疏水性治疗剂的制剂、其制备方法及应用的制作方法

疏水性治疗剂的制剂、其制备方法及应用的制作方法
【专利摘要】本发明还提供了制备疏水性治疗剂、诸如氟替卡松或曲安西龙的纳米晶体的方法、其药物组合物(例如，局部或鼻内组合物)，及治疗和/或预防障碍、诸如睑缘炎、睑板腺功能不良或皮肤炎症或呼吸系统疾病(例如，哮喘)的征兆和/或症状的方法。
【专利说明】疏水性治疗剂的制剂、其制备方法及应用
[0001] 相关申请
[0002] 本申请要求2012年5月8日提交的美国临时申请61/644, 105 ;2012年6月8日 提交的美国临时申请61/657,239 ;2012年8月23提交的美国临时申请61/692,487、2013 年2月12日提交的美国临时申请61/763, 770 ;和2013年3月15日提交的美国临时申请 61/788, 519及2013年1月7日提交的美国非临时申请13/735, 973的优先权和权益。由此 将这些申请每一项的内容完整地引入作为参考。 发明领域
[0003] 本发明提供了最优化以满足药物施用标准（例如，局部或鼻内施用）的疏水性治 疗剂（诸如丙酸氟替卡松和曲安奈德）的无菌的纳米晶体的制备方法。
[0004] 发明背景
[0005] 丙酸氟替卡松[(6 α，11 β，16 α，17 α )-6, 9，-二氟-11-羟基-16-甲基-3-氧 代-17-(1-氧代丙氧基）雄留-1，4-二烯-17-硫代甲酸，S-氟甲酯]，一种合成的氟化皮 质类固醇。皮质类固醇是一类用作抗炎药和止痒剂的主要是合成的类固醇。丙酸氟替卡松 (FP)已经作为皮质类固醇上市销售，用于治疗炎症相关疾病诸如变应性鼻炎、哮喘和特应 性皮炎。通过在人中的长期应用，该分子的ρκ/ro性质已经非常确定。
[0006] 在化学角度上丙酸氟替卡松是C25H31F30 5S。丙酸氟替卡松具有500. 6的分子量。 其是白色至类白色的粉末，且在水中不可溶。像其他的局部用皮质类固醇一样，丙酸氟替卡 松具有抗炎、止痒和血管收缩性质。局部用类固醇的抗炎活性的机制总体而言不清楚。然 而，皮质类固醇被认为通过诱导磷脂酶A 2抑制蛋白质（统称为脂皮质蛋白）起作用。据推 测这些蛋白质控制炎症的强效调节剂（例如前列腺素和白三烯）的生物合成，后者通过抑 制其共同前体花生四烯酸的释放来实现。花生四烯酸是通过磷脂酶A 2从膜磷脂释放。所 述化合物具有强效的抗炎活性，且特别可用于治疗呼吸系统障碍、特别是哮喘。使用人肺细 胞溶胶制备物的体外试验已经确定丙酸氟替卡松为人糖皮质激素受体激动剂，具有超过地 塞米松18倍的亲和力及几乎两倍于倍氯米松-17-单丙酸酯（BMP)(布地奈德的活性代谢 物）的亲和力。
[0007] 丙酸氟替卡松的目前的市售形式的不良反应包括淋巴的征兆和症状；心血管心 悸；过敏性反应、包括血管性水肿、皮疹、脸和舌的水肿、瘙痒、荨麻疹、支气管痉挛、喘鸣、呼 吸困难和过敏性/过敏样反应；中耳炎；扁桃体炎；鼻漏/后鼻滴注/鼻涕；耳痛；咳嗽；喉 炎；声撕/发声困难；鼻出血；扁桃体炎；鼻的征兆和症状；未指定的口咽斑块（unspecified oropharyngeal plaques);耳鼻和喉息肉；喷嚷；鼻窦疼痛；鼻炎；喉收缩；变应性耳、鼻和 喉障碍；味觉和/或嗅觉改变或丧失；鼻中隔穿孔；鼻粘膜出血；鼻溃疡；声音变化；体液 失调（fluid disturbances);体重增加；甲状腺肿；尿酸代谢障碍；食欲紊乱；眼发炎；视 力模糊；青光眼；眼内压增加和白内障；角膜炎和结膜炎；睑结膜炎；恶心和呕吐；腹痛；病 毒性胃肠炎；胃肠炎/结肠炎；胃肠道感染；腹部不适；腹泻；便秘；阑尾炎；消化不良和胃 障碍；异常肝功能；损伤；发热；銷齿；牙的问题；口腔发炎；口和舌障碍；胆囊炎；下呼吸道 感染；肺炎；关节痛和风湿关节病；肌肉痛性痉挛和痉挛；骨折；伤口和撕裂伤；挫伤和血 肿；烧伤；肌肉骨骼炎症；骨和软骨障碍；关节疼痛；扭伤/劳损（strain);颈障碍/症状； 肌肉酸痛/疼痛；疼和痛；四肢疼痛；头晕/眩晕；震颤；催眠作用；压缩神经综合征；睡眠 障碍；颉神经麻搏；偏头痛；神经质；支气管炎；胸部阻塞（chest congestion)和/或症 状；不适和疲劳；疼痛；水肿和肿胀；细菌感染；真菌感染；运动性障碍；囊肿、肿块和团块 (masses);心境障碍；急性鼻咽炎；呼吸困难；由于吸入导致的发炎；荨麻疹；疹/皮肤出 疫（rash/skin eruption);汗和皮脂障碍；出汗；日光性皮炎；皮炎和皮肤病；病毒性皮肤 感染；湿疹；真菌性皮肤感染；瘙痒；痤疮和毛囊炎；烧伤；多毛症；红斑增加；荨麻疹；毛囊 炎；色素减退；口周皮炎；皮肤萎缩；条纹；粟粒疹；脓疱性银屑病；尿路感染；细菌性生殖 道感染；痛经；阴道念珠菌病；盆腔炎性疾病；阴道炎/外阴阴道炎；和不规则月经周期。
[0008] 所有市售的和研究性产品的氟替卡松的作用机制均是相同的；穿透细胞质膜和 之后该分子与胞质的糖皮质激素受体（通过由单个基因转录的两个分开的受体GR-α和 GR-β表示）结合。在这两个受体中，GR-α与抗炎应答的产生相关。其他调节炎症的机 制通过蛋白-蛋白螯合进行，后者经由与其他促炎转录因子、诸如激活蛋白（AP-I)结合 进行，其导致炎症基因转录的抑制。GC-GR复合物也可以直接通过诱导抑制蛋白、例如抑制 NF- κ B活性的I κ B来起作用。因此，抗炎作用还影响免疫通路，导致免疫抑制（使用所述 药物观测到的副作用之一）。其它相关的副作用为眼部影响诸如眼内压的增加（青光眼） 和白内障生长。然而，这些副作用与药物的浓度及施用途径有关。
[0009] 存在适于眼部应用的氟替卡松的局部用制剂的需求。
[0010] 发明概述
[0011] 本发明基于制备疏水性药物的无菌的稳定的纳米晶体、诸如丙酸氟替卡松纳米晶 体或曲安奈德纳米晶体的方法这一发现。本发明的方法能使疏水性药物（例如，丙酸氟替 卡松和曲安奈德）纳米晶体的混悬剂成为0. 0001 %至10%的浓缩形式而保持尺寸、纯度、 形状（棒或板）、pH和重量摩尔渗透压浓度（osmolality)。该方法使得可以在比之前已经 实现用于治疗眼和皮肤炎症性障碍更高的可耐受浓度制备局部用制剂。该方法还能制备结 晶程度更高的（more crystalline)疏水性药物和控制疏水性药物的纳米晶体的尺寸和粒 度分布。尺寸和粒度分布的控制可通过选择该方法的具体条件来实现，诸如用于该方法的 组分溶液的温度、PH和/或粘度，稳定剂的类型、分子量和/或粘度，退火/缓慢冷却持续 时间（annealing duration)、声波处理输出能量、批量大小和流速。
[0012] 在一个方面中，本发明提供了丙酸氟替卡松的形态（A形式），其通过包含在约 7. 8、15. 7、20. 8、23. 7、24. 5和32. 5度2 Θ的峰的X-射线粉末衍射图表征。
[0013] 本发明还提供了多种丙酸氟替卡松的纳米板，其具有约l〇-l〇〇〇〇nm(例如， IOO-IOOOnm 或 300-600nm)的平均尺寸。
[0014] 本发明还提供了纯化的丙酸氟替卡松的晶形，其通过不低于〇.35g/cm3 (例如，不 低于〇· 40g/cm3、不低于0· 45g/cm3、不低于0· 50g/cm3或不低于0· 55g/cm3)的振实密度表 征。
[0015] 本文描述的形态、晶形和/或纳米晶体可包括一种或多种以下特征。
[0016] 所述形态进一步通过还包含在约9. 9、13. 0、14. 6、16. 0、16. 9、18. 1和34. 3度2 Θ 的峰的X-射线粉末衍射图表征。
[0017] 所述形态通过基本类似于图31A中所示的X-射线粉末衍射图表征。
[0018] 所述形态具有以重量计大于80 %的纯度（例如，>85%、>90%、>95%、>97%、 >98%或 >99% )。
[0019] 所述形态通过不低于0. 35g/cm3 (例如，不低于0. 40g/cm3、不低于0. 45g/cm3、不低 于0. 50g/cm3或不低于0. 55g/cm3)的振实密度进一步表征。
[0020] 所述形态进一步通过以下表征：熔点为299. 5°C，熔程为KTC。
[0021] 所述形态进一步通过约1 μ g/g/天（在水中，在室温）的在水中的溶出度表征。
[0022] 所述形态包括具有约 IO-IOOOOnm (例如，100-1000nm、300-600nm、400-800nm 或 500-700nm)的平均尺寸的丙酸氟替卡松纳米板。
[0023] 所述形态包括粒度分布范围窄的丙酸氟替卡松纳米板。换言之，纳米板尺寸基本 均一。
[0024] 所述形态包括具有 50-100nm、100-300nm、300-600nm、400-600nm、400-800nm、 800-2000nm、1000-2000nm、1000-5000nm、2000-5000nm、2000-3000nm、3000-5000nm 或 5000-10000nm的粒度分布的丙酸氟替卡松纳米板。
[0025] 所述纳米板各自具有 5nm 至 500nm (例如，5-400nm、5_200nm、10_150nm 或 30-1 OOnm)的厚度。
[0026] 所述纳米板具有基本正交于限定所述纳米板厚度的表面的[001]晶轴。
[0027] 所述大量的纳米板通过不低于0. 35g/cm3 (例如，不低于0. 40g/cm3、不低于0. 45g/ cm3、不低于0. 50g/cm3或不低于0. 55g/cm3)的振实密度表征。
[0028] 所述大量的纳米板通过以下表征：熔点为299. 5°C，熔程为KTC。
