乙型肝炎病毒(hbv)表达的调节的制作方法

乙型肝炎病毒(hbv)表达的调节的制作方法
【专利摘要】本发明公开用于减少HBV?mRNA、DNA和蛋白质表达的反义化合物和方法。此类方法、化合物以及组合物适用于治疗、预防或改善HBV相关疾病、病症或病状。
【专利说明】乙型肝炎病毒(HBV)表达的调节
[0001]序列表
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[0003]领域
[0004]在某些实施方案中，提供用于抑制乙型肝炎病毒(HBV)mRNA及蛋白质在动物体内的表达的方法、化合物及组合物。所述方法、化合物及组合物适用于治疗、预防或改善HBV相关疾病及病症。
[0005]背景
[0006]乙型肝炎为由被污染的物质(如血液及血液制品)、被污染的针以胃肠外方式传播、性传播及由受感染或携带者母体垂直传播至其后代的病毒性疾病。据世界卫生组织(World Health Organization)估计,在世界范围内有超过20亿人已受感染,其中每年有约400万急性病例，每年有100万例死亡，以及3.5-4亿个慢性携带者(World HealthOrganization:Geographic Prevalence of Hepatitis B Prevalence, 2004.http://www.wh0.1nt/vaccines-surveillance/graphics/htmls/hepbprev.htm)。
[0007]病毒HBV为仅感染人及非人灵长类动物的双链嗜肝性病毒。病毒主要在肝脏中进行复制，且以较少程度在肾脏、胰脏、骨髓及脾中进行复制(Hepatitis B virus biology.Microbiol Mol Biol Rev.64:2000; 51-68.) ?病毒及免疫标记可在血液中检测出，且特征性抗原-抗体型态随时间推移演变。首先可检测的病毒标记为HBsAg，继而为乙型肝炎e抗原(HBeAg)及HBV DNA。滴度在潜伏期期间可较高，但HBVDNA及HBeAg水平在疾病发作时开始下降且在临床疾病最高点时可能不可检测(Hepatitis B virus infection-naturalhistory and clinical consequen`ces.N Engl J Med..350:2004;1118-1129)。HBeAg为可在血液中检测出的病毒标记并且与活性病毒复制有关，且因此与高病毒负荷及感染性有关(Hepatitis B e antigen-the dangerous end game of hepatitis B.N Engl JMed.347:2002; 208-210)。抗-HBsAb和抗-HBcAb (IgG)的存在指示先前受感染的个体的恢复和免疫力。
[0008]当前由美国肝病研究协会(AmericanAssociation for the Study of LiverDiseases, AASLD)及欧洲肝脏研究协会(European Association for the Study of theLiver, EASL)推荐的用于慢性HBV感染的疗法包括干扰素a (INF α )、聚乙二醇化干扰素a-2a(Peg_IFN2a)、恩替卡韦(entecavir)及泰诺福韦(tenofovir)。核苷及核苷酸疗法(即恩替卡韦和泰诺福韦)成功地降低病毒负荷，但HBeAg血清转化率和HBsAg丧失率甚至低于使用IFNa疗法所获得的速率。还使用其它类似疗法，包括拉米夫定(lamivudine，3TC)、替比夫定(telbivudine, LdT)及阿德福韦(adefovir),但一般对于核苷/核苷酸疗法而言，抗性的出现会限制治疗功效。
[0009]因此，在本领域中需要发现和开发新的抗病毒疗法。另外，需要能够提高HBeAg和HBsAg血清转化率的新的抗-HBV疗法。新近临床研究已发现血清转化与HBeAg降低(Fried等(2008) Hepatology47:428)及 HBsAg 降低(Moucari 等(2009) Hepatology49:1151)之间的相关性。抗原水平的降低可允许免疫学控制HBV感染，因为高抗原水平被认为会诱导免疫耐受。当前用于HBV的核苷疗法能够显著降低HBV的血清水平，但对HBeAg及HBsAg水平几乎无影响。
[0010]反义技术作为减少特定基因产物表达的有效手段而出现且因此可证明在多种治疗、诊断及研究应用中独特地适用于调节HBV表达(参见美国专利公布号2008/0039418和2007/0299027)。反义疗法与核苷疗法的不同之处在于其可直接靶向HBV抗原的转录物且因此降低血清HBeAg及HBsAg水平。由于在HBV感染时产生多种重叠转录物，所以单个反义寡聚物除HBeAg和HBsAg之外还有可能减少HBV DNA。因此，反义技术作为减少某些基因产物表达的有效手段而出现且因此可证明在多种治疗、诊断及研究应用中独特地适用于调节 HBV0
[0011]概述
[0012]本发明提供调节HBV mRNA及蛋白质的表达的方法、化合物及组合物。在某些实施方案中，适用于调节HBV mRNA及蛋白质的表达的化合物为反义化合物。在某些实施方案中，反义化合物为反义寡核苷酸。
[0013]在某些实施方案中，可在细胞或组织中进行调节。在某些实施方案中，细胞或组织处于动物体内。在某些实施方案中，动物为人。在某些实施方案中，HBVmRNA水平降低。在某些实施方案中，HBV DNA水平降低。在某些实施方案中，HBV蛋白水平降低。在某些实施方案中，HBV抗原水平降低。在某些实施方案中，HBV S-抗原(HBsAg)水平降低。在某些实施方案中，HBV e-抗原(HBeAg)水平降低。所述降低可以时间依赖性方式或以剂量依赖性方式出现。
[0014]还提供适用于预防、治疗及改善疾病、病症及病状的方法、化合物及组合物。在某些实施方案中，所述HBV相关疾病、病症及病状为肝脏疾病。在某些实施方案中，所述肝脏疾病、病症及病状包括黄疸、 肝癌、肝脏炎症、肝纤维化、炎症、肝硬化、肝衰竭、弥漫性肝细胞炎症性疾病、噬血细胞综合征、血清肝炎、HBV病毒血症及与肝脏疾病相关的移植。在某些实施方案中，所述HBV相关疾病、病症及病状为过度增生性疾病、病症及病状。在某些实施方案中，所述过度增生性疾病、病症及病状包括癌症以及相关恶性病和转移。在某些实施方案中，所述癌症包括肝癌和肝细胞癌(HCC)。
[0015]所述疾病、病症及病状可共同具有一个或多个风险因素、成因或结果。产生肝脏疾病或过度增生性疾病的某些风险因素及成因包括逐渐变老；使用烟草；暴露于日光及电离辐射；与某些化学物质接触；感染某些病毒及细菌；某些激素疗法；癌症家族史；使用酒精；及某些生活方式选择，包括不良膳食、缺乏身体运动和/或超重。与产生肝脏疾病或过度增生性疾病有关的某些症状及结果包括但不限于:流行性感冒样疾病、虚弱、疼痛、头痛、发烧、食欲丧失、腹泻、黄疸、恶心及呕吐、身体肝区疼痛、黏土色或灰色粪便、全身发痒及尿色深。
[0016]在某些实施方案中，治疗方法包括向有需要的个体施用HBV反义化合物。在某些实施方案中，治疗方法包括向有需要的个体施用HBV反义寡核苷酸。
[0017]详述
[0018]应了解，以上一般描述及以下详述仅具例示性及说明性而不限制如所要求的本发明。在本文中，除非另外特别说明，否则单数的使用包括复数。除非另外说明，否则本文所用的“或”的使用意谓“和/或”。此外，术语“包括(including)”以及其它形式，如“包括(includes) ”及“包括(included) ”的使用不具限制性。并且，除非另外特别说明，否则如“元件”或“组件”的术语涵盖包括一个单位的元件和组件以及包括超过一个亚单位的元件和组件。
[0019]本文所用的章节标题仅用于组织目的而不被视为限制所述标的物。本申请中引用的所有文献或文献的部分(包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍及论文)关于本文所论述的文献部分明确地以引用方式特此并入以及以引用方式特此整体并入。
[0020]定义
[0021]除非提供具体定义，否则关于本文所述的分析化学、合成有机化学及医学和药物化学所用的命名及本文所述的分析化学、合成有机化学及医学和药物化学的工序及技术为本领域中熟知且常用的。可使用标准技术进行化学合成及化学分析。在允许的情况下，贯穿本公开中所提及的所有专利、申请、公布的申请及其它公布、可经由数据库(如美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information, NCBI))获得的GENBANK登录号及相关序列信息及其它数据关于本文所论述的文献部分以引用方式并入本文以及以引用方式整体并入本文。
[0022]除非另外指示，否则以下术语具有以下含义:
[0023]“2’ -O-甲氧基乙基”(又为2’ -MOE和2’ -O(CH2)2-OCH3)是指呋喃糖环的2’位上的O-甲氧基-乙基修饰。2’ -O-甲氧基乙基修饰的糖为修饰的糖。
[0024]“2’ -MOE核苷”(又为2’ -O-甲氧基乙基核苷)意谓包含2’ -MOE修饰的糖部分的核苷。
[0025]“2’ -取代的核苷”意谓在呋喃糖基环的2’位上包含除H或OH以外的取代基的核苷。在某些实施方案中，2’取代的核苷包括具有双环糖修饰的核苷。
