专利名称：一种土贝母苷甲的制备方法
技术领域：
本发明属于中药活性成分分离制备领域，具体而言，本发明涉及一种从土贝母中分离制备土贝母苷甲的方法。
背景技术：
土贝母苷甲(Tubeimoside A)是从葫芦科植物土贝母(Bolbostemma paniculatum)提取分离得到的皂苷，是土贝母的主要有效成分之一。分子式=C63H98O29，分子量1319. 43。经药理试验表明，其具有抗肿瘤、抗病毒、免疫抑制等多种活性。土贝母苷甲在植物中含量较高，魏有良等采用HPLC法测定不同产地土贝母中土贝母苷甲含量，流动相为65%的甲醇，流速1. Oml/min，检测波长214nm ；得到拟野生条件下种植土贝母与市售饮片土贝母中的土贝母苷甲的含量分别为1.776%和1.009%。李晓晶等采用HPLC法研究并建立各产地土贝母药材的指纹图谱(土贝母的HPLC指纹图谱研究.中草药.2007，38 (6) 926-929.)，采用70%乙醇加热回流提取，乙酸乙酯和水饱和正丁醇萃取制备供试品溶液。 目前尚未见有土贝母苷甲制备的专利报道和详细研究，故本发明提供了一种土贝母苷甲的制备方法。
发明内容
本发明旨在提供一种土贝母苷甲的制备方法。该方法避免使用正丁醇，保证了土贝母苷甲的收率和纯度。本发明采用的技术方案如下1)将市售土贝母饮片或新鲜采集的土贝母鳞茎作为原料，选用水、甲醇、乙醇或它们中的两种混合溶剂提取；2)将1)中提取得到的提取物经过聚酰胺柱层析、S^hadex LH-20柱层析、中压氧化铝柱层析的一种或多种方式分离，用水、乙腈、乙醇、二氯甲烷、甲醇、氯仿或它们的至少两种混合物作洗脱剂进行洗脱；3)合并2)中的洗脱液，回收试剂，干燥；4)将3)中所得干燥物用丙酮洗涤多次，干燥即得产品。所述步骤1)中提取溶剂用量为原料量的4-20倍。所述步骤1)中提取是在溶剂浸泡后，采用加热提取、超声提取、渗漉提取中的一种，提取1-3次。 所述步骤2、中聚酰胺柱层析洗脱剂可选60-80 %乙醇水溶液或20-50 %乙腈水溶液。所述步骤幻LH-20柱层析为常压或中压柱层析，洗脱剂可选60-80% 乙醇水溶液或20-50%乙腈水溶液。所述步骤2)中中压氧化铝柱洗脱剂可选二氯甲烷-甲醇或氯仿-甲醇，按 100 1,50 1,20 1、5 1 梯度洗脱。
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本发明的特点在于本发明解决了由于使用正丁醇、硅胶柱层析导致土贝母苷甲的纯度不高、收率低的问题，本发明制备的土贝母苷甲的纯度高于90%，且操作简单，可扩大工业化生产。
具体实施例方式实施例1 土贝母饮片^g，粉碎过20目筛，加15L50%乙醇浸泡5小时后，加50%乙醇至30L 加热回流提取，过滤，药渣再同样回流提取2次，过滤，合并提取液，减压回收乙醇至25L; 将提取液通入预处理好的聚酰胺柱中(8L，20-50目)，先用3BV水洗脱，再用80%乙醇洗脱，减压回收乙醇，浓缩至小体积，得样品。将此样品加200g氧化铝烘干，加入中压氧化铝柱中，先用水洗脱至无色，再依次用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，由高到低，依次按100 1、 50 1,20 1和5 1，分段收集，收集有效成分段，浓缩产生结晶，再用丙酮洗涤多次，冷冻干燥得土贝母苷甲35g，HPLC检测其纯度为90. 9%。实施例2:土贝母饮片^ig,粉碎过20目筛，加32L60%乙醇浸泡3小时后，加60%乙醇至80L 渗漉提取，药渣再同样渗漉提取1次，过滤，合并提取液，减压回收乙醇至40L;将提取液通入预处理好的kphadex LH-20层析柱中(15L，20_50目)，先用3BV水洗脱，再用65%乙醇洗脱，减压回收乙醇，浓缩至小体积，得样品。将此样品加300g氧化铝烘干，加入中压氧化铝柱中，先用水洗脱至无色，再依次用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，由高到低，依次按100 1、 50 1,20 1和5 1，分段收集，收集有效成分段，浓缩产生结晶，再用丙酮洗涤多次，冷冻干燥得土贝母苷甲58g，HPLC检测其纯度为92. 