本发明涉及医疗化学、药理学和医学。
发明背景
本发明提供为G-蛋白-偶联受体6(在下文被称为GPR6)调节剂的化合物。GPR6是经由Gs途径传导信号的GPCR。GPR6受体在中枢神经系统(CNS)、特别是纹状体的中型多棘神经元(MSN)中高度表达，而在外周组织中表达最少。多巴胺能神经支配的主要纹状体靶标位于纹状体苍白球(间接)和纹状体黑质(直接)输出途径的中型多棘神经元中。直接输出途径的MSN表达D1多巴胺受体而间接途径中的那些表达D2受体。GPR6富集在纹状体内表达MSN的D2受体中，其中GPR6活性与D2受体信号传导功能性相反。Gs偶联的GPR6的拮抗或反向激动降低MSN内的cAMP，并且提供多巴胺介导的D2受体活化的功能替代物。因此，本发明的化合物可用于治疗多种神经障碍和精神障碍，包括帕金森病(Parkinson’s disease)。
发明概述
本发明提供式I化合物：
其中
R1选自由以下组成的组：任选取代的C3-8环烷基、任选取代的C3-6杂环基、任选取代的C6-10芳基和任选取代的C1-10杂芳基；
X1是N且X2是CH；或
X1是CH且X2是N；或
X1是N且X2是N；
当X1是N时，Z选自由以下组成的组：C1-6亚烷基、C1-6卤代亚烷基、-C(O)-和-S(O)2-；
当X1是CH时，Z选自由以下组成的组：C1-6亚烷基、C1-6卤代亚烷基、-O-、-C(O)-、-NH-、-S-、-S(O)-和-S(O)2-；
q是0、1或2；
s是0、1或2；
R2是-OR5或-NR6R7；
R3，每次采用时，独立选自由以下组成的组：C1-6烷基、C3-8环烷基和三氟甲基；
p是0、1或2；
R4，每次采用时，独立选自由以下组成的组：任选取代的C1-6烷基、氰基、羟基、卤基、任选取代的C3-6杂环基、-C(O)-R8、-C(O)-N(R9)(R10)和-C(O)-OR11；
r是1或2；
R5选自由以下组成的组：C1-6烷基和C3-8环烷基；
R6选自由以下组成的组：氢和C1-6烷基；
R7选自由以下组成的组：任选取代的C1-6烷基、C3-8环烷基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的C1-10杂芳基和任选取代的C3-6杂环基；
R8选自由以下组成的组：氢、任选取代的C1-6烷基、C3-8环烷基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的C1-10杂芳基和任选取代的C3-6杂环基；
R9选自由以下组成的组：氢和任选取代的C1-6烷基；
R10选自由以下组成的组：氢、C1-6烷基和C3-8环烷基；或
R9和R10连同它们所连接的氮一起形成4至7元饱和环，所述饱和环任选地具有另1个选自N、O和S的环杂原子，且在环碳原子的任一个上被1至5个独立选自由氰基、卤基、羟基、氨基、任选取代的C3-6杂环基、C1-9酰胺、任选取代的C1-6烷基和C1-4烷氧基组成的组的取代基任选取代及在任何另外的环氮上被选自由氢、C3-8环烷基和任选取代的C1-6烷基组成的组的取代基取代；
R11选自由以下组成的组：氢、C1-6烷基和C3-8环烷基；
或其药学上可接受的盐。
本发明还提供药物组合物，其包含：式I化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的赋形剂。
本发明的化合物是GPR6的调节剂，且可用于治疗多种神经障碍和精神障碍，例如运动障碍(包括帕金森病、左旋多巴诱导的异动症和亨丁顿病(Huntington’s disease))、药物成瘾、进食障碍、认知障碍、精神分裂症、双相障碍和抑郁。因此，本发明还提供治疗与本文所述的GPR6相关的疾患的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的本发明的化合物。本发明提供本发明的化合物作为药剂的用途，包括用于治疗与本文所述的GPR6相关的疾患，且包括用于制造治疗与本文所述的GPR6相关的疾患所用的药剂。
本发明还提供用于制备GPR6调节剂及其中间体的方法。
发明详述
术语“C1-4烷基”是指一至四个碳原子的直链或支链烷基链。
术语“任选取代的C1-4烷基”是指被1至6个独立选自由以下组成的组的取代基任选取代的C1-4烷基：任选取代的C1-4烷氧基、C1-4硫代烷氧基、C1-9酰胺、C1-7酰氨基、氨基、C1-8烷基氨基、C1-5氧基羰基、C1-5羰基氧基、C1-8磺酰基、氰基、任选取代的C3-8环烷基、C3-8环烷氧基、卤基、羟基、硝基、氧代、任选取代的C3-6杂环基、任选取代的C1-10杂芳基和任选取代的C6-10芳基。
更具体地，“任选取代的C1-4烷基”是指被1至6个独立选自由以下组成的组的取代基任选取代的C1-4烷基：C1-4烷氧基、C1-9酰胺、氨基、C1-8烷基氨基、C1-5氧基羰基、氰基、C3-8环烷基、卤基、羟基、在任何环氮上被C1-4烷基任选取代的C3-6杂环基、C1-10杂芳基及任选取代的苯基。
甚至更具体地，“任选取代的C1-4烷基”是指被1至6个独立选自由以下组成的组的取代基任选取代的C1-4烷基：C1-4烷氧基、氰基、C3-8环烷基、卤基、羟基、在任何环氮上被C1-4烷基任选取代的C3-6杂环基及任选取代的苯基。
术语“C1-6烷基”是指一至六个碳原子的直链或支链烷基链。
术语“任选取代的C1-6烷基”是指被1至7个独立选自由以下组成的组的取代基任选取代的C1-6烷基：氨基、C1-8烷基氨基、任选取代的C1-4烷氧基、C1-4硫代烷氧基、C1-9酰胺、C1-7酰氨基、C1-5氧基羰基、C1-5羰基氧基、C1-8磺酰基、氰基、任选取代的C3-8环烷基、卤基、羟基、氧代、任选取代的C1-10杂芳基、任选取代的C3-6杂环基和任选取代的C6-10芳基。
更具体地，“任选取代的C1-6烷基”是指被1至7个独立选自由以下组成的组的取代基任选取代的C1-6烷基：C1-4烷氧基、C1-9酰胺、氨基、C1-8烷基氨基、C1-5氧基羰基、氰基、C3-8环烷基、卤基、羟基、在任何环氮上被C1-4烷基任选取代的C3-6杂环基、C1-10杂芳基和任选取代的苯基。
甚至更具体地，“任选取代的C1-6烷基”是指被1至7个独立选自由以下组成的组的取代基任选取代的C1-6烷基：C1-4烷氧基、氰基、C3-8环烷基、卤基、羟基、在任何环氮上被C1-4烷基任选取代的C3-6杂环基及任选取代的苯基。
术语“C1-6卤代烷基”是指被1至3个卤素原子取代的一至六个碳原子的直链或支链烷基链。更具体地，术语“C1-6卤代烷基”是指氟甲基和二氟甲基。
术语“C1-8磺酰基”是指与C1-6烷基基团、C3-8环烷基或任选取代的苯基连接的磺酰基。
术语“C1-6亚烷基”是指一至六个碳原子的直链或支链二价亚烷基链。
术语“C1-6卤代亚烷基”是指被1至3个卤素原子取代的一至六个碳原子的直链或支链二价亚烷基链。更具体地，术语“C1-6卤代亚烷基”是指氟亚甲基和二氟亚甲基。
术语“C1-4烷氧基”是指通过氧原子连接的C1-4烷基。
术语“任选取代的C1-4烷氧基”是指被1至6个独立选自由以下组成的组的取代基任选取代的C1-4烷氧基：C1-4烷氧基、C1-9酰胺、C1-5氧基羰基、氰基、任选取代的C3-8环烷基、卤基、羟基、任选取代的C1-10杂芳基和任选取代的C6-10芳基。尽管应理解当任选的取代基为C1-4烷氧基或羟基时那么取代基通常对于烷氧基连接点不是α，术语“任选取代的C1-4烷氧基”包括稳定部分且具体地包括三氟甲氧基、二氟甲氧基和氟甲氧基。
更具体地，“任选取代的C1-4烷氧基”是指被1至6个独立选自由以下组成的组的取代基任选取代的C1-4烷氧基：C1-4烷氧基、氰基、C3-8环烷基、卤基、羟基和任选取代的苯基。甚至更具体地，“任选取代的C1-4烷氧基”是指三氟甲氧基、二氟甲氧基和氟甲氧基。
术语“C1-9酰胺”是指-C(O)NRaRb基团，其中Ra选自由以下组成的组：氢和C1-4烷基，且Rb选自由以下组成的组：氢、C1-3烷基和任选取代的苯基。
术语“C1-7酰氨基”是指-NHC(O)Rc基团，其中Rc选自由以下组成的组：氢、C1-6烷基和任选取代的苯基。
术语“C1-5氨基甲酰基”是指被末端C1-4烷基取代的O-或N-连接的氨基甲酸酯。
术语“C1-5脲基”是指被C1-4烷基任选取代的脲。
术语“C1-8烷基氨基”是指-NRdRe基团，其中Rd是C1-4烷基且Re选自由以下组成的组：氢和C1-4烷基。
术语“C6-10芳基”是指具有五至十个碳原子的单环和多环不饱和的缀合烃，且包括苯基和萘基。
更具体地，“C6-10芳基”是指苯基。
术语“任选取代的C6-10芳基”是指被1至5个独立选自由以下组成的组的取代基任选取代的C6-10芳基：任选取代的Cl-4烷基、任选取代的C1-4烷氧基、C1-4硫代烷氧基、氨基、C1-8烷基氨基、C1-9酰胺、C1-7酰氨基、C1-5氧基羰基、C1-5羰基氧基、C1-8磺酰基、C1-5氨基甲酰基、C1-6磺酰基酰氨基、氨基磺酰基、C1-10氨基磺酰基、C1-5脲基、氰基、卤基和羟基。
更具体地，“任选取代的C6-10芳基”是指被1至5个独立选自由以下组成的组的取代基任选取代的C6-10芳基：Cl-4烷基、C1-4烷氧基、氰基、卤基、羟基、氨基、三氟甲基和三氟甲氧基。
甚至更具体地，“任选取代的C6-10芳基”是指被1至5个独立选自由以下组成的组的取代基任选取代的苯基：Cl-4烷基、C1-4烷氧基、氰基、卤基、三氟甲基和三氟甲氧基。
术语“C1-5氧基羰基”是指氧基羰基基团(-CO2H)及其C1-4烷基酯。
术语“C1-5羰基氧基”是指其中Rf选自由氢和C1-4烷基组成的组的羰基氧基基团(-O2CRf)，例如乙酰氧基。
术语“C3-8环烷基”是指一至八个碳原子的单环或双环、饱和或部分(但非完全)不饱和的烷基环，并且包括环丙基、环丁基、环己基等。应理解术语包括苯并稠合的环戊基和环己基。
术语“任选取代的C3-8环烷基”是指被1至6个独立选自由以下组成的组的取代基任选取代的C3-8环烷基：任选取代的C1-4烷基、任选取代的C1-4烷氧基、C1-9酰胺、C1-7酰氨基、氨基、C1-8烷基氨基、C1-5氧基羰基、氰基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基、卤基、羟基、硝基、氧代、任选取代的C1-10杂芳基和任选取代的苯基。
更具体地，“任选取代的C3-8环烷基”是指被1至3个独立选自由以下组成的组的取代基任选取代的C3-8环烷基：C1-4烷氧基、卤基、羟基及被C1-4烷氧基、卤基和羟基任选取代的C1-4烷基。
术语“C3-8环烷氧基”是指通过氧连接的C3-8环烷基。
术语“卤素”和“卤基”是指氯、氟、溴或碘原子。
术语“C3-6杂环基”是指具有一个或两个选自由氮、氧和硫组成的组的杂原子的4至8元单环或双环饱和或部分(但不完全)不饱和环，并且所述环任选地包含羰基以形成内酰胺或内酯。应理解当包含硫时，硫可为-S-、-SO-和-SO2-。也应理解所述术语包括螺稠合双环系统。所述术语例如但不限于包括氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、氧杂环丁基、二氧戊环基、四氢吡喃基、四氢硫代吡喃基、四氢呋喃基、六氢嘧啶基、四氢嘧啶基、二氢咪唑基等。应理解C3-6杂环基可通过环碳或环氮原子连接为取代基。
更具体地，“C3-6杂环基”选自由以下组成的组：氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、氧杂环丁基、四氢吡喃基、四氢硫代吡喃基和四氢呋喃基。
术语“任选取代的C3-6杂环基”是指在环碳上被1至4个独立选自由以下组成的组的取代基任选取代的C3-6杂环基：任选取代的C1-4烷基、任选取代的C1-4烷氧基、C1-9酰胺、C1-7酰氨基、氨基、C1-8烷基氨基、C1-5氧基羰基、氰基、任选取代的C3-8环烷基、C3-8环烷氧基、卤基、羟基、硝基、氧代和任选取代的苯基；且在任何环氮上被独立选自由以下组成的组的取代基任选取代的：任选取代的C1-4烷基、C3-8环烷基、任选取代的C3-6杂环基、任选取代的C1-10杂芳基和任选取代的苯基。
更具体地，“任选取代的C3-6杂环基”是指在环碳上被1至4个独立选自由C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤基和羟基组成的组的取代基任选取代且在任何环氮上被C1-4烷基任选取代的C3-6杂环基。
术语“C1-10杂芳基”是指具有一至十个碳原子和一个或多个、通常一至四个选自由氮、氧和硫组成的组的杂原子的五至十三元单环或多环完全不饱和环或环系统。所述术语例如但不限于包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、氮杂卓、二氮杂卓、苯并氮杂卓、苯并二氮杂卓、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚基、苯并咪唑基、苯并异噻唑基、苯并异噁唑基、苯并噁二唑基、苯并噁唑基、苯并吡嗪基、苯并吡唑基、咪唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、吡咯并吡啶基、喹唑啉基、噻吩并吡啶基、咪唑并吡啶基、喹啉基、异喹啉基苯并噻唑基等。应理解C1-10杂芳基可通过环碳或环氮原子连接为取代基，其中此类连接模式可用于例如吡咯基、吲哚基、咪唑基、吡唑基、氮杂卓、三唑基、吡嗪基等。
更具体地，“C1-10杂芳基”选自由以下组成的组：呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、三唑基、吡啶基和嘧啶基。
术语“任选取代的C1-10杂芳基”是指C1-10杂芳基，所述杂芳基在碳上被1至5个独立选自由以下组成的组的取代基任选取代：氨基、C1-8烷基氨基、C1-9酰胺、C1-7酰氨基、C1-5氨基甲酰基、C1-6磺酰基酰氨基、氨基磺酰基、C1-10氨基磺酰基、C1-5脲基、任选取代的Cl-4烷基、任选取代的C1-4烷氧基、氰基、卤基、羟基、氧代、硝基、C1-5羰基氧基、C1-5氧基羰基和C1-8磺酰基，且在每个氮上被独立选自由以下组成的组的取代基任选取代：任选取代的Cl-4烷基、C1-8磺酰基、任选取代的C3-6杂环基和任选取代的苯基。
更具体地，“任选取代的C1-10杂芳基”是指C1-10杂芳基，所述杂芳基在碳上被1至3个独立选自由以下组成的组的取代基任选取代：氨基、C1-8烷基氨基、C1-9酰胺、Cl-4烷基、C1-4烷氧基、氰基、卤基、羟基、氧代、三氟甲基和三氟甲氧基且在环氮上被Cl-4烷基任选取代。
