本发明属于医药化学领域，涉及2,4-二取代的嘧啶类化合物，具体涉及如式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐、其药物组合物、及其在治疗EGFR或/和ALK介导的疾病中的用途。
背景技术：
表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)是上皮生长因子(EGF)细胞增殖和信号传导的受体，也被称作HER1、ErbB1。EGFR属于ErbB受体家族的一种，该家族包括EGFR(ErbB-1)，HER2/c-neu(ErbB-2)，HER3(ErbB-3)和HER4(ErbB-4)。EGFR是一种糖蛋白，属于酪氨酸激酶型受体，细胞膜贯通，分子量170KDa。
EGFR位于细胞膜表面，靠与配体结合来激活，包括EGF和TGFα激活后，EGFR由单体转化为二聚体。所述二聚体既包括两个同种受体分子的结合(同源性二聚作用)，也包括人类EGF相关性受体(HER)酪氨酸激酶家族中的不同成员的结合(异源性二聚作用)。EGFR二聚后可以激活它位于细胞内的激酶通路，包括胞内域中关键酪氨酸残基的磷酸化，并且导致对参与细胞增殖和生存的许多细胞内信号传导通路的刺激。
在许多实体肿瘤中存在EGFR的高表达或异常表达。EGFR与肿瘤细胞的增殖、血管生成、肿瘤侵袭、转移及细胞凋亡的抑制有关。其可能机制有：EGFR的高表达引起下游信号传导的增强；突变型EGFR受体或配体表达的增加导致EGFR的持续活化；自分泌环的作用增强；受体下调机制的破坏；异常信号传导通路的激活等。EGFR的过表达在恶性肿瘤的演进中起重要作用，胶质细胞、肾癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌等组织中都已发现有EGFR的过表达。
其中EGFR和Erb-B2的异常表达在肿瘤的转化与增长中起着关键性的作用。以肺癌为例，EGFR在50％的非小细胞肺癌(NSCLC)病例中有表达，而且其表达与愈后不佳相关。这两个因素使得EGFR及其家族成员成为开展靶向治疗的主要候选者。两种靶向EGFR的小分子抑制剂，吉非替尼和厄洛替尼，得到了美国FDA的快速批准用于治疗晚期NSCLC患者，所述患者对常规化疗失去了反应。
早期的临床数据表明，10％的NSCLC患者对吉非替尼和厄洛替尼有反应。分子生物学分析表明，在多数情况下，对药物有反应的患者在编码EGFR基因上带有特定的突变：第19外显子的第747～750位氨基酸的缺失占突变的45％，还有10％的突变发生在第18和第20外显子。最常见的EGFR激活突变(L858R和delE746_A750)导致相对于野生型WT-EGFR而言，对小分子酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的亲和力增加、以及对三磷酸腺苷(ATP)亲和力下降。T790M突变是EGFR第20外显子中的一个点突变，其产生对吉非替尼或厄洛替尼治疗的获得性抗性。最新研究显示，L858R合并T790M突变对ATP的亲和力比单纯L858R强，而TKI是ATP竞争性激酶抑制剂，故导致TKI与激酶区结合率降低。
间变型淋巴瘤激酶(Naplastic Lymphoma Kinase,ALK)是受体酪氨酸激酶蛋白激酶的超家族成员。ALK基因变异可引发多种血液系统或非血液系统肿瘤。已有报道，神经母细胞瘤和胶质母细胞瘤中全长ALK受体蛋白的表达异常；约有60％间变性大细胞淋巴瘤病例存在NPM-ALK基因融合现象；非小细胞肺癌大约有5％是源于EML4-ALK基因融合现象。ML4-ALK基因融合也可致其它癌症，如肠癌、乳腺癌或肾癌等等。目前，已上市的ALK抑制剂如克唑替尼(Crizotinib)和色瑞替尼(Ceritinib)已成功用于治疗非小细胞肺癌。
技术实现要素：
本发明提供一种式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
其中，
X或Y各自独立地选自N或CH；
R1选自H、卤素、-CF3或-CN；
R2或R6各自独立地选自H或-OC1-6烷基；
R3或R5各自独立地选自H或
R4选自3～8元杂环烷基或
R7选自H、-OC1-6烷基、
所述3～8元杂环烷基包含1、2或3个选自N、O或S的杂原子，并且任选地被R8取代；
所述R8选自-C1-4烷基、-C(O)-C1-4烷基、-NR9R10、-C(O)O-C1-4烷基、-C(O)NH-C1-4烷基、-SO2-C1-4烷基、-SO2NH2、-C(O)-C1-4亚烷基-OH或
所述Z选自O、S或NR11；
所述R9、R10或R11各自独立地选自H或-C1-4烷基。
作为式(Ⅰ)的一种优选实施方式，R1选自H、-F、-Cl、-Br、-CF3或-CN。
作为式(Ⅰ)的一种优选实施方式，R2或R6各自独立地选自H或-OC1-4烷基。
作为式(Ⅰ)的一种更优选实施方式，R2或R6各自独立地选自H、-OC1烷基、-OC2烷基、-OC3烷基或-OC4烷基。
作为式(Ⅰ)的一种优选实施方式，R4选自5～6元杂环烷基或
作为式(Ⅰ)的一种优选实施方式，R7选自H、-OC1-4烷基、
作为式(Ⅰ)的一种更优选实施方式，R7选自H、-OC1烷基、-OC2烷基、-OC3烷基、-OC4烷基、
作为式(Ⅰ)的一种优选实施方式，所述杂环烷基包含1或2个选自N或O的杂原子，并且任选地被R8取代。
作为式(Ⅰ)的一种更优选实施方式，所述杂环烷基选自吗啉基、哌啶基或哌嗪基。
作为式(Ⅰ)的一种优选实施方式，R8选自-C1烷基、-C2烷基、-C3烷基、-C4烷基、-C(O)-C1烷基、-C(O)-C2烷基、-C(O)-C3烷基、-C(O)-C4烷基、-NR9R10、-C(O)O-C1烷基、-C(O)O-C2烷基、-C(O)O-C3烷基、-C(O)O-C4烷基、-C(O)NH-C1烷基、-C(O)NH-C2烷基、-C(O)NH-C3烷基、-C(O)NH-C4烷基、-SO2-C1烷基、-SO2-C2烷基、-SO2-C3烷基、-SO2-C4烷基、-SO2NH2、-C(O)-C1亚烷基-OH、-C(O)-C2亚烷基-OH、-C(O)-C3亚烷基-OH、-C(O)-C4亚烷基-OH或
作为式(Ⅰ)的一种优选实施方式，Z选自O或NR11。
作为式(Ⅰ)的一种优选实施方式，R9、R10或R11各自独立地选自H、-C1烷基、-C2烷基、-C3烷基或-C4烷基。
作为本发明的一个实施方式，提供一种式(Ⅱ)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
其中，
X或Y各自独立地选自N或CH；
R1选自H、-F、-Cl、-Br、-CF3或-CN；
R2、R6或R7各自独立地选自H、-OC1烷基、-OC2烷基、-OC3烷基或-OC4烷基。
作为本发明的一个实施方式，提供一种式(Ⅲ)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
其中，
X或Y各自独立地选自N或CH；
R1选自H、卤素、-CF3或-CN；
R2或R6各自独立地选自H或-OC1-6烷基；
R7选自H、-OC1-6烷基、
A选自O、NH、NR8或CH-R8；
所述Z选自O、S或NR11；
所述R8选自-C1-4烷基、-C(O)-C1-4烷基、-NR9R10、-C(O)O-C1-4烷基、-C(O)NH-C1-4烷基、-SO2-C1-4烷基、-SO2NH2、-C(O)-C1-4亚烷基-OH或
所述R9、R10或R11各自独立地选自H或-C1-4烷基。
作为式(Ⅲ)的一种优选实施方式，R1选自H、-F、-Cl、-Br、-CF3或-CN。
作为式(Ⅲ)的一种优选实施方式，R2或R6各自独立地选自H或-OC1-4烷基。
作为式(Ⅲ)的一种更优选实施方式，R2或R6各自独立地选自H、-OC1烷基、-OC2烷基、-OC3烷基或-OC4烷基。
作为式(Ⅲ)的一种优选实施方式，R7选自H、-OC1-4烷基、
作为式(Ⅲ)的一种更优选实施方式，R7选自H、-OC1烷基、-OC2烷基、-OC3烷基、-OC4烷基、
作为式(Ⅲ)的一种优选实施方式，R8选自-C1烷基、-C2烷基、-C3烷基、-C4烷基、-C(O)-C1烷基、-C(O)-C2烷基、-C(O)-C3烷基、-C(O)-C4烷基、-NR9R10、-C(O)O-C1烷基、-C(O)O-C2烷基、-C(O)O-C3烷基、-C(O)O-C4烷基、-C(O)NH-C1烷基、-C(O)NH-C2烷基、-C(O)NH-C3烷基、-C(O)NH-C4烷基、-SO2-C1烷基、-SO2-C2烷基、-SO2-C3烷基、-SO2-C4烷基、-SO2NH2、-C(O)-C1亚烷基-OH、-C(O)-C2亚烷基-OH、-C(O)-C3亚烷基-OH、-C(O)-C4亚烷基-OH或
作为式(Ⅲ)的一种优选实施方式，所述Z选自O或NR11。
作为式(Ⅲ)的一种优选实施方式，R9、R10或R11各自独立地选自H、-C1烷基、-C2烷基、-C3烷基或-C4烷基。
作为本发明的一个实施方式，提供一种式(Ⅳ)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
其中，
X或Y各自独立地选自N或CH；
R1选自H、卤素、-CF3或-CN；
R2或R6各自独立地选自H或-OC1-6烷基；
R7选自H、-OC1-6烷基、
所述Z选自O、S或NR11；
所述R9、R10或R11各自独立地选自H或-C1-4烷基。
作为式(Ⅳ)的一种优选实施方式，R1选自H、-F、-Cl、-Br、-CF3或-CN。
作为式(Ⅳ)的一种优选实施方式，R2或R6各自独立地选自H或-OC1-4烷基。
作为式(Ⅳ)的一种更优选实施方式，R2或R6各自独立地选自H、-OC1烷基、-OC2烷基、-OC3烷基或-OC4烷基。
作为式(Ⅳ)的一种优选实施方式，R7选自H、-OC1-4烷基、
作为式(Ⅳ)的一种更优选实施方式，R7选自H、-OC1烷基、-OC2烷基、-OC3烷基、-OC4烷基、
作为式(Ⅳ)的一种优选实施方式，所述Z选自O或NR11。
作为式(Ⅳ)的一种优选实施方式，R9、R10或R11各自独立地选自H、-C1烷基、-C2烷基、-C3烷基或-C4烷基。
本发明优选下述化合物或其药学上可接受的盐：
本发明的另一方面提供了一种治疗EGFR或/和ALK介导的疾病的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(Ⅰ)化合物或者其药学上可接受的盐。
本发明的另一个方面提供了式(Ⅰ)化合物或者其药学上可接受的盐在治疗EGFR或/和ALK介导的疾病中的用途。
本发明的另一个方面提供了式(Ⅰ)化合物或者其药学上可接受的盐在制备治疗EGFR或/和ALK介导的疾病的药物中的用途。
在本发明的部分实施方式中，所述EGFR介导的疾病选自EGFR-L858R或/和EGFR-T790M突变激活介导的疾病。
在本发明的部分实施方式中，所述ALK介导的疾病选自NPM-ALK或/和EML4-ALK基因融合介导的疾病。
在本发明的部分实施方式中，所述EGFR或/和ALK介导的疾病包括癌症、炎症、感染、免疫性疾病、器官移植、病毒性疾病、心血管疾病或代谢性疾病。
在本发明的部分实施方式中，所述癌症包括但不限于：肺癌、头颈癌、乳腺癌、前列腺癌、食道癌、直肠癌、结肠癌、鼻咽癌、子宫癌、胰腺癌、淋巴瘤、血癌、骨肉瘤、黑色素瘤、肾癌、胃癌、肝癌、膀胱癌、甲状腺癌或大肠癌。
在本发明的部分实施方式中，所述肺癌选自非小细胞肺癌。
在本发明的部分优选实施方式中，所述疾病选自EGFR或/和ALK介导的疾病选自非小细胞肺癌。
本发明的另一方面提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的式(Ⅰ)所示化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。本发明的药物组合物可以进一步含有一种或多种额外的治疗剂。
本发明的药物组合物可通过将本发明的化合物或其盐与适宜的药学上可接受的载体组合而制备，例如可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、溶液剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。
给予本发明的化合物或其药物可接受的盐或其药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、透黏膜、经肠给药，或者局部、经皮、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。
本发明的药物组合物可以采用本领域众所周知的方法制造，如常规的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣药丸法、磨细法、乳化法、冷冻干燥法等。
对于口服给药，可以通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的载体混合来配制该药物组合物。这些载体能使本发明的化合物被配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、浆剂、悬浮剂等，用于对患者的口服给药。
可以通过常规的混合、填充或压片方法来制备固体口服组合物。例如，可通过下述方法获得：将所述的活性化合物与固体赋形剂混合，任选地碾磨所得的混合物，如果需要则加入其它合适的辅剂，然后将该混合物加工成颗粒，得到了片剂或糖衣剂的核心。适合的辅料包括但不限于：粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂或矫味剂等。如微晶纤维素、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶溶液、蔗糖和淀粉糊；滑石、淀粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸；乳糖、蔗糖、淀粉、甘露糖醇、山梨糖醇或磷酸二钙；二氧化硅；交联羧甲基纤维素钠、预交化淀粉、淀粉羟乙酸钠、藻酸、玉米淀粉、马铃薯淀粉、甲基纤维素、琼脂、羧甲基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮等。可以根据通常药物实践中公知的方法任选地对糖衣剂的核心进行包衣，尤其使用肠溶包衣。
药物组合物还可适用于肠胃外给药，如合适的单位剂型的无菌溶液剂、混悬剂或冻干产品。
本文所述的式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的盐可以通过任何适用的途径和方法给药，例如通过口服或肠胃外(例如，静脉内)给药。式(Ⅰ)化合物的治疗有效量为从约0.0001到20mg/Kg体重/天，例如从0.001到10mg/Kg体重/天。
式(Ⅰ)化合物的剂量频率由患者个体的需求决定，例如，每天1次或2次，或每天更多次。给药可以是间歇性的，例如，其中在若干天的期间内，患者接受式(Ⅰ)化合物的每日剂量，接着在若干天的期间，患者不接受式(Ⅰ)化合物的每日剂量。
有关定义：
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
本文所用的Cm-n指该部分中具有m-n个碳原子。例如，“C1-6烷基”指该烷基具有1-6个碳原子。
