技术领域本发明属于生物分子水平技术领域，具体涉及一种直接对植物mRNA进行提取的方法。
背景技术：
高质量的RNA是进行植物分子生物学研究的重要前提，由于植物组织细胞内组成成分的复杂多样性，使得植物组织RNA的提取方法具有多样性。在目前的研究中常用的为传统方法，包括异硫氰酸胍法、苯酚-SDS法、CTAB法、、Trizol法等，其均在细胞破裂的前提下提取出植物总RNA，而实验所需要mRNA仅占总RNA的1％～4％，而且提取过程繁琐，效率低成本高。
技术实现要素：
本发明的目的是为了解决传统方法提取植物mRNA过程繁琐，效率低的问题，提供了植物mRNA直接提取方法。本发明的植物mRNA直接提取方法按以下步骤进行：一、提取前的准备：依次用己烷、丙酮和乙醇溶液震动清洗皮内针，在75℃～82℃烘箱中干燥；然后把2片～4片载玻片叠放在一起，放到玻璃培养皿中，把干燥好的皮内针的针尖朝外悬在载玻片边上，盖上培养皿的盖子，放在75℃～82℃烘箱里，去掉培养皿的盖子，烘干，取出时盖上培养皿盖子，自然冷却；取0.1mL～0.3mL三甲氧基硅烷、0.7mL～0.9mL二甲苯和5μL～10μL的二异丙基乙胺置于离心管中，之后在混匀器上混合5s～10s，得混合液；然后取8uL～12uL混合液到PCR管里，使皮内针头部浸在混合液中，盖上PCR管的盖子；在混合液中孵化皮内针，75℃～82℃培养10h～16h；之后取出PCR管，待皮内针降到室温，吸出混合液弃掉，然后用焦碳酸二乙酯(DEPC)水清洗皮内针，清洗3～5次，清洗时针尖必须朝下，每次清洗5min～10min；二、耦合反应：将0.1MKOH溶液与0.1-0.5μg/ml多聚胸腺嘧啶混合，然后加到装有皮内针的PCR管中；35℃～40℃保持5h～8h；取出皮内针并用45℃～55℃蒸馏水清洗；将皮内针放在载玻片上再置于培养皿中，盖上盖，放在空气中自然干燥；所述KOH溶液与多聚胸腺嘧啶的体积比为(95～100)：1；三、提取：将自然干燥后的皮内针扎入植物材料的目的基因检测部位保持1min～3min，拔出皮内针放到PCR管中，加8uL～12uL焦碳酸二乙酯(DEPC)水，盖上盖，漂放到水浴锅中，80℃～90℃保持8min～12min，使提取的mRNA溶入到焦碳酸二乙酯(DEPC)水中，即完成植物mRNA的提取。本发明相对于现有技术的优点：本发明提供了一种固相mRNA基因直接提取的新技术，是对皮内针进行清洗、孵化、培养、包埋、干燥一系列操作处理后，使OligodT(15-25)吸附在皮内针的针头表面，用处理后的皮内针扎植物材料设定的位置，提取其的mRNA。实现对mRNA的提取。该技术不需要提取其总RNA，处理皮内针的过程简单，且一次能够处理大量的皮内针用于实验，其提取RNA的过程快速，处理后的皮内针对目的基因能够实现精确的定位提取，对样品材料无伤害或损坏，并能够在2分钟内从植物材料中提取到mRNA，操作过程简便、快捷。基因技术改造在RNA定量、分布、转录、在时空范围内的基因表达研究上有着巨大的潜力，具有比以往功能基因提取技术显著的优越性，实用性强和应用性广泛，它的使用能够对我国观赏植物转基因育种、种质创新起到积极的推动作用。附图说明图1为实施例1使用的皮内针的示意图。具体实施方式本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。