甚至更具体地，“任选取代的C1-10杂芳基”是指选自由以下组成的组的C1-10杂芳基：呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、二唑基、吡啶基、嘧啶基和三唑基，其各自被1至3个独立选自由Cl-4烷基、C1-4烷氧基、氰基、卤基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的取代基任选取代且在环氮上被甲基任选取代。
术语“氧代”是指双重键合至其连接以形成酮或醛的羰基的碳的氧原子。例如，吡啶酮基被理解为氧代取代的C1-10杂芳基。
术语“任选取代的苯基”是指被1至5个独立选自由以下组成的组的取代基任选取代的苯基基：Cl-4烷基、C1-4烷氧基、C1-9酰胺、氨基、C1-8烷基氨基、C1-5氧基羰基、氰基、卤基、羟基、硝基、C1-8磺酰基和三氟甲基。
更具体地，“任选取代的苯基”是指被1至5个独立选自由以下组成的组的取代基任选取代的苯基基团：Cl-4烷基、C1-4烷氧基、C1-9氨基、C1-8烷基氨基、C1-5氧基羰基、氰基、卤基、羟基、硝基和三氟甲基。
术语“C1-6磺酰基酰氨基”是指-NHS(O)2-Rg基团，其中Rg选自由以下组成的组：C1-6烷基和任选取代的苯基。
术语“氨基磺酰基”是指-S(O)2NH2。
术语“C1-10氨基磺酰基”是指-S(O)2NRhRi基团，其中Rh选自由以下组成的组：氢和C1-4烷基，且Ri选自由以下组成的组：C1-4烷基和任选取代的苯基。
术语“C1-4硫代烷氧基”是指通过硫原子连接的C1-4烷基。
术语“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的有机酸和碱或者无机酸和碱的盐。此类盐是本领域熟知的且包括Journal of Pharmaceutical Science,66,2-19(1977)中描述的那些。一个实例是盐酸盐。
术语“取代的”包括当用于“任选取代的”中时是指基团的一个或多个氢基被非-氢基(取代基)替换。应理解取代基可在每个取代位置相同或不同。由本发明所设想的基团和取代基的组合是稳定或化学可行的那些。
术语“稳定的”是指当经受允许其生产的条件下时基本上不改变的化合物。在一个非限制性实例中，稳定化合物或化学可行的化合物是当保持在40℃或更低的温度下在缺乏湿度或其它化学反应条件持续约1周时基本上不改变的化合物。
应理解当本文定义的术语提及一定数目的碳原子时，提及的数目是指提及的基团且不包括可存在于其上的任何任选的取代基上的任何碳。
技术人员将理解本发明的某些化合物存在为异构体。本发明的化合物的所有立体异构体，包括几何异构体、对映异构体和非对映异构，以任何比率被考虑在本发明的范围内。
技术人员将理解本发明的某些化合物以互变异构体存在。本发明的所有互变异构体形式的化合物被考虑在本发明的范围内。
本发明的化合物还包括所有药学上可接受的同位素变型，其中至少一个原子被具有相同原子数、但原子质量不同于主要原子质量的原子替代。适用于包含在式I化合物内的同位素包括放射性同位素。
术语“本发明的化合物”和“本发明的一种化合物”及“本发明的化合物等包括式I的实施方案及由本文所述的式I涵盖和本文所述化合物示例的其它更特别的实施方案以及这些实施方案的每一个的药学上可接受的盐。
(a)一个实施方案涉及式I化合物，其中X1是CH且X2是N。
(b)一个实施方案涉及式I化合物，其中X1是N且X2是N。
(c)一个实施方案涉及式I化合物及实施方案(a)和(b)，其中R4是氰基。
(d)一个实施方案涉及式I化合物及实施方案(a)和(b)，R4选自基团氰基、-C(O)-N(R9)(R10)和-C(O)-OR11。
(e)一个实施方案涉及式I化合物及实施方案(a)、(b)、(c)和(d)，其中R1是任选取代的C6-10芳基。
(f)一个实施方案涉及式I化合物及实施方案(a)、(b)、(c)和(d)，其中Z是C1-6亚烷基。
(g)一个实施方案涉及式I化合物及实施方案(a)、(b)、(c)和(d)，其中Z是C1-6卤代亚烷基。
(h)一个实施方案涉及式I化合物及实施方案(a)、(c)和(d)，其中Z是-O-。
(i)一个实施方案涉及式I化合物及实施方案(a)、(b)、(c)和(d)，其中Z是-C(O)-。
(j)一个实施方案涉及式I化合物及实施方案(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)和(i)，其中R2是-NR6R7。在实施方案(j)内的另一个实施方案中，R6是氢且R7是C1-6烷基。在实施方案(j)内的又一个实施方案中，R6是氢且R7是C3-8环烷基。在实施方案(j)内的又一个实施方案中，R6是氢且R7是C3-6杂环基。
(k)一个实施方案涉及式I化合物及实施方案(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)和(j)，其中s是1。
(l)一个实施方案涉及式I化合物及实施方案(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)和(k)，其中q是1。
(m)一个实施方案涉及式I化合物及实施方案(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)，其中R4是氰基且r是2。
(m)一个实施方案涉及式I化合物及实施方案(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)和(l)，其中r是1。
(ay)另一个实施方案涉及以上每一个实施方案的药学上可接受的盐。
(az)另一个实施方案涉及每一种示例性化合物的药学上可接受的盐。
本发明的化合物可通过多种程序制备，其中的一些描述在下文。除非另外指定，否者所有取代基如前所定义。每个步骤的产物可通过常规方法回收，所述方法包括萃取、蒸发、沉淀、色谱、过滤、研磨、结晶等。所述程序可需要保护某些基团，例如羟基、氨基或羧基基团以将不利反应最小化。保护基的选择、使用和去除是熟知的且被理解为标准实践，例如T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Chemistry(John Wiley and Sons,1991)。在以下方案中，原料可商购获得或可通过本领域熟知的方法立即制备。
方案A
方案A描绘了其中X2是N的化合物的形成。
在方案A、步骤1中，使得适当的式1化合物与适当的式2化合物接触以得到式3化合物。适当的式1化合物是其Hal是卤素且R4和r如在式I的最终化合物中所需的化合物。适当的式2化合物是其中R1、Z、R3、p、s和q如式I的最终化合物所需或者产生如式I的最终化合物所需的R1、Z和R3的化合物。式2化合物可商购获得，或者它们可通过本领域熟知的方法容易制备。例如，其中Z是氧的式2化合可通过哌啶醇与芳基醇之间的Mitsunobu反应制备。
反应在适合的有机溶剂(如二噁烷、正丁醇、二甲亚砜等)中在碱(诸如二异丙基乙胺和三乙胺)的存在或不存在下进行。反应通常在0至80℃的温度下进行。
应理解式1化合物还可用哌嗪处理以产生其中X1是N的化合物。哌嗪衍生物可通过胺化、烷基化、芳基化、酰胺化、磺酰基化等进一步修饰以提供式3化合物。此外，哌嗪如果需要在此后步骤中去保护后，可如上所提及被保护且阐述。
在方案A、步骤2中，使得式3化合物与适当的式4化合物接触以得到式I化合物。适当的式4化合物是HOR5或HNR6R7，其中R5或R6和R7如式I的最终化合物中所需。
当式4化合物为胺HNR6R7时，在适合的有机溶剂(如二噁烷、乙醇、四氢呋喃、二甲亚砜、N,N-二甲基甲酰胺等)中在碱(诸如氢氧化钠、二异丙基乙胺或三乙胺)的存在或不存在下进行反应。反应通常在20至150℃的温度下进行。
当式4化合物是醇HOR5时，在适合的有机溶剂(如二噁烷、四氢呋喃、二甲亚砜、N,N-二甲基甲酰胺等)中在碱(诸如氢化钠、氢化锂、叔丁醇钾等)的存在下进行反应。反应通常在0至150℃的温度下进行。
可替代地，如在方案A、步骤3中所述，使用上文所述的方法，可使得适当的式1化合物与适当的式2化合物接触以得到式5化合物。
如在方案A、步骤4中所述，可使得式5化合物与式2化合物接触以得到式I化合物。
将由本领域普通技术人员所认识方案A中的步骤可经改变以提供式I化合物。特别地，产生式I化合物所需的步骤的顺序取决于正在合成的特定化合物、起始化合物及经取代部分的相对易变性。其它变型是可能的且容易被技术人员理解。
方案B
方案B描绘了其中X2是CH的化合物的形成。
在方案B、步骤1中，使得如上所述的适当的式1化合物与适当的式6化合物接触以得到式7化合物。适当的式6化合物是其中R1、Z、R3、p、s和q如在式I的最终化合物中所需或产生如式I和Y的最终化合物(硼酸或硼酸酯)中所需的R1、Z和R3的化合物。还应理解描述为R1-Z-的基团可被诸如甲基、苄基、t-BOC或Cbz的适当的保护基替代，随后去除保护基和安装如式I的最终化合物中所需的R1-Z-。
此类反应通常被称为Suzuki反应且是本领域熟知的。尽管Suzuki反应描绘于方案B中，应理解形成偶联反应的其它碳-碳键可与具有Y的式6化合物而非硼酸或酯一起使用以产生式I化合物。
在方案B、步骤2中，使得式7化合物与适当的式4化合物接触以得到式8化合物。适当的式4化合物和一般反应条件在上文描述于方案A、步骤2中。
可替代地，方案B、步骤3描绘了用适当的式6化合物与适当的式5化合物如上所述进行Suzuki反应以得到式8化合物。
在方案B、步骤4中，式8化合物被还原为式I化合物。此类还原是本领域熟知的。在适当的有机溶剂如二噁烷、乙醇、甲醇、异丙醇、四氢呋喃等中进行反应。反应通过使用氢和催化剂(诸如铂或钯催化剂)进行。
应理解本领域普通技术人员将认识到方案B中的步骤可经改变以提供式I化合物。特别地，产生式I化合物所需的步骤的顺序取决于正在合成的特定化合物、起始化合物及经取代部分的相对易变性。
还应理解式I的一些化合物可在未显示的另外步骤中被阐述为式I的其它化合物。式I化合物可以多种方式阐述。此类反应包括水解、氧化、还原、烷基化、酰胺化等。此外，在以上方案中未显示的任选的步骤中，式I化合物可通过本领域熟知且理解的方法被转化为药学上可接受的盐。
以下实施例意为说明性的而非限制性的，且代表本发明的特定实施方案。
在以下实施例中，获得许多化合物的质子核磁共振(NMR)光谱。特征性化学位移(δ)使用常见缩写指定主要峰(包括s(单峰)、d(双峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)和br(宽))从四甲基硅烷以百万分之一低磁场给出。除非另外指定，否则其它缩写具有其通常含义。除非另外指定，否则使用电喷射电离(ESI)或大气压化学电离记录质谱。
以下实施例在适当的容器中进行且通常进行搅拌。在指定的情况下，某些制备和实施例的产物通过HPLC纯化。在指定的情况下，制备和实施例的产物通过HPLC纯化。
HPLC方法A：泵：Shimadzu LC-8A；UV/Vis：SPD-20A；软件：LCSolution。使用PhenomenexC18,5μm,ID 30x 100mm柱且用ACN(含0.035％TFA)和水(含0.005％TFA)的梯度洗脱。除非另外指定，否则使用10％至100％ACN梯度。
HPLC方法B：泵：Waters 2525或2545；MS:ZQ；软件：MassLynx。使用XbridgeTM C18、5μm、ID 30x 75mm柱且用ACN(含0.035％TFA)和水(含0.005％TFA)的梯度洗脱。
在通过色谱分离后，去除溶剂且产物通过蒸发含产物级分(如GeneVacTM)、旋转蒸发仪、抽空烧瓶、冻干等获得。
除非另外说明，否则全文使用的缩写具有它们常见的含义。例如，使用以下缩写：ACN(乙腈)；aq(水性)；Boc或t-BOC(叔丁氧基羰基)；Cbz(苄氧羰基)；DCM(二氯甲烷)；DMSO(二甲亚砜)；TFA(三氟乙酸)；HOAc(乙酸)、MeOH(甲醇)、PE(石油醚)、EA或EtOAc(乙酸乙酯)等。
制备1(5-氯-2-氟苯基)(哌啶-4-基)甲酮
将2-溴-4-氯-1-氟苯(175μL,1.377mmol)于THF(4.59mL)中的溶液在–78℃下用n-BuLi(2.6M,741μL,1.928mmol)处理，并将反应混合物搅拌30分钟。向其中一次性添加4-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(250mg,0.918mmol)。去除冷却浴并且使所得的反应混合物升温至室温并搅拌1.5小时。通过使用于己烷中的10％EtOAc的自动快速硅胶色谱纯化得到呈黄色油状物的4-(5-氯-2-氟苯甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(287.9mg,92％)。ESI-MS m/z[M+Na]+364.20。
将4-(5-氯-2-氟苯甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(287.9mg,0.843mmol)于二噁烷(2.41mL)中的溶液用HCl(2.11mL,8.43mmol)在室温下处理并将所得的反应混合物搅拌过夜。将反应混合物用己烷稀释并通过抽吸过滤以得到呈黄色固体的作为其HCl盐的(5-氯-2-氟苯基)(哌啶-4-基)甲酮(146mg,62.3％)。ESI-MS m/z[M+H]+242.20。
制备2 4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶
向2,4-二氟苯酚(10g,77mmol)、PPh3(30.2g,115mmol)和4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(30.9g,154mmol)于THF(400mL)中的溶液在0℃下滴加DEAD(18.3mL,115mmol)。在添加完成后，使所得的混合物在40℃下搅拌16小时。将混合物倾倒至水中并用EtOAc(3x 400mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥、过滤并浓缩以得到粗产物。通过用80:1PE:EtOAc洗脱的快速硅胶色谱纯得到呈油状物的4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(20g,83％)。
将4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(20g,63.8mmol)于4:1HCl/EtOAc(250mL)中的溶液在25℃下搅拌1小时。将混合物浓缩以得到呈白色固体的作为其HCl盐的标题化合物(15.4g，97％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.84(m,2H),2.08(m,2H),3.05(m,2H),3.20(m,2H),4.57(m,1H),7.04(m,1H),7.31(m,2H),8.95(br d,2H)。