[0026]“3’目标位点”是指目标核酸中与具体反义化合物的3’最末端核苷酸互补的核苷酸。
[0027]“5’目标位点”是指目标核酸中与具体反义化合物的5’最末端核苷酸互补的核苷酸。
[0028]“5-甲基胞嘧啶”意谓用连接至5位的甲基修饰的胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶为修饰的核酸碱基。
[0029]“约”意谓在值±7%的范围内。举例来说，如果指出“化合物将HBV抑制至少约70%”，那么表示63%至77%范围内的HBV水平被抑制。
[0030]“可接受的安全性概况”意谓在临床上可接受的限度内的副作用型态。
[0031]“活性药剂”意谓药物组合物中在向个体施用时提供治疗益处的物质。举例来说，在某些实施方案中，靶向HBV的反义寡核苷酸为活性药剂。
[0032]“活性目标区”意谓一种或多种活性反义化合物所靶向的目标区。“活性反义化合物”意谓降低目标核酸水平或蛋白质水平的反义化合物。
[0033]“急性乙型肝炎感染”在暴露于乙型肝炎病毒的人开始产生病毒性肝炎的体征和症状时产生。这被称作潜伏期的时段平均为90天，但可短至45天或长达6个月。对于大多数人，这感染将引起轻度至中度不适，但会因身体免疫反应成功战胜病毒而自行消失。然而，有些人，尤其是免疫系统受损的那些人，如患有AIDS、进行化学疗法、服用免疫抑制药物或服用类固醇的人会因急性HBV感染而产生极严重的问题，且进展成更严重的病状，如爆发性肝衰竭。
[0034]“同时施用”是指两种药剂以这两者的药理学作用在患者体内同时显现的任何方式共同施用。同时施用不需要这两种药剂于单一药物组合物中、以相同剂型或通过相同施用途径来施用。这两种药剂的作用本身无需同时显现。这些作用仅需重叠一段时间而无需共同延长。
[0035]“施用”意谓向个体提供药剂，且包括但不限于由医学专业人员施用及自行施用。
[0036]“药剂”意谓在向动物施用时可提供治疗益处的活性物质。“第一药剂”意谓本文所述的治疗性化合物。举例来说，第一药剂可为靶向HBV的反义寡核苷酸。“第二药剂”意谓本文所述的第二治疗性化合物(例如靶向HBV的第二反义寡核苷酸)和/或非HBV治疗性化合物。
[0037]“改善”是指减轻病状或疾病严重性的至少一个指标。指标的严重性可通过本领域的技术人员已知的主观或客观度量来确定。
[0038]“动物”是指人或非人动物，包括但不限于小鼠、大鼠、家兔、狗、猫、猪，及非人灵长
类动物，包括但不 限于猴及黑猩猩。
[0039]“抗体”是指特征在于与抗原以某种方式特异性反应的分子，其中抗体与抗原各自利用另一者来定义。抗体可指的是完全抗体分子或其任何片段或区域，如重链、轻链、Fab区及F。区。
[0040]“反义活性”意谓可归于反义化合物与其目标核酸杂交的任何可检测或可测量活性。在某些实施方案中，反义活性为目标核酸或由所述目标核酸编码的蛋白质的量或表达的减少。
[0041]“反义化合物”意谓能够与目标核酸经由氢键进行杂交的寡聚化合物。反义化合物的实例包括单链和双链化合物，如反义寡核苷酸、siRNA, shRNA, snoRNA、miRNA及卫星重复序列。
[0042]“反义抑制”意谓在与目标核酸互补的反义化合物存在下目标核酸水平相较于在不存在反义化合物下的目标核酸水平有所减少。
[0043]“反义机制”为所有涉及化合物与目标核酸的杂交的机制，其中杂交的结果或效果为目标降解或目标占有，伴随阻碍涉及例如转录或剪接的细胞机构。
[0044]“反义寡核苷酸”意谓具有允许与目标核酸的相应区域或区段杂交的核酸碱基序列的单链寡核苷酸。
[0045]“碱基互补性”是指反义寡核苷酸的核酸碱基与目标核酸中的相应核酸碱基进行准确碱基配对(即杂交)的能力，且由相应核酸碱基之间的沃森-克里克(Watson-Crick)、霍氏(Hoogsteen)或反霍氏氢键结合介导。
[0046]“双环糖”意谓由两个非偕位碳原子桥连修饰的呋喃糖环。双环糖为修饰的糖。
[0047]“体重”是指动物的全身重量，包括所有组织(包括脂肪组织)。
[0048]“帽结构”或“末端帽部分”意谓已并入反义化合物任一末端处的化学修饰。
[0049]“cEt”或“限制性乙基”意谓包含连接4’ -碳与2’ -碳的桥基的双环糖部分，其中所述桥基具有下式:4’ -CH(CH3)-0-2’。[0050]“限制性乙基核苷”(又为cEt核苷)意谓包含含4’ -CH(CH3)-O^'桥的双环糖部分的核苷。
[0051]“化学相异区”是指反义化合物中以某种方式在化学上不同于同一反义化合物的另一区的区域。举例来说，具有2’ -O-甲氧基乙基核苷酸的区域在化学上与具有无2’ -O-甲氧基乙基修饰的核苷酸的区域不同。
[0052]“嵌合反义化合物”意谓具有至少2个化学相异区的反义化合物，每一位置具有多个亚单位。
[0053]“慢性乙型肝炎感染”在人最初患有急性感染，但接着不能抗击感染时出现。疾病变成慢性抑或完全消退主要取决于受感染的人的年龄。出生时受感染的约90%婴儿将进展成慢性疾病。然而，随着人年龄的增长，慢性感染的风险降低，因此20%至50%的儿童及不到10%的年龄较大的儿童或成人将由急性感染进展成慢性感染。慢性HBV感染为本发明的实施方案的主要治疗目标，但本发明的ASO组合物还能够治疗HBV相关病状，如炎症、纤维化、硬化、肝癌、血清肝炎及其它病状。
[0054]“共同施用”意谓向个体施用两种或更多种药剂。两种或更多种药剂可在单个药物组合物中，或可在单独的药物组合物中。所述两种或更多种药剂可各自经由相同或不同的施用途径来施用。共同施用涵盖并行或依序施用。
[0055]“互补性”意谓第一核酸与第二核酸的核酸碱基之间配对的能力。
[0056]“顺应”意谓个体对所推荐的疗法的依从性。
[0057]“包含(comprise) ”、“包含(comprises) ” 及“包含(comprising) ” 应理解为意指包括所述步骤或要素或步骤或要素的群组，但不排除任何其它步骤或要素或步骤或要素的群组。
[0058]“连续的核酸碱基”意谓彼此紧邻的核酸碱基。
[0059]“治愈”意谓恢复健康的方法或过程或针对疾病所开出的治疗。
[0060]“脱氧核糖核苷酸”意谓在核苷酸的糖部分的2’位上具有氢的核苷酸。脱氧核糖核苷酸可被多种取代基中的任一种修饰。
[0061]“设计”或“被设计来”是指设计与所选核酸分子特异性杂交的寡聚化合物的方法。
[0062]“稀释剂”意谓组合物中缺乏药理学活性，但为药学上必需或所需的成分。举例来说，在注射的药物中，稀释剂可为液体，例如生理盐水溶液。
[0063]“剂量单位”意谓提供药剂的形式，例如丸剂、片剂或本领域中已知的其它剂量单位。
[0064]“剂量”意谓单次施用中或指定时段内提供的药剂的指定量。在某些实施方案中，可以两次或更多次快速注射(bolus)、片剂或注射来施用剂量。举例来说，在某些实施方案中，在需要皮下施用时，所需剂量需要不易由单次注射提供的体积。在所述实施方案中，可使用两次或更多次注射来达成所需剂量。在某些实施方案中，可以两次或更多次注射施用剂量以使个体的注射部位反应减至最小。在其它实施方案中，药剂通过经长时段或连续输注来施用。剂量可被规定为每小时、每天、每周或每个月的药剂的量。
[0065]“给药方案”为被设计以达成一种或多种所需作用的剂量的组合。
[0066]“持续时间”意谓活性或事件持续的时段。在某些实施方案中，治疗的持续时间为施用药剂的剂量的时段。[0067]“有效量”在调节活性或治疗或预防病状的情况下意谓向需要所述调节、治疗或防治的受试者以单次剂量或一系列剂量的一部分形式施用有效调节所述效应，或治疗或防治或改善所述病状的活性成分的量。有效量将视以下因素而变化:所治疗受试者的健康及身体状况、所治疗受试者的分类学群组、组合物的配制、医学病况的评估及其它相关因素。
[0068]“功效”意谓产生所需效果的能力。
[0069]“表达”包括基因密码信息借以转化成细胞中存在且起作用的结构的所有功能。所述结构包括但不限于转录及转译的产物。
[0070]“完全互补”或“ 100%互补”意谓第一核酸的各核酸碱基在第二核酸中皆具有互补核酸碱基。在某些实施方案中，第一核酸为反义化合物且目标核酸为第二核酸。
[0071]“完全修饰的基元”是指反义化合物所包含的连续核苷序列中基本上各核苷均为具有均一修饰的糖修饰的核苷。
[0072]“间隔体(gapmer)”意谓具有多个支持核糖核酸酶H裂解的核苷的内部区域位于具有一个或多个核苷的外部区域之间的嵌合反义化合物，其中构成内部区域的核苷在化学上与构成外部区域的核苷不同。内部区域可称为“间隔区”且外部区域可称为“翼区”。
[0073]“间隔加宽”意谓反义化合物具有位于具有I至6个具有修饰的糖部分的核苷酸的5’与3’翼段之间的具有12个或超过12个连续的2’-脱氧核糖核苷酸的间隔段。
[0074]“HBV”意谓哺乳动物乙型肝炎病毒，包括人乙型肝炎病毒。所述术语涵盖乙型肝炎病毒，尤其人乙型肝炎病毒的地理基因型，以及乙型肝炎病毒的地理基因型的变异病毒株。
[0075]“HBV抗原”意谓任何乙型肝炎病毒抗原或蛋白质，包括核心蛋白，如“乙型肝炎核心抗原”或“HBcAG”及“乙型肝炎E抗原”或“HBeAG”，及包膜蛋白，如“HBV表面抗原”或“HBsAg” 或 “HBsAG”。