[0029] 所述大量的纳米板通过约1 μ g/g/天（在水中，在室温）的在水中的溶出度表征。
[0030] 所述大量的纳米板通过包含在7. 8、15. 7、20. 8、23. 7、24. 5和32. 5度2 Θ的峰的 X-射线粉末衍射图表征。
[0031] 所述大量的纳米板进一步通过还包含在约9. 9、13. 0、14. 6、16. 0、16. 9、18. 1和 34. 3度2 Θ的峰的X-射线粉末衍射图表征。
[0032] 所述大量的纳米板通过基本类似于图31A中所示的X-射线粉末衍射图表征。
[0033] 所述大量的纳米板具有以重量计大于80%的纯度（例如，>85%、>90%、>95%、 >97%、>98%或 >99% )。
[0034] 所述晶形进一步通过以下表征：熔点为299. 5°C，熔程为KTC。
[0035] 所述晶形进一步通过约1 μ g/g/天（在水中，在室温）的在水中的溶出度表征。
[0036] 所述晶形进一步通过包含在7.8、15.7、2〇.8、23.7、24.5和32.5度2 0的峰的 X-射线粉末衍射图表征。
[0037] 所述晶形进一步通过还包含在约9. 9、13. 0、14. 6、16. 0、16. 9、18. 1和34. 3度2 Θ 的峰的X-射线粉末衍射图表征。
[0038] 所述晶形通过基本类似于图31A中所示的X-射线粉末衍射图表征。
[0039] 所述晶形具有以重量计大于80 %的纯度（例如，>85%、>90%、>95%、>97%、 >98%或 >99% )。
[0040] 在另一个方面，本发明提供了曲安奈德的新的形态、即B形式，其通过包含在约 11. 9、13. 5、14. 6、15. 0、16. 0、17. 7和24. 8度2 Θ的峰的X-射线粉末衍射图表征。
[0041] B 形式进一步通过包含在约 7· 5、12. 4、13. 8、17. 2、18. 1、19. 9、27· 0 和 30. 3 度 2 θ 的另外的峰的X-射线粉末衍射图表征。
[0042] B形式通过基本类似于图39中红色的谱线的X-射线粉末衍射图表征。
[0043] B形式基本不含杂质。
[0044] B形式具有大于85%、大于90%、大于92%、大于95%、大于96%、大于97%、大于 98 %或大于99 %的纯度。
[0045] 本发明还提供了制备上文所述的大量的纳米板的方法。所述方法包括：
[0046] 提供I阶段溶液（例如，无菌的溶液），其包含丙酸氟替卡松和用于丙酸氟替卡松 的溶剂；
[0047] 提供II阶段溶液（例如，无菌的溶液），其包含至少一种表面稳定剂和用于丙酸氟 替卡松的抗溶剂，其中所述至少一种表面稳定剂包含纤维素表面稳定剂；
[0048] 将I阶段溶液与II阶段溶液混合，得到III阶段混合液，其中当混合这两种溶液 时使用声波处理，且该混合在不超过25°C的第一个温度进行；和
[0049] 将III阶段混合液在高于第一个温度的第二个温度退火（annealing) -段时间 (T1)，以致生成含大量丙酸氟替卡松的纳米板的III阶段混悬物。
[0050] 在另一个方面，本发明提供了制备疏水性治疗剂的纯化的、稳定的、无菌的纳米晶 体的方法。所述方法包括：
[0051] 提供含疏水性治疗剂和用于该疏水性治疗剂的溶剂的I阶段溶液（例如，无菌的 溶液）；
[0052] 提供含至少一种表面稳定剂和用于该疏水性治疗剂的抗溶剂的II阶段溶液（例 如，无菌的溶液）；
[0053] 将I阶段溶液和II阶段溶液混合，得到III阶段混合液，其中所述混合在不超过 25°C的第一个温度进行；和
[0054] 将III阶段混合液在超过第一个温度的第二个温度退火一段时间（T1)，以致生成 含大量该疏水性治疗剂的纳米晶体的III阶段混悬物。
[0055] 本文所述的方法可包括一种或多种以下特征。
[0056] 所述疏水性治疗剂是留体药物、诸如皮质类固醇。
[0057] 所述疏水性治疗剂是氟替卡松或其酯或曲安奈德。
[0058] 所述疏水性治疗剂是丙酸氟替卡松。
[0059] 当混合无菌的I阶段溶液和无菌的II阶段溶液时，使用声波处理（例如，功率 10-75W 或约 50-70W)。
[0060] 所述第一个温度为-KTC至30°c、-10°c至25°C (例如，22°C或不超过20°C)、 或-5 °C至I (TC、或(TC至5 °C、或(TC至2 °C、或2 °C至4 °C、或2 °C至8 °C的温度。
[0061] 所述第二个温度为4°C至60°C、或KTC至40°C、或15°C至25°C的温度。
[0062] T1为至少8小时。
[0063] II阶段溶液中的至少一种表面稳定剂包含纤维素表面稳定剂。
[0064] 所述纤维素表面稳定剂是分子量不超过IOOkDa的甲基纤维素。
[0065] 所述甲基纤维素在III阶段混悬物中的浓度为约0. 1%至0. 5%。
[0066] 用于II阶段溶液的纤维素表面稳定剂是水溶液。
[0067] 纤维素表面稳定剂的水溶液具有不超过4000cP(例如，不超过2000cP、不超过 1000cP、不超过500cP、不超过100cP、不超过50cP、不超过30cP或不超过15cP)的粘度。 [0068] 纤维素表面稳定剂的水溶液具有约4cP至50cP的粘度，且所述纤维素表面稳定剂 是甲基纤维素。
[0069] 所述抗溶剂包括水（例如，蒸馏水）。
[0070] II阶段溶液中的至少一种表面稳定剂还包含苯扎氯铵。
[0071] II阶段溶液中的苯扎氯铵浓度为约0.005%至0· 15% (例如，约0.01%-0· 12% 或 0· 02% -0· 08% )。
[0072] II阶段溶液的pH值不超过6. 5或不超过6. 0或不超过5. 5。
[0073] I阶段溶液的溶剂包括聚醚。
[0074] 所述聚醚选自聚乙二醇（PEG)、聚丙二醇（PPG)及其混合物。
[0075] 所述聚醚选自PEG400、PPG400及其混合物。
[0076] I阶段溶液中PEG 400的浓度为约20至35%。
[0077] I阶段溶液中PPG 400的浓度为约65 %至75%。
[0078] I阶段溶液的溶剂包括一种或多种多元醇、诸如单体的多元醇（例如，甘油、丙二 醇和乙二醇）和聚合的多元醇（例如，聚乙二醇）。
[0079] I阶段溶液还包含表面稳定剂。
[0080] I阶段溶液中的表面稳定剂是吐温80,例如以约7. 0%至15%的浓度存在于I阶 段溶液中的吐温80。
[0081] I阶段溶液与II阶段溶液的体积比例范围为1:10至10:1(例如，1:3至3:1，或 1:2 至 2:1，或约 1:1)。
[0082] 纤维素表面稳定剂是分子量不超过IOOkDa的甲基纤维素，第一个温度是0°C至 5°C的温度，第二个温度是KTC至40°C的温度，且T 1为至少8小时。
[0083] 所述方法还包括通过切向流过滤或通过连续流动离心纯化所述疏水性治疗剂的 大量纳米晶体。所述方法可进一步包括通过例如过滤、真空干燥或离心来干燥所述疏水性 治疗剂的大量纳米晶体。所述方法可进一步包括在通过例如离心纯化纳米晶体后，将纯化 的纳米晶体与适合的水溶液混合，可以向所述水溶液中加入另外的赋形剂，从而形成符合 FDA眼或皮肤施用标准的最终制剂。例如，所述混合在混合器（例如,Silverson Lab Mixer) 中、在室温、以6000RPM进行约60分钟或更长时间。
[0084] 通过将氟替卡松的无菌的I阶段溶液与含苯扎氯铵、甲基纤维素和蒸馏水的无菌 的II阶段溶液混合，以便制备含氟替卡松纳米晶体的混悬物的III阶段混悬物，来制备氟 替卡松的纯化的、稳定的、无菌的纳米晶体。纳米晶体为400-800nm。为了纯化，即为除去 和/或减少I阶段溶液和II阶段溶液的结晶溶剂的浓度，将氟替卡松纳米晶体进行洗涤， 并交换至适合的水溶液中。所述交换例如通过使用切向流过滤（TFF)或中空纤维过滤筒进 行。在一些方面中，将纳米晶体交换至符合FDA眼或皮肤施用标准的制剂中。或者将纳米 晶体交换至无菌的水溶液中，向所述水溶液中加入另外的赋形剂，以形成符合FDA眼或皮 肤施用标准的最终制剂。在最终的含水缓冲溶液中的氟替卡松浓度为约〇. 0001%至10% (w/v)。在一些方面中，在缓冲液交换步骤之前进行退火步骤。退火步骤在约25-40°C进行 并进行约30分钟至24小时的时间。
[0085] 优选地，I阶段溶液的氟替卡松的浓度为约0. 4%至I. 0% w/v。更优选地，I阶段 溶液的氟替卡松的浓度为约〇. 45% w/v。
[0086] 在一些方面中，I阶段溶液还包含吐温80、聚乙二醇（PEG)400和聚丙二醇 (PPG)400。吐温80的浓度为约7. 0%至15%w/v。PEG 400的浓度为约20至35% (w/ v)。PPG 400的浓度为约65%至75% (w/v)。在一个优选的实施方案中，I阶段溶液包含约 0. 45% w/v的浓度的氟替卡松、约7. 44%的浓度吐温80、约23% (w/v)的浓度的PEG 400 和约69.11% (w/v)的浓度的PPG 400。