制备3 3-氟-4-(哌啶-4-基氧基)苯甲腈
将3,4-二氟苯甲腈(28g,201mmol)和4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(40.5g,201mmol)于THF(500mL)中的溶液用氢化钠(4g,100mmoL)处理并在25℃下搅拌16小时。将反应混合物用水洗涤、用EtOAc萃取，并将粗产物通过快速硅胶色谱纯化以得到4-(4-氰基-2-氟苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(25g,39％)。
将4-(4-氰基-2-氟苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(42g,131mmol)溶解于4:1HCl/EtOAc(100mL)中的溶液搅拌5小时。浓缩混合物以得到呈其HCl盐的标题化合物(12g,36％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.89(m,2H),2.14(m,2H)；3.08(m,2H),3.21(m,2H),4.86(m,1H),7.48(t,J＝8.4Hz,1H),7.70(d,J＝8.4Hz,1H),7.89(m,1H)；ESI-MS m/z[M+H]+220.7。
制备4 4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶
向4-(2,4-二氟苯甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.28g,3.93mmol)于MeOH(15.7mL)中的0℃溶液添加NaBH4(0.372g,9.84mmol)。去除冰浴并将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后用饱和水性NH4Cl淬灭。将有机层用EtOAc萃取、用H2O洗涤且经MgSO4干燥。减压去除溶剂得到呈白色吸湿性固体的4-((2,4-二氟苯基)(羟基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。
向4-((2,4-二氟苯基)(羟基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(200mg,0.611mmol)于DCM(3.055mL)中的–78℃溶液添加DAST(242μL,1.833mmol)。将混合物在–78℃下搅拌30分钟，然后用MeOH淬灭。使用于己烷中的0％至100％EtOAc的梯度的快速硅胶色谱得到呈无色油状物的4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。
向外消旋4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(148mg,0.449mmol)于二噁烷(1.50mL)中的溶液添加HCl(4M于二噁烷中，337μL,1.348mmol)。将混合物在45℃下加热16小时，然后真空浓缩，得到呈白色固体的作为其HCl盐的标题化合物(109mg,91％)。
制备5(R)-4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶
使得4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯经受手性SFC分离以得到(R)-4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。
将(R)-4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.8g,8.50mmol)溶解于EtOAc(20mL)中，并添加HCl(4M于EtOAc中，21mL)。将反应混合物在23℃下搅2小时。蒸发溶剂得到呈其HCl盐的标题化合物(2.1g,93％)。ESI-MS m/z[M+H]+229.9。
制备6(S)-4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶
使得4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
经受手性SFC分离以得到(R)-4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。标题化合物的HCl盐以类似制备5的方式使用(S)-4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯制备。ESI-MS m/z[M+H]+229.9。
制备7 4-((2-氟苯基)磺酰基)哌啶
将2-氟苯硫醇(0.764mL,7.15mmol)、4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.816g,6.5mmol)和K2CO3(1.348g,9.75mmol)于ACN(16.25mL)中的混合物在80℃下加热过夜。将反应混合物倾倒至水中且用EtOAc萃取两次。将合并的有机物经Na2SO4干燥、过滤并减压浓缩得到呈黄色油状物的4-((2-氟苯基)硫代)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.98g,98％)，其不经纯化接后使用。
将4-((2-氟苯基)硫代)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.98g,6.36mmol)于THF(54.5mL)和MeOH(18.2mL)中的溶液在0℃下用(9.77g,15.9mmol)于水(54.5mL)中的冷溶液处理。将反应混合物搅拌5小时，逐渐升温至室温。将反应混合物倾倒至水中且用EtOAc萃取两次。将合并的有机物用水洗涤，然后用饱和水性NaCl洗涤、经Na2SO4干燥、过滤、并减压浓缩。将残余物通过使用于己烷中的具有0.1％三乙胺的10％至50％EtOAc的梯度的快速硅胶色谱纯化以得到呈浅黄色油状物的4-((2-氟苯基)磺酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.31g,60％)。
将4-((2-氟苯基)磺酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.31g,3.82mmol)于二噁烷(12.7mL)中的溶液在室温下用于二噁烷(9.55ml,38.2mmol)中的4M HCl处理。使得反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物减压浓缩。将所得的白色固体用己烷研磨、过滤、收集且冻干过夜以得到呈白色固体的为其HCl盐的标题化合物(815.1mg,76％)。ESI-MS m/z[M+H]+243.95。
制备8 4-((2-氟-4-甲氧基苯基)磺酰基)哌啶
将2,4-二氟苯硫醇(0.810mL,7.15mmol)、4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.816g,6.5mmol)和K2CO3(1.348g,9.75mmol)于ACN(16.25mL)中的混合物在80℃下加热过夜。将反应混合物倾倒至水中且用EtOAc萃取两次。将有机层经Na2SO4干燥、过滤、并减压浓缩以得到呈黄色油状物的4-((2,4-二氟苯基)硫代)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.141g)，其不经纯化接后使用。
将4-((2,4-二氟苯基)硫代)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.141g,6.50mmol)于THF/MeOH(3:1,74mL)中的溶液在0℃下用(9.99g,16.25mmol)于水(56mL)中的冷溶液处理。使得反应混合物搅拌过夜、逐渐升温至室温。将反应混合物倾倒至水中且用EtOAc萃取两次。将合并的有机物用水洗涤，然后用饱和水性NaCl洗涤、经Na2SO4干燥、过滤、并减压浓缩。将残余物通过使用于己烷中的具有0.1％三乙胺的10％至40％EtOAc的梯度的快速硅胶色谱纯化以得到呈白色固体的4-((2,4-二氟苯基)磺酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.32g,56％)。ESI-MS m/z[M+Na]+383.80。
向4-((2,4-二氟苯基)磺酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(50mg,0.138mmol)于MeOH(461μL)中的悬浮液滴加甲醇钠(25.6μL,0.138mmol,5.4M于MeOH中)。使得反应混合物在45℃下搅拌20分钟，然后真空浓缩。Boc去保护通过添加HCl(138μL,0.553mmol,4M于二噁烷中)至于300μL二噁烷中的粗反应混合物进行。在50℃下搅拌24小时、然后真空浓缩产生呈白色固体的为其HCl盐的标题化合物(57mg)(10:1区域异构体混合物)。ESI-MS m/z[M+H]+274.00。
制备9 4-((3-氟苯基)磺酰基)哌啶
将4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.0g,3.58mmol)、K2CO3(0.742g,5.37mmol)和3-氟苯硫醇(0.363mL,4.30mmol)于ACN(7.5mL)中的混合物在23℃下搅拌5分钟。将反应混合物在80℃下搅拌17小时、冷却至23℃且在EtOAc与水之间分配。分离各层，将有机相用盐水洗涤、经Na2SO4干燥、过滤、用EtOAc冲洗且真空干燥，得到呈黄色油状物的4-((3-氟苯基)硫代)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.115g,100％)。ESI-MS m/z[M+H]+255.9。
将碱性氧化铝(3.0g,29.4mmol)于水(0.6mL)中的混合物在23℃下搅拌5分钟。接着，添加ACN(12mL)，然后添加4-((3-氟苯基)硫代)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.115g,3.58mmol)于CHCl3(8mL)中的溶液。接着，添加(6.60g,10.74mmol)并将反应混合物在60℃下搅拌19小时。将反应混合物冷却至23℃、过滤、用CHCl3冲洗，并将滤液用水(10mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥、过滤、用CHCl3冲洗且真空干燥。将粗残余物溶解于甲苯(5mL)中且经由使用具有于庚烷中的0.1％三乙胺的10％至100％EtOAc的梯度的中压色谱在80g硅胶柱(Single StepTM)上纯化，得到呈白色固体的4-((3-氟苯基)磺酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.769g,62.5％)。ESI-MS m/z[M+Na]+365.9。
向4-((3-氟苯基)磺酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(756mg,2.201mmol)于二噁烷(5.0mL)中的溶液在23℃下添加HCl(4M于二噁烷中，5.50mL,22.01mmol)。将反应物在23℃下搅拌21小时以提供白色悬浮液。将所得的固体过滤、用二噁烷冲洗且真空干燥以得到呈白色固体的为其HCl盐的标题化合物(582.6mg,95％)。ESI-MS m/z[M+H]+243.9。
制备10 4-((3-甲氧基苯基)磺酰基)哌啶
呈其HCl盐的标题化合物以类似于制备9的方式制备，除了使用另外的氯仿在第二步中来替代ACN之外。ESI-MS m/z[M+H]+255.9。
制备10 4-((4-氟苯基)磺酰基)哌啶
将4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.42g,5.08mmol)、4-氟苯硫醇(0.663ml,6.10mmol)和K2CO3(1.054g,7.62mmol)于ACN(12.71mL)中的混合物在85℃下搅拌过夜。将反应混合物通过抽吸过滤且去除溶剂，得到呈白色固体的4-((4-氟苯基)硫代)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.5g,95％)。
将4-((4-氟苯基)硫代)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.5g)于水(16.06mL)和MeOH(16.06mL)中的溶液用(5.92g,9.63mmol)在室温下处理，且将所得的反应混合物搅拌6小时。将溶液通过抽吸过滤且去除溶剂，得到呈白色固体的4-((4-氟苯基)磺酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.6g,4.66mmol,97％产率)。
将4-((4-氟苯基)磺酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(32.7mg,0.095mmol)于二噁烷(238μL)中的溶液在室温下用HCl(4M于二噁烷中,190μL,0.762mmol)处理，且将所得的反应混合物搅拌4小时。去除溶剂得到呈白色固体的为其HCl盐的标题化合物(25mg,94％)。ESI-MS m/z[M+H]+243.95。
制备11 1-(2,4-二氟苄基)哌嗪
将哌嗪(26.5g,308mmol)于THF(350mL)中的混合物加热至70℃且添加1-(氯甲基)-2,4-二氟苯(5g,30.8mmol)。将悬浮液在70℃下加热过夜。将固体(哌嗪)滤掉且减压去除溶剂。将残余物在EtOAc与水之间分配。将有机层干燥且浓缩以得到标题化合物(6g,92％)。ESI-MS m/z[M+H]+213.04。
制备12 4-(2-氟-4-甲氧基苯氧基)哌啶