`[0076]“乙型肝炎E抗原”或“HBeAg”或“HBeAG”为分泌的非微粒形式的HBV核心蛋白。HBV抗原HBeAg与HBcAg共有主要氨基酸序列，因此在T细胞水平上展示交叉反应性。HBeAg不为病毒组装或复制所需，但研究表明其可为发生慢性感染所需。新生儿HBeAg阴性突变体感染常引起爆发的急性而非慢性HBV感染(Terezawa等(1991)Pediatr.Res.29:5), M用WHeAg阴性突变体使幼年土拨鼠感染会引起低得多的慢性WHV感染率(Cote等(2000)Hepatology31:190)。HBeAg可能通过经由缺失或克隆无能使核心特异性T细胞失活而充当耐受原(Milich等(1998) J.1mmunol.160:8102)。在抗病毒疗法及HBeAg血清转化时HBV病毒负荷及抗原减少与T细胞的抑制性受体程序化死亡-1 (PD-1 ;又称为rocDi)(活化的T细胞的负向调节因子)的表达减少之间存在正相关(Evans等(2008)H印atology48:759)。
[0077]“HBV mRNA”意谓由乙型肝炎病毒表达的任何信使RNA。
[0078]“HBV核酸”或“HBV DNA”意谓编码HBV的任何核酸。举例来说，在某些实施方案中，HBV核酸包括不限于编码HBV基因组或其部分的任何病毒DNA序列、自病毒DNA转录的任何RNA序列，包括编码HBV蛋白质的任何mRNA序列。
[0079]“HBV蛋白”意谓由乙型肝炎病毒分泌的任何蛋白质。所述术语涵盖各种HBV抗原，包括核心蛋白，如“肝炎E抗原”、“HBeAg”或“HBeAG”，及包膜蛋白，如“HBV表面抗原”或 “HBsAg”。
[0080]“HBV表面抗原”或“HBsAg”或“HBsAG”为感染性HBV病毒粒子的包膜蛋白，但还分泌为非感染性粒子，其血清水平比HBV病毒粒子高1000倍。受感染的人或动物的HBsAg血清水平可高达 1000 μ g/mL (Kann 和 Gehrlich (1998) Topley&Wilson’ s Microbiologyand Microbial Infections,第9版，745)。在急性HBV感染中，HBsAg在血清中的半衰期或血清tl/2为8.3天(Chulanov等(2003) J.Med.Virol.69:313)。由脊髓树突状细胞内化HBsAg会抑制共刺激分子(即B7)上调并且抑制T细胞刺激能力(den Brouw等(2008)Immunologyl26:280),且受慢性感染的患者的树突状细胞在HBsAg存在下还展示缺乏共刺激分子的表达、IL-12分泌及对T细胞的刺激(Zheng等(2004) J.Viral Hepatitisll: 217)。CHB患者的HBsAg特异性⑶8细胞展示改变的四聚体结合。这些⑶8细胞并非无变应性，但可具有赋予部分耐受性或忽视性的TCR拓扑(Reignat等(2002) J.Exp.Med.195:1089)。此外，在Peg-1FNa 2a疗法期间在第24周血清HBsAg降低>llog对于持续病毒学反应(SVR-定义为治疗后I年内不可由PCR检测到HBV DNA)具有高预测值(92%) (Moucari等(2009)Hepatology49:1151)。
[0081]“乙型肝炎相关病状”或“HBV相关病状”意谓由乙型肝炎感染、暴露或疾病恶化、由乙型肝炎感染、暴露或疾病所引起、与其相关、与其有关或可归因于乙型肝炎感染、暴露或疾病的任何疾病、生物学病状、医学病状或事件。术语乙型肝炎相关病状包括慢性HBV感染、炎症、纤维化、硬化、肝癌、血清肝炎、黄疸、肝癌、肝脏炎症、肝纤维化、肝硬化、肝衰竭、弥漫性肝细胞炎症性疾病、噬血细胞综合征、血清肝炎、HBV病毒血症、与肝脏疾病相关的移植，以及在结合针对乙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒抗原的存在的阳性测试或针对乙型肝炎病毒抗原特异性抗体的存在的阳性测试时，具有可包括以下任一种或全部的症状的病状:流行性感冒样疾病、虚弱、疼痛、头痛、发烧、食欲丧失、腹泻、恶心及呕吐、身体肝区疼痛、黏土色或灰色粪便、全身发痒及尿色深。
[0082]“杂交”意谓互补核酸分子的退火。在某些实施方案中，互补核酸分子包括但不限于反义化合物与核酸目标。在某些实施方案中，互补核酸分子包括但不限于反义寡核苷酸与核酸目标。
[0083]“鉴别患有HBV感染的动物”意谓鉴别已诊断感染有HBV的动物；或鉴别具有包括但不限于以下的HBV感染的任一症状的动物:慢性HBV感染、炎症、纤维化、硬化、肝癌、血清肝炎、黄疸、肝癌、肝脏炎症、肝纤维化、肝硬化、肝衰竭、弥漫性肝细胞炎症性疾病、噬血细胞综合征、血清肝炎、HBV 病毒血症、与肝脏疾病相关的移植，以及在结合针对乙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒抗原的存在的阳性测试或针对乙型肝炎病毒抗原特异性抗体的存在的阳性测试时，具有可包括以下任一种或全部的症状的病状:流行性感冒样疾病、虚弱、疼痛、头痛、发烧、食欲丧失、腹泻、恶心及呕吐、身体肝区疼痛、黏土色或灰色粪便、全身发痒及尿色深。
[0084]“紧邻”意谓紧邻元件之间不存在介入元件。
[0085]“个体”意谓选用于治疗或疗法的人或非人动物。
[0086]“个体顺应性”意谓个体对于所推荐或开出的疗法的依从性。
[0087]“诱导”、“抑制”、“增强”、“升高”、“增加”、“降低”或其类似术语一般表示两种状态之间的定量差异。所述术语可指两种状态之间具统计显著性的差异。举例来说，“有效抑制HBV的活性或表达的量”意谓处理的样品中HBV的活性水平或表达水平与未处理的细胞中HBV的活性水平或表达水平在定量上有所不同，且可能具统计显著性。所述术语适用于例如表达水平及活性水平。[0088]“抑制HBV”意谓降低HBV mRNA、DNA和/或蛋白质的水平或表达。在某些实施方案中，相较于在不存在HBV反义化合物(如反义寡核苷酸)下HBV mRNA、DNA和/或蛋白质的表达水平，HBV在靶向HBV的反义化合物(包括靶向HBV的反义寡核苷酸)存在下得到抑制。
[0089]“抑制表达或活性”是指降低、阻断表达或活性且不一定指示完全消除表达或活性。
[0090]“注射部位反应”意谓个体的注射部位处皮肤的炎症或异常发红。
[0091]“核苷间键”是指核苷之间的化学键。
[0092]“腹膜内施用”意谓经由输注或注射于腹膜中来施用。
[0093]“静脉内施用”意谓施用至静脉内。
[0094]“延长的”反义寡核苷酸为相对于本文所公开的反义寡核苷酸具有一个或多个额外核苷的反义寡核苷酸。
[0095]“连接的脱氧核苷”意谓由磷酸酯连接形成核苷酸的被脱氧核糖取代的核酸碱基(A、G、C、T、U)。
[0096]“连接的核苷”意谓由核苷间键连接在一起的相邻核苷。
[0097]“锁核酸”或“LNA”或“LNA核苷”意谓在核苷糖单位的4’位与2’位之间具有连接两个碳原子，从而形成双环糖的桥基的核酸单体。所述双环糖的实例包括但不限于 A) a -L-亚甲氧基(4’ -CH2-0-2’) LNA ; (B) β -D-亚甲氧基(4’ -CH2-0_2’) LNA ； (C)亚乙氧基(4，-(CH2)2-0-2，)LNA ; (D)氨氧基(4，-CH2-O-N(R)-2’)LNA ;及(E)氧氨基(4’ -CH2-N(R) -0-2’) LNA,如下文所描绘。
[0098]
【权利要求】
1.一种化合物，其包含修饰的寡核苷酸，所述修饰的寡核苷酸由10至30个连接的核苷组成并具有包含核酸碱基序列SEQ ID NO:5至310、321至802、804至1272或1288至1350、1364至1372、1375、1376以及1379中任何一个的至少8个连续核酸碱基的核酸碱基序列。
2.一种化合物，其包含修饰的寡核苷酸，所述修饰的寡核苷酸由10至30个连接的核苷组成，其中所述修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO:1互补。
3.如权利要求1或2所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸与SEQID NO:1至少96%互补。
4.如权利要求1或2所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸与SEQID NO:1至少97%互补。
5.如权利要求1或2所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸与SEQID NO:1至少98%互补。
6.如权利要求1或2所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸与SEQID NO:1至少99%互补。
7.如权利要求1或2所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸与SEQID NO: 1100%互补。
8.如权利要求1或2所述的化合物，其由单链的修饰的寡核苷酸组成。
9.如权利要求1或2所述的化合物，其中至少一个核苷间键是修饰的核苷间键。
