽为抗体。由此看出，本发明所 提供的多肽能有效的中和抗血清中的抗体，而无关多肽却不能。
具体实施例方式以下结合附图对本发明做进一步的详细说明，所述的实施例用于描述本发明，而 不是限制本发明。
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实施例一1、18种低危和高危HPV亚型保守抗原表位的筛选和肽段合成通过计算机模拟，采用多种B细胞表位预测软件(如antigenic，ν6. 0. 1)进行18 种HPV亚型(6，11，16，18，52，58等)的Ll蛋白表位预测和多序列比对，并用naccess程 序计算相应氨基酸残基的液相可及面积，我们筛选一条非常保守且位于蛋白质表面的肽段 (N—Cys Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Thr Tyr lie His—C)，并且委托北京赛百盛生 物科技公司合成了该肽段及该肽段的交联物(Cys Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Thr Tyr lie His—KLH)，纯度> 90%。2、抗血清的制备初次免疫实验组将弗氏完全佐剂与合成的免疫原Cys Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Thr Tyr lie His-KLH蛋白等量混合，磁力搅拌器上搅拌30min。混合均勻后免疫家兔， 每只家兔免疫0.5ml的200ug/ml抗原。2周后用弗氏不完全佐剂与免疫原等量混合，充分 乳化后进行家兔免疫(操作同前)。后间隔2周免疫一次，总共免疫4次，在第四次免疫后 2周从颈动脉置管收集血清，加等量甘油，充分混勻后分装。实施实例二抗多肽抗血清对被HPV病毒感染细胞反应性的免疫细胞化学检测将处于对数生 长期的HeLa(感染了 HPV18的宫颈腺癌细胞株)、Siha(感染了 HPV16的宫颈鳞癌细胞株) 细胞用胰酶消化后，将细胞悬液接种在置于24孔板中的盖玻片上，C02孵箱、37°C过夜培 养，当细胞覆盖玻片约70%时用4%多聚甲醛固定15min，PBS洗5minX3次，3% H2O2消除 内源性过氧化物酶30min，PBS5minX 3次，0. 1% Triton打孔15min, PBS5minX 3次，用山 羊血清封闭液封闭30min，加入1 500稀释的家兔血清4°C过夜，PBS洗5minX3次，再滴 加山羊抗兔二抗工作液15min，PBS洗5min X 3次，加入辣根标记链酶卵白素工作液，PBS洗 5minX3次，DAB显色3min，自来水终止反应，苏木苏复染5min，后经脱水透明后封片。图1_A、B为以多肽抗血清为抗体，图l_a、b为以阴性对照组兔血清为抗体。Ll蛋 白主要在细胞核中表达，细胞浆中少量表达。由图1可以看出多肽抗血清能和宫颈癌细胞 株HeLa和SiH中的Ll蛋白结合，而对照组则不能。实施实例三抗多肽抗血清对HPV阳性的临床标本反应性的免疫组化检测经临床病理科鉴定 为尖锐湿疣、CIN、宫颈炎且HPV感染阳性的组织标本经10%甲醛固定、石蜡包埋、切片、脱 蜡水化后，再用0. 01mol/lpH6. 0柠檬酸盐缓冲液100°C修复20min，自然冷却至室温后PBS 洗5minX 3次，3% H2O2消除内源性过氧化物酶30min，PBS5minX 3次，用山羊血清封闭液封 闭30min，加入1 500稀释的家兔血清4°C过夜，PBS洗5minX 3次，再滴加山羊抗兔二抗 工作液15min，PBS洗5min X 3次，加入辣根标记链酶卵白素工作液，PBS洗5minX3次，DAB 显色3min，自来水终止反应，苏木苏复染5min，后经脱水透明后封片。图2_A、B、C、D、E为以多肽抗血清为抗体，图2-a、b、c、d为以阴性对照组兔血清为 抗体。Ll蛋白主要在细胞核中表达，细胞浆中少量表达。由图2可以看出多肽抗血清能和 尖锐湿疣、CIN以及宫颈炎中的Ll蛋白结合，而对照组则不能，HPV阴性的宫颈炎也不能。实施实例4抗多肽抗血清对被HPV病毒感染细胞反应性的Western Blot检测
A、细胞蛋白的提取用BCA总蛋白提取试剂盒提取细胞总蛋白。将Siha (感染了 HPV16的宫颈鳞癌细胞株)和Hela(感染了 HPV18的宫颈腺癌细胞株)细胞用刮匙刮下后 500g4°C离心 2min，PBS 洗两次，加入 RIPA 200ul、cocktail8ul、PMSF2ul、2ul 蛋白酶抑制 剂，振荡15s，冰上静置10min，15000g4°C离心lOmin，洗取上清即为总蛋白。用BCA蛋白定 量试剂盒测定蛋白浓度，按IOOug/管分装后存放于-80°C冰箱备用。B、用12%的聚丙烯酰胺凝胶进行SDS-PAGE电泳，每孔上样lOOug，120V, 1. 5h，转 移至醋酸纤维膜上后，5%脱脂奶粉振荡封闭lh，用5%脱脂奶粉按1 800稀释抗血清4°C 过夜，TBST洗膜5minX3次，再用5%脱脂奶粉按1 5000稀释的HRP标记山羊抗兔IgG 抗体振荡作用lh，TBST洗膜5min X 3次，加入化学发光剂显色5min，BioRed化学发光仪下 显色。HPVLl蛋白分子量在55Kd左右，图3显示多肽抗血清能与siha和hela细胞中的 Ll蛋白结合，在50+Kd处出现条带。