具体实施方式一：本实施方式的植物mRNA直接提取方法按以下步骤进行：一、提取前的准备：依次用己烷、丙酮和乙醇溶液震动清洗皮内针，在75℃～82℃烘箱中干燥；然后把2片～4片载玻片叠放在一起，放到玻璃培养皿中，把干燥好的皮内针的针尖朝外悬在载玻片边上，盖上培养皿的盖子，放在75℃～82℃烘箱里，去掉培养皿的盖子，烘干，取出时盖上培养皿盖子，自然冷却；取0.1mL～0.3mL三甲氧基硅烷、0.7mL～0.9mL二甲苯和5μL～10μL的二异丙基乙胺置于离心管中，之后在混匀器上混合5s～10s，得混合液；然后取8uL～12uL混合液到PCR管里，使皮内针头部浸在混合液中，盖上PCR管的盖子；在混合液中孵化皮内针，75℃～82℃培养10h～16h；之后取出PCR管，待皮内针降到室温，吸出混合液弃掉，然后用焦碳酸二乙酯水清洗皮内针，清洗3～5次，清洗时针尖必须朝下，每次清洗5min～10min；二、耦合反应：将0.1MKOH溶液与0.1-0.5μg/ml多聚胸腺嘧啶混合，然后加到装有皮内针的PCR管中；35℃～40℃保持5h～8h；取出皮内针并用45℃～55℃蒸馏水清洗；将皮内针放在载玻片上再置于培养皿中，盖上盖，放在空气中自然干燥；所述KOH溶液与多聚胸腺嘧啶的体积比为(95～100)：1；三、提取：将自然干燥后的皮内针扎入植物材料的目的基因检测部位保持1min～3min，拔出皮内针放到PCR管中，加8uL～12uL焦碳酸二乙酯水，盖上盖，漂放到水浴锅中，80℃～90℃保持8min～12min，使提取的mRNA溶入到焦碳酸二乙酯水中，即完成植物mRNA的提取。具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是，步骤一取0.2mL三甲氧基硅烷、0.8mL二甲苯和8μL的二异丙基乙胺置于离心管中，之后在混匀器上混合5s，得混合液。其他步骤与参数与具体实施方式一相同。具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一不同的是，所述KOH溶液与多聚胸腺嘧啶的体积比为99：1。其他步骤与参数与具体实施方式一相同。具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一不同的是，步骤三将自然干燥后的皮内针扎入植物材料的目的基因检测部位保持2min。其他步骤与参数与具体实施方式一相同。具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一不同的是，步骤三加入焦碳酸二乙酯水的体积为10uL。其他步骤与参数与具体实施方式一相同。实施例11)提取前的准备将Φ0.14×6mm的皮内针放于5mL离心管中，针头朝下，针柄朝上，加入己烷(250μL)清洗15分钟后吸出溶液，再加入丙酮(250μL)清洗15分钟吸出溶液，最后加入乙醇(250μL)清洗15分钟后吸出溶液。在80℃的烘干箱中烘干15分钟，自然冷却。用0.2mL三甲氧基硅烷加入0.8mL二甲苯，再加入8μL的二异丙基乙胺置于离心管中，之后在混匀器上混合5秒钟。取10μL混合液到小PCR管里，使皮内针头部浸在混合液中，盖上。在上诉混合液中孵化清洁过的皮内针，80℃过夜培养16小时。之后取出使之降低到室温，吸出混合液弃掉，然后用DEPC水清洗皮内针，清洗3次，每次用250μL，清洗时针头必须朝下，每次清洗5分钟。2)耦合反应准备0.1MKOH的99μL溶液，加入0.1-0.5μg/ml的多聚胸腺嘧啶1μL；取10μl上述溶液加到装有皮内针的PCR管中；保持37℃，6小时。取出皮内针并用蒸馏水(50℃5分钟)清洗；将皮内针置于空气中干燥(将皮内针放在载玻片上再置于培养皿中，盖上盖，让其自然干燥)。3)提取：在植物材料目的基因检测部位用处理的皮内针提取mRNA，提取时皮内针在要提取的植物相应部位保持1-2分钟，拔出皮内针放到PCR管中，加10μlDEPC水，盖上盖，漂放到水浴锅中，保持80℃以上10分钟，使提取的总的mRNA溶入到DEPC水中。通过本实施例实现了对目的mRNA的提取，且能够在2分钟内从植物材料中提取到mRNA，操作过程简便、快捷。