[0087] I阶段和II阶段的混合在不超过8°C的温度（例如，0_2°C、2-4°C或2-8°C )进行。 I阶段与π阶段的体积比率为0. 15至0. 3或1:1至1: 3。将I阶段溶液与II阶段溶液以 0.5至1.4ml/分钟的流速混合，其中所述II阶段溶液是固定的。参见例如图3。在其他的 实施方案中，在流动反应器中通过将I阶段溶液以〇. 5-900ml/分钟（例如，0. 5-2. Oml/分 钟、10-900ml/ 分钟、12-700ml/ 分钟、50-400ml/ 分钟、100-250ml/ 分钟或 110-130ml/ 分 钟）的流速与Π 阶段溶液以2. 5-2100ml/分钟（例如，2. 5-10ml/分钟、10-900ml/分钟、 12-700ml/分钟、50-400ml/分钟、100-250ml/分钟或110-130ml/分钟）的流速组合形成 III阶段。参见，例如图4。在一些实施方案中，I阶段溶液的流速和II阶段溶液的流速基 本上是相同的。在其他的实施方案中，I阶段的流速低于II阶段的流速，例如，I阶段溶液 与Π 阶段溶液的体积比率为约1:2或1:3。在一些实施方案中，流动反应器产生的III阶 段混悬物的流速为约20-2800ml/分钟（例如，约100-800ml/分钟或200-400ml/分钟）。 任选地，对III阶段混合液进行声波处理。
[0088] 在一些实施方案中，最终的含水缓冲液包含甲基纤维素、渗透促进剂和润湿剂。甲 基纤维素的浓度为例如约0.5% (w/v)。
[0089] 本发明还包括本发明的方法产生的大量纳米晶体和含所述纳米晶体的组合物 (例如，药物组合物）。所述组合物基本没有有机溶剂。纳米晶体具有400-800nm(例如， 300-600nm、400-600nm或500-700nm)的范围的平均尺寸。纳米晶体不聚结，且经24小时 的时间尺寸不增加。所述纳米晶体为纳米板，例如，丙酸氟替卡松纳米板具有基本正交于限 定所述纳米板厚度的表面的[001]晶轴。所述纳米板可以具有约5nm至IOOnm的范围的厚 度。任选地，纳米晶体被甲基纤维素涂覆。
[0090] 本发明还提供了无菌的局部用纳米晶体氟替卡松制剂，其包含0.0001% -10% W/ V的本发明的氟替卡松纳米晶体和药学上可接受的含水赋形剂的混悬物。在一些方面中，所 述制剂在20°C具有10_20cP的粘度。所述制剂的重量摩尔渗透压浓度为约280-350m0sm/ kg。所述制剂的pH为约6-7. 5。
[0091] 在另一个方面，本发明提供了通过向有需要的个体施用、例如向有需要的个体的 睑缘、皮肤或眼表面局部施用有效量的本发明的制剂（例如，局部用制剂）来治疗或减轻 眼障碍的症状（例如，睑缘炎、睑板腺功能不良、术后痛或术后眼部炎症、干眼、眼变态反应 或眼色素层炎）的方法。所述制剂例如通过使用涂药器（例如，刷子或药签）施用。在一 个实施方案中，通过例如涂药器（例如,刷子诸如Latisse?.刷或药签、诸如25-3317-U药 签），将治疗有效量的所述制剂施用于有需要的个体用于治疗睑缘炎。在一些实施方案中， 所述制剂是含本发明的0. 001% -5% FP纳米晶体（例如，0. 01-1 %或约0. 25%、0. 1 %或 0.05% )和药学上可接受的含水赋形剂的混悬物的无菌的局部用纳米晶体丙酸氟替卡松 制剂。在一些实施方案中，所述制剂还包含约0.002-0. 01% (例如50ppm±15%)的苯扎氯 铵（BKC)。在一些实施方案中，所述制剂还包含一种或多种包衣分散剂（例如，泰洛沙泊、聚 山梨酯80和PEG硬脂酸酯、诸如PEG40硬脂酸酯）、一种或多种组织润湿剂（例如，甘油）、 一种或多种聚合的稳定剂（例如，甲基纤维素4000cP)、一种或多种缓冲剂（例如，磷酸氢 二钠 Na2HPO4和磷酸二氢钠 NaH2PO4和/或一种或多种张度调节剂（tonicity adjusting agent)(例如，氯化钠）。在一些实施方案中，所述制剂在20°C具有40-50cP的粘度。在一 些实施方案中，制剂的重量摩尔渗透压浓度为约280-350 (例如，约285-305)m0sm/kg。在一 些实施方案中，制剂的pH为约6. 8-7. 2。在一些实施方案中，所述制剂在20°C具有40-50cP 的粘度。在一些实施方案中，制剂中的FP纳米晶体具有300-600nm的中位尺寸、500-700nm 的平均尺寸、300_600nm的D50值和/或低于2 μ m (例如，低于1. 5 μ m)的D90值。
[0092] 在又一个方面，本发明提供了通过向有需要的个体施用有效量的本发明的药物组 合物来治疗或减轻呼吸系统疾病（例如，哮喘或慢性阻塞性肺疾病（COPD))、鼻炎、皮炎或 食管炎的方法。
[0093] 还提供了药物组合物，其包含一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂以及通过 本发明的方法制备的疏水性药物（例如，丙酸氟替卡松）的纳米晶体。所述组合物可以是 干粉剂/吸入剂、眼用制剂、喷雾剂、软膏剂、乳膏剂、丸剂等形式。
[0094] 在另一个方面本发明提供了半柔性的聚氨酯涂药器，其包含本发明的氟替卡松纳 米晶体和药学上可接受的含水赋形剂。
[0095] 在又一个方面中，本发明提供了外科手术装置或可植入装置（例如，支架、血管成 形术气球、导管、分流器、入口设备（access instrument)、导线、移植物系统、血管内成像装 置、血管闭合装置、内窥镜配件或本文公开的其他装置），其涂覆有或浸透着本发明的丙酸 氟替卡松晶体。在一些实施方案中，将丙酸氟替卡松晶体涂覆或包埋至外科手术或可植入 装置中改变了该药物的释放时间。例如，将丙酸氟替卡松晶体涂覆或包埋至外科手术或可 植入装置中延长了该药物的释放时间。
[0096] 除非另外定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技 术人员通常所理解的相同的含义。虽然与本文所述的那些相似或等同的方法和材料可用于 实施本发明，但仍然在下文描述了适合的方法和材料。所有本文提及的出版物、专利申请、 专利和其他参考文献的全部内容明确引入本文作为参考。如果有矛盾，以本说明书、包括定 义为准。此外，本文描述的材料、方法和实施例仅仅是说明性的，而不是意欲进行限制。
[0097] 本发明的方法的优势包括所述产物（例如，所述疏水性药物的纳米晶体）比该药 物的原料（stock material)更纯（或至少不会更不纯）、结晶程度更高和/或更稳定原料。 优势还包括所述产物的尺寸和粒度分布是可控的且产物的尺寸可以是基本上均匀的（其 可导致在体内更高地控制药物释放），以及本发明的方法很少或不引起药物分解。本发明的 其他特征和优势通过以下详述和权利要求将是显而易见的。
[0098] 附图简述
[0099] 图1是丙酸氟替卡松物理和化学特征的概述。
[0100] 图2是丙酸氟替卡松及其常见杂质的HPLC色谱图。
[0101] 图3是本发明方法的一个实施方案的流程（称为"分批方法）。
[0102] 图4本发明方法的另一个实施方案的流程（称为"流动方法"）。
[0103] 图5是显示如下内容的图：通过改变阶段II溶液的具体组成，丙酸氟替卡松纳米 晶体平均尺寸是可控的。
[0104] 图6是显示如下内容的图：通过自顶向下技术，诸如微流化 (microfluidization)、气流粉碎（jet-milling)、超声处理（湿磨）和勻化，制备的丙酸氟 替卡松的粒度。
[0105] 图7是显示阶段II溶液的pH对丙酸氟替卡松的粒度的影响的图。
[0106] 图8是显示阶段II溶液中不同的稳定剂对丙酸氟替卡松的粒度的影响的图。 [0107] 图9是显示阶段III混合物的pH对丙酸氟替卡松的粒度的影响的图。
[0108] 图10是显示纯化的丙酸氟替卡松纳米晶体不随着时间推移而聚集的图。
[0109] 图11是显示如下内容的图：当混合阶段I溶液和阶段II溶液时，温度对丙酸氟替 卡松的粒度的影响。
[0110] 图12是显示如下内容的图：退火温度对在阶段III混悬物中具有0. 1 %浓度的丙 酸氟替卡松的粒度的影响。
[0111] 图13是显示如下内容的图：退火温度对在阶段III混悬物中具有10%浓度的丙 酸氟替卡松的粒度的影响。
[0112] 图14是显示过滤器类型对药物晶体损失的影响的图。
[0113] 图15是显示过滤器孔径对药物晶体损失的影响的图。
[0114] 图16是显示作为批规模（从左至右：20g、100g、250g、1000g和2000g)的函数的 制剂的分散性的图。
[0115] 图17是显示作为丙酸氟替卡松浓度（从左至右：10%、5%、1%、0· 1%、0· 05%、 0. 01%和0. 005% )的函数的制剂的分散性的图。
[0116] 图18是显示作为时间的函数的制剂的均匀性的图。
[0117] 图19是流动反应器的示意图。
[0118] 图20是显示在所述流动方法中流速对丙酸氟替卡松的粒度的影响。
[0119] 图21A-C是显示以下内容的图：由所述分批方法制得的丙酸氟替卡松纳米晶体的 粒度分布、由匀化制得的丙酸氟替卡松颗粒和从制造商获得的丙酸氟替卡松原料。
[0120] 图22是一组显示在25°C和40°C达至多75天的丙酸氟替卡松纳米混悬剂稳定性 的图。
[0121] 图23是显示以下内容的图：勻化的丙酸氟替卡松（1-5微米，由灰色正方形点表 示）和由所述分批方法制备的丙酸氟替卡松晶体（400_600nm，由黑色菱形点表示）的溶出 度。
[0122] 图24A和24B分别是丙酸氟替卡松原料和由所述分批方法制备的纳米晶体的色谱 图。
[0123] 图25A和25B分别是由所述分批方法制备的干燥的丙酸氟替卡松晶体和丙酸氟替 卡松原料的光学显微照片（型号：〇MAX，1600X)原料。
[0124] 图26A和26B是由所述分批方法制备的干燥的丙酸氟替卡松晶体的扫描电子显微 照片。
