一种Na+/Pi协同转运蛋白启动子和终止子及其应用的制作方法

文档序号:11808986阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种Na+/Pi协同转运蛋白启动子,其特征在于:核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种DNA表达盒,其特征在于:其含有SEQ ID NO:1所示的Na+/Pi协同转运蛋白启动子的核苷酸序列。

3.按照权利要求2所述的DNA表达盒,其特征在于:所述的表达盒还含有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列作为终止子,其中SEQ ID NO:1所示的序列位于SEQ ID NO:2所示的序列的上游,SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2间为编码目的基因的开放阅读框架。

4.按照权利要求3所述的DNA表达盒,其特征在于:所述编码目的基因的开放阅读框架的cDNA序列具有如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列。

5.一种包含权利要求2-4中任一项所述的DNA表达盒的重组载体。

6.按照权利要求5所述的重组载体,其特征在于:所述载体为游离型或者整合型载体。

7.按照权利要求6所述的重组载体,其特征在于:所述整合型载体为农杆菌介导的双元表达载体,或者为携带有靶基因翼侧1500-4000碱基同源重组臂的同源重组载体,所述同源重组载体骨架或所述游离型载体选自大肠杆菌克隆载体或酵母穿梭载体,优选pMD18-T、pUC18、pYES2c/t或pYX212。

8.一种包含权利要求5所述的重组载体的宿主细胞。

9.按照权利要求8所述的宿主细胞,其特征在于:所述宿主细胞为大肠杆菌细胞或酵母细胞。

10.一种用于产油酵母遗传表达的表达系统,其特征在于:所述表达系统包含:

(1)能够在红冬孢酵母属、锁掷酵母属、掷孢酵母属和红酵母属菌株中表达的改良载体,所述改良载体通过在能够在上述酵母属中整合表达或游离表达的质粒中插入SEQ ID NO:1所示的启动子序列和SEQ ID NO:2所示的终止子序列构建获得,其中SEQ ID NO:1所示的启动子序列位于SEQ ID NO:2所示的终止子序列的上游,SEQ ID NO:1所示的序列与SEQ ID NO:2所示的序列之间为多克隆位点,并且所述载体还包含选择性标记基因;和

(2)目的基因开放阅读框序列,其能够可操作性地插入到(1)所述的改良载体中,并使所述目的基因与(1)所述的改良载体中的启动子和终止子符合阅读框的连接,和

(3)红冬孢酵母属、锁掷酵母属、掷孢酵母属和红酵母属菌株。

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