本申请要求2007年12月21日申请的序列号61/015,795的美国临时申请的利益。
技术领域：
本公开通常涉及N-(叔-丁氧基羰基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺(prolinamide)的晶型。本公开通常还涉及包括一种或多种所述晶型的药物组合物、使用所述晶型治疗丙型肝炎病毒(HCV)的方法及获得这样的晶型的方法。
背景技术：
：丙型肝炎病毒(HCV)是主要的人类病原体，其在世界内感染估计一亿七千万人——大致是1型人类免疫缺陷病毒感染数量的5倍。这些HCV感染个体中相当大的部分发展成严重的进行性肝脏疾病，包括肝硬化和肝细胞癌。目前，最有效的HCV疗法使用α-干扰素和利巴韦林(ribavirin)的组合，其在40％的患者中产生持续的功效。最新的临床结果证实，作为单一疗法，PEG基化的α-干扰素优于未修饰的α-干扰素。然而，即使用包括PEG基化的α-干扰素和利巴韦林组合的试验性治疗方案，相当多的患者也没有出现病毒载量的持续减少。因此，对于开发用于治疗HCV感染的有效疗法而言，存在明显的、未得到满足的需要。技术实现要素：化合物N-(叔-丁氧基羰基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺用于治疗HCV感染。在广泛的结晶研究期间，分离出两种晶态的游离酸形式，本文称为晶型H-1(水合物)和晶型T1F-1/2(无水的)。已经发现这些晶型的每种都可以大规模地重复结晶，而且每种多晶型物都具有商业用途可接受的特征。取决于湿度，化合物(I)可以作为T1F-1/2(＜15％相对湿度)、H-1(＞45％相对湿度)或这两种的混合物(～15-45％的相对湿度)存在。图1显示了作为相对湿度函数的晶型H-1和T1F-1/2的互变。在水溶液中，化合物(I)作为H-1存在，当悬浮在水中时，晶型T1F-1/2快速转变成H-1。在第一个方面，本发明提供下式的晶型H-1在第二个方面，本发明提供下式的晶型H-1特征在于具有下述晶胞参数：晶胞尺寸：α＝90.00度β＝90.00度γ＝90.00度空间群P212121分子/晶胞4其中所述晶型的测量是在约20℃至约25℃的温度进行的。在第三个方面，本发明提供下式的晶型H-1特征在于具有如在表3中列出的晶胞内的分数原子坐标。在第四个方面，本发明提供下式的晶型H-1具有在约20℃至约25℃的温度下，在粉末X射线衍射图中如下2θ值处的特征峰：6.3±0.1、7.1±0.1、9.4±0.1、10.3±0.1、12.7±0.1、13.8±0.1、17.5±0.1、18.7±0.1、20.6±0.1和22.5±0.1。在第五个方面，本发明提供下式的晶型H-1：特征在于具有一个或多个下述的：a)具有基本上等于下述参数的参数的晶胞：晶胞尺寸：α＝90.00度β＝90.00度γ＝90.00度空间群P212121分子/晶胞4其中所述晶型的测量是在约20℃至约25℃的温度下进行的；b)在约20℃至约25℃的温度下，在粉末X射线衍射图中如下2θ值处的特征峰：6.3±0.1、7.1±0.1、9.4±0.1、10.3±0.1、12.7±0.1、13.8±0.1、17.5±0.1、18.7±0.1、20.6±0.1和22.5±0.1；和/或c)特征在于具有如在表3中列出的晶胞内的分数原子坐标。在第六个方面，本发明提供下式的基本纯的晶型H-1：在第六个方面的第一个实施方案中，晶型H-1具有至少95重量％的纯度。在第六个方面的第二个实施方案中，晶型H-1具有至少99重量％的纯度。在第七个方面，本发明提供下式的晶型T1F-1/2：在第八个方面，本发明提供下式的晶型T1F-1/2：具有在约20℃至约25℃的温度下，在粉末X射线衍射图中如下2θ值处的特征峰：7.3±0.1、9.1±0.1、10.0±0.1、10.6±0.1、11.1±0.1、12.3±0.1、15.6±0.1、20.1±0.1、20.9±0.1和27.8±0.1。在第九个方面，本发明提供下式的晶型T1F-1/2：特征在于具有一个或多个下述的：a)在约20℃至约25℃的温度下，在粉末X射线衍射图中如下2θ值处的特征峰：7.3±0.1、9.1±0.1、10.0±0.1、10.6±0.1、11.1±0.1、12.3±0.1、15.6±0.1、20.1±0.1、20.9±0.1和27.8±0.1；和/或c)与起点典型地在140-145℃的熔融相关的第一吸热峰，接着分解。