[0125] 图27A和27B分别是干燥的丙酸氟替卡松原料和由匀化制备的丙酸氟替卡松晶体 的扫描电子显微照片。
[0126] 图28A和28B分别是由所述分批方法制备的丙酸氟替卡松纳米晶体和丙酸氟替卡 松原料的组合DSC/TGA。
[0127] 图29是由本发明的分批方法制备的丙酸氟替卡松纳米晶体的傅里叶变换红外光 谱扫描图(Fourier Transform Infrared Spectroscopic Scan) 〇
[0128] 图30是丙酸氟替卡松原料的傅里叶变换红外光谱扫描图。
[0129] 图31A是由所述分批方法制备的丙酸氟替卡松纳米晶体的XRPD图（黑色）。
[0130] 图31B是由所述分批方法制备的丙酸氟替卡松纳米晶体的XRPD图（黑色），其与 交盖的多晶型物1(红色）和多晶型物2(蓝色）的计算的XRPD图交盖。蓝色的箭头显示 XRPD图中的一些区别。
[0131] 图32是显示本发明的方法制备的曲安奈德晶体的粒度分布的图。
[0132] 图33是曲安奈德原料的DSC扫描图。
[0133] 图34是本发明的方法制备的曲安奈德晶体的DSC扫描图。
[0134] 图35是曲安奈德原料的热重分析。
[0135] 图36是本发明的方法制备的曲安奈德晶体的热重分析。
[0136] 图37A-E是不同放大倍率的曲安奈德原料和本发明的方法制备的曲安奈德晶体 的扫描电子显微照片：A和B -分别在100X和5000X放大倍率的曲安奈德原料；C、D和E -分别在100X、5000X和10, 000X放大倍率的由本发明的方法制备的曲安奈德晶体。
[0137] 图38是显示用于丙酸氟替卡松纳米晶体的制备和纯化的本发明的方法的实施方 案的示意图。
[0138] 图39是本发明的方法制备的曲安奈德纳米晶体的XRH)图（红色），其与曲安奈德 原料的XRPD图（蓝色）交盖。蓝色的箭头显示XRPD图中的一些区别。
[0139] 发明详述
[0140] 本发明描述了用以制备疏水性治疗剂（诸如丙酸氟替卡松）的无菌的纳米晶体 (任选地纳米混悬剂）的方法和组合物，其被最优化以符合药物施用标准（例如，局部或鼻 内施用）。通过所述方法制备的组合物理想地适用于炎性障碍的局部治疗，诸如眼部障碍和 皮肤障碍。通过所述方法制备的组合物还理想地适用于所述组合物中的疏水性药物所应用 的障碍的全身或非全身治疗，诸如炎性障碍、呼吸系统障碍、自身免疫性疾病和癌症。
[0141] 当施用于有需要的个体时，通过本发明的方法制备的药物纳米晶体可以是适用于 具体的施用途径的各种形式，例如滴眼剂、凝胶剂、软膏剂、干粉末、凝胶剂、气雾剂或胶态 混悬剂（例如，液体混悬剂）的形式。例如，药物纳米晶体为混悬于另一种作为"连续"相 的相中的"分散"相。纳米混悬剂可以定义为，通过适合的方法制备并通过适合的稳定剂或 表面稳定剂稳定的纳米尺寸的药物颗粒的胶态分散体。除非另外说明，否则术语"稳定剂"、 "表面稳定剂"和"空间稳定剂（steric stabilizer)"在本文中可以互换使用。在一个实 施方案中，将药物递送或配制以用于经由全身或局部途径的递送。例如，将药物递送或配制 以用于直接或经由涂药器（例如，刷子或药签）递送。例如，将药物递送或配制以用于经由 局部途径递送至组织、诸如眼组织和/或附器（adnexa)。可以将药物递送或配制以用于经 眼内、玻璃体内、视网膜下、囊内、脉络膜上、眼球筋膜囊下（subtenon)、结膜下、前房内、睑 内、穹窿、眼球后或眼球周注射而递送。还可以将药物递送或配制以用于经由局部施用递送 至组织、诸如眼组织和/或附器。还可以将药物递送或配制以用于经由可植入或外科手术 (例如，药物递送）设备递送。
[0142] 不溶性药物的纳米混悬剂、诸如纳米晶体混悬剂通过增强生物利用度可以显著降 低其有效浓度。"生物可利用"意指是分子上可供细胞吸收的溶解的药物。
[0143] 丙酸氟替卡松几乎不溶于水中，溶解度为0. 14微克/ml。由于大多数眼用混悬剂 是含水的，不溶性药物的粒度决定了其在任何给定时间成为溶解的药物（或生物可利用药 物）的溶出度。提高生物利用度的一个方式是确保完全溶解的药物溶液。对于不溶性药 物，提高不溶于水的药物的生物利用度的方式是通过利用微粉化或纳米级的剂型。在丙酸 氟替卡松的情况中，通过降低粒度显著增加了溶出度。800-900nm尺寸的丙酸氟替卡松颗 粒的释放速率是>10微米的颗粒的许多倍。因此，丙酸氟替卡松的纳米混悬剂具有产生强 效药物的潜力，其在不引起不利副作用的浓度有效。浓度较高时，丙酸氟替卡松可以引起 眼内压升高，导致青光眼和白内障。如果药物是纳米微粒或是更溶于水的形态，则可以预见 更低浓度的有效的丙酸氟替卡松的制剂。对于丙酸氟替卡松，市售药品的有效浓度范围为 0.005% (克廷肤）和0.5% (Flonase)。因此，使得药物在以前对于所述适应症不曾考虑 的浓度"有效"，是一个令人惊讶和不可预期的结果。类似地，对于另一种疏水性药物曲安奈 德（在28°C水溶解度为17. 5 μ g/mL)，当药物为例如通过本发明的方法生成的纳米颗粒形 式时，可获得在预料不到的更低的曲安奈德浓度的TA的有效的制剂，所述浓度对于具体适 应症而言是以前不曾考虑过的。
[0144] 因此，在需要立即缓解、然后持续缓解的局部用药的设计中，推测还具有生物粘附 性的纳米晶体混悬剂将有助于增加药物的停留时间，同时增加生物利用度。在本发明描 述的实例中，开发丙酸氟替卡松混悬剂用于治疗睑缘炎，其特征为眼睑的炎症和感染。然 而，本文描述的丙酸氟替卡松组合物还可以用于预防或治疗其他眼部炎性病症。例如，本 发明中描述的组合物可以用于外科手术后的术后护理。例如，本发明的组合物可以用于 术后疼痛的控制、术后炎症的控制、氦激光小梁成形术和屈光性操作（photorefractive procedures)。此外，丙酸氟替卡松组合物可以用于治疗其他眼部障碍、诸如眼部变态反应、 变应性结膜炎、囊样黄斑水肿、眼色素层炎或睑板腺功能不良。此外，丙酸氟替卡松组合物 可以用于治疗皮肤障碍、诸如特应性皮炎、皮肤损害、湿疹、银屑病或疹。
[0145] 疏水性药物的稳定的纳米晶体制造的挑战
[0146] 纳米混悬剂的成功的制造具有两个主要挑战。第一个挑战是生成所需尺寸的颗 粒。对大多数不溶于水的药物，所需的粒度是亚微米，范围为从低nm至高（10-990nm)。第 二步是长期保持粒度。这两个步骤都具有挑战性。
[0147] 通常通过"自顶向下"的技术制备药物混悬剂，通过该技术将分散体机械地破碎为 更小的颗粒。技术诸如湿磨、声波处理、微流化和高压匀化为该技术的实例以创造微粉化和 纳米化颗粒。在高压匀化中，由该方法得到的纳米晶体尺寸不仅取决于药物原料的硬度，还 取决于匀化压力和循环次数。然而，其不取决于稳定剂的类型。因此，稳定剂的功效-是 否能防止颗粒聚集-在加工后和存储期间显示。因此，理解所用特定方法中颗粒形成所涉 及的现象是极其重要的。
[0148] 在研磨或机械的粒度降低方法期间，在研磨容器中两个相反的过程相互影响：原 料碎裂为更小的颗粒和通过颗粒间碰撞的导致的颗粒增长。这两个相反的现象的发生取决 于工艺参数。通常在某个时间点后，粒度已经达到恒定水平，且继续研磨不进一步降低粒 度。在一些情况中，研磨时间的增加甚至可导致粒度的逐渐增加和原料的多相性，而通过降 低的研磨速度实现降低的粒度。研磨期间还可能发生物理形式的改变或无定形化。超过某 临界压力值的机械压力增加晶格振动，其使晶格不稳定。缺陷的数量增加，且向无定形态的 转化在临界缺陷浓度以上发生。在颗粒减小技术期间对药物晶体的高应力导致晶体结构的 去稳定作用，结晶度的损失，且有时转变为较不稳定的多晶型物。晶体结构中无定形区的出 现导致粒度的逐渐增加，因为混悬剂变回稳定的晶体形态。
[0149] 纳米晶体制备的另一个挑战是颗粒尺寸的逐渐增加，也称为"奥斯特瓦尔德成熟 (Ostwald Ripening) "。胶态混悬剂中的晶体生长通常被称为奥斯特瓦尔德成熟，且是粒度 和粒度分布改变的原因。奥斯特瓦尔德成熟源自颗粒溶解性对它们尺寸的依赖性。根据 Ostwald - Freundlich方程，小晶体具有比更大的晶体更高的饱和溶解度，在小和大的晶体 之间造成药物浓度梯度。因此，分子从环绕小晶体的较高浓度扩散至具有较低药物浓度的 较大晶体附近的区域。这产生大晶体周围的过饱和的溶液状态，导致药物结晶至大晶体上。 该扩散过程得到环绕小晶体的不饱和溶液，引起药物分子从小晶体溶出至大量介质中。该 扩散过程继续直至所有的小晶体溶解。奥斯特瓦尔德成熟实质上是较小晶体变为大颗粒晶 体的过程。这随后导致胶态混悬剂的晶体大小和粒度分布变化至更高的范围。连续相中溶 解的药物的分散体也总是导致粒度的不稳定性。
[0150] 纳米晶体的另一个挑战是颗粒的成团或结块。稳定剂在分散体的稳定中起关键作 用。稳定剂需要吸附在颗粒表面以实现适当的稳定。此外，吸附应当足够强以持续长时间。 稳定剂的吸附可通过离子相互作用、氢键、范德华力或离子偶极相互作用或通过疏水作用 发生。
[0151] 在选择药物-稳定剂对之前始终需要考虑稳定剂的官能团和药物原料之间的可 能的相互作用。许多药物具有含能相互作用的官能团如酚类、胺、羟基、醚类或羧酸基团的 结构。强离子相互作用、氢键、偶极子-诱导的力和弱的范德华或伦敦（London)相互作用 可增加或妨碍颗粒形成。稳定剂的浓度水平也重要。吸附/面积是通常不依赖于粒度的表 面性质。由于吸附量与表面积相关，这意味着稳定剂的总量与晶体大小直接相关。当吸附 导致的自由能的减少补偿所伴随的熵损失时，发生聚合物分子至晶体表面的吸附。由于空 间稳定化基于吸附/解吸附过程，所以加工变量、诸如稳定剂的浓度、粒度、溶剂等对于稳 定剂的功效是重要的因素。
