专利名称：一种山茱萸多糖的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种山茱萸多糖的制备方法，尤其是一种利用超声提取、膜分离和分 级沉淀提取纯化山茱萸多糖的方法。
背景技术：
山茱萸(Fructus Corni)为山茱萸科植物山茱萸 Cornus Officinalis Sieb. et Zucc.的干燥果肉，又名山萸肉、药枣、肉枣等。是一种滋补类名贵药材，具有补益肝肾、涩 精固脱的功效。近年来研究显示，山茱萸具有抗失血性休克、抑制血小板聚集、免疫调节、抗 炎、降血糖、抗氧化、抗癌、抗菌等作用。文献“山茱萸有效化学成分的研究进展(周京华， 李春生，李电东.中国新药杂志，2001,10(11) :808·)”和“山茱萸多糖的化学研究(杨云， 刘建鑫，刘翠平，等.中国中药杂志，1999,24(10) :614.)”，临床研究证明，山茱萸是治疗糖 尿病、冠心病和高血压病的主要药材。现代研究表明山茱萸果肉中主要成分有糖类、有机酸 类及其酯类、鞣质类等，其中多糖类物质是生命代谢不可缺少的重要物质，具有多种生物活 性，山茱萸多糖具有免疫调节活性和明显的抗氧化作用。有关山茱萸多糖的提取方法报道很少，方法比较局限。现有方法是原料脱脂、水 提、浓缩、洗涤、干燥，得到产品，如赵晓华等《山茱萸多糖提取工艺及理化性质研究》，脱脂 使用石油醚，用量大、毒性大；工艺所用有机溶剂种类多，容易导致有效成分流失。张丽娟等《山茱萸多糖的提取工艺优化及对大鼠局部灶性脑缺血再灌注损伤的保 护作用》，该文献公开的方法是超声水提、浓缩、超滤、醇沉、除蛋白、洗涤干燥所得山茱萸多 糖产品纯度不高。中国专利“一种酶解提取山茱萸多糖的方法”(申请号=200810120569. 6)，该专利 公开的方法是取山茱萸干燥果肉粉碎制得山茱萸干粉，加入质量为山茱萸干粉质量15 60倍的蒸馏水，加入酶于35 60°C、pH3. 5 7. 0下酶解0. 5h 4h，酶解结束后灭酶，提 取液浓缩醇沉，离心干燥即得山茱萸多糖提取物，产品纯度低。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种操作简单，生产安全，纯度较高的山茱萸 多糖制备方法。为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案一种山茱萸多糖的制备方法，其特征在于包含以下步骤1)提取将山茱萸果肉醇提总苷后的干燥残渣加入5-10倍量(V/W)温水超声提 取l-2h，重复2-3次，过滤，合并提取液；2)除杂上述提取液浓缩，加适量30%H202，至浅黄色，加3%三氯醋酸至不再产生 混浊，离心，取上清液；3)膜分离上述上清液用超滤膜超滤，得截留物；4)分级沉淀上述截留物加适量水，先加30%乙醇沉淀，滤液再加50%乙醇，过滤，滤液加入90%乙醇，生成沉淀，滤出沉淀依次用丙酮、乙醇洗涤，真空干燥即得山茱萸多
糖产品。步骤1)中温水为30_70°C，超声频率为20KHz。步骤2)中H2O2用量为浓缩液体积的1/4-1/2。步骤3)中超滤膜为截留分子量为60000的中空纤维膜综上所述，本发明存在以下优点本工艺采用温水超声提取山茱萸多糖，溶剂简 单；所用药材为醇提总苷后的残渣，成本较低；膜分离能有效除去小分子杂质。采用上述技术方案制备山茱萸多糖，操作简单，成本较低，纯度较高，利于大生产 操作。下面将结合具体实施方式
对本发明做进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不 局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例1取山茱萸果肉醇提总苷后的干燥残渣1kg，加入5L60°C温水超声提取2h，重复3 次，合并提取液。提取液浓缩至原体积的1/2，冷却至25°C，加入1.8L30% H2O2，搅拌，至 浅黄色，加3 %三氯醋酸至不再产生混浊，加入离心机离心，直到离液面交界处无白色混 悬，分出澄清液体，用超滤膜超滤，截留物加400ml水，加入400ml30 %乙醇沉淀，滤液再加 600ml50%乙醇，过滤，滤液加入1400ml90%乙醇，放置沉淀，滤出沉淀，依次用200ml丙酮、 150ml乙醇洗涤，真空干燥，即得山茱萸多糖11. Sg,经HPLC检测，纯度为91.5%。