专利名称：一种狗哇花皂苷(Ⅰ)的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种狗哇花皂苷(I )的制备方法，具体涉及ー种应用柱分离以及快速的高液相制备的方法。
背景技术：
阿尔泰狗睡花(Heteropappusaltaicus (Willd. )Novopokr.),又名阿尔泰紫毙，为菊科狗哇花属植物，全草或根入中药，广泛生于草原与草甸草原带，也生于山地、丘陵、路旁、村舍附近，产量极多。阿尔泰狗哇花分布于我国东北、华北、内蒙古、陕西、湖北、四川、甘肃、青海、新疆、西藏等地(区)；蒙古、苏联(西伯利亚及中亚地区)也有分布。全草入药能清热解毒，排脓，润肺降气，化痰止咳，利尿。主治时疫热病，高热头痛，肝胆火旺，胸胁满闷，烦躁易怒，痈疮疖肿，毒蛇咬伤，肺虚咳嗽,咯血,慢性支气管炎,淋病，小便不利,治瘟疫,血热，毒热，瘟病，麻疹不透等症。阿尔泰狗哇花成分主要为精油、黄酮类、三萜皂苷类，主要皂苷成分为阿尔艾狗哇花皂苷(I )，为齐墩果烷型皂苷，具有抗真菌、抗肿瘤和调节免疫活性。到目前为止所采用的阿尔泰狗哇花皂苷的制备方法，有的是对原料用こ醇水溶液热提取，正丁醇萃取，提取出来的杂质较多，不利于狗哇花皂苷(I )単体的分离，有的要经反复硅胶柱层析，既费溶剂又费时间，产率低，成本较高。目前，高效液相制备色谱用于大规模制备高含量的狗哇花皂苷(I)的工作还未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种狗哇花皂苷(I )的制备方法。该方法能实现高纯度狗哇花皂苷(I )的制备。为实现上述目的，本发明采用如下技术方案一种狗哇花皂苷(I )的制备方法，其特征在于包括如下步骤将阿尔泰狗哇花全草粉碎，用こ醇水溶液提取1-4次，毎次O. 5-4h，抽滤，合并滤液，减压浓缩无醇，分散于水中，分散液先通过大孔树脂柱，用水洗至水洗液无色，洗液弃去，再用50-80%こ醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、干燥得粉末，再采用制备型高液相色谱进行分离制备高纯度的狗哇花皂苷(I )，经HPLC测定产品狗哇花皂苷(I )的含量为98%以上。所述こ醇水溶液体积百分比为60-80%，提取方法为微波辅助提取、加热回流提取或超声提取中的一种。所述大孔树脂型号可选AB-8、LSA-21、HPD-400等。本发明的有益效果在干(I)本发明整体エ艺操作简单，可行性强；(2)本发明以制备型高液相为分离手段，可以获得纯度在98%以上的狗哇花皂苷(I )，且单针分离时间短，非常适合大批量的制备，同时制备溶剂可回收利用，可实现批量制备；
(3)本发明在制备高液相色谱前先用大孔树脂除杂，可延长色谱柱的使用寿命。现结合实施例对本发明做进ー步说明，实施例仅限于说明本发明，而非对本发明的限定。
具体实施例方式实施例I :将阿尔泰狗哇花全革粉碎，取1kg，用80%こ醇水溶液加热回流提取4次，每次
0.5h，抽滤，合并滤液，减压浓缩无醇，分散于水中，分散液先通过LSA-21大孔树脂柱，用水洗至水洗液无色，洗液弃去，再用4L60 %こ醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、干燥得粉末，用75 %こ溶解，配成浓度为50mg/ml的溶液，经O. 45 μ m微滤膜过滤，制备型高液相色谱制备 柱以C8键合相为填料，粒径为10 μ m，柱长为15cm、直径为7cm，六通阀进样，进样体积为25ml,以45%的こ腈水溶液为流动相，控制流速为50ml/min，紫外在线检测，收集含有狗哇花皂苷(I )的高纯度流分，浓缩至干即得含量为98. 26%的狗哇花皂苷(I )。实施例2:将阿尔泰狗哇花全草粉碎，取1kg，用70%こ醇水溶液超声提取I次，每次4h，抽滤，合并滤液，减压浓缩无醇，分散于水中，分散液先通过AB-8大孔树脂柱，用水洗至水洗液无色，洗液弃去，再用5L70%こ醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、干燥得粉末，用75%こ溶解，配成浓度为100mg/ml的溶液，经O. 45 μ m微滤膜过滤，制备型高液相色谱制备柱以C18键合相为填料，粒径为20 μ m,柱长为10cm、直径为Icm,六通阀进样，进样体积为5ml,以35%的こ腈水溶液为流动相，控制流速为10ml/min，紫外在线检测，收集含有狗哇花皂苷(I )的高纯度流分，浓缩至干即得含量为98. 89%的狗哇花皂苷(I )。实施例3:将阿尔泰狗哇花全草粉碎，取1kg，用60%こ醇水溶液微波辅助提取3次，每次