将4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.496g,12.03mmol)于THF(33.4mL)中的溶液在室温下用2-氟-4-甲氧基苯酚(1.181mL,10.03mmol)和三苯基膦(3.16g,12.03mmol)处理。将反应混合物冷却至0℃且经由注射器滴加DEAD(40wt％于甲苯中，5.95mL,15.04mmol)。将所得的反应混合物在65℃下搅拌5小时，然后在室温下搅拌过夜。使用于己烷中的10％至100％EtOAc的梯度的快速硅胶色谱得到呈浅黄色油状物的4-(2-氟-4-甲氧基苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.78g,85％)。ESI-MS m/z[M+Na]+348.2。
将4-(2-氟-4-甲氧基苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.78g,8.54mmol)于二噁烷(21.36mL)中的溶液在室温下用HCl(4M于二噁烷中，21.36mL,85mmol)处理，并将所得反应混合物搅拌过夜。使用于DCM中的5％至30％MeOH的梯度的快速硅胶色谱得到呈白色固体的为其HCl盐的标题化合物(1.7g,76％)。ESI-MS m/z[M+H]+226.20。
制备13 4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶
向4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(250mg,1.242mmol)于THF(4.14mL)中的溶液添加4-氯-2-氟苯酚(0.15mL,1.366mmol)和三苯基膦(391mg,1.491mmol)。将混合物冷却至0℃且滴加DEAD(0.81mL,2.050mmol)(40％wt于甲苯中)。将混合物加热至65℃持续15小时。将材料浓缩且经由快速柱色谱(0-100％EtOAc于己烷中)纯化以得到4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(270mg,65％)。ESI-MS m/z[M+H]+330.1。
向4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(270mg,0.819mmol)于二噁烷(2.73mL)中的溶液添加HCl(4N于二噁烷中，1.0mL,4.09mmol)。将混合物在40℃下搅拌1.5小时，然后浓缩以得到呈白色固体的标题化合物的HCl盐(200mg,92％)。ESI-MS m/z[M+H]+230.1。
制备14 5-氯-6-(环丙基氨基)吡嗪-2,3-二甲腈
向5,6-二氯吡嗪-2,3-二甲腈(10.48g,52.7mmol)于THF(263ml)中的溶液在0℃下添加环丙胺(4.06mL,57.9mmol)。使得所得的明黄色反应混合物缓慢升温至23℃并搅拌过夜。将反应混合物倾倒至水上并用EtOAc(3x 250mL)萃取。将有机层合并、经无水MgSO4干燥、过滤且真空去除溶剂。将粗产物通过快速柱色谱(10-100％EtOAc于己烷中)纯化以得到呈黄色固体的标题化合物(5.9g,51.0％)。ESI-MS m/z[M+H]+220.0。
制备15 5-氯-6-(异丙基氨基)吡嗪-2,3-二甲腈
将标题化合物制备并以与制备14类似的方式使用异丙胺替代环丙胺来制备。将粗物质通过快速柱色谱(10-100％EtOAc于己烷中)纯化以得到标题化合物(72％产率)。ESI-MS m/z[M+H]+222.0。
制备16 5,6-二氯吡嗪-2-甲酸甲酯
将6-溴-5-羟基吡嗪-2-甲酸甲酯(3g,12.87mmol)和POCl3(40mL)的溶液在回流下加热3小时且随后用冰淬灭。将混合物用DCM萃取且将有机层合并、浓缩且经由快速色谱(0-100％EtOAc于庚烷中)纯化以得到标题化合物(2.0g,75％)。ESI-MS m/z[M+H]+208.0。
制备17 6-氯-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸甲酯
将5,6-二氯吡嗪-2-甲酸甲酯(5.75g,27.8mmol)和丙-2-胺(11.83mL,139mmol)于二噁烷(185mL)中的溶液在23℃下搅拌2小时。将混合物倾倒至水和盐水中，然后用EtOAc(1x 100mL)和DCM(2x 100mL)萃取。将有机层合并、经无水MgSO4干燥、过滤且去除溶剂以得到呈褐色固体的粗标题化合物(5.79g,91％)。ESI-MS m/z[M+H]+230.9。
制备18 6-氯-5-(环丙基氨基)吡嗪-2-甲酸甲酯
标题化合物以与17的制备类似的方式使用环丙胺替代异丙胺来制备和纯化。去除溶剂得到呈白色固体的粗标题化合物(88％产率)。ESI-MS m/z[M+H]+228.1。
制备19 6-氯-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸
向具有搅拌棒的50mL RB烧瓶添加于二噁烷(50mL)中的6-氯-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸甲酯(2.0g,8.71mmol)和1N氢氧化钠(43.5mL,43.5mmol)。将反应混合物在23℃下搅拌2小时并浓缩以提供黄色固体。将粗物质用乙腈(100mL)研磨并添加浓HCl以调节pH＝3。将所得的白色沉淀通过过滤收集为标题化合物(2.2g,100％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 1.23(d,J＝6.35Hz,6H),2.51(dt,J＝3.54,1.89Hz,3H),4.30(dt,J＝8.05,6.47Hz,1H),7.46(d,J＝8.30Hz,1H),8.60(s,1H)；ESI-MS m/z[M+H]+216.5。
20的制备6-氯-5-(异丙基氨基)-N,N-二甲基吡嗪-2-甲酰胺
在氮气下合并6-氯-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸(1.3g,6.03mmol)、二甲胺盐酸盐(0.541g,6.63mmol)、HATU(2.292g,6.03mmol)和DIPEA(4.21mL,24.11mmol)于DMF(50mL)中。将溶液在23℃下搅拌2小时、用盐水(100mL)淬灭且用乙酸乙酯(100mL x 2)萃取。分离有机层、用无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。通过快速柱色谱(30％EtOAc于庚烷中)纯化得到标题化合物(0.9g,61.5％)；ESI-MS m/z[M+H]+243.4。
制备21 6-氯-5-(异丙基氨基)-N-甲基吡嗪-2-甲酰胺
以类似20的制备的方式使用甲胺盐酸盐替代二甲胺盐酸盐来制备和纯化标题化合物。通过快速柱色谱(30％EtOAc于庚烷中)纯化得到呈浅黄色固体的标题化合物(64％产率)。ESI-MS m/z[M+H]+229.5
制备22 6-氯-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲腈
向6-氯-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸甲酯(530mg,2.308mmol)于MeOH(11.5mL)中的溶液在23℃下添加NH4OH(21.0mL,178mmol)。将所得的反应混合物在80℃下加热1小时。去除溶剂后，将残余物通过快速柱色谱(50％EtOAc于庚烷中)纯化以得到呈黄色固体的6-氯-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酰胺(326.5mg,66％)。ESI-MS m/z[M+H]+215.0。
将6-氯-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酰胺(326mg,1.519mmol)和TEA(1.69mL,12.15mmol)于DCM(7.59mL)中的溶液经由注射器在23℃下逐滴用三氟乙酸酐(0.858mL,6.07mmol)处理，并将所得的橘色反应混合物搅拌3小时。在去除溶剂后，将残余物通过快速柱色谱(5-25％EtOAc于庚烷中)纯化以得到呈黄色固体的标题化合物(300mg,100％)。ESI-MS m/z[M+H]+197.0。
制备23 6-氯-5-(环丙基氨基)吡嗪-2-甲腈
以类似22的制备的方式使用6-氯-5-(环丙基氨基)吡嗪-2-甲酸甲酯替代6-氯-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸甲酯来制备和纯化标题化合物。通过快速柱色谱(5-50％EtOAc于庚烷中)纯化得到呈白色固体的标题化合物(85％产率)。ESI-MS m/z[M+H]+195.1。
制备24 6-氯-5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-N,N-二甲基吡嗪-2-甲酰胺
将5,6-二氯吡嗪-2-甲酸甲酯(400mg,1.932mmol)、碳酸铯(1259mg,3.86mmol)和4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶盐酸盐(386mg,1.546mmol)于二噁烷(20mL)中的混合物在120℃下加热1小时。去除溶剂后，将残余物通过快速柱色谱(10-50％EtOAc于庚烷中)纯化以得到6-氯-5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲酸甲酯(451.4mg,60.9％)。ESI-MS m/z[M+H]+384.0。
向6-氯-5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲酸甲酯(451.4mg,1.176mmol)于MeOH(10mL)中的溶液在23℃下添加1N NaOH的溶液(3.53mL,3.53mmol)。将反应混合物在该温度下搅拌2小时。真空去除MeOH，然后将溶液用1N HCl酸化至pH＝3。将混合物用EtOAc(10mL x 3)萃取，并将有机层经无水Na2SO4干燥、过滤并浓缩以得到粗6-氯-5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲酸(600mg)，其不经进一步纯化就使用。ESI-MS m/z[M+H]+370.0。
将6-氯-5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲酸(600mg,1.62mmol)、二甲胺盐酸盐(265mg,3.25mmol)、HATU(926mg,2.43mmol)和DIPEA(1.134ml,6.49mmol)于DMF(10.0mL)中的溶液在氮气下在23℃下搅拌2小时。真空去除溶剂，然后将残余物溶解于DCM中、用H2O洗涤、经无水Na2SO4干燥并过滤。真空去除溶剂得到粗标题化合物(700mg)，其不经进一步纯化就使用。ESI-MS m/z[M+H]+397.0。
制备25 6-氯-5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲腈
将5,6-二氯吡嗪-2-甲酸甲酯(500mg,2.415mmol)、4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶盐酸盐(680mg,2.72mmol)和TEA(1.010mL,7.25mmol)于DCM(20mL)中的混合物在120℃加热3小时。将混合物倾至水中并用EtOAc萃取。将有机层浓缩以得到粗6-氯-5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲酸甲酯(950mg,102％)，其直接用于下一步中而不经进一步纯化。ESI-MS m/z[M+H]+383.8。
将6-氯-5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲酸甲酯(800mg,2.085mmol)和NH4OH(20mL,154mmol)于MeOH(20mL)中的混合物在90℃下加热16小时。将混合物倾至水中并用EtOAc萃取。将有机层浓缩以得到粗6-氯-5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲酰胺(650mg,85％)。
向6-氯-5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲酰胺(250mg,0.678mmol)和TEA(0.425mL,3.05mmol)于DCM(15mL)中的溶液在0℃下滴加TFAA(0.192mL,1.356mmol)。然后使得反应溶液升温至23℃持续2小时。将混合物倾至水中并用DCM萃取。真空浓缩有机层至粗标题化合物(220mg,93％)。ESI-MS m/z[M+H]+350.8。
制备26 6-氯-5-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲腈
标题化合物以类似于25的制备的方式使用5,6-二氯吡嗪-2-甲酸叔丁酯和4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶盐酸盐作为反应底物来制备和纯化。粗产物通过快速柱色谱(20％EtOAc于庚烷中)纯化以得到呈黄色油状物的标题化合物(66.7％产率)。ESI-MS m/z[M+H]+368.8。
制备27 6-氯-5-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲腈
标题化合物以类似于25的制备的方式使用5,6-二氯吡嗪-2-甲酸酯和4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶盐酸盐作为反应底物制备和纯化以得到呈其游离碱的6-氯-5-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲腈(30％产率，经3个步骤)。
制备28和29(S)-6-氯-5-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲腈和(R)-6-氯-5-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲腈
