专利名称：虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取与纯化方法
技术领域：
本发明涉及一种中药材对照品制备方法，具体是一种虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取与纯化方法。
背景技术：
2008年我国首次把中药标准物质研究列入国家科技计划，建立我国中药材标准物质、中药材物质标准、中药材标准分析方法技术规范和国际上通行的中药标准是实现中药现代化的关键。黄芪作为非常中药的一味补气中药，具有清热解毒、清凉解署、健胃清食作用之功效。临床上应用非常广泛，主要用于治疗关节痹痛，湿热黄疸，经闭，癥瘕，咳嗽痰多， 水火烫伤，跌扑损伤，痈肿疮毒等病症。目前对虎杖药材质量控制的对照品白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取制备与纯化方法还没有相关报导。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种高效率、低成本中药材对照品虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取与纯化方法。本发明以如下技术方案解决上述技术问题本发明虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取与纯化方法，包括以下步骤1)浸膏的制备称取虎杖药材粗粉，用8-12倍重量的体积浓度为70-85%的乙醇提取1-2次，每次1-2小时，过滤，合并滤液，浓缩至膏状，浸膏水分散，备用；2)化合物的分离纯化2. 1大孔树脂富集将浸膏水分散液过大孔树脂，先用蒸馏水洗脱，至洗下的洗脱液澄清无色，弃去水洗部分，再用体积浓度为40-60%的乙醇洗脱，收集洗脱液至颜色淡为止，此部分为白藜芦醇和虎杖苷富集部位，将乙醇洗脱液浓缩至干备用；2. 2白藜芦醇和白藜芦醇苷供试品的制备将大孔树脂富集部位通过半制备型高效液相色谱分离纯化；色谱条件色谱柱Inertsil〇RPREP-ODSlOnm, IOmmX 250mm，流动相采用体积比为20 80的乙腈-水溶液；体积流量5mL/min ；检测波长2Mnm ；柱温 室温；取体积浓度为50%的甲醇稀释液，进样量10mL，收集时间分别为6-8min、10-i;3min两个流分，分别合并流分，于60°C减压浓缩后，置干燥器内干燥，得白藜芦醇、白藜芦醇苷。采用本发明方法可制取中药材对照品白藜芦醇和白藜芦醇苷，而且效率高、成本低。
具体实施例方式
以下通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明。实施例1(1)浸膏的制备称取虎杖药材粗粉(60目)10Kg，用SOKg体积浓度为70%的乙醇提取2次，每次1. 5小时，过滤，合并滤液，浓缩至膏状，浸膏水分散，备用。
(2)化合物的分离纯化浸膏水分散液过大孔树脂(HG2-885-76)，先用蒸馏水洗脱，至洗下的洗脱液澄清无色，弃去水洗部分，再用体积浓度为50 %的乙醇洗脱，收集洗脱液至颜色淡为止，此部分为白藜芦醇和白藜芦醇苷富集部位，将乙醇洗脱液浓缩至干备用。将大孔树脂富集部位通过半制备型高效液相色谱分离纯化。色谱条件色谱柱 Inertsil〇RPREP-ODS (lOnm, IOmmX 250mm)，流动相采用体积比为20 80的乙腈-水溶液；体积流量5mL/min ；检测波长2Mnm ；柱温室温；取体积浓度为50%的甲醇稀释液， 进样量10mL，收集时间分别为6-8min、10-i;3min两个流分。分别合并流分，于60°C减压浓缩后，置干燥器内干燥，得白藜芦醇2. lg、白藜芦醇苷1. Sg。实施例2(1)浸膏的制备称取虎杖药材粗粉(60目)20Kg，用200Kg体积浓度为80%的乙醇提取2次，第一次2小时，第二次1. 5小时，过滤，合并滤液，浓缩至膏状，浸膏水分散，备用。(2)化合物的分离纯化浸膏水分散液过大孔树脂(HG2-885-76)，先用蒸馏水洗脱，至洗下的洗脱液澄清无色，弃去水洗部分，再用体积浓度为50 %的乙醇洗脱，收集洗脱液至颜色淡为止，此部分为白藜芦醇和白藜芦醇苷富集部位，将乙醇洗脱液浓缩至干备用。将大孔树脂富集部位通过半制备型高效液相色谱分离纯化。色谱条件色谱柱 Inertsil〇RPREP-ODS (lOnm, IOmmX 250mm)，流动相采用体积比为20 80的乙腈-水溶液；体积流量5mL/min ；检测波长2Mnm ；柱温室温；取体积浓度为50%的甲醇稀释液， 进样量10mL，收集时间分别为6-8min、10-i;3min两个流分。分别合并流分，60°C减压浓缩后，置干燥器内干燥，得白藜芦醇4. Og、白藜芦醇苷3. 7g。