实施实例五合成多肽特异性封闭抗多肽抗血清对HPV病毒感染细胞的免疫反应性的免疫细 胞化学检测将处于对数生长期的Hela、Siha和H8细胞用胰酶消化后，将细胞悬液接种在 置于24孔板中的盖玻片上，C02孵箱、37°C过夜培养，当细胞覆盖玻片约70%时用4%多聚 甲醛固定15min，PBS洗5minX3次，3%H202消除内源性过氧化物酶30min，PBS5minX3 次，0. 1% Triton打孔15min，PBS5minX 3次，用山羊血清封闭液封闭30min，加入1 500 稀释的家兔血清及10ug/ml的本发明提供的多肽(N端-—Cys Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Thr Tyr lie His-—C端)或无关多肽的混合物，4°C过夜，PBS洗5minX 3次，再滴加 山羊抗兔二抗工作液15min，PBS洗5min X 3次，加入辣根标记链酶卵白素工作液，PBS洗 5minX3次，DAB显色3min，自来水终止反应，苏木苏复染5min，后经脱水透明后封片。图4中A、B，图5中A、B、C、D、E为以多肽抗血清与无关多肽的混合物为抗体，图4 中a、b，图5中a、b、c、d、e为以多肽抗血清与本发明提供的多肽为抗体。由此看出，本发 明所提供的多肽能有效地中和抗血清中的抗体，而无关多肽却不能。
权利要求
一种人类乳头瘤病毒(HPV)衣壳蛋白L1多肽，其特征是由含N端 Cys Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Thr Tyr Ile His C端所示的氨基酸序列组成。
2.如权利要求1所述的人类乳头瘤病毒衣壳蛋白Ll多肽，其特征是由含N端一Cys Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Thr Tyr lie His-—C端所示的氨基酸序列组成，且肽段的 长度小于50个氨基酸。
3.如权利要求1或2所述的人类乳头瘤病毒衣壳蛋白Ll多肽，其特征是由含 N 端一Cys Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Thr Tyr lie His—C 端所示的氨 基酸序列取代、缺失或叠加一个或多个氨基酸所组成。
4.权利要求1或2或3所述人类乳头瘤病毒衣壳蛋白Ll多肽制备，其特征是通过对 18种低危型和高危型HPV亚型的Ll蛋白表位预测和多序列比对，筛选出的一条保守且位于 蛋白质表面，长度为12个氨基酸，序列为N端-—CysThr Leu Thr Ala Asp Val Met Thr Tyr lie His-—C 端的多肽。
5.权利要求1或2或3所述人类乳头瘤病毒衣壳蛋白Ll多肽的应用，其特征是以所 述的肽段作为诱导物，所诱导制备的多克隆抗血清或单克隆抗体。
6.权利要求1或2或3所述的人类乳头瘤病毒外壳蛋白Ll多肽的应用，其特征是以 所述的肽段为基本结构单元，以连接多肽连接，形成具有多个重复结构的蛋白或长肽，再将 此蛋白或长肽作为诱导物，所诱导制备的多克隆抗血清或单克隆抗体。
7.权利要求1或2或3所述的人类乳头瘤病毒外壳蛋白Ll多肽的应用，其特征是以 所述的多肽与具有佐剂效应的蛋白相连接，再将此连接后的蛋白作为诱导物，所诱导制备 的多克隆抗血清或单克隆抗体。
8.权利要求1或2或3所述的人类乳头瘤病毒外壳蛋白Ll多肽的应用，其特征是以 所述的多肽与化学合成佐剂或生物佐剂混合后，再将此混合物作为诱导物，所诱导制备的 多克隆抗血清或单克隆抗体。
9.权利要求1或2或3所述的人类乳头瘤病毒衣壳蛋白Ll多肽的应用，其特征是以 多肽作为被检测物，制备用于检测多型别HPV感染患者血清、体液、组织中的抗HPVLl蛋白 抗体，或者制备用于检测经HPVLl蛋白免疫的哺乳类或非哺乳类动物免疫血清、体液、组织 中的抗HPVLl蛋白抗体的试剂。
10.权利要求5或6或7或8所述多克隆抗体或单克隆抗体的应用，其特征是制备用 于多型别人HPV或HPVLl的检测、分离、纯化的试剂。
全文摘要
本发明涉及一种人类乳头瘤病毒衣壳蛋白L1(HPVL1)多肽及其制备与应用。该人类乳头瘤病毒衣壳蛋白L1多肽，氨基酸序列为N端---Cys Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Thr Tyr Ile His---C端的肽段，或者是包含这一氨基酸序列且长度小于50个氨基酸的肽段。本发明是通过对18种低危型和高危型HPV亚型(6，11，16，18，52，58等)的L1蛋白表位预测和多序列比对，筛选出的一条非常保守且位于蛋白质表面的肽段，诱导产生的抗体可以与多型别HPVL1反应，可用于多种型别HPVL1的检测，尤其是在人类宫颈癌癌前病变检测中的应用，针对这一肽段的抗体还可用于多型别HPVL1的纯化、制备。另外，本发明还提供这一肽段作为多种型别HPV抗血清和单克隆抗体被检测物的应用。
文档编号C07K16/06GK101914139SQ20101022881
公开日2010年12月15日 申请日期2010年7月16日 优先权日2010年7月16日
发明者刘宝, 张 林, 林勇, 王霞, 甘晓玲, 胡丽娜, 陈恒禧 申请人:四川大学