来自以上步骤的外消旋6-氯-5-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲腈(240mg,0.654mmol)通过手性SFC分离分离以得到(S)-6-氯-5-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲腈(120mg,50.0％)和(R)-6-氯-5-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲腈(100mg,41.7％)。
30的制备3,6-二氯-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲腈
向3,5,6-三氯吡嗪-2-甲腈(5g,23.99mmol)于二噁烷(20mL)中的溶液在0℃下在氮气下添加丙-2-胺(4.09mL,48.0mmol)。将反应溶液在23℃下搅拌4小时，然后用盐水(300mL)淬灭并用乙酸乙酯(2x 200mL)萃取。将有机层合并、经无水MgSO4干燥、过滤并浓缩。将残余物经由快速柱色谱(5-30％EtOAc于庚烷中)纯化以得到标题化合物(5g,90％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 1.23(d,J＝6.83Hz,6H)4.22(dt,J＝8.05,6.47Hz,1H)8.27(d,J＝7.81Hz,1H)；ESI-MS m/z[M+H]+231.0。
实施例1 5-(环丙基氨基)-6-(4-(2,4-二氟苄基)哌嗪-1-基)吡嗪-2,3-二甲腈
将1-(2,4-二氟苄基)哌嗪盐酸盐(400mg,1.608mmol)、5-氯-6-(环丙基氨基)吡嗪-2,3-二甲腈(353mg,1.608mmol)和DIPEA(702μL,4.02mmol)于DCM(16.1mL)中的溶液在23℃下搅拌4小时。在真空去除溶剂后，将粗产物通过快速柱色谱(0-10％MeOH于DCM中)纯化以得到呈黄色固体的标题化合物(456mg,71.7％)。ESI-MS m/z[M+H]+396.0。
实施例2 5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)吡嗪-2,3-二甲腈
标题化合物以类似于实施例1的方式使用4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶盐酸盐和5-氯-6-(异丙基氨基)吡嗪-2,3-二甲腈作为反应底物制备和纯化。真空去除溶剂得到粗产物(99％产率)，其不经进一步纯化就使用。
实施例3：5-(4-(5-氯-2-氟苯甲酰基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)吡嗪-2,3-二甲腈
标题化合物以类似于制备1的方式使用(5-氯-2-氟苯基)(哌啶-4-基)甲酮盐酸盐和5-氯-6-(异丙基氨基)吡嗪-2,3-二甲腈作为反应底物制备和纯化。真空去除溶剂以得到粗标题化合物，其不经进一步纯化就使用。ESI-MS m/z[M+H]+427.0。
实施例4(R)-5-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)吡嗪-2,3-二甲腈
标题化合物以类似于制备1的方式使用(R)-4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶盐酸盐和5-氯-6-(异丙基氨基)吡嗪-2,3-二甲腈作为反应底物制备和纯化。去除溶剂得到呈黄色固体的粗标题化合物(96％产率)，其不经进一步纯化就直接用于下一步骤中。ESI-MS m/z[M+H]+415.0
实施例5 5-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)吡嗪-2,3-二甲腈
向5,6-二氯吡嗪-2,3-二甲腈(150mg,0.754mmol)于DCM(7.5mL)中的溶液在0℃下缓慢添加丙-2-胺(64.8μL,0.754mmol)，然后添加DIPEA(395μL,2.261mmol)。将反应溶液在该温度下搅拌1小时，然后添加4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶盐酸盐(281mg,1.055mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌2小时，然后升温至23℃持续2小时。在真空去除溶剂后，将粗产物通过快速柱色谱(0-60％EtOAc于庚烷中)纯化以得到呈黄色固体的标题化合物的其游离碱(212mg,67.8％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 1.20(d,J＝6.35Hz,6H),1.83(dtd,J＝12.63,8.45,8.45,3.66Hz,2H),2.05(ddd,J＝9.64,6.71,3.66Hz,2H),3.23(ddd,J＝12.94,9.03,3.42Hz,2H),3.54-3.63(m,2H),4.15-4.25(m,1H),4.70(dt,J＝7.81,3.91Hz,1H),7.22(dq,J＝8.85,1.44Hz,1H),7.29-7.36(m,1H),7.39-7.49(m,2H),8.10-8.10(m,1H)ESI-MS m/z[M+H]+414.85。
实施例6 5-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶-1-基)-3-氰基-6-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸和6-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶-1-基)-3-氰基-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸
及
向5-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)吡嗪-2,3-二甲腈(150mg,0.362mmol)于MeOH(1.0mL)和二噁烷(2.0mL)中的溶液添加2N KOH溶液(0.362mL,0.723mmol)。将反应溶液在23℃下搅拌4小时。然后添加3.0mL 1N HCl溶液以调节pH＝1-2。搅拌持续2小时。在真空去除溶剂混合物后，将粗产物通过快速柱色谱(10-60％EtOAc于庚烷中)纯化以得到呈黄色油状物的5-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶-1-基)-3-氰基-6-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸甲酯和6-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶-1-基)-3-氰基-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸甲酯(148mg,91％)的混合物。[M+H]+447.9。
向5-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶-1-基)-3-氰基-6-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸甲酯和6-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶-1-基)-3-氰基-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸甲酯(132mg,0.295mmol)的混合物于二噁烷(2.0mL)中的溶液添加2N KOH溶液(184μL,0.368mmol)。将反应混合物在23℃下搅拌2小时。然后1N HCl溶液用于调节pH＝3-4。真空去除溶剂混合物后，得到标题化合物的混合物(154mg,83wt％的所需产物)，其在高真空下干燥5小时且不经纯化直接用于下一步中。ESI-MS m/z[M+H]+433.9。
实施例7 3-氰基-6-(环丙基氨基)-5-(4-(2,4-二氟苄基)哌嗪-1-基)吡嗪-2-甲酸和3-氰基-5-(环丙基氨基)-6-(4-(2,4-二氟苄基)哌嗪-1-基)吡嗪-2-甲酸
及
标题化合物以类似于实施例6的方式使用5-(环丙基氨基)-6-(4-(2,4-二氟苄基)哌嗪-1-基)吡嗪-2,3-二甲腈替换5-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)吡嗪-2,3-二甲腈制备和纯化。标题化合物获得为两个区域异构体的粗混合物，其不经纯化直接用于下一步中。ESI-MS m/z[M+H]+415.0。
实施例8 3-氰基-5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸和3-氰基-6-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸
及
标题化合物以类似于实施例6的方式使用5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)吡嗪-2,3-二甲腈替代5-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)吡嗪-2,3-二甲腈制备和纯化。标题化合物获得为两个区域异构体的粗混合物，其不经纯化直接用于下一步中。
实施例9 5-(4-(5-氯-2-氟苯甲酰基)哌啶-1-基)-3-氰基-6-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸和6-(4-(5-氯-2-氟苯甲酰基)哌啶-1-基)-3-氰基-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸
及
标题化合物以类似于实施例6的方式使用5-(4-(5-氯-2-氟苯甲酰基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)吡嗪-2,3-二甲腈替代5-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)吡嗪-2,3-二甲腈来制备和纯化。标题化合物获得为两个区域异构体的粗混合物，其不经纯化直接用于下一步中。ESI-MS m/z[M+H]+446.0。
实施例10：(R)-3-氰基-5-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸和(R)-3-氰基-6-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸
及
标题化合物以类似于实施例6的方式使用(R)-5-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)吡嗪-2,3-二甲腈替代5-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)吡嗪-2,3-二甲腈来制备和纯化。标题化合物获得为两种区域异构体的粗(1:1)混合物(83％产率)，其不经进一步纯化直接用于下一步中。
实施例11 6-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)-吡嗪-2-甲酸
向6-氯-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸甲酯(300mg,1.306mmol)和4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶(418mg,1.959mmol)于DMSO(10mL)中的搅拌溶液滴加TEA(0.55mL,3.92mmol)。将所得的混合物在120℃下搅拌5小时。将混合物倾至水中并用EtOAc萃取。将有机层浓缩以得到6-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸甲酯，其不经进一步纯化就使用。ESI-MS m/z[M+H]+407.0。
向6-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸甲酯(350mg,0.861mmol)于MeOH(10ml)中的溶液添加2N NaOH溶液(20mL)。将所得的溶液在23℃下搅拌12小时。真空浓缩反应溶液，然后倾倒至水(10mL)中、用2N HCl酸化以调节pH＝3，然后用EtOAc(2x 20mL)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥、过滤且浓缩以得到粗产物。通过快速柱色谱(10-70％EtOAc于己烷中)纯化得到呈黄色油状物的标题化合物(280mg,83％)。ESI-MS m/z[M+H]+393.0。
实施例12 3-氯-6-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲腈
将2,2'-双(联苯基膦基)-1,1'-联二萘(4.31g,6.92mmol)、二乙酰氧基钯(0.777g,3.46mmol)、Cs2CO3(16.92g,51.9mmol)、4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶盐酸盐(6.48g,26.0mmol)和3,6-二氯-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲腈(4g,17.31mmol)于甲苯(10mL)中的混合物在微波下在100℃下加热30分钟。将反应用相同的量且在相同的条件下对8个批次重复。将批次合并、浓缩且经由快速柱色谱(10-30％EtOA于庚烷中)纯化、然后SFC纯化以得到呈固体的标题化合物(900mg,13％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 1.21(d,J＝6.35Hz,6H),1.62-1.83(m,2H),1.96-2.13(m,2H),3.45-3.62,(m,2H),3.98(ddd,J＝13.30,6.47,3.66Hz,2H),4.17(dd,J＝14.16,6.35Hz,1H),4.60(dt,J＝7.81,3.91Hz,1H),6.94-7.10(m,1H),7.24-7.39(m,2H),7.47(d,J＝7.81Hz,1H)。ESI-MS m/z[M+H]+408.4。
实施例13 5-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶-1-基)-3-氰基-6-(异丙基氨基)-N,N-二甲基吡嗪-2-甲酰胺