5%。实施例3:土贝母新鲜鳞茎5kg，粉碎过20目筛，加13L60%甲醇浸泡5小时后，加60%甲醇至35L超声提取，每次30min，过滤，药渣再同样超声提取2次，过滤，合并提取液，减压回收甲醇至^L;将提取液通入预处理好的聚酰胺柱中(8L，20-50目)，先用3BV水洗脱， 再用75%乙醇洗脱，减压回收乙醇，浓缩至小体积，得样品。将此样品加200g葡聚糖凝胶 Sephadex LH-20拌样烘干，加入kphadex LH-20层析柱，先用水洗脱，再用23%乙腈洗脱， 收集洗脱液，浓缩产生结晶，再用丙酮洗涤多次，冷冻干燥得土贝母苷甲37g，HPLC检测其纯度为92. 1%0实施例4:土贝母新鲜鳞茎4kg，粉碎过20目筛，加12L70%甲醇浸泡3小时后，加70%甲醇至48L加热回流提取，过滤，药渣再同样回流提取1次，过滤，合并提取液，减压回收甲醇至 15L ；将提取液通入预处理好的kphadex LH-20中压层析柱中(8L，20-50目)，先用3BV水洗脱，再用60%乙醇洗脱，减压回收乙醇，浓缩至小体积，得样品。将此样品加300g氧化铝烘干，加入中压氧化铝柱中，先用水洗脱至无色，再依次用氯仿-甲醇梯度洗脱，由高到低， 依次按100 1,50 1,20 1和5 1，分段收集，收集有效成分段，浓缩产生结晶，再用丙酮洗涤多次，冷冻干燥得土贝母苷甲27g，HPLC检测其纯度为91. 3%。
权利要求
1.一种土贝母苷甲的制备方法，其特征在于包括以下步骤1)将市售土贝母饮片或新鲜采集的土贝母鳞茎作为原料，选用水、甲醇、乙醇或它们中的两种混合溶剂提取；2)将1)中提取得到的提取物经过聚酰胺柱层析、S^hadexLH-20柱层析、中压氧化铝柱层析的一种或多种方式分离，用水、乙腈、乙醇、二氯甲烷、甲醇、氯仿或它们的至少两种混合物作洗脱剂进行洗脱；3)合并2)中的洗脱液，回收试剂，干燥；4)将幻中所得干燥物用丙酮洗涤多次，干燥即得产品。
2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于所述步骤1)中提取溶剂用量为原料量的4-20倍。
3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于所述步骤1)中提取是在溶剂浸泡后， 采用加热提取、超声提取、渗漉提取中的一种，提取1-3次。
4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于所述步骤幻中聚酰胺柱层析洗脱剂可选60-80%乙醇水溶液或20-50%乙腈水溶液。
5.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于所述步骤幻LH-20柱层析为常压或中压柱层析，洗脱剂可选60-80%乙醇水溶液或20-50%乙腈水溶液。
6.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于所述步骤幻中中压氧化铝柱洗脱剂可选二氯甲烷-甲醇或氯仿-甲醇，按100 1,50 1,20 1、5 1梯度洗脱。
全文摘要
本发明提供了一种土贝母苷甲的制备方法，该方法如下将土贝母鳞茎浸泡在适量有机溶剂中，再采用加热、渗漉或超声方法提取，过滤得土贝母提取液，再采用聚酰胺柱层析、Sephadex LH-20柱层析、中压氧化铝柱层析等工艺中的一种或多种工艺，收集洗脱液，洗脱液减压回收试剂，丙酮洗涤多次制备得到土贝母苷甲。本方法制备的土贝母苷甲的纯度高于90％，且简单实用，适于规模化生产。
文档编号C07H1/08GK102180934SQ20111002912
公开日2011年9月14日 申请日期2011年1月24日 优先权日2011年1月24日
发明者刘东锋, 杨成东, 郭琴 申请人:南京泽朗医药科技有限公司