10.如权利要求9所述的化合物，其中每个核苷间键均为硫代磷酸酯核苷间键。
11.如权利要求1或2所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸中的至少一个核苷包含修饰的糖。
12.如权利要求11所述的化合物，其中所述至少一个修饰的糖是双环糖。
13.如权利要求11所述的化合物，其中至少一个修饰的糖包含2’-O-甲氧基乙基。
14.如权利要求11所述的化合物，其中所述修饰的糖包含2’-O(CH2)2-OCH3基团。
15.如权利要求11所述的化合物，其中所述修饰的糖包含4’-CH(CH3)-0-2’基团。
16.如权利要求1或2所述的化合物，其中至少一个核苷包含修饰的核酸碱基。
17.如权利要求16所述的化合物，其中所述修饰的核酸碱基是5-甲基胞嘧啶。
18.如权利要求1或2所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含: 间隔段，其由连接的脱氧核苷组成； 5’翼段，其由连接的核苷组成；以及 3’翼段，其由连接的核苷组成； 其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间并且其中每个翼段的每个核苷均包含修饰的糖。
19.如权利要求18所述的化合物，其中所述间隔段由6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个或16个连接的核苷组成。
20.如权利要求18所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含: 间隔段，其由10个连接的脱氧核苷组成； 5’翼段，其由2个至3个连接的核苷组成；以及 3’翼段，其由3个至4个连接的核苷组成；其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间，其中每个翼段的每个核苷均包含2’ -O-甲氧基乙基糖或限制性乙基糖；并且其中每个核苷间键均为硫代磷酸酯键。
21.如权利要求20所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含: 间隔段，其由10个连接的脱氧核苷组成； 5’翼段，其由3个连接的核苷组成；以及 3’翼段，其由3个连接的核苷组成； 其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间，其中每个翼段的每个核苷均包含2’ -O-甲氧基乙基糖或限制性乙基糖；并且其中每个核苷间键均为硫代磷酸酯键。
22.如权利要求21所述的化合物，其中所述5’翼段的所述3个连接的核苷中的每一个均包含2’-0_甲氧基乙基糖，并且所述3’翼段的所述3个连接的核苷中的每一个均包含限制性乙基糖。
23.如权利要求21所述的化合物，其中所述5’翼段的所述3个连接的核苷按5’至3’方向包含2’ -O-甲氧基乙基糖、限制性乙基糖以及限制性乙基糖，并且所述3’翼段的所述3个连接的核苷按5’至3’方向包含限制性乙基糖、限制性乙基糖以及2’ -O-甲氧基乙基糖。
24.如权利要求20所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含: 间隔段，其由10个连接的脱氧核苷组成； 5’翼段，其由2个连接的核苷组成；以及 3’翼段，其由4个连接的核苷组成； 其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间，其中每个翼段的每个核苷均包含2’ -O-甲氧基乙基糖或限制性乙基糖；并且其中每个核苷间键均为硫代磷酸酯键。
25.如权利要求24所述的化合物，其中所述5’翼段的所述2个连接的核苷按5’至3’方向包含2’-0_甲氧基乙基糖和限制性乙基糖，并且所述3’翼段的所述4个连接的核苷按5’至3’方向包含限制性乙基糖、2’ -O-甲氧基乙基糖、限制性乙基糖以及2’ -O-甲氧基乙基糖。
26.如权利要求18所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含: 间隔段，其由10个连接的脱氧核苷组成； 5’翼段，其由5个连接的核苷组成；以及 3’翼段，其由5个连接的核苷组成； 其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间并且其中每个翼段的每个核苷均包含修饰的糖。
27.如权利要求18所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含: 间隔段，其由10个连接的脱氧核苷组成； 5’翼段，其由4个连接的核苷组成；以及 3’翼段，其由4个连接的核苷组成； 其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间并且其中每个翼段的每个核苷均包含修饰的糖。
28.如权利要求18所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含: 间隔段，其由10个连接的脱氧核苷组成；.5’翼段，其由3个连接的核苷组成；以及 .3’翼段，其由3个连接的核苷组成； 其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间并且其中每个翼段的每个核苷均包含修饰的糖。
29.如权利要求18所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含: 间隔段，其由10个连接的脱氧核苷组成； .5’翼段，其由2个连接的核苷组成；以及 .3’翼段，其由2个连接的核苷组成； 其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间并且其中每个翼段的每个核苷均包含修饰的糖。
30.如权利要求18所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含: 间隔段，其由10个连接的脱氧核苷组成； .5’翼段，其由3个连接的核苷组成；以及 .3’翼段，其由4个连接的核苷组成； 其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间并且其中每个翼段的每个核苷均包含修饰的糖。
31.如权利要求18所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含: 间隔段，其由10个连接的脱氧核苷组成； .5’翼段，其由I个至5个连接的核苷组成；以及 .3’翼段，其由I个至5个连接的核苷组成； 其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间，其中每个翼段的每个核苷均包含2’ -O-甲氧基乙基糖；并且其中每个核苷间键均为硫代磷酸酯键。
32.如权利要求1或2所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸由20个连接的核苷组成。
33.如权利要求1或2所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成。
34.如权利要求1或2所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸由15个至30个连接的核苷组成。
35.如权利要求1或2所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸由18个至22个连接的核苷组成。
36.如权利要求1或2所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸由20个至30个连接的核苷组成。
37.一种化合物，其包含修饰的寡核苷酸，所述修饰的寡核苷酸由10个至30个连接的核苷组成并与SEQ ID NO:1在以下核苷酸范围内互补:1至20、10至29、10至56、13至38、.13 至 35、19 至 38、25 至 47、25 至 50、25 至 56、43 至 68、43 至 63、55 至 74、58 至 73、58 至.74,58 至 77、58 至 79、58 至 80、58 至 84、59 至 74、59 至 75、59 至 80、60 至 75、60 至 76、60至 79、61 至 76、61 至 77、61 至 80、62 至 77、63 至 84、68 至 114、101 至 123、98 至 123、113 至.138,116 至 138,131 至 150,137 至 162,152 至 186,158 至 177,167 至 186,191 至 215,196至 224,196 至 215,196 至 218,199 至 228,199 至 218,199 至 224,200 至 224,205 至 224、`206 至 228、218 至 237、224 至 243、233 至 264、242 至 `263、243 至 262、244 至 263、245 至 274,245 至 260,245 至 `264,246 至 266,247 至 