本发明涉及生物分离技术领域，具体涉及一种海参皂苷提取方法。
背景技术：
皂苷是苷元为三萜或螺旋甾烷类化合物的一类糖苷，主要分布于陆地高等植物中，也少量存在于海星和海参等海洋生物中。有研究表明皂苷具有积极的免疫调节作用和抗疲劳作用，同时能够刺激骨髓红细胞生长，用于防止脑瘫及因脑震荡的脊椎损伤等。许多中草药如人参、远志、桔梗、甘草、知母和柴胡等的主要有效成分都含有皂苷，而海参中皂苷含量也较丰富。除了直接食用之外，如果能将海参中的有效成分加以分离提取，那么对该成分的利用将更具针对性。
现有技术中许多研究者针对人参、桔梗的天然药物的皂苷提取方法做了积极的研究，但是由于上述植物与海参的物料性质、细胞类别均存在差异，因此无法将上述提取方法直接转用至海参，而专门针对海参皂苷的提取方法目前仍存在诸多缺陷。
技术实现要素：
本发明旨在针对现有技术的技术缺陷提供一种海参皂苷提取方法，以解决现有技术中海参皂苷提取效率较低的技术问题。
本发明解决的另一技术问题是提升海参皂苷提取的纯度。
为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：
一种海参皂苷提取方法，包括以下步骤：
1)将鲜海参粉碎得到海参糜，向其中加入10倍重量的95％乙醇浸泡4～5h，而后离心取上清，加热回流0.5～1h，趁热过滤，滤液在-20℃～-26℃下冻放8～14h，倒出上清液得沉淀；
2)向步骤1)得到的沉淀中加入6～10倍的90～95％乙醇，该乙醇液中含H2SO44～6％，加热回流6～8h，加水调乙醇浓度至75～85％，然后置-20℃～-26℃下冻放8～14h，倒出上清液得沉淀；
3)向步骤2)得到的沉淀中加入8～12倍的75～85％乙醇，置-20℃～-26℃下冻放8～14h，倒出上清液得沉淀，向沉淀中再次加入8～12倍的75～85％乙醇，置-20℃～-26℃下冻放8～14h，倒出上清得白色絮状物沉淀；
4)向步骤3)得到的白色絮状物沉淀中加入4～8倍的75～85％乙醇，水浴加热至40～50℃后，停止加热，缓慢冷却、挥发，得皂苷提取物。
优选的，所述海参为花刺参
优选的，步骤2)所述的冻放是在搅拌条件下持续的，在此基础上进一步优选的，所述搅拌的转速为300rpm。
在以上技术方案中，鲜海参是指湿状的海参，可以是捕捞后尚未干燥的海参也可以是干海参水发后的状态。本发明通过乙醇的多次浸提高效的从海参中提取得到海参皂苷，其操作较为简便，工艺可控，同时不会增加成本。提取得到的皂苷产物纯度较高，可以达到97.8～99％，为后续对海参皂苷的进一步利用奠定了良好的基础。与此同时，本发明的另一突出优势在于对原料的利用率高，实验检测发现，经提取后的原料残渣其中的海参皂苷含量仅为为经提取时含量的3～5％，因此本发明对原料具有极高的利用效率。
具体实施方式
以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。
实施例1
一种海参皂苷提取方法，包括以下步骤：
1)将鲜海参粉碎得到海参糜，向其中加入10倍重量的95％乙醇浸泡4～5h，而后离心取上清，加热回流0.5，趁热过滤，滤液在-20℃下冻放8h，倒出上清液得沉淀；
2)向步骤1)得到的沉淀中加入6倍的90％乙醇，该乙醇液中含H2SO44％，加热回流6，加水调乙醇浓度至75％，然后置-20℃下冻放8h，倒出上清液得沉淀；
3)向步骤2)得到的沉淀中加入8倍的75％乙醇，置-20℃下冻放8h，倒出上清液得沉淀，向沉淀中再次加入8倍的75％乙醇，置-20℃下冻放8h，倒出上清得白色絮状物沉淀；
4)向步骤3)得到的白色絮状物沉淀中加入4倍的75％乙醇，水浴加热至 40℃后，停止加热，缓慢冷却、挥发，得皂苷提取物。
在以上技术方案的基础上：所述海参为花刺参；步骤2)所述的冻放是在搅拌条件下持续的，搅拌的转速为300rpm。
实施例2
一种海参皂苷提取方法，包括以下步骤：
1)将鲜海参粉碎得到海参糜，向其中加入10倍重量的95％乙醇浸泡5h，而后离心取上清，加热回流1h，趁热过滤，滤液在-26℃下冻放14h，倒出上清液得沉淀；
2)向步骤1)得到的沉淀中加入10倍的95％乙醇，该乙醇液中含H2SO46％，加热回流8h，加水调乙醇浓度至85％，然后置-26℃下冻放14h，倒出上清液得沉淀；
3)向步骤2)得到的沉淀中加入12倍的85％乙醇，置-26℃下冻放14h，倒出上清液得沉淀，向沉淀中再次加入12倍的85％乙醇，置-26℃下冻放14h，倒出上清得白色絮状物沉淀；
4)向步骤3)得到的白色絮状物沉淀中加入8倍的85％乙醇，水浴加热至50℃后，停止加热，缓慢冷却、挥发，得皂苷提取物。
实施例3
一种海参皂苷提取方法，其特征在于包括以下步骤：
1)将鲜海参粉碎得到海参糜，向其中加入10倍重量的95％乙醇浸泡4.5h，而后离心取上清，加热回流0.7h，趁热过滤，滤液在-23℃下冻放11h，倒出上清液得沉淀；
2)向步骤1)得到的沉淀中加入8倍的95％乙醇，该乙醇液中含H2SO45％，加热回流7h，加水调乙醇浓度至80％，然后置-23℃下冻放11h，倒出上清液得沉淀；
3)向步骤2)得到的沉淀中加入10倍的80％乙醇，置-23℃下冻放11h，倒出上清液得沉淀，向沉淀中再次加入10倍的80％乙醇，置-23℃下冻放11h，倒出上清得白色絮状物沉淀；
4)向步骤3)得到的白色絮状物沉淀中加入6倍的80％乙醇，水浴加热至45℃后，停止加热，缓慢冷却、挥发，得皂苷提取物。
以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。