一种从山银花中提取分离绿原酸的方法
【专利摘要】本发明公开了一种从山银花中提取分离绿原酸的方法，步骤如下：(1)将山银花使用粉碎机粉碎，粉碎成10-100目的药材粉末；(2)将步骤(1)的药材粉末放入提取罐中加水提取，然后过滤得到提取液；(3)将步骤(2)得到的提取液通过大孔树脂进行吸附分离，上样量为药材与大孔树脂的重量比为1:1-8，上样流速为0.5-2?BV/h，上样完成后，先以0.5-5?BV的水以0.5-2?BV/h的速度冲洗，然后用4-8?BV10％-40％的乙醇以1-4?BV/h的速度洗脱，收集洗脱液；(4)将洗脱液浓缩至原体积1/3～1/8，过滤后通过工业色谱纯化，以10％-30％乙醇作为洗脱剂，流速为10-25mL·min-1，洗脱液减压浓缩、喷雾干燥，得到绿原酸。本发明的工艺合理、可行，绿原酸的转移率高，过程简单，溶剂单一、方便回收，具有很强的实用价值。
【专利说明】一种从山银花中提取分离绿原酸的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及提取分离【技术领域】，尤其涉及一种从山银花中提取分离绿原酸的方 法。
【背景技术】
[0002] 绿原酸是从金银花、山银花等药材中提取分离得到的一种重要的生物活性物质， 具有广泛的药理活性，如抗菌、抗病毒、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴 奋中枢神经系统等，具有广泛的应用范围，如可作为多种中成药等产品质量控制的有效成 分，可取代部分合成氧化剂、加入猪油中防止猪油氧化、增加保质期，也可作为饲料添加剂 等使用，具有较大的市场需求量，尤其是高纯度的绿原酸提取物价格昂贵。研究从植物中获 得高纯度绿原酸将对社会发挥重要的作用。
[0003] 绿原酸来源广泛，目前用于提取分离绿原酸的药材种类主要有金银花类、山银花 类、杜仲叶等，其中灰毡毛忍冬、红腺忍冬、华南忍冬等山银花类药材为中国药典所收载的 中药，具有较高的绿原酸含量，而国内外公开从山银花中提取分离绿原酸的报道数量相对 较少，选择从山银花中提取分离绿原酸具有较大的资源优势。
[0004] 绿原酸结构中有活性基团，其性质不稳定，提取分离时不能处于高温、强光、易水 解的环境中。目前已报道从天然药物中提取分离绿原酸的主要方法有溶剂提取法、物理场 辅助提取法（超声场、微波场等）、醇沉法、乙酸乙酯萃取法、大孔树脂法等。上述提取分离 方法中存在一些问题，如物理场辅助提取法不适合大规模生产，醇沉法、乙酸乙酯萃取法的 转移率低、过程不安全、溶剂毒性大，已报道的大孔树脂法的转移率低、过程复杂、所用溶剂 不适合回收。因此研究一条绿原酸转移率高、过程简单，溶剂毒性小并能被方便回收的提取 分离新工艺路线具有重要的经济意义。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了一种从山银花中提取分离绿原酸的方法。
[0006] 本发明采用如下技术方案：
[0007] 本发明的从山银花中提取分离绿原酸的方法的具体步骤如下：
[0008] (1)将山银花使用粉碎机进行粉碎，粉碎成10-100目的药材粉末；
[0009] (2)将步骤⑴的药材粉末放入提取罐中加水提取，料液比为1:10-30,提取温度 为40-90°C，提取1-2次，每次0. 5-2h，然后过滤得到提取液；
[0010] (3)将步骤（2)得到的提取液通过大孔树脂进行吸附分离，大孔树脂以湿法装柱， 其径高比为1 :3-10,上样量为药材与大孔树脂的重量比为1:1-8,上样流速为0. 5-2BV/h， 上样完成后，先以0.5-5 BV的水以0.5-2 BV/h的速度冲洗，然后用4-8 BV 10%-40%的 乙醇以l-4BV/h的速度洗脱，收集洗脱液；