实施例3(1)浸膏的制备称取虎杖药材粗粉(60目)30Kg，用360Kg体积浓度为80%的乙醇提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩至膏状，浸膏水分散，备用。(2)化合物的分离纯化浸膏水分散液过大孔树脂(HG2-885-76)，先用蒸馏水洗脱，至洗下的洗脱液澄清无色，弃去水洗部分，再用体积浓度为60 %的乙醇洗脱，收集洗脱液至颜色淡为止，此部分为白藜芦醇和白藜芦醇苷富集部位，将乙醇洗脱液浓缩至干备用。将大孔树脂富集部位通过半制备型高效液相色谱分离纯化。色谱条件色谱柱 Inertsil〇RPREP-ODS (lOnm, IOmmX 250mm)，流动相采用体积比为20 80的乙腈-水溶液；体积流量5mL/min ；检测波长2Mnm ；柱温室温；取体积浓度为50%的甲醇稀释液， 进样量10mL，收集时间分别为6-8min、10-i;3min两个流分。分别合并流分，于60°C减压浓缩后，置干燥器内干燥，得白藜芦醇5. 7g、白藜芦醇苷5. 2g。以下为纯度检测学和结构鉴定实验资料1样品纯度检测1.1TLC 法检测白藜芦醇的检测取适量制备所得的白藜芦醇供试品以尽可能大的量点于硅胶G 板上，以白藜芦醇对照品溶液为对照，分别以丙酮-氯仿(体积比为5 1.5)、石油醚-丙酮(体积比为5 3.5)及石油醚-乙酸乙酯(体积比为5 4)为展开剂，展开，晾干，喷以体积浓度为10%浓硫酸-香草醛于105°C加热直至显紫红色斑点。结果在供试品色谱中， 仅在于对照品色谱相应位置上显一个紫红色斑点。
白藜芦醇苷的检测取适量制备所得的白藜芦醇苷供试品以尽可能大的量点于硅胶G板上，以白藜芦醇苷对照品溶液为对照，分别以丙酮-氯仿(体积比为5 1)、氯仿-甲醇(体积比为5 1.5)和乙酸乙酯-丙酮-甲酸(体积比为2 2 0.1)为展开剂，展开，晾干，喷以体积浓度为10%浓硫酸-香草醛于105°C加热直至显紫红色斑点。结果在供试品色谱中，仅在于对照品色谱相应位置上显一个紫红色斑点。1.2HPLC 法检测色谱条件色谱柱为Ultimate XB-C18 (4. 6mmX 250mm, 5 μ m)，流动相A相为乙腈，B相为0. 3%磷酸水，梯度洗脱(15-40% A,0-25min)检测波长为2Mnm，柱温为25°C， 流速为1. Oml/min。在上述条件下样品中白藜芦醇和白藜芦醇苷能够达到基线分离，分离度大于1.5，理论塔板数大于5000，稳定性好，能够用于白藜芦醇和白藜芦醇苷的鉴别。产物经分析型高效液相色谱检测，面积归一化法测定纯度，白藜芦醇和白藜芦醇苷的纯度均大于 99%。2结构鉴定
权利要求
1.虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取与纯化方法，其特征在于，包括以下步骤1)浸膏的制备称取虎杖药材粗粉，用8-12倍重量的体积浓度为70-85%的乙醇提取 1-2次，每次1-2小时，过滤，合并滤液，浓缩至膏状，浸膏水分散，备用；2)化合物的分离纯化.2.1大孔树脂富集将浸膏水分散液过大孔树脂，先用蒸馏水洗脱，至洗下的洗脱液澄清无色，弃去水洗部分，再用体积浓度为40-60%的乙醇洗脱，收集洗脱液至颜色淡为止，此部分为白藜芦醇和虎杖苷富集部位，将乙醇洗脱液浓缩至干备用；.2.2白藜芦醇和白藜芦醇苷供试品的制备将大孔树脂富集部位通过半制备型高效液相色谱分离纯化；色谱条件色谱柱Inertsil〇RPREP-ODSlOnm，IOmmX 250mm，流动相 采用体积比为20 80的乙腈-水溶液；体积流量5mL/min ；检测波长2Mnm ；柱温室温； 取体积浓度为50%的甲醇稀释液，进样量10mL，收集时间分别为6-8min、10-i;3min两个流分，分别合并流分，于60°C减压浓缩后，置干燥器内干燥，得白藜芦醇、白藜芦醇苷。
全文摘要
本发明公开虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取与纯化方法，它主要包括以下步骤1)浸膏的制备称取虎杖药材粗粉，用8-12倍重量的体积浓度为70-85％的乙醇提取1-2次，每次1-2小时，过滤，合并滤液，浓缩至膏状，浸膏水分散，备用；2)化合物的分离纯化将浸膏水分散液过大孔树脂，先用蒸馏水洗脱，至洗下的洗脱液澄清无色，弃去水洗部分，再用体积浓度为40-60％的乙醇洗脱，收集洗脱液至颜色淡为止，此部分为白藜芦醇和虎杖苷富集部位，将乙醇洗脱液浓缩至干备用；将大孔树脂富集部位通过半制备型高效液相色谱分离纯化，得到白藜芦醇、白藜芦醇苷。采用本发明方法可制取中药材对照品白藜芦醇和白藜芦醇苷，而且效率高、成本低。
文档编号C07C39/21GK102531851SQ201110452519
公开日2012年7月4日 申请日期2011年12月29日 优先权日2011年12月29日
发明者周小雷, 周雅琴, 王硕, 缪剑华, 袁经权, 龚小妹 申请人:广西壮族自治区药用植物园