本文中的数字范围，是指给定范围中的各个整数。例如“C1-6”是指该基团可具有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子或6个碳原子。
术语“Cm”表示碳原子数量的文字与官能团形成的基团包括其所有同分异构体形式，例如：1)“-C3烷基”包括其所有同分异构体形式，例如CH3CH2CH2-和(CH3)2CH-；2)“-C4烷基”包括其所有同分异构体形式，例如CH3CH2CH2CH2-、CH3CH2(CH3)CH-、(CH3)2CHCH2-和(CH3)3C-。
术语“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
术语“烷基”是指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的饱和的脂肪烃基团，其通过单键与分子的其余部分连接。烷基的非限制性实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基、叔丁基等。
术语“亚烷基”是指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的饱和的脂肪烃基团，其通过两个连接点与分子的其余部分连接。该术语的非限制性实例包括亚甲基(-CH2-)、1,1-亚乙基(-CH(CH3)-)、1,2-亚乙基(-CH2CH2-)、1,1-亚丙基(-CH(CH2CH3)-)、1,2-亚丙基(-CH2CH(CH3)-)、1,3-亚丙基(-CH2CH2CH2-)、1,4-亚丁基(-CH2CH2CH2CH2-)等。术语“C4亚烷基”指具有4个碳原子的亚烷基。
术语“杂环烷基”是指饱和的单环、稠合多环、桥环或螺环体系基团，其中部分环原子是选自N、O、S的杂原子，其余环原子为C。杂环基的非限制性实例包括环氧乙烷基、环硫乙烷基、环氮乙烷基、吖丁啶基、噁丁环基、噻丁环基、四氢呋喃基、吡咯烷基、噁唑烷基、四氢吡唑基、吡咯啉基、二氢呋喃基、二氢噻吩基、哌啶基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、吗啉基、哌嗪基、二氢吡啶基、四氢吡啶基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、二氢噻喃基、氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、氧杂氮杂双环[2.2.1]庚基和氮杂螺[3.3]庚基等。术语“3元～8元杂环烷基”是指具有3～8个环原子的杂环烷基。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
作为药学上可接受的盐，例如，与无机酸形成的盐、与有机酸形成的盐、与酸性氨基酸形成的盐等。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离碱形式的这些化合物与化学计量的适当酸反应来制备。
本发明的某些化合物可以以非溶剂化形式或者溶剂化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶剂化形式与非溶剂化的形式相当，都包含在本发明的范围之内。本发明的某些化合物可以以多晶或无定形形式存在。
本发明的某些化合物可以具有不对称碳原子(光学中心)或双键。外消旋体、非对映异构体、几何异构体和单个的异构体都包括在本发明的范围之内。
本文中消旋体、ambiscalemic and scalemic或者对映体纯的化合物的图示法来自Maehr,J.Chem.Ed.1985,62:114-120。除非另有说明，用楔形键和虚线键表示一个立体中心的绝对构型。当本文所述化合物含有烯属双键或其它几何不对称中心，除非另有规定，它们包括E、Z几何异构体。同样地，所有的互变异构形式均包括在本发明的范围之内。
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的分步结晶法或色谱法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
术语“药学上可接受的载体”是指对有机体无明显刺激作用，而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些载体。“药学上可接受的载体”是指与活性成份一同给药的、有利于活性成份给药的惰性物质，包括但不限于国家食品药品监督管理局许可的可接受的用于人或动物(例如家畜)的任何助流剂、增甜剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、矫味增强剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、崩解剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂。所述载体的非限制性实例包括碳酸钙、磷酸钙、各种糖和各类淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇等。关于载体的其他信息，可以参考Remington:The Science and Practice of Pharmacy,21st Ed.,Lippincott,Williams&Wilkins(2005)，该文献的内容通过引用的方式并入本文。
术语“赋形剂”通常是指配制有效的药物组合物所需要载体、稀释剂和/或介质。
针对药物或药理学活性剂而言，术语“有效量”或“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。对于本发明中的口服剂型，组合物中一种活性物质的“有效量”是指与该组合物中另一种活性物质联用时为了达到预期效果所需要的用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
术语“活性成分”、“治疗剂”，“活性物质”或“活性剂”是指一种化学实体，它可以有效地治疗目标紊乱、疾病或病症。
本文中使用的短语“治疗有效量”是指研究人员、兽医、医师或其它临床医师正在组织、系统、动物、个体或人中寻找的引起生物学或医学反应的活性化合物或药物的量，它包括以下一项或多项：
(1)预防疾病：例如在易感染疾病、紊乱或病症但尚未经历或出现疾病病理或症状的个体中预防疾病、紊乱或病症。
(2)抑制疾病：例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理或症状的个体中抑制疾病、紊乱或病症(即阻止病理和/或症状的进一步发展)。
(3)缓解疾病：例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理或症状的个体中缓解疾病、紊乱或病症(即逆转病理和/或症状)。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明的部分式(Ⅰ)所示化合物可以由有机合成领域技术人员通过路线1用本领域的标准方法来制备，所述取代基团的定义如前所述：
如路线1所示，式2化合物与丙烯酰氯反应得式3化合物，式3化合物还原硝基得式4化合物，式4化合物与式5化合物在路易斯酸的催化下得式6化合物，式6化合物在碱性条件下或在Pd金属催化条件下与式7化合物反应得式(I)化合物。
本发明的部分式(Ⅰ)所示化合物也可以由有机合成领域技术人员通过路线2用本领域的标准方法来制备，所述取代基团的定义如前所述：
如路线2所示，式5化合物与式7化合物在碱性条件下反应得式8化合物，式8化合物可以和式4化合物缩合得式(I)化合物；式8化合物也可以先和式9化合物反应得式10化合物，式10化合物的硝基先经还原得氨基，然后与丙烯酰氯反应得式(I)化合物。
本发明的制备方法所用的碱包括无机碱和有机碱，可列举的实例包括氢化钠、叔丁基氯化镁、氢化锂、叔丁醇锂、叔丁醇钾、叔丁醇钠、NaHMDS、LiHMDS、甲基咪唑(例如1-甲基咪唑、2-甲基咪唑、4-甲基咪唑)、DBU、三乙胺、二异丙基胺或二异丙基乙基胺。
本发明的制备方法所用的酸包括无机酸和有机酸，可列举的实例包括盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、苯甲酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸或萘磺酸。
在本发明的部分实施方式中，本领域的技术人员可以依据而非严格按照路线1或路线2的步骤进行制备，根据终产物的结构，可以对路线1或路线2进行增加、减少或者改变各个步骤的顺序，这也属于本发明的范围。
本发明具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本发明的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本发明的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。
本领域任何合成路线规划中的一个重要考量因素是为反应性官能团(如本发明中的氨基)选择合适的保护基。对于经过训练的从业者来说，Greene and Wuts的(Protective Groups in Organic Synthesis,Wiley and Sons,1991)是这方面的权威。本发明引用的所有参考文献整体上并入本发明。
可按照本领域中已知的任何合适的方法，监测本文中所述反应。例如，可通过广谱方法例如核磁共振波谱(例如1H或13C)、红外光谱、分光光度测定(例如UV-可见光)或质谱，或通过色谱例如高效液相色谱(HPLC)或薄层层析监测产物形成。
为清楚起见，本发明进一步用实施例来阐述。但是实施例不局限于定义或者指定发明范围。
在本发明的部分实施方式中，反应所用起始原料或者试剂可以是市售的(可从Aldrich购买)，也可以是本领域的技术人员利用化学领域已知的方法制备得到。本发明所使用的所有溶剂是市售的，无需进一步纯化即可使用。涉及对水和/或氧气敏感的实验的所有操作都在预干燥玻璃仪器中于氮气氛下进行。
化合物经手工或者软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
具体实施方式
下面的具体实施例，其目的是使本领域的技术人员能更清楚地理解和实施本发明。它们不应该被认为是对本发明范围的限制，而只是本发明的示例性说明和典型代表。
实施例1 N-(3-((4-氯-5-三氟甲基吡啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(6-1)
步骤(1)N-(3-硝基苯基)丙烯酰胺(3-1)
向反应瓶中加入式2-1化合物(10.0g，72.4mmol)溶于无水四氢呋喃中，加入Et3N(11.0g，108.6mmol)，0℃滴加丙烯酰氯(10.29g，113.7mmol)，滴完室温反应1.5～2hrs，TLC监测反应完全，反应液旋蒸干，加饱和Na2CO3水溶液调至pH＝10，EA萃取干燥，旋蒸得粗品，过硅胶柱，PE-EA洗脱，合并浓缩得式3-1化合物(6.50g)。
1H-NMR(300M,CD3OD)：8.68(s,1H),7.96-7.92(t,2H),7.58-7.52(t,1H),6.44-6.42(t,2H),5.84-5.81(m,1H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:193.0604。
步骤(2)N-(3-氨基苯基)丙烯酰胺(4-1)
向反应瓶中加入式3-1化合物(6.0g，31.22mmol)，乙醇和四氢呋喃作溶剂，加入SnCl2·2H2O(35.2g，156.1mmol)，加热回流3～4hrs，TLC监测反应完全，反应液旋蒸干，加NaOH水溶液调至pH＝12，EA萃取干燥，旋蒸得粗品，过硅胶柱，PE-EA洗脱(4:1到3:2)，合并浓缩得式4-1化合物(3.20g)。
1H-NMR(300M,DMSO-d6):6.98(s,1H),6.89-6.94(t,1H),6.74-6.77(d,1H),6.37-6.46(m,1H),6.17-6.28(m,2H),5.67-5.70(d,1H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：163.0867。
步骤(3)N-(3-((4-氯-5-三氟甲基嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(6-1)
氮气保护下，将化合物5-1(0.50g，2.30mmol)溶解于1,2-二氯乙烷和叔丁醇(各20mL)中。0℃下滴加1.0M氯化锌的乙醚溶液(4.60mL，4.60mmol)，然后反应混合物在低温下搅拌。将化合物4-1(0.374g，2.30mmol)加入反应中，然后再逐滴加入三乙胺(0.256g，2.53mmol)的1,2-二氯乙烷和叔丁醇溶液。反应数小时后，逐渐恢复到室温反应。TLC监测反应完成后，旋蒸除去溶剂，然后再向反应瓶中加入水(30mL)，超声30min。抽滤，水洗得到白色固体，干燥后通过重结晶纯化，最终得到式6-1化合物，为白色固体。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):10.69(s,1H),10.19(s,1H),8.79(s,1H),7.99(s,1H),7.42～7.47(t,1H),7.27～7.33(t,1H),6.43～6.52(m,2H),6.24～6.30(dd,1H),5.74～5.78(dd,1H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:343.0555。
实施例2 N-(3-((4-氯-5-三氟甲基嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(6-2)
步骤(1)4-甲氧基苯胺硝酸盐(12)
取10g化合物11于250mL三口瓶中，向反应瓶中加入80mL TBME和20mL THF，将反应液降温至0-5℃，向反应液中滴加65％硝酸7.8g，滴加过程中保持温度小于20℃，滴加完毕，控制反应温度在0℃左右，反应大约1h，反应液过滤，用TBME洗涤滤饼，滤饼室温真空干燥过夜，得到14.68g产品，产率97.1％。
步骤(2)4-甲氧基-3-硝基苯胺(2-2)
称取63g 95％浓硫酸于500mL三口瓶中，冷却至0℃。取12g化合物12，悬浮于120mL二氯甲烷中，配制成悬浮液，将此悬浮液滴加入冷的浓硫酸中，滴加过程中控制温度在0℃左右，滴加完毕保持此温度反应大约3h，反应液分液，取下层酸层，120mL水冷却至0℃左右，将酸层缓慢加入冷水中，过程中保持温度不超过20℃，滴加完毕后向稀释的反应液中滴加氨水直到pH在6-11为止，滴加过程中温度不超过20℃，用120mL×2DCM萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩。得到8.7g黑褐色粘稠油状物，收率80.3％。
1H-NMR(500M,DMSO):7.07(s,1H),7.05-7.06(m,2H),3.78(s,3H)。