266,247 至 269,247 至 270,245 至 `267,251 至 267、245 至 266、250 至 269、251 至 266、`251 至 268、251 至 269、245 至 269、245 至 266、 245 至 `261、`250 至 265、250 至 266、250 至 267、250 至 268、`250 至 `269、251 至 270、252 至 267,253 至 268,253 至 `269,253 至 `272,253 至 274,254 至 269,254 至 270,254 至 `274,255 至 `270、255 至 271、255 至 274、255 至 401、255 至 400、255 至 274、255 至 273、255 至 272、 255 至 271、`256 至 271、`2`56 至 275、255 至 276、256 至 272、256 至 `276、253 至 `275、256 至 279,257 至 276,258 至 273,259 至 274,260 至 `279,262 至 281,262 至 321,262 至 315,262 至 312、265 至 `312、266 至 288、266 至 291、266 至 285、`281 至 321、281 至 303、290 至 321、 290 至 312、292 至 `311、290 至 312、`293 至 312、293 至 315、293 至 321、`296 至 321、302 至 `321,324 至 343、339 至 361、339 至 `367、348 至 367、342 至 367、358 至 392、358 至 378、360 至 392、360 至 383、`360 至 388、360 至 385、362 至 381、`366 至 388、369 至 `388、366 至 385、 366 至 392、370 至 `389、370 至 392、`380 至 399、382 至 401、384 至 433、`384 至 400、384 至 `401,385 至 401、405 至 424、409 至 `428、405 至 428、411 至 426、411 至 427、411 至 430、411 至 431,411 至 437,412 至 431,411 至 426,411 至 427,412 至 428,412 至 431,412 至 427、 413 至 433、413 至 432、`413 至 428、413 至 429、413 至 432、413 至 433、414 至 `427、415 至 427,414 至 429,414 至 430,414 至 433,415 至 `428,415 至 429,415 至 430,415 至 431,415 至 434、416 至 `431、416 至 432、416 至 429、416 至 435、417 至 432、417 至 433、417 至 436、 418 至 433、418 至 435、418 至 434、`418 至 437、419 至 435、`419 至 434、420 至 435、419 至 `432,419 至 434,421 至 `436,422 至 437,422 至 441,423 至 `436,425 至 465,454 至 `473,454 至 472,457 至 476,457 至 `472,457 至 473,454 至 `476,455 至 472,457 至 485,458 至 `485、 458 至 483、458 至 `477、458 至 473、459 至 485、`460 至 485、463 至 498、463 至 485、466 至 485,463 至 `482,457 至 491,458 至 491,459 至 491,460 至 491,463 至 `491,466 至 491,472 至 491、472 至 493、473 至 492、475 至 491、459 至 494、460 至 494、`463 至 494、466 至 494、 `467 至 498、472 至 494、475 至 `494、457 至 473、457 至 `472、458 至 494、454 至 494、457 至 494,457 至 473,485 至 513,470 至 493,476 至 519,485 至 519,500 至 519,512 至 534,512 至 550、524 至 546、536 至 559、548 至 567、`548 至 570、550 至 570、548 至 594、`554 至 573、 548 至 `576、`560 至 594、584 至 606、611 至 `645、617 至 363、`623 至 `642、617 至 645、639 至 754,639 至 658,639 至 `654,641 至 `656,642 至 657,643 至 658,642 至 754,653 至 `672,662 至 `685、665 至 685，665 至 689、668 至 687、670 至 754、670 至 706、670 至 685、670 至 686、 `670 至 689、`671 至 690、`671 至 691、671 至 686、671 至 `687、672 至 `693、672 至 `697、672 至 707,672 至 687,672 至 `688,673 至 688,674 至 `693,678 至 693,679 至 694,679 至 `707,679 至 698、679 至 `701、679 至 702、679 至 707、680 至 695、`680 至 699、679 至 699、681 至 706、 681 至 696、`682 至 `697、682 至 706、`682 至 707、682 至 702、682 至 `701、`683 至 698、684 至 `699,685 至 700、686 至 701、687 至 `754、688 至 704、689 至 709、689 至 710、690 至 705、`679 至 705、679 至 710、`679 至 706、690 至 710、691 至 `710、690 至 754、690 至 `706、684 至 703、 687 至 705、`687 至 702、687 至 703、687 至 706、688 至 703、688 至 `704、688 至 705、689 至 `704,689 至 705、689 至 708、690 至 705、690 至 706、690 至 709、691 至 706、692 至 711、`693 至 716、693 至 712、`695 至 715、697 至 716、697 至 `716、690 至 716、724 至 `746、724 至 752、.724 至 754、724 至 758、733 至 752、738 至 754、738 至 753、739 至 758、739 至 754、739 至.775,739 至 754,740 至 754,742 至 785,742 至 773,757 至 776,757 至 785,790 至 815,793至 812、811 至 833、811 至 844、814 至 833、811 至 906、820 至 839、822 至 844、822 至 867、.823 至 842、845 至 864、845 至 867、854 至 906、845 至 909、845 至 906、854 至 876、863 至.882,863 至 885、878 至 900、887 至 906、899 至 918、899 至 933、899 至 958、905 至 927、905至 933,914 至 933,936 至 958,936 至 955,945 至 964,951 至 970,951 至 985,951 至 1044、.951 至 1024,951 至 1056,951 至 997,960 至 985,963 至 1044,963 至 1024,963 至 997,972 至.1015,1025 至 1044、1031 至 1056、1037 至 1056、1046 至 1083、1049 至 1068、1070 至 1089、.1070 至 1095、1082 至 1101、1081 至 1134,1081 至 1143,1082 M 1101,1088 M 1107,1088 M.1134,1094 至 1119,1097 至 1119,1112 至 1134,1118 至 1143,1118 至 1146,1088 至 1146、.1121 至 1140、1127 至 1146、1127 至 1193、1150 至 1193、1156 至 1187、1165 至 1187、1170 至.1192,1171 至 1191,1172 至 1191,1176 至 1192,1176 至 1285,1177 至 1192,1176 至 1191、.1203 至 1297、1206 至 1228,1206 M 1255,1209 