向5-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶-1-基)-3-氰基-6-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸和6-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶-1-基)-3-氰基-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸(50mg,0.096mmol的混合物于DMF(0.96mL)中的溶液在23℃下添加HATU(36.4mg,0.096mmol)和DIPEA(50.1μL,0.287mmol)。将反应溶液搅拌10分钟后，添加二甲胺(96μL,0.191mmol)。然后将所得的溶液在23℃下搅拌2小时。将粗产物通过HPLC使用方法A纯化、然后通过SFC纯化，得到呈黄色固体膜的标题化合物的游离碱(5.4mg,12％)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 1.28(d,J＝6.35Hz,6H),1.94-2.02(m,2H),2.12-2.20(m,2H),3.05(s,3H),3.12-3.19(m,2H),3.14(s,3H),3.47-3.54(m,2H),4.30(spt,J＝6.59Hz,1H),4.59(tt,J＝7.38,3.60Hz,1H),7.10-7.15(m,1H),7.16-7.23(m,2H)ESI-MS m/z[M+H]+460.9。
实施例14：3-氰基-6-(环丙基氨基)-5-(4-(2,4-二氟苄基)哌嗪-1-基)-N,N-二甲基吡嗪-2-甲酰胺
标题化合物以类似于实施例13的方式使用3-氰基-6-(环丙基氨基)-5-(4-(2,4-二氟苄基)哌嗪-1-基)吡嗪-2-甲酸和3-氰基-5-(环丙基氨基)-6-(4-(2,4-二氟苄基)哌嗪-1-基)吡嗪-2-甲酸的混合物作为底物来制备和纯化。获得呈白色固体的为其游离碱的标题化合物(11％产率)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 0.61-0.69(m,2H),0.79-0.91(m,2H),2.81(tt,J＝7.20,3.78Hz,1H),3.09(s,3H),3.12-3.29(m,2H),3.15(s,3H),3.36-4.00(m,6H),4.49(s,2H),7.09-7.28(m,2H),7.67(td,J＝8.54,6.35Hz,1H)ESI-MS m/z[M+H]+442.0。
实施例15和16 3-氰基-5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)-N,N-二甲基吡嗪-2-甲酰胺
和3-氰基-6-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)-N,N-二甲基吡嗪-2-甲酰胺
及
标题化合物以类似于实施例13的方式使用3-氰基-5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸和3-氰基-6-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸的混合物作为底物来制备和纯化。粗物质通过使用方法A的HPLC纯化，然后进行SFC分离以得到呈灰白色固体的3-氰基-5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)-N,N-二甲基吡嗪-2-甲酰胺(14.5％产率)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)ppm 1.23-1.30(m,6H)1.86-2.00(m,3H)2.06-2.17(m,2H)2.98-3.17(m,7H)3.46-3.54(m,1H)3.58-3.66(m,1H)4.21-4.34(m,1H)4.50(td,J＝7.44,3.66Hz,1H)6.83-6.90(m,1H)6.95-7.03(m,1H)7.14-7.22(m,1H)；ESI-MS m/z[M+H]+445.0；和呈白色固体的3-氰基-6-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)-N,N-二甲基吡嗪-2-甲酰胺(2.0％产率)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 1.27(d,J＝6.83Hz,6H),1.83-2.00(m,2H),2.03-2.19(m,2H),3.02-3.18(m,6H),3.27-3.35(m,2H),3.49-3.70(m,2H),4.25(t,J＝6.35Hz,1H),4.46-4.56(m,1H),6.77-6.93(m,1H),6.98(ddd,J＝11.35,8.42,3.17Hz,1H,)7.17(td,J＝9.28,5.37Hz,1H)；ESI-MS m/z[M+H]+445.4。
实施例17 5-(4-(5-氯-2-氟苯甲酰基)哌啶-1-基)-3-氰基-6-(异丙基氨基)-N,N-二甲基吡嗪-2-甲酰胺
标题化合物以类似于实施例13的方式使用5-(4-(5-氯-2-氟苯甲酰基)哌啶-1-基)-3-氰基-6-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸和6-(4-(5-氯-2-氟苯甲酰基)哌啶-1-基)-3-氰基-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸的混合物作为底物制备和纯化。标题化合物通过使用方法B的HPLC纯化以得到呈灰白色固体的其TFA盐(44％产率)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)ppm 1.22-1.29(m,6H)1.85-1.96(m,2H)1.96-2.06(m,2H)2.89-2.97(m,2H)3.03(s,3H)3.09-3.15(m,3H)3.33-3.41(m,1H)3.58-3.65(m,2H)4.28(t,J＝6.35Hz,1H)7.28(dd,J＝10.25,8.79Hz,1H)7.57-7.63(m,1H)7.73-7.78(m,1H)ESI-MS m/z[M+H]+473.0。
实施例18：(R)-3-氰基-5-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-6-(异丙基氨基)-N-甲基吡嗪-2-甲酰胺
标题化合物以类似于实施例13的方式使用(R)-3-氰基-5-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸化合物和(R)-3-氰基-6-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸(1:1)及N1,N1,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺的混合物作为反应底物制备和纯化。通过用50:1至15:1DCM:MeOH洗脱的快速柱色谱纯化、然后进行SFC纯化以得到呈灰白色固体的标题化合物(17％产率)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm1.27(d,J＝5.2Hz,6H),1.57-1.60(m,2H),3.57(br.s.,8H),4.48(s,2H),4.66(quin,J＝6.59Hz,1H),7.11-7.24(m,2H),7.61(s,1H),7.68(td,J＝8.54,6.35Hz,1H),8.83(s,1H)；ESI-MS m/z[M+H]+518.1。
实施例19：6-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)-N,N-二甲基吡嗪-2-甲酰胺
将6-氯-5-(异丙基氨基)-N,N-二甲基吡嗪-2-甲酰胺(50mg,0.206mmol)、DIPEA(0.144ml,0.824mmol)和4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶盐酸盐(103mg,0.412mmol)于二噁烷(2.0mL)中的混合物在180℃下在微波中加热4小时。将混合物通过使用方法A的HPLC纯化以得到呈黄色膜的为其TFA盐的标题化合物(10mg,12％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 1.21(d,J＝6.35Hz,6H),1.77-1.97(m,2H,)2.07(br.s.,2H),2.81-3.00(m,2H),3.15(d,J＝19.53Hz,2H),3.38(m,6H),4.22(dd,J＝14.40,6.59Hz,1H),4.54(dt,J＝7.93,4.09Hz,1H),6.11(d,J＝8.30Hz,1H),6.93-7.08(m,1H),7.21-7.43(m,2H),8.01(s,1H)；ESI-MS m/z[M+H]+420.4。
实施例20 6-(4-(5-氯-2-氟苯甲酰基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)-N,N-二甲基吡嗪-2-甲酰胺
6-(4-((5-氯-2-氟苯基)(羟基)甲基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)-N,N-二甲基吡嗪-2-甲酰胺以类似于实施例19的方式使用(5-氯-2-氟苯基)(哌啶-4-基)甲醇替代4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶盐酸盐制备和纯化。通过使用方法A的HPLC纯化得到呈白色固体的为其TFA盐的6-(4-((5-氯-2-氟苯基)(羟基)甲基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)-N,N-二甲基吡嗪-2-甲酰胺(47mg,85％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)ppm 1.09-1.29(m,6H)1.36(d,J＝12.69Hz,1H)1.48-1.72(m,2H)1.81(d,J＝12.20Hz,1H),2.53-2.55(m,2H,)2.94(s,3H)3.10(s,3H)3.31-3.48(m,2H)4.19(dd,J＝14.40,6.59Hz,1H)4.65(d,J＝6.35Hz,1H)5.98(d,J＝8.30Hz,1H)7.15-7.32(m,1H)7.32-7.42(m,1H)7.48(dd,J＝6.10,2.69Hz,1H)7.98(s,1H).；ESI-MS m/z[M+H]+450.3。
向6-(4-((5-氯-2-氟苯基)(羟基)甲基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)-N,N-二甲基吡嗪-2-甲酰胺(42mg,0.093mmol)于DCM(5mL)中的溶液添加戴斯-马丁高碘物(Dess-Martin Periodinane)(99mg,0.233mmol)。将反应溶液在23℃下搅拌2小时。将混合物过滤且通过使用方法A的HPLC纯化两次以得到呈透明膜的为其TFA盐的标题化合物(0.5mg,1.0％)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 1.29(m,6H),1.93(m,2H,)2.02(m,2H),2.65(m,2H),3.16(m,2H),3.33-3.34(m,6H),4.33(m,1H),4.61(m,1H),7.26(m,1H),7.29(m,1H),7.74(m,2H),8.07(s,1H)；ESI-MS m/z[M+H]+450.3。
实施例21(R)-6-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)-N-甲基吡嗪-2-甲酰胺
标题化合物以类似于实施例19的方式使用(R)-4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶盐酸盐和6-氯-5-(异丙基氨基)-N-甲基吡嗪-2-甲酰胺作为反应底物制备和纯化。获得呈白色固体的为其TFA盐的标题化合物(11％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 1.20(d,J＝6.35Hz,6H),1.34(d,J＝12.69Hz,1H),1.49-1.78(m,2H),1.93(d,J＝12.20Hz,1H),2.09(br.s.,1H),2.60-2.76(m,2H),2.77(d,J＝4.88Hz,3H),3.22-3.55(m,2H,)4.20-4.24(m,1H,)5.45-5.68(m,1H),6.13(d,J＝8.30Hz,1H),7.20(t,J＝8.30Hz,1H),7.34(t,J＝10.01Hz,1H),7.51-7.65(m,1H),7.94(d,J＝4.88Hz,1H),8.21(s,1H)；ESI-MS m/z[M+H]+422.2。
实施例22(S)-6-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)-N-甲基吡嗪-2-甲酰胺
标题化合物以类似于实施例19的方式使用(S)-4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶盐酸盐和6-氯-5-(异丙基氨基)-N-甲基吡嗪-2-甲酰胺作为反应底物制备和纯化。获得呈白色固体的为其TFA盐的标题化合物(14％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)ppm 1.20(d,J＝6.35Hz,6H),1.34(d,J＝11.72Hz,1H),1.49-1.78(m,2H),1.93(d,J＝13.18Hz,1H),2.09(d,J＝3.91Hz,1H),2.57-2.66(m,2H),2.76-2.77(d,J＝4.9Hz,3H),3.42-3.45(m,2H),4.19-4.26(m,1H),5.42-5.69(m,1H),6.12(d,J＝7.81Hz,1H),7.11-7.27(m,1H),7.29-7.40(m,1H),7.51-7.65(m,1H),7.94(d,J＝4.88Hz,1H),8.21(s,1H)；ESI-MS m/z[M+H]+422.2。