实施例2取山茱萸果肉醇提总苷后的干燥残渣1kg，加入10L30°C温水超声提取lh，重复 2次，合并提取液，提取液浓缩至原体积的1/2，冷却至25°C，加入2. 5L30% H2O2，搅拌，至 浅黄色，加3%三氯醋酸至不再产生混浊，加入离心机离心，直到离液面交界处无白色混 悬，分出澄清液体，用超滤膜超滤，截留物加650ml水，加入650ml30 %乙醇沉淀，滤液再加 940ml50%乙醇，过滤，滤液加入2250ml90%乙醇，放置沉淀，滤出沉淀，依次用丙酮、乙醇洗 涤，真空干燥，即得山茱萸多糖12.. 9g，经HPLC检测，纯度为95.6%。实施例3取山茱萸果肉醇提总苷后的干燥残渣1kg，加入8L70°C温水超声提取1. 5h，重复 2次，合并提取液。提取液浓缩至原体积的1/2，冷却至25°C，加入3.8L30% H2O2，搅拌， 至浅黄色，加3 %三氯醋酸至不再产生混浊，加入离心机离心，直到离液面交界处无白色混 悬，分出澄清液体，用超滤膜超滤，截留物加500ml水，加入500ml30 %乙醇沉淀，滤液再加 750ml50%乙醇，过滤，滤液加入1750ml90%乙醇，放置沉淀，滤出沉淀，依次用丙酮、乙醇洗 涤，真空干燥，即得山茱萸多糖13. 8g，经HPLC检测，纯度为87.2%。实施例4取山茱萸果肉醇提总苷后的干燥残渣1kg，加入7L50°C温水超声提取lh，重复 3次，合并提取液。提取液浓缩至原体积的1/2，冷却至25°C，加入7L30 % H2O2，搅拌，至 浅黄色，加3%三氯醋酸至不再产生混浊，加入离心机离心，直到离液面交界处无白色混 悬，分出澄清液体，用超滤膜超滤，截留物加450ml水，加入450ml30 %乙醇沉淀，滤液再加680ml50%乙醇，过滤，滤液加入1600ml90%乙醇，放置沉淀，滤出沉淀，依次用丙酮、乙醇洗 涤，真空干燥，即得山茱萸多糖10. 4g，经HPLC检测，纯度为92.5%。实施例5取山茱萸果肉醇提总苷后的干燥残渣5kg，加入25L50°C温水超声提取2h，重复 2次，合并提取液。提取液浓缩至原体积的2/5，冷却至25°C，加入8L30% H2O2，搅拌，至浅 黄色，加3%三氯醋酸至不再产生混浊，加入离心机离心，直到离液面交界处无白色混悬， 分出澄清液体，用超滤膜超滤，截留物加1200ml水，加入1200ml30%乙醇沉淀，滤液再加 1800ml50%乙醇，过滤，滤液加入4200ml90%乙醇，放置沉淀，滤出沉淀，依次用丙酮、乙醇 洗涤，真空干燥，即得山茱萸多糖58. 6g，经HPLC检测，纯度为89. 1 %。
权利要求
1.一种山茱萸多糖的制备方法，其特征在于包含以下步骤1)提取将山茱萸果肉醇提总苷后的干燥残渣加入5-10倍量(V/W)温水超声提取 l-2h，重复2-3次，过滤，合并提取液；2)除杂上述提取液浓缩，加适量30%H2O2，至浅黄色，加3%三氯醋酸至不再产生混 浊，离心，取上清液；3)膜分离上述上清液用超滤膜超滤，得截留物；4)分级沉淀上述截留物加适量水，先加30%乙醇沉淀，滤液再加50%乙醇，过滤，滤 液加入90%乙醇，生成沉淀，滤出沉淀依次用丙酮、乙醇洗涤，真空干燥即得山茱萸多糖产品。
2.如权利要求1所述山茱萸多糖的制备方法，其特征在于步骤1)中温水为30-70°C， 超声频率为20KHz。
3.如权利要求1所述山茱萸多糖的制备方法，其特征在于步骤2)中H2O2用量为浓缩 液体积的1/4-1/2。
4.如权利要求1所述山茱萸多糖的制备方法，其特征在于步骤3)中超滤膜为截留分子 量为60000的中空纤维膜。
全文摘要
本发明涉及一种山茱萸多糖的制备方法，工艺以山茱萸果肉醇提总苷后的干燥残渣为原料，加5-10倍量(V/W)温水超声提取1-2h，合并提取液，浓缩，加30％H2O2和3％三氯醋酸，离心，取上清液，超滤，截留物先加适量水，再加不同浓度乙醇分级沉淀，滤出高浓度醇沉淀物干燥即得产品。该工艺操作简单，成本较低，纯度较高，利于大生产操作。
文档编号C08B37/00GK102002109SQ20101055811
公开日2011年4月6日 申请日期2010年11月25日 优先权日2010年11月25日
发明者万冬梅, 刘东锋, 杨成东 申请人:南京泽朗医药科技有限公司