专利名称：一种六驳碱的提取方法
技术领域：
本发明属于天然植物提取领域，涉及一种六驳碱的提取方法，尤其是一种采用超 临界流体萃取和氧化铝柱层析纯化六驳碱的方法。
背景技术：
六驳碱(Laurotetanine)，又名樟苍碱，山鸡椒痉挛碱；是一种阿朴啡生物碱。分子式=C19H21NO4；分子量327. 38。理化性质淡棕色结晶，mp.(丙酮)，[a]32/D+125° (氯仿)；[a]22/ D+100。(c = 0.12，乙醇)。六驳碱在樟科木姜子属植物山鸡椒(Litsea cubeba(Lour. )Pers)及山胡椒属植 物狭叶山胡椒(Lindera angustifolia Cheng)。药理研究表明其具有抗肿瘤协同作用，能 提高秋水仙碱的抗有丝分裂的作用；抗血小板聚集作用，在100 μ g/mL时，对ADP诱导的兔 血小板聚集呈强的抑制作用；降压作用，本品在1.0mg/kg时，对正常血压的大鼠产生降血 压作用，平均降低四.0%，并持续2分钟；松弛血管作用。在本品100 μ g/mL时，强力抑制 大鼠由高K+(80mM)和去甲肾上腺素(3μΜ)引起的主动脉收缩。六驳碱的提取方法有DMasao等人采用乙醇提取，再用3 %醋酸提取，浓缩至一定体积放置一夜过滤， 绿叶用氯仿提取，提取后酸性母液用氢氧化铵中和至析出固体，用氯仿提取出来，提取液再 用2%氢氧化钠溶液振摇提取，其中的氢氧化钠提取液加入碳酸铵至析出结晶，再用氯仿提 取，用无水碳酸钾干燥得到残渣，残渣的丙酮溶液加入苦酮酸盐得红色结晶，该方法操作繁 琐，反复酸碱反应、重结晶，过程中目标产物损失大。2)中国专利(申请号200710040166. 6)，用乙醇提取，乙醇提取物用正丁醇萃取， 正丁醇萃取部分用硅胶柱粗分一次，得六驳碱混合物，再用高速逆流色谱法制备高纯度六 驳碱，该方法虽较方法1)分离条件温和，但制备量非常小，成本较高。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种六驳碱的提取方法。该工艺能降低生产成 本，提高得率。本发明提取技术方案如下一种六驳碱的提取方法，其特征在于包含以下步骤a.超临界CO2萃取将富含六驳碱的药材粉碎40-80目，投入萃取釜中，加温装置 正常工作后，打开压缩泵加压到22. 5-36. 8MPa，萃取温度30-60°C，泵入液体(X)2和夹带剂， 保持上述压力和温度0. 5-3小时，分离釜在压力6. 8-14. 7MPa，温度40_60°C下减压解析分 离，收集提取物；b.离子交换将上述提取物加入阳离子交换树脂，2-8%氨水洗脱，下注液浓缩干 燥；
c.柱层析纯化将上述干燥物用少量氯仿溶解，加入氧化铝层析柱，二氯甲烷-甲 醇混合溶剂洗脱，收集六驳碱高含量洗脱部分，回收试剂至开始析晶，于低温条件下静置养 晶，过滤，干燥即得产品。步骤a.中所述CO2流量控制为沈_33kg/h，夹带剂为乙醇或甲醇，用量2-5%。步骤b.中所述阳离子交换树脂为强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂001X8、大孔 弱酸丙烯酸系阳离子交换树脂D152、弱酸阳离子交换树脂7M或732。步骤c.中所述氧化铝为100-200目的碱性氧化铝，梯度洗脱为2-4BV甲醇 —4-6BV 二氯甲烷-甲醇(1 1)混合溶液一3-8BV 二氯甲烷-甲醇(1 9)混合溶液。步骤c.中所述养晶条件温度4-10°C，养晶时间为16-4他。综上所述，本发明采用超临界(X)2萃取，提取率高，生产安全；氧化铝柱层析上样量 大，洗脱效果好，产品纯度高。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求的保护的范围并不局 限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例1 取80目豆豉姜Ikg置于萃取釜，密封，将提取温度调至45°C，分离塔温度调至 55°C，提取压力28. 3Mpa，解析压力为7. 