M 1228,1215 M 1255,1245 M 1265,1251 M .1280.1262至 1285,1251 至 1285,1259 至 1296,1259 至 1290,1259 至 1287,1261 至 1296、.1261 至 1285,1261 至 1276,1261 至 1277,1261 至 1280,1262 M 1296,1262 M 1277,1262 M.1278.1262至 1281,1263 至 1278,1263 至 1279,1263 至 1282,1264 至 1279,1264 至 1280、.1264 至 1283、1264 至 1297、1265 至 1280、1265 至 1281,1265 M 1284,1266 M 1281,1266 M.1282,1266 至 1285,1267 至 1282,1267 至 1283,1268 至 1283,1268 至 1284,1268 至 1296、.1269 至 1284,1269 至 1285,1269 至 1288,1270 至 1285,1271 至 1290,1271 至 1296,1277 至.1296,1261 至 1290,1262 至 1290,1268 至 1290,1263 至 1305,1259 至 1305,1259 至 1305、.1266 至 1305,1259 至 1302,1275 至 1294,1281 至 1306,1281 至 1324,1281 至 1336,1282 至.1301,1286 至 1306、1290 至 1324、1293 至 1318、1290 至 1324、1293 至 1315、1296 至 1315、.1311 至 1336,1311 至 1333、1326 至 1345、1353 至 1381,1359 M 1378,1395 M 1414,1498 M.1532,1498 至 1523,1498 至 1535,1510 至 1529,1515 至 1535,1515 至 1563,1515 至 1596、.1515 至 1605、1515 至 1602、1515 至 1540,1515 M 1535,1518 M 1605、1518 至 1602、1518 至.1537,1521 至 1563,1521 至 1540,1550 至 1655,1550 至 1563,1550 至 1569,1553 至 1578、.1553 至 1599、1553 至 1590、1565 至 1584、1571 至 1595,1577 M 1605,1577 M 1606,1577 M.1592,1577 至 1593,1577 至 1596,1578 至 1593,1578 至 1594,1578 至 1597,1578 至 1598、.1571 至 1598、1579 至 1594、1579 至 1594、1579 至 1598,1580 M 1595,1580 M 1596,1580 M.1599,1580 至 1605、1580 至 1602、1581 至 1596、1581 至 1597、1581 至 1600、1582 至 1597、.1582 至 1598、1582 至 1601、1582 至 1602,1553 M 1655,1583 M 1598、1583 至 1599、1583 至.1602,1584 至 1599,1584 至 1600,1584 至 1603,1585 至 1600,1585 至 1601,1585 至 1604、.1586 至 1601,1586 M 1602、1586 至 1605、1587 至 1602、1587 至 1603,1587 M 1606,1588 M.1603、1588 至 1604、1589 至 1604、1589 至 1605、1590 至 1605、1590 至 1606、1591 至 1606、.1586 至 1652、1642 至 1664、1651 至 1720,1651 至 1673,1655 M 1679,1695 M 1720,1716 M.1738,1743 至 1763,1743 至 1768,1764 至 1783,1773 至 1792,1777 至 1796,1777 至 1800、.1778 至 1800、1778 至 1793、1778 至 1794,1778 M 1797,1779 M 1798、1779 至 1797、1779 至.1796,1779 至 1795,1779 至 1794,1780 至 1799,1780 至 1796,1780 至 1795,1781 至 1797、.1781 至 1796,1781 至 1796,1781 至 1800,1781 至 1797,1782 M 1799,1782 M 1797,1782 M`1798、1783 至 1798、1783 至 1799、1784 至 1800、1784 至 1799、1779 至 1799、1778 至 1889、`1778 至 1794,1779 M 1795、1780 至 1799、1785 至 1800、1794 至 1813,1806 M 1837,1806 M`1828,1806 至 1825、1809 至 1828、1812 至 1843、1812 至 1837、1812 至 1831、1815 至 1843、`1815 至 1844,1815 至 1840,1815 至 1834,1818 至 1837,1821 至 1840,1821 至 1844,1821 至`1837,1822 至 1843、1822 至 1839、1822 至 1837、1823 至 1843、1823 至 1838、1824 至 1839、`1827 至 1846、1861 至 1884,1861 至 1880,1865 M 1885,1866 M 1881、1867 至 1882、1867 至`1886、1868 至 1883、1869 至 1885、1869 至 1884、1870 至 1885、1871 至 1886、1872 至 1887、`1874 至 1889,1876 M 1895、1888 至 1914、1888 至 1908、1891 至 1910,1891 M 1914,1895 M`1938,1895 至 1935,1913 至 1935,1898 至 1920,1907 至 1929,1913 至 1935,1918 至 1934、`1919 至 1938、1919 至 1934、1921 至 1934,1928 M 1956,1957 M 1976、2035 至 2057、2083 至`2141,2230 至 2261,2368 至 2393,2381 至 2397,2368 至 2394,2379 至 2394,2381 至 2396、`2368 至 2397,2368 至 2396,2420 至 2439,2458 至 2476,2459 至 2478,2819 至 2838,2818 至`2838、2873至2892或3161至3182，其中所述修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO:1至少90%互补。
38.一种化合物，其包含修饰的寡核苷酸，所述修饰的寡核苷酸由10个至30个连接的核苷组成并且其所具有的核酸碱基序列包含具有至少8个连续核酸碱基且与以下核酸碱基的等长部分100%互补的部分:1至20、10至29、10至56、13至38、13至35、19至38、25至 47、25 至 50、25 至 56、43 至 68、43 至 63、55 至 74、58 至 73、58 至 74、58 至 77、58 至 79、58至 80、58 至 84、59 至 74、59 至 75、59 至 80、60 至 75、60 至 76、60 至 79、61 至 76、61 至 77、`61 至 80、62 至 77、63 至 84、68 至 114、101 至 123、98 至 123、113 至 138、116 至 138、131 至`150,137 至 162,152 至 186,158 至 177,167 至 186,191 至 215,196 至 224,196 至 215,196至 218,199 至 228,199 至 218,199 至 224,200 至 224,205 至 224,206 至 228,218 至 237、`224 至 243、233 至 264、242 至 263、243 至 262、244 至 263、245 至 274; 245 至 260、245 至`264,246 至 266,247 至 266,247 至 269,247 至 270,245 至 267,251 至 267,245 至 266,250至 269、251 至 266、251 至 268、251 至 269、245 至 269、245 至 266、245 至 261、250 至 265、`250 至 266、250 至 267、250 至 268、250 至 269、251 至 270、252 至 267、253 至 268、253 至`269,253 