[0152] 稳定晶体大小的另一种方法为微粒混悬物在特定稳定剂的存在下的喷雾干燥，所 述技术已经用于制备丙酸氟替卡松的喷雾的微粒。与自顶向下方法的组合还用于制备所需 尺寸的颗粒。稳定粒度的又一种方法是冻干微粒混悬物。
[0153] 通常用于制备纳米混悬剂的其他方法是抗溶剂沉淀方法，由此将药物溶液在抗溶 剂中沉淀为纳米晶体。该途径被称为"自下而上"的结晶途径，由此原位制备纳米晶体。沉 淀作为纳米晶体的药物通常伴随匀化或声波处理。如果在沉淀之前将药物溶于有机溶剂、 诸如丙酮中，则在形成颗粒后必须除去有机溶剂。这通常通过蒸发溶剂进行。该蒸发步骤 造成该颗粒形成方法的挑战，因为蒸发过程可以改变颗粒稳定化的动力学，常见为粒度的 快速增加。此外，残留水平的有机溶剂常常保持结合至在制剂中使用的赋形剂。因此，通过 研究，该方法具有其挑战性，且一般不优选。
[0154] 通过本发明定义的方法制备疏水性药物的纳米晶体不使用需要除去的有毒的有 机溶剂，且不显示以上章节中定义的颗粒不稳定性。
[0155] 本发明的核心特征
[0156] 本发明提供了可以制备药物（例如，疏水性药物）的纳米晶体或含纳米晶体的 混悬剂的声波处理结晶（sonocrystallization)/纯化方法。所述方法：（a)在制备纳米 晶体之前对所有的组分进行无菌的过滤，（b)制备期望尺寸的晶体，（c)通过使用特定的 空间稳定组合物结合在特定温度退火，来稳定纳米晶体，（d)通过另一种连续相替换初始 连续相，为配方设计师（formulator)提供了纯化所述颗粒的灵活性和（d)提供了在最终 制剂介质中实现最终所需的药物浓度的灵活性。在步骤（d)中，纯化步骤的意义可能是本 发明的主要和关键的方面，因为产生和稳定具有期望尺寸的颗粒的所述组合物是差别细 微的（nuanced)并依赖于以下参数：离子强度、聚合物分子量和结构及pH。用于产生所述 颗粒的所述组合物通常不是配方设计师设想的作为最终制剂的组合物或最终药物浓度。 这通过喷雾干燥或冻干实现。通过该方法生成的纳米晶体的尺寸范围为100nm-500nm、 500-900nm、400-800nm和900nm至lOOOOnm。优选地纳米晶体的尺寸范围为400-800nm(例 如，400-600nm)。本发明的纳米晶体的尺寸和粒度分布可以通过常规方法、诸如动态光散射 (DLS)、扫描电子显微镜检术（SEM)、透射电子显微镜（TEM)和X射线粉末衍射（XRPD)测定。 在本发明中，通过与最终的生物相容的、组织相容的缓冲液交换纯化纳米晶体。
[0157] 两部分方法：该方法特征为制备纳米晶体的两部分方法，如步骤1和步骤2所定 义。任选地，所述方法为单个步骤，由此最终制剂在单个步骤（仅步骤1)中制备。对于两 步骤方法（步骤1，随后进行步骤2)，所述方法的第一个部分是所需尺寸的纳米晶体的制备 (步骤1)。所述方法的第二个部分是纳米晶体纯化，从而得到用于最终制剂的以所需药物 浓度混悬的高纯度的纳米晶体和最佳的赋形剂组合物（步骤2)。
[0158] 药物浓度：在一个优选的实施方案中，初始纳米晶体浓度（步骤1后）是0. 1 %药 物（例如，皮质类固醇、诸如FP)，但最终制剂可以高至10% (步骤2后）。混悬物的初始浓 度可低于0. 1 % (步骤1中），并在纯化方法（步骤2)期间浓缩至10%，其具有同样的介质 组成或不同的介质组成。混悬物的初始浓度可以是0.1%或低于0.1%、优选0.06%。初 始混悬物可以纯化至更低的浓度（步骤2中），其具有同样的介质组成或不同的介质组成。 在优选的组合物中，初始混悬物可以以〇. 06%的浓度形成（步骤1中），并纯化至0. 06%或 更低（步骤2中），其具有同样的初始介质组成或不同的介质组成。纳米混悬剂的初始浓度 可以是 1%、1% -0· 5%、0· 5% -0· 1%、0· 1% -0· 05%、0· 05% -0· 01%、0· 01% -0· 005%、 0. 005% -0. 001%、0. 001% -0. 0005%、0. 0005% -0. 0001%、0. 0001% -0. 00001%。
[0159] 步包括将药物在FDA-批准的赋形剂中溶解以得到I阶段。然后将该溶液（I 阶段）经由0.22微米PVDF(聚偏二氟乙烯）过滤器无菌过滤。制备具有一定粘度、pH和 离子强度的含特定的空间稳定剂的组合物的溶液。这是II阶段。在一个实施方案中，药物 为甾体药物。在一个优选的实施方案中，药物是丙酸氟替卡松。在另一个优选的实施方案 中，药物是糠酸氟替卡松。在另一个实施方案中，药物丙酸氟替卡松的任何盐形式。
[0160] 在一个实施方案中，步骤1包括：
[0161] 提供含疏水性治疗剂和用于所述疏水性治疗剂的溶剂的I阶段溶液（例如，无菌 的溶液）；
[0162] 提供含至少一种表面稳定剂和用于所述疏水性治疗剂的抗溶剂的II阶段溶液 (例如，无菌的溶液）；
[0163] 将I阶段溶液和II阶段溶液混合，得到III阶段混合液，其中所述混合在不超过 25°C的第一个温度进行；
[0164] 将III阶段混合液在超过第一个温度的第二个温度退火一段时间（T1)，以生成含 疏水性治疗剂的大量纳米晶体的III阶段混悬物，和
[0165] 任选地通过例如切向流过滤、中空纤维过滤筒或离心（例如，连续流动离心）纯化 所述纳米晶体。
[0166] 任选地，以约L 6L/min在约39, OOOxg进行离心。
[0167] 任选地，步骤1包括在退火步骤之后和纯化步骤之前用溶液稀释的步骤。例如，稀 释步骤包括将纳米晶体在溶液中的再分散。用于稀释的溶液可以包括约0. 002-0. 01% (例 如50ppm±15% )苯扎氯铵、0.01-1%聚山梨酯80(例如，约0.2% )、0.01-1% PEG40硬脂 酸酯（例如，约〇. 2% )、缓冲剂（例如，柠檬酸盐缓冲液、pH 6. 25)和水。将纯化（例如，离 心期间）期间形成的小球再分散至最终制剂中（参见，例如图38)。可将该小球加入适合的 水溶液中以再分散在混合器（例如，Silverson Lab Mixer)中的纳米晶体。所述再分散可 以在室温以6000RPM进行约45mins或更长时间（例如，约60mins或更长时间），得到符合 FDA眼或皮肤施用标准的最终制剂。所述制剂可包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。
[0168] 例如，所述疏水性治疗剂是类固醇。
[0169] 例如，所述疏水性治疗剂是丙酸氟替卡松或曲安奈德。
[0170] 例如，所述至少一种表面稳定剂包含纤维素表面稳定剂、诸如甲基纤维素。
[0171] 例如，所述甲基纤维素具有不超过IOOkDa的分子量。
[0172] 例如，用于II阶段溶液的纤维素稳定剂（例如，甲基纤维素）具有4cP至50cP的 粘度，例如，15_45cP。
[0173] 例如，第一个温度例如不超过20°C、不超过8°C，例如<4°C或<2°C或0_4°C。
[0174] 例如，第二个温度即退火温度为20°C至60°C。
[0175] 例如，降低纳米晶体的粒度和/或硬化纳米晶体（例如，为增加纳米晶体的硬度） 需要退火步骤。
[0176] 例如，以约I. 6L/min在约39, OOOx g进行连续流动离心。
[0177] 例如，通过本文所述的方法制备的纳米晶体具有IOnm至10000nm(例如， 50-5000nm、80-3000nm、100-5000nm、100-2000nm、IOO-IOOOnm 或 100-800nm)的平均尺寸。
[0178] 例如，通过本文所述的方法制备的纳米晶体具有适于通过显微针（即、27-41号） 递送的粒度。例如，当在眼的脉络膜周隙中注射时，所述纳米晶体可以有效递送至眼的背面 或将更缓慢地溶解以使得药物治疗靶组织而不浸析至眼前部的组织、诸如晶状体、睫状体、 玻璃质等，由此最小化眼的副作用、诸如高眼内压（IOP)或白内障形成。
[0179] 例如，通过本文所述的方法制备的纳米晶体具有窄的粒度分布范围。换言之，所述 纳米晶体大小基本均勻。
[0180] 例如，纳米晶体' D90和DlO值的比例低于10,例如，低于5、低于4、低于3、低于2 或低于 1. 5。例如，纳米晶体具有 50-100nm、100-300nm、300-600nm、400-600nm、400-800nm、 800-2000nm、1000-2000nm、1000-5000nm、2000-5000nm、2000-3000nm、3000-5000nm 或 5000-10000nm的粒度分布。
[0181] 例如，通过本文所述的方法制备的纳米晶体具有不超过5000nm(例如，不超过 4000nm、不超过3000nm、不超过2000nm、不超过lOOOnm、不超过900nm、不超过800nm、不超 过700nm、不超过700nm、不超过600nm、不超过500nm、不超过400nm、不超过300nm、不超过 200nm、不超过IOOnm或不超过80nm)的D90值。
[0182] 例如，通过本文所述的方法制备的纳米晶体涂覆有甲基纤维素。
[0183] 例如，通过本文所述的方法制备的甲基纤维素-涂覆的纳米晶体是稳定的，例如， 它们不聚集。
[0184] 例如，通过本文所述的方法制备的纳米晶体为具有400_600nm的粒度分布的丙酸 氟替卡松纳米晶体。