5Mpa, CO2气体从钢瓶放出，经过气体净化器后在液 化罐中，液化，进入储罐用高压计量泵将CO2送入净化器，通过预热器到指定温度和压力， 流速30kg/h，打开调压阀，通过调压阀控制上述参数，动态提取2. 5小时。停机后放出萃取 物，收集萃取物88g，加入001 X 8强酸性阳离子交换树脂柱，3%氨水洗脱，收集下注液减压 浓缩成浸膏，加入氯仿溶解，滤液泵入氧化铝柱，先用3BV甲醇溶液洗脱杂质，再用二氯甲 烷-甲醇(1 1)、二氯甲烷-甲醇(1 9)洗脱，高液相检测，收集高浓度流分，回收试剂至 开始析晶，放置在5°C环境中养晶18h，滤除结晶物，低温干燥得六驳碱1. 3g，含量97. 5%。实施例2 取40目狭叶山胡椒根Ikg置于萃取釜，密封，将提取温度调至47°C，分离塔温度调 至59°C，提取压力26. 4Mpa,解析压力为9Mpa，CO2气体从钢瓶放出，经过气体净化器后在液 化罐中，液化，进入储罐用高压计量泵将(X)2送入净化器，通过预热器到指定温度和压力，流 速观！^/!!，打开调压阀，通过调压阀控制上述参数，动态提取2小时。停机后放出萃取物， 收集萃取物90g，加入D152大孔弱酸性阳离子交换树脂柱，2 %氨水洗脱，收集下注液减压 浓缩成浸膏，加入氯仿溶解，滤液泵入氧化铝柱，先用2BV甲醇溶液洗脱杂质，再用二氯甲 烷-甲醇(1 1)、二氯甲烷-甲醇(1 9)洗脱，高液相检测，收集高浓度流分，回收试剂至 开始析晶，放置在4°C环境中养晶20h，滤除结晶物，低温干燥得六驳碱1. 2g，含量98. 7%。实施例3 取60目豆豉姜5kg置于萃取釜，密封，将提取温度调至55°C，分离塔温度调至 600C，提取压力35. 5Mpa,解析压力为10. IMpa, CO2气体从钢瓶放出，经过气体净化器后在液 化罐中，液化，进入储罐用高压计量泵将(X)2送入净化器，通过预热器到指定温度和压力，流 速沈！^/!!，打开调压阀，通过调压阀控制上述参数，动态提取1. 5小时。停机后放出萃取物， 收集萃取物450g，加入7M弱酸性阳离子交换树脂柱，5%氨水洗脱，收集下注液减压浓缩成浸膏，加入氯仿溶解，滤液泵入氧化铝柱，先用3BV甲醇溶液洗脱杂质，再用二氯甲烷-甲 醇(1 1)、二氯甲烷-甲醇(1 9)洗脱，高液相检测，收集高浓度流分，回收试剂至开始 析晶，放置在8°C环境中养晶16h，滤除结晶物，低温干燥得六驳碱6. 5g，含量98. 6%。实施例4 取80目狭叶山胡椒根IOkg置于萃取釜，密封，将提取温度调至42V，分离塔温度 调至56°C，提取压力27. 8Mpa，解析压力为12. 7Mpa, CO2气体从钢瓶放出，经过气体净化器 后在液化罐中，液化，进入储罐用高压计量泵将CO2送入净化器，通过预热器到指定温度和 压力，流速32kg/h，打开调压阀，通过调压阀控制上述参数，动态提取2. 0小时。停机后放出 萃取物，收集萃取物920g，加入732弱酸性阳离子交换树脂柱，6%氨水洗脱，收集下注液减 压浓缩成浸膏，加入氯仿溶解，滤液泵入氧化铝柱，先用2BV甲醇溶液洗脱杂质，再用二氯 甲烷-甲醇(1 1)、二氯甲烷-甲醇(1 9)洗脱，高液相检测，收集高浓度流分，回收试剂 至开始析晶，放置在6°C环境中养晶Mh，滤除结晶物，低温干燥得六驳碱12g，含量98. 4%。实施例5 取80目狭叶山胡椒根20kg置于萃取釜，密封，将提取温度调至45°C，分离塔温度 调至55°C，提取压力32. 6Mpa，解析压力为14. 7Mpa, CO2气体从钢瓶放出，经过气体净化器 后在液化罐中，液化，进入储罐用高压计量泵将CO2送入净化器，通过预热器到指定温度和 压力，流速33kg/h，打开调压阀，通过调压阀控制上述参数，动态提取2. 5小时。停机后放出 萃取物，收集萃取物1. cg，加入724弱酸性阳离子交换树脂柱，8%氨水洗脱，收集下注液减 压浓缩成浸膏，加入氯仿溶解，滤液泵入氧化铝柱，先用3BV甲醇溶液洗脱杂质，再用二氯甲 烷-甲醇(1 1)、二氯甲烷-甲醇(1 9)洗脱，高液相检测，收集高浓度流分，回收试剂至 开始析晶，放置在4°C环境中养晶36h，滤除结晶物，低温干燥得六驳碱25g，含量98. 