HRMS(ESI，[M+H]+)：m/z 169.0613。
步骤(3)N-(4-甲氧基-3-硝基苯基)丙烯酰胺(3-2)
取8.7g化合物2-2，加入250mL三口瓶中氮气保护，向瓶中加入40mL干燥THF，取4.8mL三乙胺加入反应瓶中，将反应液冷却至0℃，滴加8.65mL丙烯酰氯，滴加过程中保持反应液温度在0℃左右，滴加完毕升至室温反应3h，反应结束，反应液浓缩，残留物用100mL水和100mL乙酸乙酯洗涤萃取，有机相饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩，浓缩过程中发现有固体析出立即停止浓缩，将溶液放于冰水浴中15min，过滤，取滤饼，通过两次浓缩过滤，得到8.6g黄色固体，产率75.1％。
1H-NMR(500M，DMSO):10.33(s,1H),8.32-8.33(m,1H),7.81-7.83(m,1H),7.35-7.37(m,1H),6.26-6.30(m,1H),5.77-5.80(m,1H),3.90(s,3H)。
HRMS(ESI，[M+H]+)m/z：223.0761。
步骤(4)N-(3-氨基-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(4-2)
取1.8g化合物3-2，加入250mL三口瓶中，向反应瓶中依次加入50mL甲醇和55mL饱和氯化铵水溶液，室温搅拌，称取锌粉2.68g加入反应瓶中。60℃油浴反应，TLC监控反应结束，反应液过滤，滤液浓缩除去甲醇，乙酸乙酯10mL×2萃取，分液，有机相干燥，浓缩，残留物硅胶柱纯化得到1.08g白色固体，产率69.4％。
1H-NMR(500M，DMSO):9.69(s,1H),7.02-7.03(m,1H),6.80-6.83(m,1H),6.70-6.71(m,1H),6.37-6.42(dd,J＝10Hz,J＝25Hz,1H),6.16-6.20(dd,J＝1.9Hz,J＝17Hz,1H),5.64-5.67(dd,J＝1.9Hz,J＝10.1Hz,1H),4.72(s,2H),3.72(s,3H)。
HRMS(ESI，[M+H]+)m/z:193.1003。
步骤(5)N-(3-((4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(6-2)
以化合物4-2和5-1为原料，参考实施例1步骤(3)的方法制备化合物6-2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.06(s,1H),9.78(s,1H),8.68(s,1H),7.81(d,J＝2.5Hz,1H),7.52(dd,J＝8.9,2.6Hz,1H),7.06(d,J＝8.9Hz,1H),6.41(dd,J＝16.9,10.0Hz,1H),6.22(dd,J＝16.9,2.2Hz,1H),5.72(dd,J＝9.9,2.2Hz,1H),3.75(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：373.0685。
实施例3 N-(5-((4-氯-5-三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-2,4-二甲氧基)丙烯酰胺(6-3)
步骤(1)1,5-二甲氧基-2,4-二硝基苯(14)
将甲醇钠(11.40g，211mmol)溶于甲醇(200mL)制成溶液，在反应瓶中加入化合物13(5.0g，21.10mmol)后加入甲醇钠/甲醇溶液，加热回流2小时，TLC监控原料点消失，反应液放冷旋蒸干，加水EA萃取后干燥旋蒸得化合物14(4.51g，19.73mmol)
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):8.67(s,1H),7.05(s,1H),4.11(s,6H)。
步骤(2)2,4-二甲氧基-5-硝基苯胺(2-3)
在反应瓶中加入硫氢化钠水合物(5.37g，67.07mmol)，硫单质(0.82g，25.65mmol)，氢氧化钠(1.50g，37.50mmol)，并加水150mL，80℃加热至完全溶清后放冷至室温，在另外一反应瓶中加入化合物14(4.50g，19.73mmol)的水(50mL)混悬液，在90℃下缓慢滴加放冷的混合溶液，滴完后反应液停止加热放冷，搅拌过夜，第二天抽滤水洗，滤饼烘干得粗品。粗品溶清后制砂过硅胶柱，得化合物2-3(2.31g，11.66mmol)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):7.27(s,1H),6.75(s,1H),4.84(s,2H)，3.92(s,3H),3.87(s,3H)。
HRMS(ESI+,[M+H]+)m/z：199.0713。
步骤(3)N-(2,4-二甲氧基-5-硝基苯基)丙烯酰胺(3-3)
在反应瓶中加入化合物2-3(2.20g，11.10mmol)和三乙胺(1.68g，16.60mmol)的新蒸THF(50mL)溶液，N2保护下，0℃滴加丙烯酰氯(2.01g，22.20mmol)，滴完后逐渐升温到室温，反应过夜，第二天加水终止反应，反应液旋蒸干，加水EA萃取干燥，得化合物3-3(2.20g，8.72mmol)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)：9.56(s，1H)，8.74(s，1H)，6.92(s，1H)，6.65-6.70(m，1H)，6.23-6.27(dd，1H)，5.73-5.75(dd，1H)，4.02(s，3H)，3.98(s，3H)，
HRMS(ESI+,[M+H]+)m/z：253.0820。
步骤(4)N-(5-氨基-2,4-二甲氧基苯基)丙烯酰胺(4-3)
在反应瓶中加入化合物3-3(2.10g，8.33mmol)，铁粉(0.93g，16.66mmol)，氯化铵(0.89g，16.66mmol)，乙醇-水混合溶剂90℃加热反应过夜，TLC监控确认完全反应，反应液抽滤后旋蒸干，萃取干燥制砂，过硅胶柱，PE-EA洗脱(4:1到2:1)，得化合物IV-3(900mg)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)：9.03(s，1H)，7.32(s，1H)，6.62(s，1H)，6.58-6.61(m，1H)，6.15-6.19(dd，1H)，5.63-5.65(dd，1H)，4.31(s，1H)，3.77(s，1H)，3.74(s，1H)。
HRMS(ESI+,[M+H]+)m/z：223.1086。
步骤(5)N-(5-((4-氯-5-三氟甲基嘧啶-2-基)氨基)-2,4-二甲氧基苯基)丙烯酰胺(6-3)
以化合物4-3和5-1为原料，参考实施例1步骤(3)的方法制备化合物6-3。
MS(ESI+,[M+H]+)m/z：403.76。
参照实施例1～3所示的制备方法，根据已有的原料，可以制备如下所示中间体化合物：
实施例4 1-(4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮(7-1)
步骤(1)1-(4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)乙酮(17)
室温下分别向反应瓶中加入式15化合物(9.0g，52.6mmol)，30mL N,N-二甲基乙酰胺，式16化合物(7.4g，57.8mmol)，N,N-二异丙基乙胺(8.1g，63.1mmol)，90℃反应5～6h，TLC监测反应完全，降至室温，将反应液倒入200mL水中，用乙酸乙酯(60mL×3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，旋蒸得到式17化合物(12.71g)，为黄色固体(收率86.4％)。
1H-NMR(300M,CDCl3):7.96(d,J＝9Hz,1H),6.41(d,J＝9Hz,1H),6.31(s,1H),3.95(s,3H),3.67-3.78(dd,J＝33Hz,4H),3.42-3.46(m,4H),2.15(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：280.1289。
步骤(2)1-(4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮(7-1)
向反应瓶中加入式17化合物(10.0g，35.8mmol)，150mL无水甲醇，反应瓶置换氮气两次，通入氢气，搅拌下加入钯碳(1.0g，10％)，室温下反应24h，抽滤，旋蒸母液，得到棕色粗品。用DCM：MeOH＝10：1柱层析得到式7-1化合物(7.0g)，为紫色固体(收率78.5％)。
1H-NMR(300M,CDCl3):6.64(d,J＝9Hz,1H),6.51(s,1H),6.40(d,J＝9Hz,1H),3.83(s,3H),3.60-3.76(dd,J＝48Hz,4H),3.00(s,4H),2.12(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：250.1546。
实施例5 4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(7-2)
步骤(1)1-甲基-4-(4-硝基苯基)哌嗪(20)
取250mL反应瓶，向其中加入80mL DMF，分别取10g化合物18，9.6mL化合物19，11.8g碳酸钾，依次加入反应瓶中，80℃反应1.5h，反应结束，反应液冷却至室温，过滤除去碳酸钾，滤液缓慢加入200mL水中，析出大量固体，过滤，所得固体干燥，得到13.23g红棕色固体20，产率84.3％。
1H NMR(300Hz,CDCl3):8.06(d,J＝9.4Hz,2H),7.03(d,J＝9.4Hz,2H),3.44(t,J＝5.0Hz,4H),2.42(t,J＝5.0Hz,4H),2.21(s,3H)。
HRMS(ESI，[M+H]+)m/z:222.1240。
步骤(2)中间体4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(7-2)
向500mL反应瓶中，加入13.12g化合物20，加入200mL甲醇，和1.45g 10％Pd/C，通氢气，室温反应过夜，反应结束，过滤除去钯碳，滤液浓缩，残留物柱层析纯化(MeOH:DCM＝10:1)，得到9.9g灰色固体7-2。产率89％。
1H-NMR(300M，CD3OD):6.83(d,J＝8.5Hz,2H),6.70(d,J＝8.5Hz,2H),3.02(m,4H),2.57-2.60(m,4H),2.32(s,3H)。
HRMS(ESI，[M+H]+)m/z:192.1498。
实施例6 2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(7-3)
步骤1)1-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(21)
取7.8mL化合物19，加入250mL反应瓶中，向瓶中加入100mL DMF，称取10g化合物15和9.68g碳酸钾，依次加入反应瓶中，80℃油浴中搅拌反应，TLC监控反应，5h原料反应完，反应液冷却至室温，过滤除去碳酸钾，100mL水稀释滤液，75mL×3乙酸乙酯萃取，取有机相，50mL×3水洗涤有机相，有机相无水硫酸钠干燥，浓缩，得到10.87g黄色固体7-3，收率74.7％。
1H-NMR(300M，CDCl3)：8.01(d,J＝9.3Hz,1H),6.43(d,J＝9.3Hz,1H),6.32(s,1H),3.95(s,3H),3.40-3.43(t,J＝5Hz,4H),2.54-2.57(t,J＝5Hz,4H),2.36(s,3H)。
HRMS(ESI，[M+H]+)m/z：252.1333。
步骤(2)中间体2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(7-3)
取10g化合物21，加入250mL反应瓶中，向其中加入100mL甲醇，称取1g 10％Pd/C加入反应瓶中，通氢气，室温反应4h，反应结束过滤除去钯碳。滤液浓缩，残留物硅胶柱纯化(EA:DCM＝1:1)，得到8.1g灰色固体7-3，产率91.9％。
1H-NMR(300M,DMSO):6.48-6.53(m,2H),6.26(d,J＝8.3Hz,1H),3.73(s,3H),2.93-2.95(m,4H),2.41-2.49(m,4H),2.20(s,3H)。
HRMS(ESI，[M+H]+)m/z:222.1604。
实施例7 2-甲氧基-4-(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)苯胺(7-4)
步骤(1)1-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲磺酰基哌嗪(23)
称取10g化合物15，加入250mL三口瓶中，向瓶中加入100mL DMSO，再向反应瓶中加入11.5g化合物22和24.2g碳酸钾，将反应瓶置于80℃油浴中反应20h。反应结束过滤除去碳酸钾，滤液加入100mL水中，大量黄色固体析出，过滤，水洗涤滤饼，滤饼70℃真空干燥6h，得到18g黄色固体23，产率98.7％。
HRMS(ESI，[M+H]+)：m/z 316.0974。
步骤(2)2-甲氧基-4-(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)苯胺(7-4)
称取8g化合物23，加入250mL三口瓶中，向瓶中加入80mL无水甲醇，再向瓶中加入0.8g Pd/C 10％，H2常压下反应20h。反应结束向反应液中加入100mL二氯甲烷搅拌10min(完全溶解产物)，过滤除去钯碳，滤液浓缩，残留物用乙醚打浆，得到灰6.26g白色固体7-4，产率86.5％。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：286.1262。
实施例8 2-甲氧基-4-吗啉基苯胺(7-5)
步骤(1)4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)吗啉(25)
分别向反应瓶中加入化合物15(10.0g，58.44mmol)、化合物24(6.11g，70.12mmol)溶于DMF中，加入K2CO3(11.31g，81.81mmol)。70℃条件下反应。TLC跟踪。待反应完全，将反应体系倒入冰水中，有黄色固体析出。过滤固体，烘干即得12.55g的化合物25，产率：90.22％。
1H-NMR(300M，CDCl3)：8.01(d，J＝9.27Hz，1H)，6.45(d，J＝9.27Hz，1H)，6.37(s，1H)，3.96(s，3H)，3.87(t，J＝4.75Hz，4H)，3.35(t，J＝4.83Hz,4H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：239.1027。