实施例23 6-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-N-(2-(二甲基氨基)-乙基)-5-(异丙基氨基)-N-甲基吡嗪-2-甲酰胺
向6-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲酸(65mg,0.166mmol)、N1,N1,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺(16.93mg,0.166mmol)和HATU(126mg,0.331mmol)于THF(5mL)中的溶液添加DIPEA(0.02mL,0.13mmol)。将所得的溶液在23℃下搅拌1小时。将混合物用EtOAc(10mL)萃取且用水(10mL)和盐水(2x 10mL)洗涤。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥、过滤且浓缩以得到粗产物。通过用50:1至2:1DCM/MeOH洗脱的快速柱色谱纯化得到呈白色固体的标题化合物(70mg,89％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 1.27(d,J＝5.2Hz,6H),1.57-1.60(m,2H),3.57(br.s.,8H),4.48(s,2H),4.66(quin,J＝6.59Hz,1H),7.11-7.24(m,2H),7.61(s,1H),7.68(td,J＝8.54,6.35Hz,1H),8.83(s,1H)；ESI-MS m/z[M+H]+477.1。
实施例24：(6-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-基)(3-氟氮杂环丁烷-1-基)甲酮
标题化合物以类似于实施例23的方式使用3-氟氮杂环丁烷盐酸盐替代N1,N1,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺制备。通过使用方法B的HPLC纯化得到呈浅黄色半固体的标题化合物的其TFA盐(67.5％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)ppm 1.16-1.30(m,6H)1.84-1.95(m,2H)2.09(br.s.,2H)2.91(d,J＝9.28Hz,2H)3.12-3.20(m,1H)3.34(br.s.,1H)3.96-4.09(m,1H)4.21-4.42(m,2H)4.51-4.64(m,2H)4.83-4.95(m,1H)5.32-5.52(m,1H)6.33(d,J＝8.30Hz,1H)6.99-7.06(m,1H)7.24-7.39(m,2H)8.24-8.30(m,1H)；ESI-MS m/z[M+H]+450.0。
实施例25 5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)-N,N-二甲基吡嗪-2-甲酰胺
将6-氯-5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-N,N-二甲基吡嗪-2-甲酰胺(300mg,0.756mmol)、丙-2-胺(89mg,1.512mmol)和DIPEA(391mg,3.02mmol)于二噁烷(2.0mL)中的溶液在140℃下在微波辐照下加热1小时。将反应混合物过滤并通过使用方法B的HPLC纯化以得到呈灰白色固体的标题化合物的TFA盐(29mg,9.1％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)ppm 1.16-1.22(m,6H)1.83-1.93(m,2H)2.02-2.11(m,2H)2.91-3.00(m,5H)3.04(s,3H)3.39(d,J＝3.91Hz,2H)4.07-4.16(m,1H)4.55(tt,J＝8.05,3.91Hz,1H)5.81(d,J＝7.81Hz,1H)6.99-7.06(m,1H)7.25-7.37(m,2H)7.59-7.63(m,1H)；ESI-MS m/z[M+H]+420.0。
实施例26：(R)-5-(环丙基氨基)-6-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲腈
将6-氯-5-(环丙基氨基)吡嗪-2-甲腈(2mg,10.28μmol)、(R)-4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶盐酸盐(41.1mg,0.155mmol)和DIPEA(26.6mg,0.206mmol)于二噁烷(0.34mL)中的溶液在120℃下加热10小时。将混合物通过使用方法A的HPLC纯化以得到呈褐色固体的标题化合物的TFA盐(40.6％产率)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 0.67-0.70(m,2H),0.88-0.92(m,2H),1.43-1.45(m,1H),1.42-1.74(m,2H),1.99-2.06(m,1H),2.08-2.13(m,1H),2.70-2.80(m,3H),3.32-3.60(m,2H),5.48(dd,J＝42.2,7.6Hz,1H),6.99-7.08(m,2H),7.49-7.54(m,1H),8.08(s,1H)；ESI-MS m/z[M+H]+388.3。
实施例27：6-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲腈
标题化合物以类似于实施例26的方式使用6-氯-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲腈和4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶盐酸盐作为反应底物制备和纯化。标题化合物通过使用方法A的HPLC纯化以得到呈白色固体的其TFA盐(50.0％产率)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 1.27-1.33(m,6H),1.97-2.05(m,2H),2.13-2.22(m,2H),3.17-3.24(m,2H),3.45-3.51(m,2H),4.42-4.45(m,1H),4.50-4.53(m,1H),6.91-7.01(m,1H),7.10-7.15(m,1H),7.21-7.30(m,1H),8.15(s,1H)；ESI-MS m/z[M+H]+374.3。
实施例28 5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲腈
将6-氯-5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲腈(150mg,0.428mmol)、丙-2-胺(0.728mL,8.55mmol)和TEA(0.596mL,4.28mmol)于DMSO(5.0mL)中的混合物在80℃下加热16小时。将混合物倾至水中并用EtOAc萃取。浓缩有机层，并将粗产物通过快速柱色谱(10-100％EtOAc于庚烷中)纯化以得到标题化合物(53.7mg,33.6％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm1.23(d,J＝6.4Hz,6H),1.89-1.86(m,2H),2.16-2.07(m,2H),3.10-3.06(m,2H),3.51-3.48(m,2H),4.13-4.10(m,1H),4.49-4.47(m,1H),5.23(d,J＝7.2Hz,1H),6.99-6.89(m,1H),7.01-7.00(m,1H),7.18-7.13(m,1H)。ESI-MS m/z[M+H]+373.8。
实施例29 5-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶-1-基)-6-(环丙基氨基)吡嗪-2-甲腈
标题化合物以类似于实施例28的方式使用6-氯-5-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲腈和环丙胺作为反应底物制备和纯化。获得呈白色固体的为其游离碱的标题化合物(52％产率)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm0.53-0.56(m,2H)0.86-0.91(m,2H)1.94(ddt,J＝17.33,7.44,3.72,3.72Hz,2H)2.05-2.13(m,2H)2.74-2.79(m,1H)3.08-3.14(m,2H)3.46-3.52(m,3H)4.46(tt,J＝7.26,3.48Hz,1H)5.12(br.s.,1H)6.93-6.97(m,1H)7.03-7.06(m,1H)7.12(dd,J＝10.74,2.44Hz,1H)7.92(s,1H)。ESI-MS m/z[M+H]+387.9。
实施例30(S)-5-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲腈
标题化合物以类似于实施例28的方式使用(S)-6-氯-5-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲腈作为底物替代6-氯-5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲腈来制备和纯化。标题化合物通过HPLC纯化以得到呈白色固体的其HCl盐(14.2％产率)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 1.25(d,J＝6.8Hz,6H),1.46-1.44(m,1H),1.67-1.61(m,2H),1.98-1.96(m,1H),2.03-2.01(m,1H),2.82-2.74(m,2H),3.76-3.70(m,1H),4.18-4.15(m,1H),5.50(dd,J＝48,7.2Hz,1H),7.06-6.98(m,2H),7.51-7.47(m,1H),7.79(s,1H)。ESI-MS m/z[M+H]+389.9。
实施例31：(R)-5-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)-6-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲腈
标题化合物以类似于实施例28的方式使用(R)-6-氯-5-(4-((2,4-二氟苯基)氟甲基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲腈作为底物替代6-氯-5-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲腈来制备和纯化。标题化合物通过HPLC纯化以得到呈白色固体的其HCl盐(29.7％产率)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 1.25(d,J＝6.8Hz,6H),1.46-1.44(m,1H),1.67-1.61(m,2H),1.98-1.96(m,1H),2.03-2.01(m,1H),2.82-2.74(m,2H),3.76-3.70(m,1H),4.18-4.15(m,1H),5.50(dd,J＝48,7.2Hz,1H),7.06-6.98(m,2H),7.51-7.47(m,1H),7.79(s,1H)。ESI-MS m/z[M+H]+389.9。
实施例32 6-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)-3-吗啉代吡嗪-2-甲腈
将2,2'-双(联苯基膦基)-1,1'-联二萘(12.21mg,0.020mmol)、二乙酰氧基钯(2.202mg,9.81μmol)、Cs2CO3(47.9mg,0.147mmol)、3-氯-6-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲腈(20mg,0.049mmol)和吗啉(8.54mg,0.098mmol)合并于甲苯(10mL)中。将反应混合物在微波中在120℃下加热1小时。将反应混合物过滤且通过使用方法A的HPLC纯化以得到呈棕色膜的为其TFA盐的标题化合物(4mg,18％)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 1.12-1.37(m,6H),1.94(td,J＝8.54,4.39Hz,2H),2.04-2.21(m,2H),2.88(ddd,J＝12.33,8.91,3.17Hz,2H),3.17-3.29(m,2H),3.53-3.67(m,4H),3.73-3.86(m,4H),4.15-4.31(m,1H),4.37-4.50(m,1H),6.80-6.92(m,1H),6.98(ddd,J＝11.35,8.67,2.93Hz,1H),7.17(td,J＝9.28,5.37Hz,1H)；ESI-MS m/z[M+H]+459.4。
实施例33 6-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)-3-(甲氧基甲基)吡嗪-2-甲腈
将3-氯-6-(4-(2,4-二氟苯氧基)哌啶-1-基)-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲腈(50mg,0.123mmol)、PdCl2(dppf)(8.97mg,0.012mmol)、甲氧基甲基三氟硼酸钾(74.5mg,0.490mmol)和2N Na2CO3(0.5ml)合并于二噁烷(1.0mL)中。将反应混合物在微波中在130℃下加热30分钟。将反应混合物过滤且通过使用方法A的HPLC纯化两次以得到呈黄色膜的为其TFA盐的标题化合物(6mg,10％)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)ppm 1.27(d,J＝6.35Hz,6H)1.87-2.04(m,2H)2.08-2.20(m,2H)3.05(ddd,J＝12.45,8.54,3.42Hz,2H)3.37-3.50(m,2H)4.28-4.41(m,1H)4.43-4.53(m,3H)6.80-6.93(m,1H)6.98(ddd,J＝11.35,8.66,2.93Hz,1H)7.17(td,J＝9.28,5.37Hz,1H)；ESI-MS m/z[M+H]+418.4。