至 272,253 至 274,254 至 269,254 至 270,254 至 274,255 至 270,255 至 271,255至 274,255 至 401,255 至 400,255 至 274,255 至 273,255 至 272,255 至 271,256 至 271、`256 至 275、255 至 276、256 至 272、256 至 276、253 至 275、256 至 279、257 至 276、258 至`273,259 至 274,260 至 279,262 至 281,262 至 321,262 至 315,262 至 312,265 至 312,266 至`288,266 至 291,266 至 285,281 至 321,281 至 303,290 至 321,290 至 312,292 至 311,290 至`312,293 至 312,293 至 315,293 至 321,296 至 321,302 至 321,324 至 343,339 至 361,339至 367、348 至 367、342 至 367、358 至 392、358 至 378、360 至 392、360 至 383、360 至 388、`360 至 385、362 至 381、366 至 388、369 至 388、366 至 385、366 至 392、370 至 389、370 至`3`92,380 至 399、382 至 401、384 至 433、384 至 400、384 至 401、385 至 401、405 至 424、409至 428、405 至 428、411 至 426、411 至 427、411 至 430、411 至 431、411 至 437、412 至 431、`411 至 426、411 至 427、412 至 428、412 至 431、412 至 427、413 至 433、413 至 432、413 至`428,413 至 429,413 至 432,413 至 433,414 至 427,415 至 427,414 至 429,414 至 430,414至 433、415 至 428、415 至 429、415 至 430、415 至 431、415 至 434、416 至 431、416 至 432、.416 至 429、416 至 435、417 至 432、417 至 433、417 至 436、418 至 433、418 至 435、418 至 .434,418 至 437,419 至 435,419 至 434,420 至 435,419 至 432,419 至 434,421 至 436,422 至 437,422 至 441,423 至 436,425 至 465,454 至 473,454 至 472,457 至 476,457 至 472、 457 至 473、454 至 .476、455 至 472、457 至 485、458 至 485、458 至 483、458 至 477、458 至 473,459 至 485,460 至 .485,463 至 498,463 至 485,466 至 485,463 至 482,457 至 491,458 至 491、459 至 491、460 至 .491、463 至 491、466 至 491、472 至 491、472 至 493、473 至 492、 475 至 491、459 至 494、460 至 494、463 至 494、466 至 494、467 至 498、472 至 494、475 至 494,457 至 473,457 至 472,458 至 .494,454 至 494,457 至 494,457 至 473,485 至 513,470 至 493,476 至 519,485 至 519,500 至 519,512 至 534,512 至 550,524 至 546,536 至 559、 548 至 567、548 至 570、550 至 570、548 至 594、554 至 .573、548 至 576、560 至 594、584 至 606,611 至 645,617 至 363,623 至 642,617 至 645,639 至 .754,639 至 658,639 至 654,641 至 656、642 至 657、643 至 658、642 至 754、653 至 672、662 至 .685、665 至 685，665 至 689、 668 至 687、670 至 754、670 至 706、670 至 685、670 至 686、670 至 689、671 至 690、671 至 691,671 至 686,671 至 687,672 至 693,672 至 697,672 至 707,672 至 .687,672 至 688,673 至 688、674 至 693、678 至 693、679 至 694、679 至 707、679 至 698、679 至 .701、679 至 702、 679 至 707、680 至 695、680 至 699、679 至 699、681 至 706、681 至 696、682 至 697、682 至 706,682 至 707、682 至 702、682 至 701、683 至 698、684 至 699、685 至 700、686 至 701、687 至 754、688 至 704、689 至 709、689 至 710、690 至 705、679 至 705、679 至 710、679 至 706、 690 至 710、691 至 710、690 至 754、690 至 706、684 至 703、687 至 705、687 至 702、687 至 703,687 至 706、688 至 703、688 至 704、688 至 705、689 至 704、689 至 705、689 至 708、690 至 705、690 至 706、690 至 709、691 至 706、692 至 711、693 至 716、693 至 712、695 至 715、 697 至 716、697 至 716、690 至 716、724 至 746、724 至 752、724 至 754、724 至 758、733 至 752,738 至 754,738 至 753,739 至 758,739 至 754,739 至 775,739 至 754,740 至 754,742 至 785、742 至 773、757 至 776、757 至 785、790 至 815、793 至 812、811 至 833、811 至 844、 814 至 833、811 至 906、820 至 839、822 至 844、822 至 867、823 至 842、845 至 864、845 至 867,854 至 906、845 至 909、845 至 906、854 至 876、863 至 882、863 至 885、878 至 900、887 至 906、899 至 918、899 至 933、899 至 958、905 至 927、905 至 933、914 至 933、936 至 958、 936 至 955、945 至 964、951 至 970、951 至 985、951 至 1044、951 至 1024、951 至 1056、951 至 997、960 至 985、963 至 1044、963 至 1024、963 至 997、972 至 1015、1025 至 1044、1031 至 1056,1037 至 1056,1046 至 .1083,1049 至 1068,1070 至 1089,1070 至 1095,1082 至 1101、 1081 至 1134、1081 至 1143、1082 至 .1101、1088 至 1107、1088 至 1134、1094 至 1119、1097 至 1119,1112 至 1134,1118 至 1143,1118 至 .1146,1088 至 1146,1121 至 1140,1127 至 1146、 1127 至 1193、1150 至 1193、1156 至 1187、1165 至 .1187、1170 至 1192、1171 至 1191、1172 至 1191,1176 至 1192,1176 至 1285,1177 至 1192,1176 至 .1191,1203 至 1297,1206 至 1228、 1206 至 1255、1209 至 1228、1215 至 1255、1245 至 1265,1251 M .1280,1262 M 1285,1251 至 1285,1259 至 1296,1259 至 1290,1259 至 1287,1261 至 1296,1261 至 .1285,1261 至 1276、 1261 至 1277,1261 至 1280、1262 至 1296、1262 至 1277,1262 M 1278,1262 M .1281,1263 M 1278,1263 至 1279,1263 至 1282,1264 至 1279,1264 至 1280,1264 至 1283,1264 至 