9%。实施例6:取80目豆豉姜30kg置于萃取釜，密封，将提取温度调至45°C，分离塔温度调至 550C，提取压力34. 7Mpa,解析压力为13. 2Mpa, CO2气体从钢瓶放出，经过气体净化器后在液 化罐中，液化，进入储罐用高压计量泵将(X)2送入净化器，通过预热器到指定温度和压力，流 速^kg/h，打开调压阀，通过调压阀控制上述参数，动态提取3小时。停机后放出萃取物，收 集萃取物2. m^g，加入D152大孔弱酸性阳离子交换树脂柱，3%氨水洗脱，收集下注液减压 浓缩成浸膏，加入氯仿溶解，滤液泵入氧化铝柱，先用4BV甲醇溶液洗脱杂质，再用二氯甲 烷-甲醇(1 1)、二氯甲烷-甲醇(1 9)洗脱，高液相检测，收集高浓度流分，回收试剂 至开始析晶，放置在7°C环境中养晶48h，滤除结晶物，低温干燥得六驳碱32g，含量99. 3%。实施例7 取80目豆豉姜20kg置于萃取釜，密封，将提取温度调至41°C，分离塔温度调至 53°C，提取压力33. 3Mpa，解析压力为8. 6Mpa, CO2气体从钢瓶放出，经过气体净化器后在液 化罐中，液化，进入储罐用高压计量泵将(X)2送入净化器，通过预热器到指定温度和压力，流 速31kg/h，打开调压阀，通过调压阀控制上述参数，动态提取2小时。停机后放出萃取物， 收集萃取物1. f5kg，加入001X8强酸性阳离子交换树脂柱，4%氨水洗脱，收集下注液减压 浓缩成浸膏，加入氯仿溶解，滤液泵入氧化铝柱，先用3BV甲醇溶液洗脱杂质，再用二氯甲 烷-甲醇(1 1)、二氯甲烷-甲醇(1 9)洗脱，高液相检测，收集高浓度流分，回收试剂至 开始析晶，放置在10°C环境中养晶30h，滤除结晶物，低温干燥得六驳碱23g，含量99. 1 %。
权利要求
1.一种六驳碱的提取方法，其特征在于包含以下步骤a.超临界CO2萃取将富含六驳碱的药材粉碎40-80目，投入萃取釜中，加温装置正常 工作后，打开压缩泵加压到22. 5-36. 8MPa,萃取温度30-60°C，泵入液体CO2和夹带剂，保持 上述压力和温度0. 5-3小时，分离釜在压力6. 8-14. 7MPa，温度40_60°C下减压解析分离，收 集提取物；b.离子交换将上述提取物加入阳离子交换树脂，2-8%氨水洗脱，下注液浓缩干燥；c.柱层析纯化将上述干燥物用少量氯仿溶解，加入氧化铝层析柱，二氯甲烷-甲醇混 合溶剂洗脱，收集六驳碱高含量洗脱部分，回收试剂至开始析晶，于低温条件下静置养晶， 过滤，干燥即得产品。
2.根据权利要求1所述的六驳碱的提取方法，其特征在于步骤a.所述CO2流量控制为 ^-33kg/h，夹带剂为乙醇或甲醇，用量2-5%。
3.根据权利要求1所述的六驳碱的提取方法，其特征在于步骤b.所述阳离子交换树脂 为强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂001X8、大孔弱酸丙烯酸系阳离子交换树脂D152、弱酸 阳离子交换树脂7M或732。
4.根据权利要求1所述的六驳碱的提取方法，其特征在于步骤c.所述氧化铝为 100-200目的碱性氧化铝，梯度洗脱为2-4BV甲醇一4-6BV 二氯甲烷-甲醇(1 1)混合溶 液一3-8BV 二氯甲烷-甲醇(1 9)混合溶液。
5.根据权利要求1所述的六驳碱的提取方法，其特征在于步骤c.所述养晶条件温度 4-10°C，养晶时间为16-48h。
全文摘要
本发明涉及一种六驳碱的提取方法，方法是以富含六驳碱的狭叶山胡椒根或豆豉姜为原料，粉碎40-80目，以CO2作萃取介质，低碳醇作夹带剂，超临界提取0.5-3小时，解析物加入阳离子交换树脂，氨水洗脱，洗脱液上氧化铝柱层析，二氯甲烷甲醇混合溶剂梯度洗脱，收集高浓度流分浓缩结晶，即得高纯度的六驳碱晶体。本发明具有提取率高、工艺简单、成本低廉等优点。
文档编号C07D221/18GK102040557SQ20101029324
公开日2011年5月4日 申请日期2010年9月27日 优先权日2010年9月27日
发明者刘东锋, 杨成东, 郭琴 申请人:南京泽朗医药科技有限公司