步骤(2)2-甲氧基-4-吗啉基苯胺(7-5)
向反应瓶中加入化合物25(14.58g，61.23mmol)溶于THF中，加入1.5g Pd/C。常温条件下催化氢化。TLC跟踪。待反应完全，硅藻土过滤，减压蒸馏除去溶剂。得到固体粗品，再用乙醚打浆得到粉红色粉末，烘干即得9.57g的化合物7-5，产率：75.1％。
1H-NMR(300M，CDCl3)：6.65(d，J＝8.31Hz，1H)，6.50(d，J＝2..34Hz，1H)，6.40(d，J＝8..25Hz，1H)，3.86(s，3H)，3.84(d，J＝4.17Hz，4H)，3.04(d，J＝4.32Hz，4H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：209.1286。
实施例9 1-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-N,N-二甲基哌嗪-4-胺(7-6)
步骤(1)1-(3-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-醇(27)
取化合物15(30.00g,176mmol)于反应瓶中，190mL DMF溶解后，依次加入哌啶醇26(19.49g,193mmol)、碳酸钾(29.00g,211mmol)，70℃反应5h，TLC监测，反应完全；抽滤，滤去不溶性固体，少量DMF润洗滤饼，滤液倒入800mL水中，静置析出固体；抽滤，滤饼置于60℃下真空干燥24h得39.45g黄色固体27，收率为88％。
MS(ESI,[M+H]+)m/z：253.21。
步骤(2)1-(3-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-酮(28)
称取化合物27(30.00g,118mmol)于反应瓶中，300mL二氯甲烷溶解，分批加入Dess-Martin氧化剂(100g,236mmol)，加料完毕后，约3h停止反应；加入亚硫酸氢钠溶液(30g亚硫酸氢钠溶于适量水)猝灭反应，并用饱和碳酸钠溶液调节反应液pH至中性，分出二氯甲烷层；200mL二氯甲烷分三次萃取水层，合并二氯甲烷层，碳酸钠溶液洗两次，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥；减压蒸馏得粗品，将粗品用130mL甲醇打浆，搅拌1h，抽滤，滤饼置于50℃下真空干燥8h，得21.10g黄绿色固体28，收率为70.76％。
MS(ESI,[M+H]+)m/z：251.22。
步骤(3)1-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-N,N-二甲基哌啶-4-胺(29)
取化合物28(5.10g,20.38mmol)于反应瓶中，40mL四氢呋喃溶解后，依次加入41mL二甲胺的四氢呋喃溶液(81.52mmol)，原甲酸三甲酯(4.33g,40.76mmol)，3mL甲酸(81.52mmol)；70℃反应7h，停止反应；减压蒸馏后，加入100mL水，析出固体(TLC显示为原料)，抽滤，乙酸乙酯(50mLx3)萃取滤液，合并乙酸乙酯层，50mL水洗一次，合并水层，10％NaOH溶液调节水层pH为9，二氯甲烷(50mL x 5)萃取，合并二氯甲烷层，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥；减压蒸馏得4.27g固体29，收率为75.04％。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：280.1665。
步骤(4)1-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-N,N-二甲基哌啶-4-胺(7-6)
称取4.09g化合物29于反应瓶中，加入40mL甲醇溶解，0.4g 10％Pd/C(加入量为II-2重量的10％)，加氢还原；TLC监测，约6h，反应完全，停反应；抽滤，少量甲醇润洗，减压蒸馏得3.38g棕色固体7-6，收率为92.60％。
1H-NMR(300M,CDCl3)：6.63(d,1H)，6.52(s,1H)，6.41-6.44(t,1H)，3.84(s,3H)，3.52(d,3H)，2.59-2.67(t,2H)，2.39(s,8H)，1.95-2.00(d,2H)，1.65-1.78(m,2H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：250.1290。
实施例10 2-甲氧基-4-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基)苯胺(7-7)
步骤(1)1-(3-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-酮(28)
向反应瓶中加入化合物15(40g,232mmol)，300mL DMF溶解后，加入化合物30(39.42g,290mmol)、K2CO3(80.80g,586mmol)，搅拌，加热至70℃，反应24h后，停反应；TLC监测(石油醚:乙酸乙酯＝1:2)有原料剩余。将反应液抽滤，并用少量DMF冲洗滤饼；将滤液倒入900mL水中，静置即析出固体；抽滤并将滤饼置于60℃真空干燥24h，得44.50g黄色固体28，收率为76.72％。
1H NMR(300MHz,CDCl3):δ8.04(d,J＝9.2Hz,1H),6.46(dd,J＝9.2,2.3Hz,1H),6.38(d,J＝2.2Hz,1H),3.97(s,3H),3.79(t,J＝6.0Hz,4H),2.65(t,J＝6.0Hz,4H)。
MS(ESI,[M+H]+)m/z：251.22。
步骤(2)1-(1-(3-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-4-甲基哌嗪(32)
称取28(3.00g,12mmol)于微波反应管中，依次加入甲基哌嗪19(2.40g,24mmol)、原甲酸三甲酯(2.55g,24mmol)、12mL乙腈以及1.8mL甲酸；微波加热110℃，1h；减压蒸馏后，加入30mL水，乙酸乙酯(30mLx3)萃取水层至水层无原料点，乙酸乙酯层用20mL水洗一次；合并水层，逐滴加入10％NaOH溶液至水层由澄清变浑浊，二氯甲烷(30mLx3)萃取水层，合并二氯甲烷层，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥。减压蒸馏得土黄色固体，40℃真空干燥8h得产物32(2.43g)，收率为60.68％。
MS(ESI,[M+H]+)m/z：335.40。
步骤(3)2-甲氧基-4-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基)苯胺(7-7)的制备
取3.67g化合物32于反应瓶中，40mL甲醇溶解，加入10％Pd/C 0.42g，氢气还原，TLC监测，约6h反应完全；抽滤，减压蒸馏得3.02g淡紫色固体7-7，收率为90.42％。
1H NMR(300MHz,CDCl3):δ6.63(d,J＝8.3Hz,1H),6.52(d,J＝2.3Hz,1H),6.41(dd,J＝8.3,2.4Hz,1H),3.83(s,3H),3.53-3.49(m,3H),2.66-2.40(m,10H),2.31(s,3H),1.94-1.64(m,4H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:305.2338。
实施例11 1-(4-氨基苯基)-N,N-二甲基哌啶-4-胺(7-8)的制备
步骤(1)1-(4-硝基苯基)哌啶-4-醇(33)
称取化合物18(10.00g,70.87mmol)于反应瓶中，依次加入哌啶醇26(7.87g,77.96mmol)、碳酸钾(11.74g,85.04mmol)、85mL DMF，70℃加热搅拌，5h，停反应；抽滤，滤去不溶性固体，并用少量DMF润洗，滤液倒入650mL水中，静置析出固体，抽滤，滤饼置于60℃下真空干燥24h得13.56g橘黄色固体33，收率为86.14％。
MS(ESI,[M+H]+)m/z:223.21。
步骤(2)1-(4-硝基苯基)哌啶-4-酮(34)的制备
取化合物33(13.52g,60.87mmol)于反应瓶中，200mL二氯甲烷溶解，分批加入Dess-Martin氧化剂(52g,121.7mmol)，加料完毕后，TLC监测，约3h，停反应；加入亚硫酸氢钠溶液(7g亚硫酸氢钠溶于适量水中)猝灭反应，加入碳酸钠溶液调节pH至中性；分出二氯甲烷层，200mL二氯甲烷分三次萃取水层，合并二氯甲烷层，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏得黄色固体，置于45℃下真空干燥8h得产物34(11.26g)，收率为84.02％。
1H-NMR(300M,CDCl3)：8.15-8.18(d,2H)，6.84-6.87(d,2H)，3.80-3.84(t,4H)，2.61-2.65(t,4H)。
MS(ESI,[M+H]+)m/z:221.21。
步骤(3)N,N-二甲基-1-(4-硝基苯基)哌啶-4-胺(35)
取化合物35(5.18g,23.53mmol)于反应瓶中，40mL四氢呋喃溶解后，依次加入24mL二甲胺的四氢呋喃溶液(47.07mmol)、原甲酸三甲酯(5.00g,47.04mmol)、3.5mL甲酸(94.12mmol)，70℃加热搅拌，7h停止反应；反应液减压蒸馏，加入70mL水，析出固体(TLC显示为原料)，乙酸乙酯(40mLx2)萃取水层，合并乙酸乙酯层，40mL水洗一次，合并水层，10％NaOH溶液调节水层pH为9，二氯甲烷(40mLx5)萃取水层，合并二氯甲烷层，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥。减压蒸馏得黄色固体，45℃下真空干燥8h得产物化合物35(1.18g)，收率为20.14％。
1H-NMR(300M,CDCl3)：8.08-8.13(m,2H)，6.78-6.84(m,2H)，3.94-3.99(d,2H)，2.94-3.03(m,2H)，2.36-2.46(m,1H)，2.34(s,6H)，1.94-1.98(t,2H)，1.52-1.65(m,2H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：250.1562。
步骤(4)1-(4-氨基苯基)-N,N-二甲基哌啶-4-胺(7-8)
称取1.13g化合物35于反应瓶中，加入20mL甲醇溶解，0.12g 10％Pd/C，通入氢气，TLC监测，约6h停止反应；抽滤，少量甲醇润洗，滤液减压蒸馏得0.83g淡棕黄色固体，收率为83.50％。
1H-NMR(300M,CDCl3)：6.80-6.82(d,2H)，6.62-6.64(d,2H)，3.49-3.51(d,2H)，3.23(s,2H)，2.57-2.62(t,2H)，2.31(s,6H)，2.21-2.27(m,1H)，1.89-1.91(d,2H)，1.63-1.70(m,2H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：220.1752。
实施例12 4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7-9)
步骤(1)4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(37)
分别向反应瓶中加入化合物15(12.0g，70.12mmol)、化合物36(14.38g，77.13mmol)溶于DMF中，加入K2CO3(14.58g，105.18mmol)。80℃条件下反应，TLC跟踪。，待反应完全，将反应体系倒入冰水中，有黄色固体析出，过滤固体，用乙醚打浆，烘干即得21.2g的化合物37，产率：89.68％。
1H-NMR(300M，CDCl3)：8.01(d，J＝9.33Hz，1H)，6.42(d，J＝9.45Hz，1H)，6.34(s，1H)，3.96(s，3H)，3.61(t，J＝4.35Hz，4H)，3.39(t，J＝5.10Hz,4H)，1.49(s，9H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：338.1714。
步骤(2)4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7-9)
向反应瓶中加入36(23.91g，77.83mmol)溶于乙醇中，加入2g Pd/C。常温条件下催化氢化，TLC跟踪，待反应完全，硅藻土过滤，减压蒸馏除去溶剂，得到固体粗品，再用乙醚打浆得到粉红色粉末，烘干即得21.4g的化合物7-9，产率：98.2％。
1H-NMR(300M，CDCl3)：6.64(d，J＝8.28Hz，1H)，6.52(s，1H)，6.42(d，J＝8..22Hz，1H)，3.84(s，3H)，3.58(t，J＝4.77Hz，4H)，2.98(s，4H)，1.48(s，9H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：308.1969。
实施例13 4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7-10)
步骤(1)4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(39)
分别向反应瓶中加入化合物38(10.2g，49.52mmol)、化合物36(10.40g，54.47mmol)溶于DMF中，加入DIPEA(7.78g，59.42mmol)。50℃条件下反应，TLC跟踪，待反应完全，将反应体系倒入冰水中，有黄色固体析出，过滤固体，用EA打浆，烘干即得6.20g的化合物39，产率：40.63％。
1H-NMR(300M，CDCl3)：8.16(m，2H)，6.45(m，1H)，3.64(t，J＝4.89Hz，4H)，3.45(t，J＝5.67Hz,4H)，1.49(s，9H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：309.1554。
步骤(2)4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7-10)
向反应瓶中加入化合物39(5.65g，18.34mmol)溶于甲醇中，加入0.5g Pd/C，常温条件下催化氢化，TLC跟踪，待反应完全，硅藻土过滤，减压蒸馏除去溶剂，得到固体粗品，再用石油醚:乙醚(30:1)打浆得到粉红色粉末，烘干即得4.75g的化合物7-10，产率：93.1％。