[0185] 例如，通过本文所述的方法制备的纳米晶体为具有300_400nm的粒度分布的曲安 奈德纳米晶体。
[0186] 例如，通过本文所述的方法制备的纳米晶体为液体混悬剂或干粉剂形式。
[0187] 例如，通过本文所述的方法制备的纳米晶体具有0. 0001 %至10%、至20%、至 30%、至 40%、至 50%、至 60%、至 70%、至 80%、至 90%、至 99%或至 99. 99%的浓度。
[0188] 例如，当混合I阶段和II溶液时，应用声波处理。
[0189] 例如，在II阶段溶液中甲基纤维素的浓度范围为0. 1 %至0. 5 % (例如， 0. 2-0. 4% ) 〇
[0190] 例如，II阶段溶液还包含第二种稳定剂，例如，0· 005 %至0· 1 % (例如， 0· 01-0. 02% )的浓度范围的苯扎氯铵。
[0191] 例如，当疏水性药物是丙酸氟替卡松时，II阶段溶液具有5. 5的pH。
[0192] 例如，当疏水性药物是曲安奈德时，II阶段溶液具有约4的pH。
[0193] 例如，I阶段溶液的溶剂包括聚醚。
[0194] 例如，所述聚醚选自聚乙二醇（PEG)、聚丙二醇（PPG)及其混合物。
[0195] 例如，所述聚醚选自PEG400、PPG400、PEG40-硬脂酸酯及其混合物。
[0196] 例如，在I阶段溶液中PEG 400的浓度为约20至35%。
[0197] 例如，在I阶段溶液中PPG 400的浓度为约65%至75%。
[0198] 例如，I阶段溶液的溶剂包括一种或多种多元醇、诸如单体的多元醇（例如，甘油、 丙二醇和乙二醇）和聚合的多元醇（例如，聚乙二醇）。
[0199] 例如，I阶段溶液的溶剂包括一种或多种单体的多元醇。
[0200] 例如，I阶段溶液还包含表面稳定剂。
[0201] 例如，I阶段溶液中的表面稳定剂是吐温80,例如在I阶段溶液中浓度为约7. 0% 至15%的吐温80。
[0202] 例如，I阶段溶液中的疏水性药物的浓度为约0. 1-10%，例如，0. 1至5.0%、 0· 2-2. 5%或 0· 4 至 10%。
[0203] 例如，当疏水性药物是FP时，FP在I阶段溶液中的浓度约0. 1-10%，例如，0. 4至 1. 0%。
[0204] 例如，I阶段溶液与II阶段溶液的体积比率范围为1:10至10:1 (例如，1:3至3:1， 或1:2至2:1，或约1:1)。
[0205] 例如，纤维素表面稳定剂是分子量不超过IOOkDa的甲基纤维素，第一个温度是 (TC至5°C、第二个温度是KTC至401：，且T1为至少8小时。
[0206] 本发明的方法能制备从非常小的尺寸（例如，<75nm)至更大的尺寸（例如， 5, OOOnm)的范围的紧密（tight)的粒度分布（PSD)的药物晶体，并得到可以单独使用特定 尺寸的颗粒，或与通过本文所述的方法制备的相同的药物晶体的更小或更大的尺寸的颗粒 组合，或与药物的不同形式（例如，原料或通过匀化得到的形式）或与其他赋形剂（诸如溶 齐U、缓和剂、粘膜粘着剂）组合，以控制所述药物的释放、分配、代谢（metabolization)或消 除，或增强所述药物组织穿透力或组织停留时间。
[0207] 在一个实施方案中，在静态的分批反应器中使用声波处理（例如，超声处理）或超 匀化以将沉淀药物在抗溶剂中分散来制备药物混悬剂。在一个实施方案中，通过置于向全 部的液体提供超声能量的超声处理浴中完成超声处理过程。在另一个实施方案中，使用探 头超声焊极完成超声处理过程。在又一个实施方案中，药物在抗溶剂中沉淀期间的分散步 骤是高压匀化。
[0208] 在另一个实施方案中，在流通式反应器（flow-through reactor)中在超声处理或 超匀化期间制备药物混悬剂。溶液的温度可以是0-4或2-8摄氏度。在另一个实施方案中， 溶液的温度可以是22-30摄氏度。流通式反应器可以加保护层以控制温度。
[0209] 通过注射泵将药物溶液（I阶段）定量加入反应器。在另一个实施方案中，将药 物混悬剂定量加入反应器中通过其他自动泵设备。I阶段的流速范围可以是0. lml/min至 40ml/分钟。在流通式反应器（或流动反应器）中，I阶段的流速范围可以是0. Iml/分钟 至 40ml/ 分钟或 0· 5 至 900ml/ 分钟（例如，0· 5-2. Oml/ 分钟、10-900ml/ 分钟、12-700ml/ 分钟、50-400ml/分钟、100-250ml/分钟或110-130ml/分钟）。在流通式反应器中，II阶 段的流速范围可以是〇. lml/min至40ml/分钟或2. 5-2100ml/分钟（例如，2. 5-900ml/分 钟、2. 5-2. Oml/ 分钟、10-900ml/ 分钟、12-700ml/ 分钟、50-400ml/ 分钟、100-250ml/ 分钟或 110-130ml/ 分钟）。
[0210] 步骤1中I阶段和II阶段的组分：选择用于溶解药物以制备I阶段中的溶液的 赋形剂，以致它们在II阶段中可溶混和可溶解。II阶段组分使得该相仅用作所述药物的抗 溶剂。当在声波处理的存在下将I阶段加入II阶段中时，药物沉淀为纳米晶体中。将II 阶段经由0. 22微米PVDF过滤器无菌过滤至保持在0-4°C或2-8°C的保持容器中。将II阶 段定量加入装备有超声焊极（sonotrode)或声波处理探头的池中。然后将I阶段溶液定量 滴加至该池的II阶段中，同时进行声波处理。通过步骤1制备的纳米晶体可以在2-8°C或 22-25°C或30-40°C保持在保持槽中。该"保持"过程称为退火，以稳定步骤1中制备的纳米 晶体。步骤1中制备的纳米混悬剂的退火或物理老化能使药物分子"松弛"，并以其最稳定 的热力学状态排列。退火温度的选择取决于药物的理化特征。退火的持续时间也很重要。 在一个实施方案中，退火的持续时间为30分钟。在另一个实施方案中，退火的持续时间为 30分钟至90分钟。在另一个实施方案中，退火的持续时间为90分钟至12小时。在另一个 实施方案中，退火的持续时间为12小时至24小时。
[0211] I阶段和II阶段的组分具有低粘度，所以各阶段可以通过0. 22微米过滤器无菌过 滤。或者，无菌的过滤可以通过其他灭菌方式诸如高压灭菌法、Y辐照、环氧乙烷（ETO)辐 照来完成。
[0212] 制备用于初始纳米混悬剂的I阶段的溶剂可选自但不限于PEG400、PEG300、 PEG100、PEG1000、PEG-硬脂酸酯、PEG40-硬脂酸酯、PEG-Laureate、卵磷脂、磷脂酰胆碱、 PEG-油酸酯、PEG-甘油、吐温、司盘、聚丙二醇、DMS0、乙醇、异丙醇、NMP、DMF、丙酮、二氯甲 烧、山梨醇。
[0213] 用作用于初始纳米混悬剂的II阶段的空间稳定溶液可选自但不限于以下各项的 水溶液：甲基纤维素、？￥?、？￥八、即1?：、纤维素、普流罗尼克？127、普流罗尼克？68、卡波姆、羟 乙基纤维素、轻丙基纤维素、PEGs、卵磷脂、磷脂酰胆碱、polyquarternium-l、聚赖氨酸、聚 精氨酸、聚组氨酸、瓜尔胶、黄原胶、脱乙酰壳多糖、藻酸盐、透明质酸、硫酸软骨素、吐温20、 吐温80、司盘类、山梨醇、氨基酸。在一个优选的实施方案中，空间稳定剂是粘度15cP的甲 基纤维素。在另一个实施方案中，II阶段中的空间稳定剂是粘度4cP的甲基纤维素。在另 一个实施方案中，空间稳定剂是粘度50cP的甲基纤维素。在另一个实施方案中，空间稳定 剂是粘度4000cP的甲基纤维素。在另一个实施方案中，空间稳定剂是粘度100, OOOcP的甲 基纤维素。甲基纤维素的浓度为〇. 10%-0.20%、0.20%-0.40%和0.40%-0.50%。在一 个优选的实施方案中，Π 阶段中的甲基纤维素的浓度为0. 20%。在另一个优选的实施方案 中，II阶段中的甲基纤维素的浓度为0.39%。在一个实施方案中，II阶段中的空间稳定剂 是浓度0. -10%的卡波姆940。在另一个实施方案中，II阶段中的空间稳定剂是 浓度0. 1%-1%和1%-10%的羧甲基纤维素。在另一个实施方案中，II阶段中的空间稳 定剂是与卡波姆940组合的羧甲基纤维素。在另一个实施方案中，II阶段中的空间稳定剂 是浓度0. 1% -1%和1-10%的PVA。在另一个实施方案中，II阶段中的空间稳定剂是浓度 0· 1%至 10%的 PVP。