[0011] (4)将步骤（3)所得的洗脱液浓缩至原体积1/3?1/8,过滤后通过工业色谱纯 化，以10%-30(%乙醇作为洗脱剂，流速为10-251111^1^1^，洗脱液减压浓缩、喷雾干燥，得 到绿原酸产品。
[0012] 步骤（1)中，优选将山银花粉碎成60目的药物粉末。
[0013] 步骤⑵中，将步骤⑴的药材粉末放入提取罐中加水提取，料液比为1:20,提取 温度为60°C，提取1次，提取时间为2h，然后过滤得到提取液。
[0014] 步骤（3)中，大孔树脂为D101型、AB-8型、HPD100型、HPD750型或ADS-7型优选 大孔树脂为ADS-7型。
[0015] 步骤⑶中，大孔树脂以湿法装柱，其径高比优选为1 :5-8。
[0016] 步骤（3)中，优选提取药材与大孔树脂的重量比为1:5,上样流速为1 BV/h，上样 完成后，先以1 BV的蒸馏水以1 BV/h的速度冲洗，然后用6 BV的乙醇以2 BV/h的速度洗 脱，收集洗脱液，所述的乙醇的质量浓度为20%。
[0017] 步骤（3)中，大孔树脂使用前进行前处理，步骤如下：将大孔树脂减压抽滤至无水 滴落，备用，试验前将大孔树脂用95%乙醇浸泡24h以上，除掉大孔树脂碎片和杂物，湿法 上柱，先用95%乙醇洗至流出液与水混合后不显浑浊为止，再用蒸馏水洗至流出液无醇味； 接着再用4%氢氧化钠溶液以2BV体积以2BV ?IT1速度冲洗，然后浸泡2?4h，用蒸馏水洗 至流出液为中性；再用4%盐酸溶液以28￥体积以28￥*1^速度冲洗，然后浸泡2?411，用 蒸馏水洗至流出液为中性。
[0018] 步骤（4)中，色谱填料为CT-25-l、CT-25-2、PIP0-02中的一种，优选色谱填料为 PIP0-02。
[0019] 本发明的积极效果如下：
[0020] 本发明首次采用以水提取一大孔树脂吸附分离一工业色谱纯化为核心的成套技 术从山银花中提取分离绿原酸的方法，建立了一条从山银花中提取、分离、纯化高纯度绿原 酸的工艺路线，该工艺合理、可行，绿原酸的转移率高，过程简单，溶剂方便回收，具有很强 的实用价值。
【具体实施方式】
[0021] 下面的实施例是对本发明的进一步详细描述。
[0022] 实施例1
[0023] 本发明的从山银花中提取分离绿原酸的方法的具体步骤如下：
[0024] (1)将山银花使用粉碎机进行粉碎，粉碎成10目的药材粉末；
[0025] (2)将步骤（1)的药材粉末放入提取罐中加水提取，料液比为1:10,提取温度为 40°C，提取2次，每次2h，然后过滤得到提取液；
[0026] (3)将步骤⑵得到的提取液通过大孔树脂进行吸附分离，上样量为药材与大孔 树脂的重量比为1:1，上样流速为0.5 BV/h，上样完成后，先以0.5 BV的水以0.5 BV/h的 速度冲洗，然后用4 BV10%的乙醇以1 BV/h的速度洗脱，收集洗脱液；
[0027] (4)将步骤（3)所得的洗脱液浓缩至原体积1/3,过滤后上工业色谱，色谱填料为 CT-25-1，以10%乙醇作为洗脱剂，流速为10mL · mirT1，洗脱液减压浓缩、喷雾干燥，得到绿 原酸产品。
[0028] 步骤（3)中，大孔树脂为D101型。
[0029] 步骤（3)中，大孔树脂使用前进行前处理，步骤如下：将大孔树脂减压抽滤至无水 滴落，备用，试验前将大孔树脂用95%乙醇浸泡24h以上，除掉大孔树脂碎片和杂物，湿法 上柱，先用95%乙醇洗至流出液与水混合后不显浑浊为止，再用蒸馏水洗至流出液无醇味； 接着再用4%氢氧化钠溶液以2BV体积以2BV ?IT1速度冲洗，然后浸泡2?4h，用蒸馏水洗 至流出液为中性；再用4%盐酸溶液以28￥体积以28￥*1^速度冲洗，然后浸泡2?411，用 蒸馏水洗至流出液为中性。