实施例34 6-(4-(2,4-二氟苄基)哌嗪-1-基)-3-((2-(二甲基氨基)乙氧基)甲基)-5-(异丙基氨基)吡嗪-2-甲腈
标题化合物以与实施例33类似的方式使用2-(二甲基氨基)乙氧基甲基三氟硼酸钾替代甲氧基甲基三氟硼酸钾来制备和纯化。获得呈透明膜的为其TFA盐的标题化合物(2％产率)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 1.26-1.29(m,6H),2.94(s,6H),3.24-3.46(m,6H),3.67(s,2H),3.95-3.97(m,2H),4.38-4.39(m,1H),4.47(s,2H),4.65-4.68(m,4H),7.12-7.30(m,2H),7.67(d,J＝6.35Hz,1H)；ESI-MS m/z[M+H]+474.4。
本发明的化合物可单独施用或以药物组合物的形式施用。在实践中，本发明的化合物通常以药物组合物的形式施用，即与至少一种药学上可接受的赋形剂掺混。任何药学上可接受的赋形剂的比例和性质由本发明所选的化合物的性质、选择的使用途径和标准药物实践来确定。
在另一个实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含本发明的化合物和至少一种药学上可接受的赋形剂。
在实现需要此类治疗的患者的治疗过程中，本发明的化合物可以任何使得所述化合物可生物利用的方式和途径施用。本发明的化合物可以包括经口、特别是通过片剂和胶囊的多种途径施用。本发明的化合物可肠胃外施用，更具体地通过吸入、皮下、肌内、静脉内、动脉内、透皮、鼻内、经直肠、经阴道、经眼、局部、舌下和经颊、腹膜内、脂肪内、鞘内及经由局部递送(例如通过导管或支架)施用。
本领域的技术人员可根据所选化合物的特定特征、待治疗的病症或疾患、病症或疾患的阶段及其它相关情形容易地选择适当方式和施用途径。本发明的药物组合物可例如以以下的形式施用给患者：片剂、胶囊、扁囊剂、纸剂、锭剂、干胶片、酏剂、软膏剂、透皮贴剂、气雾剂、吸入剂、栓剂、溶液和混悬剂。
本发明的药物组合物以药物领域熟知的方式制备，并且包含至少一种本发明的化合物作为活性成分。本发明化合物的量可根据其特定形式而改变，并且可便利地为1重量％至约50重量％的单位剂型。术语“药学上可接受的赋形剂”是指通常用于制备药物组合物的那些，并且应为药学纯的且在所用的量下为无毒的。它们通常为固体、半固体或液体材料，其作为总体可用作活性成分的媒介物或介质。药学上可接受的赋形剂的一些实例见于Remington’s Pharmaceutical Sciences和the Handbook of Pharmaceutical Excipients中，且包括稀释剂、媒介物、载体、乳膏基质、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂、调味剂、凝胶基质、持续释放基质、稳定剂、防腐剂、溶剂、助悬剂、缓冲液、乳化剂、染料、助推剂、涂覆剂及其它。
本药物组合物优选被配制为单位剂型，每个剂量通常含有约0.5mg至约100mg的本发明的化合物。术语“单位剂型”是指含有预定量的活性成分结合适合的药物赋形剂的物理上分散的单位，借此一个或多个单位剂型可用于整个给药方案中以产生所需的治疗效果。可采用一个或多个“单位剂型”以实现每日计划表上的治疗剂量。
在一个特定变型中，所述组合物是适用于经口施用的药物组合物，诸如适用于经口施用片剂或胶囊或液体制剂(例如溶液或混悬剂)。在又一个特定变型中，所述药物组合物是适用于肠胃外施用的液体制剂。
本发明的化合物是GPR6的调节剂，并且因此可用于治疗和预防与GPR6相关的疾患。如上文提及，多巴胺能神经支配的主要纹状体靶位于纹状体苍白球(间接)和纹状体黑质(直接)输出途径的中型多棘神经元(MSN)内。直接输出途径的MSN表达D1多巴胺受体而间接途径中的那些表达D2受体。GPR6富集在纹状体内表达MSN的D2受体中，其中GPR6活性与D2受体信号传导功能性相反。Gs偶联的GPR6的拮抗或反向激动降低MSN内的cAMP，并且提供多巴胺介导的D2受体活化的功能替代物。
Gs偶联GPR6的拮抗或反向激动提供多巴胺介导的D2受体活化的功能性替代物。因此，调控GPR6活性的化合物可用于治疗多种神经障碍和精神障碍。例如，包括帕金森病和亨丁顿病的运动障碍单独或与其它药剂组合被批准用于治疗帕金森病，包括L-DOPA、多巴胺能激动剂、MAO B抑制剂、DOPA脱羧酶抑制剂和C(O)MT抑制剂。可通过调控GPR6治疗的其它疾病适应症包括药物成瘾和进食障碍、认知障碍、精神分裂症、双相障碍及抑郁。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗与GPR6相关的疾患的方法，其包括：向有需要的患者施用有效量的本发明的化合物。在另一个实施方案中，提供本发明化合物用作药剂。本发明还提供了本发明的化合物治疗与本文所述的与GPR6相关的疾患的用途，包括制造药剂的用途。本发明的化合物可用作用于多种受试者(如人、非人哺乳动物和非哺乳动物)的GPR6调节剂。
如本文所用，术语“疾患”、“病症”和“疾病”涉及任何不健康或异常的状态。术语“与GPR6相关的疾患”包括其中GPR6的调节剂提供治疗益处疾患、病症和疾病，诸如帕金森病、左旋多巴诱导的异动症和亨丁顿病、药物成瘾、进食障碍、认知障碍、精神分裂症、双相障碍及抑郁。
术语“治疗(treat，treatment，treating)”包括本文所述的疾患的改善。术语“治疗(treat，treatment，treating)”包括所有提供减缓、中断、阻止、控制或终止本文所述的疾患的状态或进展的过程，但不必需表示完全消除所述疾患的所有症状或治愈所述疾患。术语“治疗(treat，treatment，treating)”意在包括此类病症的治疗性治疗。术语“治疗(treat，treatment，treating)”意在包括此类病症的预防性治疗。
如本文所用，术语“患者”和“受试者”包括人和非人动物，例如哺乳动物，例如小鼠、大鼠、豚鼠、狗、猫、兔、牛、马、绵羊、山羊和猪。术语还包括鸟、鱼、爬行动物、两栖动物等。应理解更特定的患者是人。此外，更特定的患者和受试者是非人哺乳动物，诸如小鼠、大鼠和狗。
如本文所用，术语“有效量”是指本发明的化合物在单剂量或多剂量施用后治疗罹患提及的疾患的患者的量。有效量可由作为本领域技术人员的主治诊断医生通过使用已知的技术和通过观察在类似的情形下获得的结果来容易地确定。在确定有效量、剂量的过程中，主治诊断医生要考虑多种因素，包括但不限于患者的物种、其尺寸、年龄和一般健康状况；涉及的特定的疾患、病症或疾病；疾患、病症或及疾病的参与程度或严重程度、单独患者的响应；施用的特定化合物；施用模式；施用的制剂的生物利用度；所选的剂量方案；合并用药的使用；及其它相关的情形。本发明的有效量，治疗剂量，预期在1mg至200mg的范围内。特定的量可由技术人员确定。尽管这些剂量基于质量为约60kg至约70kg的平均人受试者，但医生将能够确定其它患者的适当剂量。
帕金森病(PD)的病理性标志是黑质内的神经细胞损失。黑质纹状体途径的变性导致多巴胺纹状体浓度降低，这导致运动和非运动临床表现。许多帕金森病患者用左旋多巴(一种多巴胺的前药)治疗。左旋多巴具有常见的严重副作用，包括诱导的运动障碍(LID)、冲动控制障碍(ICD)、精神病症状和睡眠障碍。LID是进行性的(90％的PD患者在10年内出现LID)。不可逆适应发生在LID的啮齿动物模型中的MSN内的D1受体信号传导中，包括减少的脱敏，从而导致直接途径内的高灵敏度。D1而非D2受体的遗传失活废除小鼠内的LID。然而，D1受体信号传导的封闭不影响L-DOPA的抗帕金森病功效。
在一个特定的实施方案中，本发明提供治疗帕金森病的方法，其包括：向有需要的患者施用有效量的本发明的化合物。即，本发明还提供了本发明的化合物治疗帕金森病的用途，包括制造药剂的用途。
本发明的化合物可与一种或多种其它药理活性化合物或疗法组合以用于治疗适用于GPR6的一种或多种病症、疾病或疾患，可与一种或多种化合物或疗法组合同时、顺序或单独施用，以用于治疗帕金森病、左旋多巴诱导的异动症、和亨丁顿病、药物成瘾、进食障碍、认知障碍、精神分裂症、双相障碍及抑郁。此类组合可提供显著的治疗优势，包括更少的副作用、治疗缺医少药的患者群体的能力改善或协同活性。特别地，本发明的化合物可与左旋多巴一起施用以用于治疗帕金森病。本发明提供了治疗帕金森病的方法，其包括：向有需要的患者施用与左旋多巴组合的治疗有效量的本发明的化合物。本发明还提供了本发明的化合物与左旋多巴组合治疗帕金森病的用途，包括用于制造药剂的用途。
作为GPR6调节剂的化合物的活性可由包括体外和体内方法的多种方法来测定。
实施例A.1
GPR6体外测定的cAMP活性的抑制
该基于细胞的测定测量了化合物抑制在CHO-K1细胞中表达的GPR6受体的组成型cAMP活性的能力。CHO细胞稳定地表达GPR6受体，所述GPR6受体的表达受到四环素可诱导的元件的控制。将细胞培养在含有F12K、10％FBS、1％Penn/Strep、200ug/mL潮霉素的培养基中。GPR6受体表达被用1g/ml多西环素(sigma D9891)在生长培养基中诱导20小时。在添加多西环素后，将细胞以250-500个细胞/孔的密度接种在半体积黑透明底板(Costar)中，并且置于孵育器(37°，5％C(O)2)内20小时，之后进行cAMP测定。
将培养基从细胞移除且将它们用50L林格氏缓冲液(MgCl2 0.047mg/mL、NaH2PO4 0.18mg/mL、Na2HPO4 0.1mg/mL、KCl 0.34mg/mL、NaHC(O)31.26mg/mL、D-葡萄糖1.8mg/mL、NaCl 7mg/mL；pH＝7.4)洗涤。将悬浮于DMSO中的化合物用含有0.5％脂肪酸游离BSA的林格氏缓冲液稀释，并且在细胞上在37°和5％C(O)2下孵育45分钟。在孵育后，将细胞在室温下与来自Perkin Elmer Lance HTRF UltracAMP测定试剂盒(TRF0264)的Eu-cAMP痕量溶液孵育10分钟。然后添加来自Lance HTRF试剂盒的ULightTM-抗-cAMP溶液，并且在振荡器上在室温下孵育1小时，之后在BMG PolarStar Omega中进行HTRF检测。
IC50曲线用四参数逻辑斯谛方程使用GraphPad Prism 5.03产生。在该测定中，实例化合物的测量的IC50值(μM)提供在下表中。
实施例A.2
GPR6体外测定的cAMP活性的抑制
该基于细胞的测定测量了化合物抑制在CHO-K1细胞中表达的GPR6受体的组成型cAMP活性的能力。CHO细胞稳定地表达GPR6受体，所述GPR6受体的表达受到四环素可诱导的元件的控制。将细胞培养在含有F12K、10％FBS、1％Penn/Strep、200ug/mL潮霉素的培养基中。GPR6受体表达用2g/ml多西环素(sigma D9891)在培养基中诱导20小时。在添加多西环素后，将细胞以450-750个细胞/孔的密度接种在96孔半体积黑透明底板(Costar)中，并且置于孵育器(37°，5％CO2)内20小时，之后进行cAMP测定。
将培养基从细胞移除，并且将它们用50L/孔林格氏缓冲液(MgCl2 0.047mg/mL、NaH2PO4 0.18mg/mL、Na2HPO4 0.1mg/mL、KCl 0.34mg/mL、NaHCO3 1.26mg/mL、D-葡萄糖1.8mg/mL、NaCl 7mg/mL；pH＝7.4)洗涤。将悬浮于DMSO中的化合物用含有0.5％脂肪酸游离BSA加300μM IBMX的林格氏缓冲液稀释，并且在细胞上在37°和5％CO2下孵育45分钟。在孵育后，将细胞在室温下与来自Perkin Elmer Lance HTRF Ultra cAMP测定试剂盒(TRF0263)的Eu-cAMP痕量溶液孵育10分钟。然后添加来自Lance HTRF试剂盒的ULightTM-抗-cAMP溶液，并且在振荡器上在室温下孵育1小时，之后在Perkin Elmer Envision读板器中进行HTRF检测。
EC50曲线用四参数逻辑斯谛方程使用GraphPad Prism 5.03产生。在该测定中，实例化合物的测量的EC50值(μM)提供nM在下表1中。
表1
实施例B
氟哌啶醇-诱导的僵住症–体内啮齿动物帕金森病模型
帕金森病的运动症状包括运动不能、运动徐缓、僵化、震颤和姿势异常，并且与黑质多巴胺能细胞损伤和纹状体多巴胺水平下降相关。施用氟哌啶醇给啮齿动物导致暂时性帕金森氏病样状态，这可通过施用L-多巴(Duty,S.；Jenner,P.Br.J.Pharmacol.(2011),164,1357–1391)和其它已经在临床上证实用于治疗帕金森病的药物逆转。氟哌啶醇拮抗多巴胺D2，且以更小的程度拮抗中型多棘神经元内的D1受体，其分别包含运动回路的间接和直接途径。纹状体多巴胺传递所得的阻断导致基底神经节回路内的异常下游点火，其表现为肌肉僵化和僵住症的症状。僵住症经推测反映了帕金森病的临床特征，借此患者经历了不能开始移动。
使用重为175-200g的雄性Sprague-Dawley大鼠(Charles River,Calco,Italy)。可替代地，使用重为25-35g的雄性C57Bl6小鼠。全身僵硬状态由在垂直网格测试上测试动物之前90分钟皮下施用多巴胺受体拮抗剂氟哌啶醇(0.3mg/kg,sc)90分钟诱导。对于该测试，将大鼠或小鼠置于25cm x43cm塑胶玻璃笼(其置于工作台内约70度的角度下)的金属丝网格上。将受试者置于网格上，其四条腿被外展和延伸(“蛙式体位”)。使用此类不自然的体位是该测试针对僵住症的特异性所必需的。对于大鼠，从将爪放置直至第一次完成去除一只爪(下降潜伏期)所用时间经测量最多为120秒。对于小鼠，将小鼠的前爪置于比Plexiglas平台高2”的水平金属条上，并且时间被记录为每次测试高达30秒。当动物的前爪返回至平台时或在30秒后测试结束。测试重复三次，且三次试验的平均值被报道为僵住症的强度指数。
僵住症在向受试者给药(0.3mg/kg i.p.剂量的氟哌啶醇连同GPR6调节剂测试化合物)后30分钟、120分钟和/或240分钟测量。测试化合物血浆和脑水平通过收集的组织样品在实验末期(即在120或240分钟时间点)测定。代表性数目的本发明化合物以0.1至100mg/kg的剂量范围结合氟哌啶醇i.p、sc或po施用。A2a拮抗剂KW6002(伊曲茶碱)作为阳性对照以0.6mg/kg的剂量i.p.给药。