1H-NMR(300M，CDCl3)：7.76(d，J＝2.76Hz,1H)，7.18(dd，J＝2.88，8.82Hz，1H)，6.50(d，J＝8.79Hz，1H)，6.40(d，J＝8..25Hz，1H)，3.57(t，J＝4.92Hz，4H)，2.95(t，J＝5.1Hz,4H)，1.48(s，9H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：279.1808。
实施例14 4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7-11)
步骤(1)4-(4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(40)
分别向反应瓶中加入化合物18(10.0g，70.87mmol)、化合物36(15.84g，85.05mmol)溶于DMF中，加入K2CO3(15.67g，113.39mmol)，80℃条件下反应，TLC跟踪，待反应完全，将反应体系倒入冰水中，有黄色固体析出，过滤固体，用乙醚打浆，烘干即得18.58g的化合物40，产率：85.3％。
1H-NMR(300M，CDCl3)：8.13(d，J＝9.27Hz，2H)，6.82(d，J＝9.33Hz，2H)，3.61(t，J＝4.71Hz，4H)，3.42(t，J＝5.46Hz,4H)，1.49(s，9H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：308.1077。
步骤(2)中间体4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7-11)
向反应瓶中加入化合物40(17.57g，63.39mmol)溶于甲醇中，加入1.7g Pd/C，常温条件下催化氢化，TLC跟踪，待反应完全，硅藻土过滤，减压蒸馏除去溶剂，得到固体粗品，再用乙醚打浆得到粉红色粉末，烘干即得12.31g的化合物7-11，产率：73.8％。
1H-NMR(300M，CDCl3)：6.82(d，J＝8.64Hz，2H)，6.65(d，J＝8.61Hz，2H)，3.57(t，J＝4.8Hz，4H)，2.97(t，J＝4.83Hz，4H)，1.48(s，9H)。
HRMS(ESI,[M+H]+m/z：278.1862。
实施例15 1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮(7-12)
步骤(1)1-(4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮(41)
室温下分别向反应瓶中加入式38化合物(10.0g，49.2mmol)，100mL N,N-二甲基乙酰胺，1-乙酰基哌嗪16(8.2g，64.0mmol)，N,N-二异丙基乙胺(19.1g，147.8mmol)，90℃反应7～8h，TLC监测反应完全，降至室温，将反应液倒入300mL水中，用乙酸乙酯(80mL×3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸得到式41化合物(9.9g)，为米黄色固体(收率80.6％)。
1H-NMR(300M，CDCl3)：8.14-8.20(m，2H)，7.70-7.24(m，1H)，3.78(d，J＝39Hz，4H)，3.47-3.52(m，4H)，2.16(s，3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：251.1144。
步骤(2)1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙酮(7-12)
向反应瓶中加入式X-16化合物(8.0g，32.0mmol)，90ml无水甲醇，反应瓶置换氮气两次，搅拌下加入钯碳(0.8g，10％)，室温下反应24h，抽滤，用无水甲醇淋洗钯碳，旋蒸母液，得到棕褐色粗品。以DCM：MeOH＝10：1柱层析得到式XI-12化合物(5.3g),为深紫色固体(收率74.7％)。
1H-NMR(300M，CDCl3)：7.76(d，J＝3Hz，1H)，7.15-7.18(m，1H)，6.49(d，J＝3Hz，1H)，3.60-3.75(dd，J＝45Hz，4H)，2.95-3.02(m，4H),2.12(s，3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：221.1399。
实施例16 5-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-2-胺(7-13)
步骤(1)1-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪(42)
称取10g化合物38，加入250mL反应瓶中，向瓶中加入80mL DMF，9mL DIPEA和8.47g化合物19，反应置于90℃油浴中反应20h，反应结束用100mL×3乙酸乙酯萃取，分液，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用甲基叔丁基醚打浆，得到6g黄色固体化合物42，产率54.6％。
1H-NMR(300M，CDCl3)：8.12-8.17(m,2H),7.18-7.27(m,1H),3.46-3.49(t,J＝5.0Hz,4H),2.57-2.60(t,J＝5.0Hz,4H),2.34(s,3H)。
HRMS(ESI，[M+H]+)m/z:223.1178。
步骤(2)5-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-2-胺(7-13)
取5g化合物42，加入250mL反应瓶中，向瓶中加入80mL甲醇，再加入10％钯碳0.5g，通氢气，室温反应16h，反应结束，过滤除去钯碳，滤液浓缩，所得残留物用甲基叔丁基醚打浆，得到4.05g淡紫色固体化合物7-13，产率93.6％。
1H-NMR(300M，DMSO)：7.60(d,J＝1.7Hz,1H),7.13-7.15(dd,J＝1.7Hz,J＝5.3Hz,1H),6.6.40(d,J＝5.0Hz,1H),2.90-2.92(t,J＝2.8Hz,4H),2.41-2.43(t,J＝2.8Hz,4H),2.19(s,3H)。
HRMS(ESI，[M+H]+)m/z：193.1476。
实施例17 1-(4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-基)乙酮(7-14)
步骤(1)1-(4-(4-硝基苯基)哌嗪-1-基)乙酮(43)
室温下分别向反应瓶中加入式18化合物(6.0g，42.5mmol)，24mL N,N-二甲基乙酰胺，1-乙酰基哌嗪16(6.5g，51.0mmol)，N,N-二异丙基乙胺(7.1g，55.3mmol)，90℃反应4～5h，TLC监测反应完全，降至室温，将反应液倒入180mL水中，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸得到式43化合物(8.8g)，为淡黄色固体(收率83.7％)。
1H-NMR(300M,CDCl3):8.11-8.16(m,2H),6.80-6.86(m,2H),3.67-3.80(dd,4H),3.46(s,4H),2.15(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：250.1188。
步骤(2)1-(4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-基)乙酮(7-14)
向反应瓶中加入式43化合物(5.0g，20.0mmol)，80mL无水甲醇，反应瓶置换氮气两次，搅拌下加入钯碳(0.5g，10％)，通入氢气，室温下反应24h，抽滤，旋蒸母液，得到棕褐色粗品。用DCM：MeOH＝10：1柱层析得到3.6g式7-14化合物，为浅紫色固体(收率82.3％)。
1H-NMR(300M,CDCl3):6.81(d,J＝9Hz,2H),6.64(d,J＝9Hz,2H),3.59-3.75(dd,4H),2.99(s,4H),2.12(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：220.1289。
参照实施例4～17所示的制备方法，根据已有的原料，可以制备如下所示中间体化合物：
实施例18 N-(3-((4-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-三氟甲基嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(I-16)
氮气下，分别向微波反应瓶中加入化合物6-1(0.2g，0.58mmol)，化合物7-2(0.358g，1.87mmol)，乙醇(8mL)。微波加热到120℃(150PSI,150POWER)，反应两小时后，TLC监测反应基本完成。向反应混合物中滴加饱和碳酸钠水溶液，有白色固体析出，通过抽滤得到固体产物。得到的固体产物通过减压烘箱50℃干燥。最终得到目标化合物(0.29g)，为白色固体。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):9.99(s,1H),9.59(s,1H),8.46(s,1H),8.30(s,1H),7.66(s,1H),7.28～7.37(m,4H),6.98～7.04(t,J＝8.13Hz,1H),6.89～6.91(d,J＝8.91Hz,2H),6.42～6.51(m,1H),6.21～6.28(dd,1H),5.71～5.76(dd,1H),3.10～3.13(t,J＝4.59Hz，4H)，2.45～2.48(t,4H),2.24(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:498.2211。
实施例19 N-(3-((4-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-三氟甲基嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(I-1)
以化合物6-1和7-1为原料,参照实施例18的方法制备目标化合物。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):10.00(s,1H),9.61(s,1H),8.47(s,1H),8.30(s,1H),7.67(s,1H),7.28～7.37(m,4H),7.00～7.05(t,1H),6.91～6.94(d,J＝8.76Hz,2H),6.41～6.50(dd,1H),6.22～6.27(d,1H),5.71～5.76(d,1H),3.58(s,4H),3.13(t,2H),3.07(t,2H),2.05(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:556.2248。
实施例20 N-(3-((4-((2-甲氧基-4-吗啉基苯基)氨基)-5-三氟甲基嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(I-6)
氮气下，将化合物6-1(0.4g，1.17mmol)加入到化合物7-5(0.292g，1.404mmol)的1,4-二氧六环(12mL)溶液中，再加入碱DIPEA(0.227g,1.75mmol)。反应加热到102℃，反应过夜。TLC监测反应完全后，旋蒸除去溶剂，得到的粗品通过柱层析分离提纯。将得到的固体产物通过减压烘箱50℃干燥，最终得到目标化合物(0.439g)，为白色固体。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):10.02(s,1H),9.67(s,1H),8.31(s,1H),7.91(s,1H),7.63～7.68(br,2H),7.30～7.36(t,J＝9.81Hz,1H),7.03～7.08(t,J＝8.10Hz,1H),6.68(s,1H),6.41～6.50(m,2H),6.21～6.27(d,1H)5.71～5.75(m,1H),3.78(s,3H),3.75～3.76(t,4H),3.11～3.14(t,4H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:515.1975。
实施例21A 叔丁基4-(4-((2-((3-丙烯酰胺苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-3-甲氧苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(I-7)
氮气保护下将式6-1化合物(2.436g,7.11mmol)加入含有式7-9化合物(2.003g 6.498mmol)的1,4-二氧六环(50mL)溶液的反应瓶中后加热至106℃反应过夜。TLC监测反应完全。将粗品柱层析分离得到目标化合物2.469g。
1H-NMR(300M,CDCl3):8.26(s,1H),8.06-8.09(d,1H),7.82(s,1H),7.56(m,2H),7.36-7.44(m,2H),7.16-7.27(m,2H),6.41-6.54(m,3H),6.19-6.28(m,1H),5.72-5.76(d,1H),3.88(s,3H),3.57-3.60(t,4H),3.09-3.12(t,4H),1.49(s,9H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:614.2706。
实施例21B N-(3((4-((2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(I-8)
氮气保护下向密封管中分别加TFA(15.134g,133mmol)和实施例21A所得化合物(2.715g,4.424mmol)的DCM溶液，加热至65℃反应3hr，TLC检测发现反应完全，将反应液减压旋干后用EA溶清并用2M NaOH水溶液调至碱性，用EA萃取后有机相用Brine洗并MgSO4干燥，将有机相抽滤旋干后柱层析得到粗品2.160g，将500mg过柱产物用EA打浆得到目标化合物纯品(309mg)。
1H-NMR(300M,DMSO-d6):10.06(s,1H),9.70(s,1H),8.87(br,1H),8.31(s,1H),7.96(s,1H),7.62(m,2H),7.33-7.37(t,2H),7.01-7.06(t,1H),6.73(s,1H),6.41-6.50(m,2H),6.20-6.26(d,1H),5.71-5.75(d,1H),3.79(s,3H),3.35-3.36(d,4H),3.26-3.27(d,4H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:514.2164。
实施例22 N-(3-((4-((2-甲氧基-4-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(I-13)