[0214] 空间稳定剂还可以是阳离子的。有用的阳离子表面稳定剂的实例包括但不限于 聚合物、生物聚合物、多糖、纤维素制品、藻酸盐、磷脂类和非聚合化合物、诸如两性离子 稳定剂、聚-η-甲基吡啶鐵、蒽基吡啶It氯化物、阳离子磷脂类、脱乙酰壳多糖、聚赖氨 酸、聚乙烯基咪唑、1，5-二甲基-1，5-二氯十一亚甲基聚甲溴化物、聚甲基丙烯酸甲酯三 甲基溴化铵溴化物（PMMTMABr)、己基二苯乙酮基三甲基溴化铵（HDMAB)、聚乙烯吡咯烷 酮-2-二甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯二甲基硫酸酯、1，2二棕榈酰-sn-甘油基-3-磷酸乙 醇胺-N-[氨基（聚乙二醇）2000](钠盐）（也称为DPPE-PEG(2000)_胺Na)、聚（2-甲基 丙烯酰氧基乙基三甲基溴化铵）、泊洛沙胺（poloxamines)、诸如Tetronic 908?、也称为 Poloxamine 908?、溶菌酶、长链聚合物、诸如藻酸和角叉菜胶。其他有用的阳离子稳定 剂包括但不限于阳离子脂类、锍、鱗，和季铵化合物、诸如十八烷基三甲基氯化铵、苄基-二 (2-氯乙基）乙基溴化铵、椰油基三甲基氯化铵或溴化铵、椰油基甲基二羟基乙基氯化铵或 溴化铵、癸基三乙基氯化铵、癸基二甲基羟基乙基氯化铵或溴化铵、c 12_15二甲基羟基乙基氯 化铵或溴化铵、椰油基二甲基羟基乙基氯化铵或溴化铵、十四烷基三甲基甲基硫酸铵、十二 烷基二甲基苄基氯化铵或溴化铵、十二烷基二甲基（乙烯氧基） 4氯化铵或溴化铵、N-烷基 (C12_18)二甲基苄基氯化铵、N-烷基（C 14_18)二甲基-苄基氯化铵、N-十四烷基二甲基苄基 氯化铵一水合物、二甲基二癸基氯化铵、N-烷基和（C 12_14)二甲基1-萘甲基氯化铵、三甲基 卤化胺、烷基-三甲基铵盐和二烷基二甲基铵盐、十二烷基三甲基氯化铵、乙氧基化的烷酰 氨基烷基二烷基铵盐和/或乙氧基化的三烷基铵盐、二烷基苯二烷基氯化铵、N-二癸基二 甲基氯化铵、N-十四烷基二甲基苄基氯化铵一水合物、N-烷基（C 12_14)二甲基1-萘基甲基 氯化铵和十二烷基二甲基苄基氯化铵、二烷基苯烷基氯化铵、十二烷基三甲基氯化铵、烷基 苄基甲基氯化铵、烷基苄基二甲基溴化铵、C12、C15、C17三甲基溴化铵、十二烷基苄基三乙基 氯化铵、聚-二烯丙基二甲基氯化铵（DADMC)、二甲基氯化铵、烷基二甲基卤化铵、三鲸蜡 基甲基氯化铵、癸基三甲基溴化铵、十二烷基三乙基溴化铵、十四烷基三甲基溴化铵、甲基 三辛基氯化铵（ALIQUAT 336?)、P0LYQUAT 10?、四丁基溴化铵、苄基三甲基溴化铵、胆碱酯 类（诸如脂肪酸的胆碱酯类）、苯扎氯铵、司拉氯铵（stearalkonium chloride)化合物（诸 如十八烷基三甲基氯化铵和二-十八烷基二甲基氯化铵）、十六烷基吡啶傭溴化物或氯化 物，季铵化的聚氧乙基烷基胺的卤盐、MIRAP0L?和ALKAQUAT?、烷基吡啶盐；胺、诸如烷基 胺、二烷基胺、烷醇胺、聚乙烯聚胺、N，N-二烷基氨基烷基丙烯酸酯和乙烯基吡啶、胺盐、诸 如十二烷基胺乙酸盐、十八烷基胺乙酸盐、烷基吡啶铺'盐和烷基咪唑#盐和氧化胺；imide azolinium盐；质子化的丙烯酰季铵；甲基化的季聚合物（quaternary polymer)、诸如聚 [二烯丙基二甲基氯化铵]和聚-[N-甲基乙烯基吡啶氯化物];和阳离子瓜尔胶。
[0215] 步骤2的组分：选择步骤2的组分完成纯化之前步骤制备的纳米晶体的任务。所 述纯化方法为切向流过滤（TFF)或常规垂直过滤（NFF)以实现超滤或透滤或微量过滤。在 另一个实施方案中，步骤2通过离心完成。过滤器的选择取决于制备的纳米晶体的尺寸。过 滤器的孔径可以是〇. Iym或0. 2μπ?或0. 5μπ?或0. 8μπ?或Ιμ--或IOym或20μπ?。如果 纳米微粒的粒度分布峰值为0. 5 μ m，则PVDF过滤器的孔径将是0. 1 μ m。优选纳米微粒的 尺寸峰值为〇. 5 μ m。在该步骤中，将纳米晶体混悬剂纯化，这样初始的连续步骤完全被新的 连续相替代。选择新的连续相使得药物在其中具有最小的溶解度。这最小化或消除奥斯特 瓦尔德成熟。
[0216] 纯化方法的组分可选自但不限于以下各项的水溶液：HPMC、MC、卡波姆、纤维素、 PEGs、脱乙酰壳多糖、藻酸盐、PVP、F127、F68、透明质酸、聚丙烯酸。
[0217] 步骤2的组分可具有组织粘合组分，其会增加纳米晶体在部位的停留时间以随 后延长治疗的功效。组织粘合组分可以是阳离子或阴离子的。阳离子组织粘合分子为 polyquad-Ι、聚乙烯亚胺、PAMAM树枝状聚合物、PEI树枝状聚合物、脱乙酰壳多糖、藻酸盐 及其衍生物。
[0218] 通过所限定的方法制备的药物纳米晶体（任选地纳米混悬剂）可以是治疗眼的炎 性病症的免疫调节剂。免疫调节剂已证实在在多种对对类固醇耐药的炎性病症中有效，或 当类固醇的长期应用与类固醇类有关时如此。目前可用的活性剂用作阻止淋巴细胞增生的 细胞毒剂或用作阻止淋巴因子的合成的免疫调节剂。环孢素 A是优选的能使用本发明定义 的方法制备的免疫调节剂。
[0219] 药物纳米混悬剂可以是使用相同的方法配制的两种药物的组合产品。因此，可以 设想两种药物共溶于共用的赋形剂中，然后本发明中说明的技术沉淀。
[0220] 疏水件治疗剂
[0221] 用于本文的术语"疏水性治疗剂"或"疏水性药物"是指在水中难溶的治疗剂，例 如，具有低于约10mg/mL(例如，低于lmg/mL、低于0· lmg/mL或低于0· 01mg/mL)的水溶解 度。
[0222] 可以应用本发明的方法以制备疏水性药物的纳米晶体和/或新的形态。疏水性药 物的实例包括但不限于ROCK抑制剂、SYK-特异性抑制剂、JAK-特异性抑制剂、SYK/JAK或 多激酶抑制剂、MT0Rs、STAT3抑制剂、VEGFR/H)GFR抑制剂、c-Met抑制剂、ALK抑制剂、mTOR 抑制剂、PI3K δ抑制剂、PI3K/mT0R抑制剂、p38/MAPK抑制剂、NSAID、类固醇类、抗生素、抗 病毒药、抗真菌剂、抗寄生虫药、降血压剂、癌症药物或抗肿瘤药、免疫调节药物（例如，免 疫抑制剂）、精神病学药物、皮肤用药、降脂药物、抗抑郁药、抗糖尿病药、抗癫痫药、抗痛风 齐[J、抗高血压剂、抗疟疾药、抗偏头痛药物、抗毒蕈碱剂、抗甲状腺药、抗焦虑药、镇静药、催 眠药、精神安定药、β -阻滞剂、心脏正性肌力药（cardiac inotropic agent)、皮质类固醇、 利尿剂、抗帕金森综合征剂、胃肠病用药、组胺H-受体拮抗剂、调血脂药、硝酸盐类和其他 抗心绞痛药、营养剂、阿片样镇痛药、性激素和兴奋剂。
[0223] 适用于本发明的方法的疏水性药物可以是类固醇。类固醇包括例如，氟替卡松、氢 化可的松、醋酸氢化可的松、醋酸可的松、替可的松匹伐酯、泼尼松龙、甲泼尼龙、泼尼松、曲 安奈德、曲安西龙、莫米松、安西奈德、布地奈德、地奈德、醋酸氟轻松、氟轻松、氟西奈德、氟 尼缩松、氟米龙、丙酸氯倍他索、氯替泼诺、甲羟松、利美索龙、二氟泼尼酯、哈西奈德、倍氯 米松、倍他米松、倍他米松磷酸钠、环索奈德、地塞米松、地塞米松磷酸钠、醋酸地塞米松、氟 可龙、氢化可的松-17- 丁酸酯、氢化可的松-17-戊酸酯、双丙酸阿氯米松、戊酸倍他米松、 二丙酸倍他米松、泼尼卡酯、氯倍他松-17- 丁酸酯、氯倍他索-17-丙酸酯、己酸氟考龙、特 戊酸氟考龙、醋酸氟泼尼定、醋酸泼尼松龙、泼尼松龙磷酸钠、氟米龙（fluoromethalone)、 氟米龙醋酸酯、氯替泼诺依碳酸酯和倍他米松磷酸盐，包括它们的酯和药学上可接受的盐。
[0224] 适用于本发明的方法的疏水性药物可以是非类固醇抗炎药物，例如溴芬酸、双氯 芬酸钠、氟比洛芬、酮洛酸氨丁三醇、mapracorat、萘普生、奥沙普秦、布洛芬和奈帕芬胺，包 括它们的酯和药学上可接受的盐。
[0225] 适用于本发明的方法的其他疏水性药物包括贝西沙星、DE-110 (Santen Inc.)、瑞 巴派特、雄激素类（DHEA、睾酮、具有弱水溶解度的类似物、&衍生物）、雌激素类（为雌二醇、 雌三醇和雌酮的衍生物的差水溶性化合物；例如，雌二醇、左炔孕酮（Ievonorgesterol)、 其类似物、异构体或衍生物）、黄体酮和孕激素类（第一至第四代），其具有弱水溶解度（例 如，炔诺酮、其类似物和衍生物、甲羟孕酮或他那罗吉（tagaproget))和孕烯醇酮。各代孕 激素类的实例包括：第一代（雌烷）诸如炔诺酮、异炔诺酮、醋酸炔诺酮和双醋炔诺醇；第 二代（留烷）诸如左炔诺孕酮、炔诺酮和炔诺孕酮；第三代（留烷）诸如去氧孕烯、孕二烯 酮、诺孕酯，和屈螺酮；和第四代诸如地诺孕素、屈螺酮、nestorone、醋酸诺美孕酮和曲美 孕酮。
[0226] 疏水性药物的其他实例包括例如，10-烷氧基-9-硝基喜树碱、17b-雌二醇、3 ' -叠 氮基-3' -脱氧胸苷棕榈酸酯、5-氨基乙酰丙酸、ABT-963、醋氯芬酸、阿克拉霉素 A、阿苯 达唑、紫朱草素/紫草素、全反式维甲酸（ATRA)、醋酸维生素 E、AMG 517、安泼那韦、阿瑞 吡坦、青蒿素、印楝素、黄芩黄素、苯并咪唑衍生物、苯并卟啉、苯并嘧啶衍生物、比卡鲁胺、 BMS-232632、BMS-488043、溴西泮、溴匹立明、卡马西平、坎地沙坦西酯、卡马西平、卡苯达 唑（Carbendazim)、卡维地洛、头孢托仑、头孢替安、头孢泊肟、头孢呋辛酯、塞来考昔、神经 酰胺、西洛他唑、丙酸氯倍他索、克霉唑、辅酶Q10、姜黄、环胞素（Cyclcoporine)、达那唑、 氨苯砜、右布洛芬、地西泮、双嘧达莫、多西他赛、多柔比星、多柔比星、益康唑、ER-34122、 依美拉唑、艾托考昔、依曲韦林、依维莫司、依西美坦、非洛地平、非诺贝特、氟比洛芬、氟他 胺、呋塞米、Y-谷维素、格列本脲、格列齐特、促性激素释放素、灰黄霉素、橙皮素、H0-221、 口引哚美辛、胰岛素、异烟肼、异维甲酸、伊曲康唑、酮基布洛芬、LAB687、利马前列素、洛匹那 韦（Liponavir)、洛哌丁胺、甲苯咪唑、甲地孕酮、美洛昔康、MFB-1041、米非司酮、MK-0869、 MTP-PE、大麻隆、柚苷配基、尼古丁、尼伐地平、尼美舒利、尼莫地平、尼群地平、硝酸甘油、 NNC-25-0926、川陈皮素（Nobiletin)、八氟丙烷、冬凌草甲素、奥沙西泮、奥卡西平、羟苯甲 酮、紫杉醇、棕榈酸帕利哌酮、喷昔洛韦、PG301029、PGE2、苯妥英、吡罗昔康、鬼曰毒素、猪胰 脂肪酶和共脂肪酶、普罗布考、吡嗪酰胺、五羟黄酮、雷洛昔芬、白藜芦醇、大黄酸、利福平、 利托那韦、罗苏伐他汀、沙奎那韦、水飞蓟素、西罗莫司、螺内酯、司他夫定、磺胺异唑、他 克莫司、他达拉非、丹参酮、茶多酚、茶碱、噻洛芬酸、替拉那韦、甲苯磺丁脲、酒石酸托特罗 定、曲尼司特、维甲酸、曲安奈德、雷公藤内酯、曲格列酮、伐昔洛韦、维拉帕米、长春新碱、重 酒石酸长春瑞滨、长春西汀、维生素-E、华法林，和XK469。更多的实例包括例如，两性霉素 B、庆大霉素和其他氨基糖苷类抗生素、头孢曲松和其他头孢菌素类、四环素类、环孢菌素 A、 阿洛普令、金诺芬、阿扎丙宗、贝诺酯、二氟尼柳、二氟尼柳、芬布芬、非诺洛芬钙、甲氯芬那 酸、甲芬那酸、萘丁美酮、羟基保泰松、保泰松、舒林酸、苄硝唑、氯碘羟喹、地考喹酯、双碘喹 啉、二氯尼特（diloxanide furoate)、二硝托胺、呋喃唑酮、甲硝唑、尼莫唑、呋喃西林、奥硝 唑和替硝唑。