[0030] 步骤⑶中，大孔树脂以湿法装柱，其径高比为1 :3。
[0031] 实施例2
[0032] 本发明的从山银花中提取分离绿原酸的方法的具体步骤如下：
[0033] (1)将山银花使用粉碎机进行粉碎，粉碎成100目的药材粉末；
[0034] (2)将步骤（1)的药材粉末放入提取罐中加水提取，料液比为1:30,提取温度为 90°C，提取1次，每次0. 5h，然后过滤得到提取液；
[0035] (3)将步骤⑵得到的提取液通过大孔树脂进行吸附分离，上样量为药材与大孔 树脂的重量比为1:8,上样流速为2 BV/h，上样完成后，先以5 BV的水以2 BV/h的速度冲 洗，然后用8BV 40%的乙醇以4 BV/h的速度洗脱，收集洗脱液；
[0036] (4)将步骤（3)所得的洗脱液浓缩至原体积1/8,过滤后上工业色谱，色谱填料为 CT-25-2,以30%乙醇作为洗脱剂，流速为25mL · mirT1，洗脱液减压浓缩、喷雾干燥，得到绿 原酸产品。
[0037] 步骤（3)中，大孔树脂为HPD750型。
[0038] 步骤（3)中，大孔树脂使用前进行前处理，步骤如下：将大孔树脂减压抽滤至无水 滴落，备用，试验前将大孔树脂用95 %乙醇浸泡24h以上，除掉大孔树脂碎片和杂物，湿法 上柱，先用95%乙醇洗至流出液与水混合后不显浑浊为止，再用蒸馏水洗至流出液无醇味； 接着再用4%氢氧化钠溶液以2BV体积以2BV ?IT1速度冲洗，然后浸泡2?4h，用蒸馏水洗 至流出液为中性；再用4%盐酸溶液以28￥体积以28￥*1^速度冲洗，然后浸泡2?411，用 蒸馏水洗至流出液为中性。
[0039] 步骤（3)中，大孔树脂以湿法装柱，其径高比为1 :10。
[0040] 实施例3
[0041] 本发明的从山银花中提取分离绿原酸的方法的具体步骤如下：
[0042] (1)将山银花使用粉碎机进行粉碎，粉碎成60目的药材粉末；
[0043] (2)将步骤⑴的药材粉末放入提取罐中加水提取，料液比为1:20,提取温度为 60°C，提取1次，提取2h，然后过滤得到提取液；
[0044] (3)将步骤⑵得到的提取液通过大孔树脂进行吸附分离，上样量为药材与大孔 树脂的重量比为1:5,上样流速为1 BV/h，上样完成后，先以1 BV的水以1 BV/h的速度冲 洗，然后用6 BV 20%的乙醇以2 BV/h的速度洗脱，收集洗脱液；
[0045] (4)将步骤（3)所得的洗脱液浓缩至原体积1/5,过滤后上工业色谱，色谱填料为 PIP0-02,以20%乙醇作为洗脱剂，流速为16. 46mL ?mirT1，洗脱液减压浓缩、喷雾干燥，得到 绿原酸产品。
[0046] 步骤（3)中，大孔树脂为ADS-7型。
[0047] 步骤（3)中，大孔树脂使用前进行前处理，步骤如下：将大孔树脂减压抽滤至无水 滴落，备用，试验前将大孔树脂用95 %乙醇浸泡24h以上，除掉大孔树脂碎片和杂物，湿法 上柱，先用95%乙醇洗至流出液与水混合后不显浑浊为止，再用蒸馏水洗至流出液无醇味； 接着再用4%氢氧化钠溶液以2BV体积以2BV ?IT1速度冲洗，然后浸泡2?4h，用蒸馏水洗 至流出液为中性；再用4%盐酸溶液以28￥体积以28￥*1^速度冲洗，然后浸泡2?411，用 蒸馏水洗至流出液为中性。
[0048] 步骤⑶中，大孔树脂以湿法装柱，其径高比为1 :5。
[0049] 提取试验的计算说明
[0050] 溶液中绿原酸总量（mg) = CXVi
[0051] 浸膏含量（％ ) = (cxv/wg X100%
[0052] 转移率（％ ) = CXV/(W0X4. 41% ) X100%