向微波管中加入式6-1化合物(400mg,1.17mmol)，乙醇(15mL)作溶剂，加入中间体7-7(426mg,1.4mmol)，微波反应2小时，TLC监测反应基本完全。反应液回复到室温后继续搅拌30分钟，有大量白色固体析出。将反应液进行过滤，滤饼分别用乙醇洗(5mL×3)、饱和碳酸钠水溶液洗(10mL×3)、乙醇洗(5mL×2)、乙醚洗(10mL×3)，减压烘干后得灰白色固体目标化合物(603mg)，收率85％。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.14(s,1H),9.68(s,1H),8.30(s,1H),7.90(s,1H),7.72–7.53(m,2H),7.35(d,J＝8.1Hz,2H),7.05(t,J＝8.1Hz,1H),6.66(d,J＝2.5Hz,1H),6.56–6.40(m,2H),6.24(dd,J＝17.0,2.5Hz,1H),5.73(dd,J＝10.1,2.2Hz,1H),3.76(s,3H),3.59-3.14(m,4H),2.96-2.62(m,9H),2.50(s,3H),1.91(m,2H),1.56(m,2H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：611.3035。
实施例23 N-(3-((4-((2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(I-17)
以化合物6-1和7-3为原料,参照实施例22的方法制备目标化合物。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.19(s,1H),9.69(s,1H),8.32(s,1H),7.97(s,1H),7.75-7.57(m,2H),7.34(t,J＝6.2Hz,2H),7.05(t,J＝8.1Hz,1H),6.75(d,J＝2.5Hz,1H),6.58–6.42(m,2H),6.24(dd,J＝17.0,2.1Hz,1H),5.74(dd,J＝10.0,2.1Hz,1H),3.80(s,3H),3.40-3.19(m,8H),2.82(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：528.2330。
实施例24 N-(3-((4-((2-甲氧基-4-(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(I-31)
以化合物6-1和7-4为原料,按实施例22的方法制备目标化合物。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.03(s,1H),9.69(s,1H),8.32(s,1H),7.92(s,1H),7.74-7.58(m,2H),7.33(dd,J＝13.0,8.2Hz,2H),7.07(t,J＝8.1Hz,1H),6.73(d,J＝2.5Hz,1H),6.46(dd,J＝17.0,9.9Hz,2H),6.24(dd,J＝17.0,2.2Hz,1H),5.74(dd,J＝10.0,2.2Hz,1H),3.80(s,3H),3.29-3.20(m,8H),2.95(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：592.1946。
实施例25 N-(3-((4-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-溴嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(I-5)
步骤(1)1-(4-(4-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮(8-1)
氮气下，将化合物5-2(1.0g,4.39mmol)和DIPEA(0.85g,6.59mmol)加入化合物7-1(1.09g,4.39mmol)的n-BuOH溶液中。反应加热到110℃，反应3小时后TLC监测反应完全后，反应放冷至室温。加入冰水(25mL)，搅拌半小时后，抽滤，水洗。将得到的固体通过减压烘箱50℃干燥，最终得到式8-1化合物(1.81g)，为白色固体(产率93.63％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3):8.29～8.32(d,J＝9.3Hz,1H),8.23(s,1H),7.93(s,1H),6.57～6.60(m,2H),3.94(s,3H),3.78～3.81(t,J＝4.53Hz,2H),3.63～3.66(t,J＝4.62Hz,2H),3.14～3.20(m,4H),2.15(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:440.0483。
步骤(2)N-(3-((4-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-溴嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺
氮气下，分别向反应瓶中加入化合物8-1(0.50g，1.13mmol)，化合物4-1(0.184g，1.13mmol)，2-BuOH(15mL)，再加入TFA(0.194g，1.70mmol)催化。反应加热到100℃，反应6小时后TLC监测反应完全后，反应放冷至室温，加入饱和碳酸钠水溶液调pH至碱性。用DCM萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗一次，分离出有机相，加入无水硫酸镁干燥。通过抽滤除去干燥剂，旋蒸除去溶剂，得到的粗品通过柱层析分离。将得到的固体产物通过减压烘箱50℃干燥，最终得到目标化合物(0.24g)，为白色固体。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):10.02(s,1H),9.34(s,1H),8.17(s,1H),7.91～7.94(d,J＝8.7,1H),7.85(s,1H),7.76(s,1H),7.35～7.37(d,J＝8.10Hz,1H),7.28～7.31(d,J＝8.04Hz,1H),7.08～7.14(t,2H),6.41～6.50(m,1H),6.21～6.27(dd,1H),5.71～5.75(dd,1H),3.79(s,3H),3.59(s,4H),3.15(t,2H),3.09(t,2H),2.06(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:568.1494。
实施例26 N-(3-((4-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(I-3)
步骤(1)1-(4-(4-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮(8-2)
以化合物5-3和7-1为原料，参考实施例25步骤(1)的方法制备化合物8-2。
1H-NMR(300MHz,CDCl3):8.30～8.33(d,J＝8.67Hz,1H),7.99～8.00(d,J＝2.67Hz，1H),7.51(s,1H),6.55～6.59(m,2H),3.92(s,3H),3.78～3.81(t,J＝4.92Hz,2H),3.63～3.66(t,J＝4.68Hz,2H),3.13～3.19(m,4H),2.15(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:380.1275。
步骤(2)N-(3-((4-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺
以化合物4-1和8-2为原料，参考实施例25步骤(2)的方法制备目标化合物。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):9.98(s,1H),9.09(s,1H),8.21(s,1H),7.99～8.01(d,J＝3.6Hz，1H),7.74(s,1H),7.59～7.62(d,J＝8.67Hz,1H),7.35～7.38(d,J＝8.22Hz,1H),7.24～7.27(d,J＝8.16Hz,1H),7.02～7.08(t,J＝8.1Hz,1H),6.69～6.70(d,J＝2.04Hz,1H),6.42～6.50(m,2H),6.20～6.26(dd,J＝1.89Hz,1H),5.70～5.74(dd,J＝1.83,1H),3.80(s,3H),3.59(br,4H),3.17(t,2H),3.10(t,2H),2.06(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:506.2284。
实施例27 N-(3-((4-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-yl)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(I-4)
步骤(1)1-(4-(4-((2,5-氯嘧啶-4-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮(8-3)
以化合物5-4和7-1为原料,参考实施例25步骤(1)的方法制备化合物8-3。
1H-NMR(300MHz,CDCl3):8.29～8.32(d,J＝8.58Hz,1H),8.12(s,1H),7.88(s,1H),6.56～6.59(m,2H),3.93(s,3H),3.78～3.79(t,2H),3.63～3.64(t,2H),3.14～3.16(m,4H),2.15(s,3H)；
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:396.0982。
步骤(2)N-(3-((4-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺
以化合物4-1和8-3为原料,参考实施例25步骤(2)的方法制备目标化合物。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):10.02(s,1H),9.31(s,1H),8.08(s,1H),7.99(s,1H),7.79～7.82(d,J＝8.731H),7.73(s,1H),7.35～7.38(d,J＝8.13Hz,1H),7.27～7.29(d,J＝7.65Hz,1H),7.06～7.11(t,J＝8.1Hz,1H),6.71～6.72(d,J＝2.01Hz,1H),6.41～6.50(m,2H),6.20～6.27(dd,J＝1.80Hz,1H),5.71～5.76(dd,J＝1.80,1H),3.83(s,3H),3.59(br,4H),3.16(t,2H),3.10(t,2H),2.06(s,3H)。
HRMS(ESI,M+H+)m/z:522.1998。
实施例28 N-(3-((4-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(I-2)
步骤(1)1-(4-(4-((2-氯嘧啶-4-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮(8-4)
以化合物5-5和7-1为原料，参考实施例25步骤(1)的方法制备化合物8-4。
1H-NMR(300MHz,CDCl3):8.04～8.06(d,J＝5.88Hz,1H),7.55～7.62(br,1H),7.12(s,1H),6.52～6.54(d,J＝6.51Hz,2H),6.44～6.46(d,J＝5.91Hz,1H),3.85(s,3H),3.78～3.81(t,J＝4.652H),3.63～3.66(t,J＝4.35Hz,2H),3.14～3.21(m,4H),2.15(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:362.1374。
步骤(2)N-(3-((4-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺
以化合物4-1和8-4为原料，参考实施例25步骤(2)的方法制备目标化合物。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):9.97(s,1H),8.99(s,1H),8.26(s,1H),7.86～7.92(dd,1H),7.66～7.69(d,J＝8.31Hz,1H),7.44～7.47(d,J＝7.89Hz,1H),7.30～7.32(d,J＝7.86Hz,1H),7.09～7.14(t,J＝8.07Hz,1H),6.67(s,1H),6.43～6.52(m,2H),6.27(s,1H),6.15～6.22(m,1H),5.71～5.74(d,J＝9.99Hz,1H),3.81(s,3H),3.58～3.59(m,4H),3.14(t,2H),3.09(t,2H),2.05(S,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:488.2366。
实施例29 N-(6-((4-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)吡啶-2-基)丙烯酰胺(I-12)
步骤(1)1-(4-(4-((2-((6-氨基嘧啶-2-基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮
称量化合物8-3(500mg,1.26mmol)，2,6-二氨基吡啶44(138mg,1.26mmol)，溶剂1,4-二氧六环20mL，加碳酸铯(822mg,2.52mmol)，加催化剂三(二亚苄基丙酮)二钯(116mg,126umol)和配体4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(73mg,126umol，又名Xantphos)，微波反应，温度120℃，时间2hr，TLC监测原料点消失，反应液抽滤，滤液过硅胶柱，得粗品，再用高压制备柱反相分离得目标化合物(220mg)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):8.59(s，1H)，8.10-8.14(d，2H)，7.70-7.73(d，1H)，7.03-7.15(m，3H)，6.66-6.72(m，1H)，6.52-6.55(dd，1H)，6.02-6.05(d，1H)，5.63(s，1H)，3.80(s，3H)，3.60(s，4H)，3.14-3.18(m，4H)，2.06(s，3H)。
HRMS(ESI+,[M+H]+)m/z：469.1947。
步骤(2)N-(6-((4-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)吡啶-2-基)丙烯酰胺