[0227] 适合本发明的疏水性药物还可以是具有5或跟高的cLogP的FDA-批准的药物，诸 如下表中列出的那些。
[0228]
【权利要求】
1. 丙酸氟替卡松的形态（A形式），其通过包含在约7. 8、15. 7、20. 8、23. 7、24. 5和32. 5 度2 0的峰的X-射线粉末衍射图表征。
2. 权利要求1的形态，其通过还包含在约9. 9、13. 0、14. 6、16. 0、16. 9、18. 1和34. 3度 2 0的峰的X-射线粉末衍射图表征。
3. 权利要求1的形态，其通过基本类似于图31A中所示的X-射线粉末衍射图表征。
4. 权利要求1的形态，其中所述形态具有以重量计超过99%的纯度。
5. 权利要求1的形态，其进一步通过不低于0. 35g/cm3、不低于0. 40g/cm3、不低于 0. 45g/cm3、不低于0. 50g/cm3或不低于0. 55g/cm3的振实密度表征。
6. 权利要求1的形态，其进一步通过以下表征：熔点为299. 5°C，熔程为10°C。
7. 权利要求1的形态，其包含具有约100-1000nm的平均尺寸的丙酸氟替卡松纳米板。
8. 权利要求7的形态，其中所述纳米板各自具有约400-800nm的平均尺寸。
9. 权利要求7的形态，其中所述纳米板具有基本正交于限定所述纳米板厚度的表面的 [001]晶轴。
10. 权利要求1的形态，其进一步通过在水中在室温时的约1 u g/g/天的在水中的溶出 度表征。
11. 大量的丙酸氟替卡松的纳米板，其具有基本正交于限定所述纳米板厚度的表面的 [001]晶轴。
12. 权利要求11的大量的纳米板，其中所述纳米板具有约100-1000nm的平均尺寸。
13. 权利要求11的大量的纳米板，其中所述纳米板各自具有5nm至500nm的厚度。
14. 权利要求11的大量的纳米板，其通过不低于0. 35g/cm3、不低于0. 40g/cm3、不低于 0. 45g/cm3、不低于0. 50g/cm3或不低于0. 55g/cm3的振实密度表征。
15. 权利要求11的大量的纳米板，其通过以下表征：熔点为299. 5°C，熔程为10°C。
16. 权利要求11的大量的纳米板，其通过在水中在室温时的约ly g/g/天的在水中的 溶出度表征。
17. 纯化的丙酸氟替卡松的晶形，其通过不低于0. 35g/cm3、不低于0. 40g/cm3、不低于 0. 45g/cm3、不低于0. 50g/cm3或不低于0. 55g/cm3的振实密度表征。
18. 权利要求17的晶形，其进一步通过以下表征：熔点为299. 5°C，熔程为10°C。
19. 权利要求17的晶形，其进一步通过在水中在室温时的约1 ii g/g/天的在水中的溶 出度表征。
20. 药物组合物，其包含权利要求1的形态和药学上可接受的载体。
21. 权利要求20的组合物，其中所述组合物是包含0. 0001% -10%的丙酸氟替卡松的 混悬物的局部用制剂。
22. 药物组合物，其包含权利要求11的大量的纳米板和药学上可接受的载体。
23. 药物组合物，其包含权利要求17的晶形和药学上可接受的载体。
24. 治疗或减轻眼障碍的症状的方法，所述方法包括向有需要的个体施用有效量的权 利要求20的组合物。
25. 权利要求24的方法，其中所述眼障碍包括睑缘炎、术后眼部炎症、眼色素层炎、干 眼或眼变态反应；且所述方法包括向有需要的个体的睑缘、皮肤或眼表面局部施用有效量 的权利要求20的组合物。
26. 治疗或减轻呼吸系统疾病的方法，所述方法包括向有需要的个体施用有效量的权 利要求20的组合物。
27. 权利要求26的方法，其中所述呼吸系统疾病是哮喘或COPD。
28. 制备权利要求11的大量的纳米板的方法，其包括： 提供无菌的相I溶液，其包含丙酸氟替卡松和用于丙酸氟替卡松的溶剂； 提供无菌的相II溶液，其包含至少一种表面稳定剂和用于丙酸氟替卡松的抗溶剂，其 中所述至少一种表面稳定剂包含纤维素表面稳定剂； 将相I溶液和相II溶液混合，得到相III混合液，其中当混合这两种溶液时使用声波 处理，且该混合在不超过25°C的第一个温度进行；和 将相III混合液在高于第一个温度的第二个温度退火一段时间0\)，以致生成含权利 要求11的大量纳米板的相III混悬物。
29. 权利要求28的方法，其中使用具有约10-75瓦的输出功率的超声处理。
30. 权利要求28的方法，其中所述纤维素表面稳定剂是具有约4至50cP的粘度的甲基 纤维素或分子量不超过l〇〇kDa的甲基纤维素，第一个温度是0°C至5°C的温度，第二个温度 是10°C至40°C的温度，且为至少8小时。
31. 制备疏水性治疗剂的纯化的、稳定的、无菌的纳米晶体的方法，其包括： 提供无菌的相I溶液，其包含疏水性治疗剂和用于所述疏水性治疗剂的溶剂； 提供无菌的相II溶液，其包含至少一种表面稳定剂和用于所述疏水性治疗剂的抗溶 剂； 将无菌的相I溶液和无菌的相II溶液混合，得到相III混合液，其中所述混合在不超 过25°C的第一个温度进行；和 将相III混合液在超过第一个温度的第二个温度退火一段时间0\)，以致生成含大量 该疏水性治疗剂的纳米晶体的相III混悬物。
32. 权利要求31的方法，其中所述疏水性治疗剂是氟替卡松或其酯或曲安奈德。
33. 权利要求32的方法，其中所述疏水性治疗剂是丙酸氟替卡松。
34. 权利要求31-33中任意一项的方法，其中当混合无菌的相I溶液和无菌的相II溶 液时使用声波处理。
35. 权利要求31-34中任意一项的方法，其中所述第一个温度是-10°C至15°C、或_5°C 至10°C、或0°C至5°C、或0°C至2°C、或2°C至4°C的温度。
36. 权利要求31-35中任意一项的方法，其中所述第二个温度是4°C至60°C、或10°C至 40°C、或15°C至25°C的温度。
37. 权利要求31-36中任意一项的方法，其中为至少8小时。
38. 权利要求31-37中任意一项的方法，其中相II溶液中的至少一种表面稳定剂包含 纤维素表面稳定剂。
39. 权利要求38的方法，其中所述纤维素表面稳定剂是分子量不超过lOOkDa的甲基纤 维素。
40. 权利要求38或39的方法，其中甲基纤维素在相III混悬物中的浓度为约0. 1%至 0? 5%。
41. 权利要求38-40中任意一项的方法，其中所述纤维素表面稳定剂具有的不超过 4000cP、不超过2000cP、不超过lOOOcP、不超过500cP、不超过lOOcP、不超过50cP、不超过 30cP或不超过15cP的粘度。
42. 权利要求31-41中任意一项的方法，其中所述抗溶剂是蒸馏水。
43. 权利要求31-42中任意一项的方法，其中相II溶液的pH不超过6. 5或不超过6. 0 或不超过5. 5。
44. 权利要求31-43中任意一项的方法，其中相I溶液的溶剂包括聚醚。
45. 权利要求44的方法，其中所述聚醚选自聚乙二醇（PEG)、聚丙二醇（PPG)及其混合 物。
46. 权利要求45的方法，其中所述聚醚选自PEG400、PPG400及其混合物。
47. 权利要求46的方法，其中相I溶液中的PEG 400的浓度为约20至35%。
48. 权利要求46的方法，其中相I溶液中的PPG 400的浓度为约65%至75%。
49. 权利要求31-48中任意一项的方法，其中相I溶液还包含表面稳定剂。
50. 权利要求49的方法，其中所述表面稳定剂是吐温80。
51. 权利要求50的方法，其中吐温80在相I溶液中的浓度为约7.0%至15%。
52. 权利要求31-51中任意一项的方法，其中相II溶液中的至少一种表面稳定剂还包 含苯扎氯铵。
53. 权利要求52的方法，其中相II溶液的苯扎氯铵浓度为约0.005%至0. 15%或为约 0? 01%至 0? 12%。
54. 权利要求31-53中任意一项的方法，所述方法还包括通过切向流过滤或通过连续 离心纯化所述疏水性治疗剂的大量纳米晶体。
55. 通过权利要求31-54中任意一项的方法制备的疏水性治疗剂的大量纳米晶体。
56. 权利要求55的大量的纳米晶体，其中所述纳米晶体是厚度范围10nm至100nm的纳 米板。
57. 权利要求55的大量的纳米晶体，其中所述纳米晶体具有400-800nm的范围的平均 尺寸。
58. 权利要求56的大量的纳米晶体，其中所述纳米板为具有基本正交于限定所述纳米 板厚度的表面的[001]晶轴的丙酸氟替卡松纳米板。
【文档编号】C07J71/00GK104350063SQ201380030423
【公开日】2015年2月11日 申请日期:2013年5月6日 优先权日:2012年5月8日
【发明者】T·加瓦纳, S·P·巴曼, T·郝, T·B·勒兰德, R·V·泰凯德特 申请人:埃塞克斯治疗公司