[0053] C :根据回归方程计算所得溶液中绿原酸浓度（mg · πιΓ1)
[0054] Vi :提取液总体积（ml)
[0055] WQ :山银花药材重量（mg)
[0056] V2 :溶解浸膏溶液体积（ml)
[0057] Wi :浸膏取样重（mg)
[0058] 提取效率指单位时间内提取出绿原酸量，与提取液中绿原酸量成正比，与提取时 间成反比。
[0059] 在提取试验中，转移率指提取工艺的转移率。
[0060] 对实施例1-3的提取过程的浸膏含量和转移率进行计算，结果如表1所示。
[0061] 表 1
【权利要求】
1. 一种从山银花中提取分离绿原酸的方法，其特征在于：所述方法的具体步骤如下： (1) 将山银花使用粉碎机进行粉碎，粉碎成10-100目的药材粉末； (2) 将步骤（1)的药材粉末放入提取罐中加水提取，料液比为1:10-30,提取温度为 40-90°C，提取1-2次，每次0. 5-2h，然后过滤得到提取液； (3) 将步骤（2)得到的提取液通过大孔树脂进行吸附分离，大孔树脂以湿法装柱，其径 高比为1 :3-10,上样量为药材与大孔树脂的重量比为1:1-8,上样流速为0. 5-2 BV/h，上样 完成后，先以0.5-5 BV的水以0.5-2 BV/h的速度冲洗，然后用4-8 BV 10%-40%的乙醇 以1-4 BV/h的速度洗脱，收集洗脱液； (4) 将步骤（3)所得的洗脱液浓缩至原体积1/3?1/8,过滤后通过工业色谱纯化，以 10% -30%乙醇作为洗脱剂，流速为10-25mL · mirT1，洗脱液减压浓缩、喷雾干燥，得到绿原 酸产品。
2. 如权利要求1所述的从山银花中提取分离绿原酸的方法，其特征在于：步骤（1)中， 将山银花粉碎成60目的药物粉末。
3. 如权利要求1所述的从山银花中提取分离绿原酸的方法，其特征在于：步骤（2)中， 将步骤（1)的药材粉末放入提取罐中加水提取，料液比为1:20,提取温度为60°C，提取1 次，提取时间为2h，然后过滤得到提取液。
4. 如权利要求1所述的从山银花中提取分离绿原酸的方法，其特征在于：步骤（3)中， 大孔树脂为D101型、AB-8型、HPD100型、HPD750型或ADS-7型。
5. 如权利要求1所述的从山银花中提取分离绿原酸的方法，其特征在于：步骤（3)中， 大孔树脂为ADS-7型。
6. 如权利要求1所述的从山银花中提取分离绿原酸的方法，其特征在于：步骤（3)中， 大孔树脂以湿法装柱，其径高比为1 :5_8。
7. 如权利要求1所述的从山银花中提取分离绿原酸的方法，其特征在于：步骤（3)中， 提取药材与大孔树脂的重量比为1:5,上样流速为1 BV/h，上样完成后，先以1 BV的蒸馏水 以1 BV/h的速度冲洗，然后用6 BV的乙醇以2 BV/h的速度洗脱，收集洗脱液，所述的乙醇 的质量浓度为20%。
8. 如权利要求1所述的从山银花中提取分离绿原酸的方法，其特征在于：步骤（4)中， 色谱填料为 CT-25-l、CT-25-2、PIP0-02 中的一种。
9. 如权利要求1所述的从山银花中提取分离绿原酸的方法，其特征在于：步骤（4)中， 色谱填料为PIP0-02。
10. 如权利要求1所述的从山银花中提取分离绿原酸的方法，其特征在于：步骤（4) 中，洗脱剂是浓度为10%的乙醇，流速为15mL · min'
【文档编号】C07C67/48GK104086424SQ201410332285
【公开日】2014年10月8日 申请日期:2014年7月11日 优先权日:2014年7月11日
【发明者】葛发欢, 陈光宇, 李海池, 张湘东 申请人:广州中大南沙科技创新产业园有限公司, 中山大学