取步骤1所得化合物(200mg,426umol)投料，加10mL DMF溶清，加30mL THF和三乙胺65mg(640umol)，-5℃下滴加丙烯酰氯，保持-5℃反应3hr，后rt反应过夜，反应液旋蒸近干，加饱和Na2CO3溶液稀释，EA萃取干燥，滤液旋蒸，残余物制砂过硅胶柱，洗脱得目标化合物(90mg)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)：10.28(s，1H)，8.83(s，1H)，8.27(s，1H)，8.12(s，1H)，7.69-7.72(m，1H)，7.58-7.61(d，1H)，7.47-7.49(m，2H)，6.73-6.74(d，1H)，6.59-6.68(m，1H)，6.50-6.54(dd，1H)，6.25-6.31(dd，1H)，5.73-5.76(t，1H)，3.79(s，3H)，3.61(s，4H)，3.15-3.20(m，4H)，2.06(s，3H)。
HRMS(ESI+,[M+H]+)m/z：523.2028。
实施例30 N-(5-((4-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)-2-甲氧基苯基)丙烯酰胺(I-9)
步骤(1)N-(2-甲氧基-5-硝基苯基)丙烯酰胺(3-4)
氮气下，将DIPEA(0.85g，6.55mmol)加入化合物2-4(1.0g，5.95mmol)的DCM(50mL)溶液。0℃下搅拌半小时后，向反应液中逐滴加入加入丙烯酰氯(0.57g，6.25mmol)。反应逐渐升至室温，TLC监测反应完全后。加入饱和碳酸钠水溶液淬灭反应，分液，有机相加入无水硫酸镁干燥。通过抽滤除去干燥剂，旋蒸除去溶剂，得到固体粗品再用PE:EA＝4：1打浆。最后将得到的固体产物通过减压烘箱50℃干燥，最终得到式3-4化合物(1.67g)，为黄色固体。
1H-NMR(300MHz,CDCl3):9.37～9.38(d,J＝2.67Hz,1H),7.98～8.02(dd,1H),7.93(s,1H),6.94～6.97(d,J＝9.03Hz,1H),6.44～6.50(m,1H),6.27～6.36(m,1H),5.81～5.85(d,J＝9.96Hz,1H).4.03(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:223.0712。
步骤(2)N-(5-氨基-2-甲氧基苯基)丙烯酰胺(4-4)
氮气下，将化合物3-4(1.2g，5.4mmol)溶于乙醇(8mL)和四氢呋喃(8mL)中，分次向反应中加入二氯化锡的二水合物(4.87g，21.6mmol)，加完后反应加热到70℃反应。反应2.5小时后，TLC监测反应完成。通过旋蒸除去溶剂，加入去离子水(20mL)。0℃下加入固体氢氧化钠至pH为强碱性。再用DCM萃取，合并有机相用饱和食盐水洗一次，有机相再用无水硫酸镁干燥。通过抽滤除去干燥剂，旋蒸除去溶剂。最后将得到的固体产物通过减压烘箱50℃干燥，最终得到式4-4化合物(0.73g)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3):7.96(s,1H),7.87(br,1H),6.68～6.71(d,8.58Hz,1H),6.36～6.42(m,2H),6.21～6.30(dd,1H),5.71～5.75(dd,1H),3.81(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:193.0967。
步骤(3)N-(5-((4-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)-2-甲氧基苯基)丙烯酰胺
以化合物4-4和8-3为原料,按参考实施例25步骤(2)的方法制备目标化合物。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):9.28(s,1H),9.08(s,1H),8.09(s,1H),8.04(s,1H),7.84～7.88(m,1H),7.33～7.35(d,J＝5.01Hz,1H),6.83～6.84(d,J＝5.34Hz,1H),6.64～6.70(m,1H),6.45～6.47(d,J＝5.04Hz,1H),6.18～6.21(d,1H),5.68～5.74(m,1H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.59(s,4H),3.17(t,2H),3.11(t,2H),2.05(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:552.2110。
实施例31 N-(3-((4-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(I-10)
步骤(1)1-(4-(4-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮(10-1)
以化合物2-4和8-3为原料,参考实施例25步骤(2)的方法制备化合物10-1。
1H-NMR(300MHz,CDCl3):9.16～9.17(d,J＝2.28Hz,1H),8.11～8.13(d,J＝8.64Hz,1H),8.07(s,1H),7.86～7.91(dd,1H),7.71(br,1H),7.65(s,1H),6.89～6.92(d,J＝8.97Hz),6.52～6.57(m,2H),4.00(s,3H),3.92(s,3H),3.80(t,2H),3.65(t,3H),3.16～3.21(m,4H),2.15(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:528.1745。
步骤(2)1-(4-(4-((2-((5-氨基-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮
氮气下，分别向反应瓶中加入化合物10-1(0.86g，1.63mmol)，铁粉(0.46g，8.15mmol)，氯化铵(0.44g，8.15mmol)，乙醇(15mL)，水(5mL)。反应加热到85℃反应。两小时，TLC监测反应完成。向反应中加入饱和碳酸钠水溶液淬灭反应，用DCM萃取，合并有机相，加入无水硫酸镁干燥。通过抽滤除去干燥剂，旋蒸除去溶剂。最后将得到的固体产物通过减压烘箱50℃干燥，最终得到目标化合物(0.76g)，产率93.83％。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):8.12(s,1H),8.03(s,1H),7.53～7.57(m,2H),7.21～7.22(d,J＝2.19Hz,1H),6.67～6.72(m,2H),6.54～6.57(d,8.7Hz,1H),6.13～6.17(dd,1H),3.79(s,3H),3.69(s,3H),3.59(br,4H),3.14～3.18(m,4H),2.06(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:498.2033。
步骤(3)N-(3-((4-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(I-10)
以步骤2所得化合物和丙烯酸酰氯反应,参考实施例29步骤(2)的方法制备目标化合物。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):9.92(s,1H),8.08(s,1H),7.84～8.02(m,3H),7.46～7.48(dd,1H),6.97～6.99(d,J＝5.31Hz,1H),6.67～6.68(d,J＝1.41Hz,1H),6.41～6.46(dd,1H),6.35～6.37(dd,1H),6.21～6.24(dd,1H),5.70～5.72(dd,1H),3.85(s,3H),3.78(s,3H),3.56～3.57(m,4H)，3.11(t,2H),3.05(t,3H),2.05(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:552.2130。
实施例32 N-(3-((5-氯-4-((4-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(I-28)
步骤(1)2,5-二氯-N-(4-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)-2-甲氧基苯基)嘧啶-4-胺(8-5)
以化合物7-6和5-4为原料,参考实施例25步骤(1)的方法制备化合物8-5。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):8.81(s,1H),8.26(s,1H),7.24～7.27(d,J＝8.67Hz,1H),6.64～6.65(d,J＝2.25Hz,1H),6.51～6.54(dd,1H),3.77(s,3H),3.71～3.77(t,2H),2.67～2.74(t,2H),2.19(s,6H),1.81～1.85(m,2H),1.40～1.53(m,2H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:396.1351。
步骤(2)N-(3-((5-氯-4-((4-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(I-28)
以化合物8-5和4-2为原料,参考实施例25步骤(2)的方法制备目标化合物(I-28)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):9.98(s,1H),8.09(s,1H),8.01～8.02(d,J＝2.04Hz,1H),7.92(s,1H),7.84～7.87(m,2H),7.47～7.51(dd,1H),6.97～7.00(d,J＝8.88Hz,1H),6.65～6.66(d,J＝1.98Hz,1H),6.35～6.49(m,2H),6.20～6.26(dd,1H),5.70～5.74(dd,1H),3.84(s,3H),3.78(s,3H),3.75(m,2H),3.06(m,2H),2.68(s,6H),1.99～2.03(m,2H),1.59～1.70(m,2H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:552.2531。
实施例33 N,N'-(((5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二基)双氨基)双(3,1-亚苯基))二丙烯酰胺(I-43)
步骤(1)N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基-氨基)苯基)丙烯酰胺(8‐6)
氮气下，向反应瓶中加入式45化合物(3.2g，19.73mmol)溶于正丁醇中，0℃滴加2,4-二氯-5-三氟甲基嘧啶5-1(4.28g，19.73mmol)和DIPEA(3.06g，23.68mmol)，室温反应2～3hrs，TLC检测原料点消失，反应液旋蒸近干，加饱和Na2CO3水溶液调至pH＝10，EA萃取干燥，过硅胶柱，PE-EA洗脱(5:1到2:1)，合并浓缩得目标产物6.35g，通过HPLC制备得目标物8-6。
1H-NMR(300M，DMSO-d6):10.22(s，1H)，9.57(s，1H)，8.58(s，1H)，7.79(s，1H)，7.49-7.52(d，1H)，7.33-7.38(t，1H)，7.13-7.16(d，1H)，6.40-6.49(m，1H)，6.23-6.29(d，1H)，5.75-5.78(d，1H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:343.0566。
步骤(2)N,N'-(((5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二基)双氨基)双(3,1-亚苯基))二丙烯酰胺(I-43)
以化合物8-6和45为原料，参考实施例25步骤(2)的方法制备目标化合物(I-43)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):10.13(s,1H),9.96(s,1H),9.67(s,1H),8.73(s,1H),8.37(s,1H),7.76(s,1H),7.64(s,1H),7.52～7.55(d,J＝7.83Hz,1H),7.42～7.45(d,J＝8.10Hz,1H),7.21～7.33(m,1H),6.94～7.00(t,J＝7.77Hz,1H),6.40～6.49(m,2H),6.21～6.29(m,2H),5.71～5.77(m,2H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:469.1588。
实施例34 N,N'-(((5-溴嘧啶-2,4-二基)双氨基)双(3,1-亚苯基))二丙烯酰胺(I-44)
步骤(1):N-(3-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(8-7)
以化合物5-2和45为原料,参考实施例33步骤(1)的方法制备化合物8-7。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:352.9794。
步骤(2)N,N'-(((5-溴嘧啶-2,4-二基)双氨基)双(3,1-亚苯基))二丙烯酰胺(I-44)
以化合物8-7和45为原料,参考实施例25步骤(2)的方法制备目标化合物(I-44)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):10.11(s,1H),9.98(s,1H),9.30(s,1H),8.62(s,1H),8.22(s,1H),7.84(s,1H),7.69(s,1H),7.45～7.47(d,2H),7.36～7.39(d,J＝8.55Hz,1H),7.22～7.30(m,2H),7.00～7.05(t,1H),6.40～6.49(m,2H),6.20～6.29(m,2H),5.70～5.77(m,2H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:479.0818。
实施例35 N-(3-((4-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(I-39)
