专利名称：两种头孢噻肟钠-牛血清白蛋白偶联物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及两种以牛血清白蛋白与头孢噻肟钠进行偶联的头孢噻肟钠-牛血清白蛋白偶联物及其制备方法。其属于免疫学检测技术领域。
背景技术：
头孢噻肟钠(Cefotaxime Sodium)为第三代头孢类抗生素，其抗菌谱广，对革兰阴性菌的作用更强，抗菌谱包括嗜血性流感杆菌、大肠杆菌、沙门杆菌克雷白产气杆菌属及奇异变形杆菌、奈瑟菌属、葡萄球菌、肺炎球菌、链球菌等。临床上主要用于各种敏感菌的感染，如呼吸道、五官、腹腔、胆道、脑膜炎、淋病、泌尿系统感染、败血症等。头孢噻肟钠是人类疾病治疗中最有效的药物之一，但随着养殖业的发展及动物养殖过程中病害的频发，越来越多的人受利益驱使将该药用于畜禽、水产等养殖过程中。农业部176号公告明文规定，未 办理兽药、饲料添加剂审批手续的人用药品，不得直接用于饲料生产和饲养过程，在动物饲料中肆意添加和动物性食品中药物残留的存在一是容易引起耐药性，二是由于未做安全性试验，存在各种安全隐患。随着人民生活水平的提高及我过对外贸易的增加，抗生素的使用及动物学食品中残留的检测必将法制化、常规化。因此研究头孢类抗生素在动物性食品中的残留检测方法是非常必要的。在抗生素残留的检测中，仪器法如高效液相色谱和质谱仪及液相质谱联用是最广泛的方法，这些方法准确、稳定、可靠，可以作为标准方法。但仪器法价格昂贵，费时较长，且造成有机溶剂污染，需要大量仪器设备和专业技术人员，所以难以用于现场现场操作。酶联免疫检测法(ELISA)提供了一种极好的初步筛选手段。该法具有快速、准确、简易、不需专业人员操作等优点，这使得ELISA成为一种理想的，可以用日常常规扫描的检测方法。本发明是针对酶联免疫检测法的建立核心是需要高效价的抗体，而高效价的抗体的获得是需要免疫原性强的抗原免疫动物而产生的，但大多数抗生素包括头孢类抗生素，都是小分子化合物，不具有免疫原性，称之为半抗原，所以，本发明则是针对如何把半抗原一一头孢噻肟钠设计合成为能引发动物免疫系统产生高效价抗体的完全免疫原而设计的。
发明内容
本发明的头孢噻肟钠-牛血清白蛋白是以共价键方式与牛血清白蛋白连接的头孢噻肟钠偶联物，头孢噻肟钠与牛血清白蛋白的偶联比范围为5 30 I。本发明的技术方案如下两种头孢噻肟钠-牛血清白蛋白偶联物，即偶联物I和偶联物II，具有如下结构
权利要求
1.两种头孢噻肟钠-牛血清白蛋白偶联物，其特征是由头孢噻肟钠与牛血清白蛋白偶联比在5 30 I构成偶联物I或偶联物II，其结构式如下
2.如权利要求I所述的头孢噻肟钠-牛血清白蛋白，紫外特征吸收光谱显示出如下物化特征偶联物 I :213. Onm, 275. 5nm ；偶联物 II :264. Onm。
3.如权利要求I中所述的头孢噻肟钠-牛血清白蛋白偶联物I或偶联物II的制备方法，其特征是由如下步骤完成 (1)偶联物I:按头孢噻肟钠1-(3-ニ甲基氨基丙基)-3-こ基-碳化ニ亚胺(EDC):牛血清白蛋白为I : 2 8 : I 10的质量比进行反应； 偶联物II :按头孢噻肟钠牛血清白蛋白为I : I 10的质量比进行反应，头孢噻肟钠25%的戊ニ醛为2 5mg I 3 ill。
(2)溶液A的制备将头孢噻肟钠溶于pH为7.4，浓度为0. OlM的磷酸盐缓冲液(PBS)中备用； (3)溶液B的制备将牛血清白蛋白溶于PBS中备用； (4)溶液Cl的制备将EDC溶于PBS中备用； 溶液C2的制备将25%的戊ニ醛用PBS以I : 100的比例稀释备用。
(5)偶联物I合成将溶液A缓慢加入溶液B中置磁力搅拌器上慢速搅拌，然后将溶液Cl逐滴加入上述反应液中，边加边搅拌，室温条件下避光反应4h后，再取溶液Cl逐滴加入上述反应液中，室温避光搅拌反应24h ； 偶联物II合成将溶液A缓慢加入溶液B中置磁力搅拌器上慢速搅拌，然后将溶液C2逐滴加入上述反应液中，边加边搅拌，室温条件下避光反应24h。
(6)将合成的偶联物I和偶联物II分别装入透析袋中，用PBS透析3d，每8h换液I次，得到头孢噻肟钠与牛血清白蛋白的偶联物I或偶联物II。
4.如权利要求I所述的头孢噻肟钠-牛血清白蛋白偶联物I或偶联物II，其特征是偶联物I是头孢噻肟钠的羧基与牛血清白蛋白的氨基进行结合；偶联物II是戊ニ醛ー端先与头孢噻肟钠的氨基连接后另一端再与牛血清白蛋白的氨基进行结合。
5.如权利要求I中所述的头孢噻肟钠-牛血清白蛋白偶联物I或偶联物II，其特征是偶联物I或偶联物II均可作为免疫原在制备头孢噻肟钠特异性抗体中进行应用。
全文摘要
本发明涉及两种具有生理活性的头孢噻肟钠-牛血清白蛋白的偶联物，即偶联物Ⅰ和偶联物Ⅱ，头孢噻肟与牛血清白蛋白的偶联比范围为5～30∶1，其结构式如图所示，式中R是牛血清白蛋白，R1是R2是-N＝C-(CH2)3-C＝N-。本发明的两种头孢噻肟钠-牛血清白蛋白偶联物，免疫原性强，对动物免疫后，通过间接ELISA法测得血清效价≥1100,000。
文档编号C07K14/765GK102816229SQ20121014004
公开日2012年12月12日 申请日期2012年5月6日 优先权日2012年5月6日
发明者王晓洁, 王守海 申请人:烟台昊清生物科技有限公司