1297、.1265 至 1280、1265 至 1281、1265 至 1284、1266 至 1281、1266 至 1282,1266 M 1285,1267 M.1282.1267至 1283,1268 至 1283,1268 至 1284,1268 至 1296,1269 至 1284,1269 至 1285、.1269 至 1288,1270 M 1285,1271 至 1290,1271 至 1296,1277 M 1296,1261 至 1290,1262 M.1290.1268至 1290、1263 至 1305、1259 至 1305、1259 至 1305、1266 至 1305、1259 至 1302、.1275 至 1294,1281 至 1306,1281 至 1324,1281 至 1336,1282 M 1301,1286 M 1306,1290 M.1324,1293 至 1318,1290 至 1324,1293 至 1315,1296 至 1315,1311 至 1336,1311 至 1333、.1326 至 1345、1353 至 1381、1359 至 1378,1395 M 1414,1498 M 1532、1498 至 1523、1498 至.1535,1510 至 1529,1515 至 1535,1515 至 1563,1515 至 1596,1515 至 1605,1515 至 1602、.1515 至 1540、1515 至 1535、1518 至 1605、1518 至 1602、1518 至 1537、1521 至 1563、1521 至.1540,1550 至 1655、1550 至 1563、1550 至 1569、1553 至 1578、1553 至 1599、1553 至 1590、.1565 至 1584,1571 至 1595、1577 至 1605、1577 至 1606,1577 M 1592,1577 M 1593,1577 M.1596,1578 至 1593,1578 至 1594,1578 至 1597,1578 至 1598,1571 至 1598,1579 至 1594、.1579 至 1594、1579 至 1598、1580 至 1595、1580 至 1596、1580 至 1599、1580 至 1605、1580 至.1602,1581 至 1596、1581 至 1597、1581 至 1600、1582 至 1597、1582 至 1598、1582 至 1601、.1582 至 1602,1553 M 1655、1583 至 1598、1583 至 1599、1583 至 1602,1584 M 1599,1584 M.1600,1584 至 1603、1585 至 1600、1585 至 1601、1585 至 1604、1586 至 1601、1586 至 1602、.1586 至 1605、1587 至 1602、1587 至 1603、1587 至 1606、1588 至 1603、1588 至 1604、1589 至.1604、1589 至 1605、1590 至 1605、1590 至 1606、1591 至 1606、1586 至 1652、1642 至 1664、.1651 至 1720,1651 至 1673,1655 M 1679,1695 M 1720,1716 M 1738、1743 至 1763、1743 至.1768,1764 至 1783,1773 至 1792,1777 至 1796,1777 至 1800,1778 至 1800,1778 至 1793、.1778 至 1794,1778 M 1797、1779 至 1798、1779 至 1797、1779 至 1796,1779 M 1795,1779 M.1794,1780 至 1799,1780 至 1796,1780 至 1795,1781 至 1797,1781 至 1796,1781 至 1796、.1781 至 1800,1781 至 1797、1782 至 1799、1782 至 1797,1782 M 1798,1783 M 1798,1783 M.1799,1784 至 1800,1784 至 1799,1779 至 1799,1778 至 1889,1778 至 1794,1779 至 1795、.1780 至 1799、1785 至 1800、1794 至 1813、1806 至 1837、1806 至 1828、1806 至 1825、1809 至.1828,1812 至 1843,1812 至 1837,1812 至 1831,1815 至 1843,1815 至 1844,1815 至 1840、.1815 至 1834,1818 M 1837,1821 至 1840,1821 至 1844,1821 至 1837,1822 M 1843,1822 M.1839,1822 至 1837、1823 至 1843、1823 至 1838、1824 至 1839、1827 至 1846、1861 至 1884、.1861 至 1880、1865 至 1885、1866 至 1881、1867 至 1882、1867 至 1886、1868 至 1883、1869 至.1885、1869 至 1884、1870 至 1885、1871 至 1886、1872 至 1887、1874 至 1889、1876 至 1895、.1888 至 1914,1888 至 1908,1891 至 1910,1891 至 1914,1895 至 1938,1895 至 1935,1913 至.1935,1898 至 1920,1907 至 1929,1913 至 1935,1918 至 1934,1919 至 1938,1919 至 1934、.1921 至 1934,1928 至 1956,1957 至 1976,2035 至 2057,2083 至 2141,2230 至 2261,2368 至.2393,2381 至 2397、2368 至 2394、2379 至 2394、2381 至 2396、2368 至 2397、2368 至 2396、.2420 至 2439,2458 至 2476,2459 至 2478,2819 至 2838,2818 至 2838,2873 至 2892 或 3161至3182，其中所述修饰的寡核苷酸的所述核酸碱基序列与SEQ ID NO:1互补。
39.如权利要求36所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸的至少一个核苷包含至少一个2’ -O-甲氧基乙基糖或限制性乙基糖。
40.一种化合物，其包含修饰的寡核苷酸，所述修饰的寡核苷酸由10至30连接的核苷组成并具有包含核酸碱基序列 SEQ ID ΝΟ:1、1273、1274、1275、1276、1277、1278、1279、.1280、1281、1282、1283、1284、1285、1287、1352、1353、1354、1359、1360、1361、1362 以及1363中任何一个的至少8个连续核酸碱基的核酸碱基序列。
41.一种组合物，其包含如权利要求1至40中任一项所述的化合物或其盐以及药学上可接受的载体或稀释剂中的至少一个 。
42.一种方法，其包括向动物施用如权利要求1至41中任一项所述的化合物或组合物。
43.如权利要求42所述的方法，其中所述动物是人。
44.如权利要求43所述的方法，其中施用所述化合物预防、治疗、改善HBV相关疾病、病症或病状，或延缓HBV相关疾病、病症或病状的进展。
45.如权利要求44所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是肝病。
46.如权利要求44所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是黄疸、肝炎、肝纤维化、炎症、肝硬化、肝衰竭、弥漫性肝细胞炎症性疾病、噬血细胞综合征、血清肝炎、HBV病毒血症或与肝脏疾病相关的移植。
47.如权利要求44所述的方法，其中所述疾病或病状是过度增生性疾病。
48.如权利要求47所述的方法，其中所述过度增生性疾病是肝癌。
49.一种降低动物的抗原水平的方法，所述方法包括向所述动物施用如权利要求1至41中任一项所述的化合物或组合物。
50.如权利要求49所述的方法，其中HBsAG水平被降低。
51.如权利要求49所述的方法，其中HBeAG水平被降低。
52.如权利要求49所述的方法，其中所述动物是人。
53.如权利要求49所述的方法，其包括将所述化合物或组合物和第二种药剂共同施用。
54.如权利要求53所述的方法，其中将所述化合物或组合物和所述第二种药剂同时施用。
【文档编号】C07H21/02GK103582648SQ201280025777
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2012年4月20日 优先权日:2011年4月21日
【发明者】埃里克·E·斯威兹, 苏珊·M·弗赖尔, 迈克尔·L·麦凯莱布 申请人:Isis制药公司