以化合物6-1和7-14为原料，参考实施例22的方法制备目标化合物(I-39)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):10.00(s,1H),9.61(s,1H),8.47(s,1H),8.30(s,1H),7.67(s,1H),7.28～7.37(m,4H),7.00～7.05(t,1H),6.91～6.94(d,J＝8.76Hz,2H),6.41～6.50(dd,1H),6.22～6.27(d,1H),5.71～5.76(d,1H),3.58(s,4H),3.13(t,2H),3.07(t,2H),2.05(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:526.2182。
实施例36 N-(4-甲氧基-3-((4-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(I-47)
以化合物6-2和7-2为原料,参考实施例22的方法制备目标化合物(I-47)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.09(s,1H),8.40(brs,1H),8.30(d,J＝14.9Hz,2H),7.88(brs,1H),7.51(dd,J＝8.9,2.6Hz,1H),7.37-7.31(m,2H),6.99(d,J＝8.9Hz,1H),6.78(d,J＝8.6Hz,2H),6.49(dd,J＝17.0,10.1Hz,1H),6.25(dd,J＝17.0,2.1Hz,1H),5.78-5.71(m,1H),3.75(s,3H),3.28-3.06(m,4H),2.75-2.59(m,4H),2.39(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：528.2358。
实施例37 N-(4-甲氧基-3-((4-((2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(I-48)
以化合物6-2和7-3为原料，参考实施例22的方法制备目标化合物(I-48)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):10.02(s,1H),8.64(br,1H),8.30(s,1H),7.86(s,1H),7.79～7.81(d,1H),7.66(s,1H),7.55～7.57(m,1H),7.02～7.04(D,1H),6.62(s,1H),6.40～6.45(m,1H),6.22～6.25(dd,2H),5.72～5.74(d,1H),3.82(s,3H),3.76(s,3H),3.09(s,4H),2.47～2.51(d,4H),2.25(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:558.2838。
实施例38 N-(2,4-二甲氧基-5-((4-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺(I-52)
以化合物6-3和7-2为原料，参考实施例22的方法制备目标化合物(I-52)。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.31(s,1H),8.46(brs,1H),8.22(s,1H),8.15(s,1H),8.08(s,1H),7.31(d,J＝8.4Hz,2H),6.83–6.63(m,4H),6.19(dd,J＝17.0,2.0Hz,1H),5.68(dd,J＝10.1,2.1Hz,1H),3.89(s,3H),3.78(s,3H),3.11-3.03(m,4H),2.49-2.45(m,4H),2.25(s,3H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：558.2521。
实施例39 N-(3-((4-((4-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(I-58)
以化合物6-1和7-6为原料,参考实施例22的方法制备目标化合物(I-58)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):10.06(s,1H),9.70(s,1H),8.31(s,1H),7.93(s,1H),7.67(br,1H),7.60(br,1H),7.32～7.37(m,2H),7.04～7.07(t,1H),6.66～6.67(d,1H),6.44～6.49(m,2H),6.23～6.27(dd,1H),5.73～5.77(dd,1H),3.78(s,3H),3.72～3.75(d,2H),2.66～2.71(t,2H),2.26(s,6H),1.86`1.88(d,2H),1.48～1.54(m,2H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:556.3066。
实施例40 N-(3-((4-((4-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(I-59)
以化合物6-3和7-6为原料,参考实施例22的方法制备目标化合物(I-59)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):9.341(s,1H),8.66(s,1H),8.24(s,1H),8.08(s,1H),7.81(br,1H),7.55(s,1H),6.82(s,1H),6.64～6.70(dd,1H),6.60(s,1H),6.26(br,1H),6.15～6.19(dd,1H),5.66～5.68(d,1H),3.91(s,3H),3.82(s,3H),3.78(s,3H),3.66～3.68(d,2H),2.60～2.65(t,2H),2.29(s,6H),1.86～1.88(d,2H),1.47`1.54(m,2H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:616.2865。
实施例41 N-(3-((4-((4-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-yl)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(I-60)
以化合物6-2和7-6为原料，参考实施例22的方法制备目标化合物(I-60)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.03(s,1H),8.65(brs,1H),8.30(s,1H),7.85(brs,1H),7.79(d,J＝8.9Hz,1H),7.65(s,1H),7.58(dd,J＝8.9,2.6Hz,1H),7.03(d,J＝8.9Hz,1H),6.61(d,J＝2.5Hz,1H),6.44(dd,J＝17.0,10.1Hz,1H),6.29–6.19(m,2H),5.73(dd,J＝10.1,2.1Hz,1H),3.82(s,3H),3.76(s,3H),3.68-3.59(m,2H),2.66-2.55(m,2H),2.32-2.22(m,1H),2.26(s,6H),1.88–1.78(m,2H),1.53-1.41(m,2H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：586.2778。
实施例42 N-(4-甲氧基-3-((4-((2-甲氧基-4-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺(I-63)
以化合物6-2和7-7为原料，参考实施例22的方法制备目标化合物(I-63)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.02(s,1H),8.64(brs,1H),8.30(s,1H),7.86(brs,1H),7.79(d,J＝8.8Hz,1H),7.65(s,1H),7.57(dd,J＝8.9,2.6Hz,1H),7.03(d,J＝8.9Hz,1H),6.60(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(dd,J＝16.9,10.1Hz,1H),6.28-6.20(m,2H),5.73(dd,J＝10.1,2.1Hz,1H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.67-3.59(m,2H),3.42-3.29(m,4H),2.64-2.52(m,3H),2.42-2.24(m,4H),2.17(s,3H),1.86-1.77(m,2H),1.54-1.42(m,2H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z：641.3208。
实施例43 N-(3-((4-((4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(I-79)
步骤(1)N1-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-N1,N2,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺(46)
以化合物15和N1,N1,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺为原料，参考实施例6步骤(1)的方法制备化合物46。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):7.88～7.91(d,1H),6.35～6.39(dd,1H),6.24～6.25(d,J＝2.28Hz,1H),3.90(s,3H),3.54～3.58(t,J＝6.84Hz,2H),3.07(s,3H),2.41～2.45(t,J＝6.84Hz,2H),2.20(s,6H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:254.1505。
步骤(2)N1-(2-(二甲氨基)乙基)-3-甲氧基-N1-甲基苯-1,4-二胺(7-24)
以化合物46为原料，参考按实施例6步骤(2)的方法制备化合物7-24。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):6.45～6.49(dd,1H),6.31～6.32(d,J＝2.43Hz,1H),6.11～6.14(dd,1H),3.73(s,3H),3.20～3.25(t,J＝7.02Hz,2H),2.75(s,3H),2.30～2.35(t,J＝7.32Hz,2H),2.15(s,6H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:224.1745。
步骤(3)N-(3-((4-((4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(I-79)
以化合物6-1和7-24为原料,参考实施例22的方法制备目标化合物(I-79)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):10.04(s,1H),9.66(s,1H),8.29(s,1H),7.91(s,1H),7.65(br,1H),7.47(br,1H),7.40～7.42(d,J＝4.8Hz,1H),7.29～7.30(d,J＝4.5Hz,1H),7.00(br,1H),6.43～6.48(m,1H),6.39(s,1H),6.23～6.26(m,2H),5.72～5.74(d,J＝6.0Hz,1H),3.76(s,3H),3.44～3.47(t,J＝3.9Hz,2H),2.95(s,3H),2.42～2.45(t,J＝3.9Hz,2H),2.22(s,6H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:530.3002。
实施例44 N-(3-((4-((4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(I-80)
以化合物6-2和7-24为原料，参考实施例22的方法制备目标化合物(I-80)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):9.99(s,1H),8.53(br,1H),8.27(s,1H),7.90(s,1H),7.69～7.71(d,1H),7.62(br,1H),7.53～7.56(dd,1H),7.00～7.02(d,1H),6.40～6.45(dd,1H),6.34(s,1H),6.21～6.25(m,1H),6.05～6.06(d,1H),5.71～5.73(d,1H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.38～3.41(t,2H),2.87(s,3H),2.38～2.40(t,2H),2.22(s,6H)。
HRMS(ESI,[M+H]+)m/z:560.3014。
实验例1对表皮生长因子受体EGFR及致癌驱动基因ALK抑制活性评价。
本试验目的是评价并比较本专利合成的部分化合物对体外培养肿瘤细胞H1975(EGFR L858R/T790M)，NCI-H3122(ALK)、NCI-H292(EGFR)或A431(EGFR)增殖的影响。
配制方法：被试样品均用DMSO配成10mM的原液；使用时用培养液配成所需浓度。
细胞株:A431细胞购自中国科学院上海生命科学院细胞库，用含10％胎牛血清(FBS)的RPMI 1640/DMEM培养基培养。肺癌NCI-H292(EGFR WT)购自中国科学院上海生命科学院细胞库，H1975细胞购自中国科学院上海生命科学院细胞库，NCI-H3122购自美国国立癌症研究所(NCI),均用含10％胎牛血清(FBS)的RPMI 1640培养基培养。
试剂及仪器：RPMI-1640购自Gibco BRL公司；FBS购自Hyclone公司；多功能酶标仪Synergy H4购自BioTek公司；磺酰罗丹明B(SRB)购自Sigma公司。
试验方法SRB法：应用SRB蛋白染色法检测药物对肿瘤细胞增殖生长的抑制作用。主要步骤如下：接种对数生长期细胞于96孔培养板，加入不同浓度(1-10000nM)的药物，每个浓度设3个复孔，同时设相应浓度的溶媒对照。肿瘤细胞在37℃、5％CO2条件下培养72小时。细胞用SRB室温中染色，最后加入Tris溶液溶解，酶标仪(BioTek)510nm波长下测定OD值，以下列公式计算细胞生长抑制率：
抑制率＝(OD值对照孔－OD值给药孔)/OD值对照孔×100％。
根据各浓度抑制率，根据非线性回归方法计算半数抑制浓度IC50。
试验共分三批进行，结果如下表1、表2和表3所示：
表1.化合物对体外培养肿瘤细胞增值抑制的IC50(第一批)
表2.化合物对体外培养肿瘤细胞增值抑制的IC50(第二批)
表2.化合物对体外培养肿瘤细胞增值抑制的IC50(第三批)
。