1.5h，抽滤，合并滤液，减压浓缩无醇，分散于水中，分散液先通过AB-8大孔树脂柱，用水洗至水洗液无色，洗液弃去，再用5L50%こ醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、干燥得粉末，用75 %こ溶解，配成浓度为80mg/ml的溶液，经O. 45 μ m微滤膜过滤，制备型高液相色谱制备柱以C18键合相为填料，粒径为15 μ m，柱长为50cm、直径为10cm，六通阀进样，进样体积为30ml,以55%的こ腈水溶液为流动相，控制流速为250ml/min，紫外在线检测，收集含有狗哇花皂苷(I )的高纯度流分，浓缩至干即得含量为99. 22%的狗哇花皂苷(I )。实施例4:将阿尔泰狗哇花全草粉碎，取2kg，用75%こ醇水溶液加热回流提取2次，每次2h，抽滤，合并滤液，减压浓缩无醇，分散于水中，分散液先通过AB-8大孔树脂柱，用水洗至水洗液无色，洗液弃去，再用10L65%こ醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、干燥得粉末，用75%こ溶解，配成浓度为120mg/ml的溶液，经O. 45 μ m微滤膜过滤，制备型高液相色谱制备柱以C18键合相为填料,粒径为5 μ m,柱长为40cm、直径为6cm,六通阀进样,进样体积为50ml,以40%的こ腈水溶液为流动相，控制流速为300ml/min，紫外在线检测，收集含有狗哇花皂苷(I )的高纯度流分，浓缩至干即得含量为98. 91%的狗哇花皂苷(I )。实施例5 将阿尔泰狗哇花全草粉碎，取2kg，用70%こ醇水溶液超声提取2次，每次3h，抽滤，合并滤液，减压浓缩无醇，分散于水中，分散液先通过LSA-21大孔树脂柱，用水洗至水洗液无色，洗液弃去，再用10L80%こ醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、干燥得粉末，用75%こ溶解，配成浓度为100mg/ml的溶液，经O. 45 μ m微滤膜过滤，制备型高液相色谱制备柱以C18键合相为填料，粒径为10 μ m，柱长为45cm、直径为4cm，六通阀进样，进样体积为40ml，以35%的こ腈水溶液为流动相，控制流速为350ml/min，紫外在线检测，收集含有狗哇花皂苷(I )的高纯度流分，浓缩至干即得含量为99. 03%的狗哇花皂苷(I )。权利要求
1.一种狗哇花皂苷(I )的制备方法，其特征在于包括如下步骤将阿尔泰狗哇花全草粉碎，用こ醇水溶液提取1-4次，毎次O. 5-4h，抽滤，合并滤液，减压浓缩无醇，分散于水中，分散液先通过大孔树脂柱，用水洗至水洗液无色，洗液弃去，再用50-80%こ醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、干燥得粉末，再采用制备型高液相色谱进行分离制备高纯度的狗哇花皂苷(I )，经HPLC测定产品狗哇花皂苷(I )的含量为98%以上。
2.根据权利要求I所述ー种狗哇花皂苷(I)的制备方法，其特征在于所述こ醇水溶液体积百分比为60-80%，提取方法为微波辅助提取、加热回流提取或超声提取中的ー种。
3.根据权利要求I所述ー种狗哇花皂苷(I)的制备方法，其特征在于所述大孔树脂型号可选 AB-8、LSA-21、HPD-400 等。
全文摘要
本发明涉及一种狗哇花皂苷(Ⅰ)的制备方法。该方法采用阿尔泰狗哇花全草为提取原料，经粉碎，用乙醇水溶液提取，提取液抽滤，减压浓缩无醇，分散于水中，分散液先后采用大孔树脂柱和制备型高液相色谱进行分离制备高纯度的狗哇花皂苷(Ⅰ)。本发明工艺稳定，产品狗哇花皂苷(Ⅰ)含量高，可达98％以上。
文档编号C07J63/00GK102649807SQ20111004531
公开日2012年8月29日 申请日期2011年2月25日 优先权日2011年2月25日
发明者刘东锋, 李法庆 申请人:苏州宝泽堂医药科技有限公司