在第十个方面，本发明提供下式的基本上纯晶型T1F-1/2：在第十个方面的第一个实施方案中，T1F-1/2具有至少95重量％的纯度。在第十个方面的第二个实施方案中，晶型T1F-1/2具有至少99重量％的纯度。在第十一个方面，本发明提供下式的晶型H-1和晶型T1F-1/2的混合物：在第十二个方面，本公开提供药物组合物，其包括下式的晶型H-1、晶型T1F-1/2或其混合物：和可药用载体或稀释剂。在第十三个方面，本公开提供药物组合物，其包括下式的晶型H-1、晶型T1F-1/2或其混合物：与至少一种具有抗-HCV活性的另外的化合物的组合。在第十三个方面的第一个实施方案中，至少一种所述具有抗HCV活性的另外的化合物为干扰素或利巴韦林。在第十三个方面的第二个实施方案中，所述干扰素选自干扰素α2B、PEG基化的干扰素α、复合干扰素(consensusinterferon)、干扰素α2A和类淋巴母细胞干扰素τ。在第十三个方面的第三个实施方案中，本公开提供药物组合物，其包括下式的晶型H-1、晶型T1F-1/2或其混合物：与至少一种具有抗-HCV活性的另外的化合物的组合，其中至少一种所述另外的化合物选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、增强1型辅助T细胞反应发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特(Imiqimod)、利巴韦林、肌苷5′-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺(amantadine)和金刚乙胺(rimantadine)。在第十四个方面，本公开提供治疗哺乳动物的HCV感染的方法，其包括给药所述哺乳动物治疗有效量的下式的晶型H-1、晶型T1F-1/2或其混合物(mixuture)：在第十四个方面的第一个实施方案中，所述哺乳动物为人类。本公开的其它实施方案可以包括本文公开的两个或更多个实施方案和/或方面的适合的组合。根据下面提供的说明，本公开的其它实施方案和方面将变得显而易见。本公开的化合物也可以作为互变异构体和旋转异构体存在；因此，本公开还包括所有的互变异构形式和旋转异构体。附图说明图1图解了作为相对湿度函数的晶型H-1和T1F-1/2的互变。图2图解了化合物(I)的H-1晶型的试验的和模拟的粉末X射线衍射图(在T＝室温下，)。图3图解了化合物(I)的T1H-1/2晶型的试验的和分度的(indexed)粉末X射线衍射图(在T＝室温下，)。图4图解了T1F-1/2和H-1晶型互变的粉末X射线衍射分析。图5图解了化合物(I)的H-1晶型的差示扫描量热图。图6图解了化合物(I)的T1F-1/2晶型的差示扫描量热图。图7图解了化合物(I)的T1F-1/2晶型的固态NMR光谱。图8图解了化合物(I)的H-1晶型的热重分析图。图9图解了化合物(I)的T1F-1/2晶型的热重分析图。具体实施方式本公开涉及化合物(I)的晶型。定义如本文使用的“多晶型物”指具有相同化学组成但形成晶体的分子、原子和/或离子空间排列不同的晶型(crystallineform)。如本文使用的术语“可药用的”指如下那些化合物、材料、组合物和/或剂型：其在合理医学判断的范围内适合接触人和动物的组织，不会产生过度毒性、刺激性、过敏反应或其它并发症，具有合理的效益/危险比。如本文使用的术语“基本上纯的”指化合物(I)的晶型H-1或晶型T1F-1/2大于约90％纯。这是指化合物(I)的多晶型物不包含大于约10％的任何其它化合物，特别地，不包含大于约10％的任何其它形式的化合物(I)。如本文使用的术语“治疗有效量”意味着包括当单独或组合给药治疗丙型肝炎时有效的晶型的化合物(I)的晶型的量。化合物(I)的晶型和其药物组合物可用于治疗丙型肝炎。如果化合物(I)与另外的药物组合，本文描述的化合物的组合可以导致形成协同组合。如例如ChouandTalalay，Adv.EnzymeRegul.1984，22，27-55所描述的，当组合给药时化合物的效果大于作为单一试剂单独给药时化合物的效果时，存在协同作用。术语“治疗”指：(i)预防可能易感染某疾病、障碍和/或病症但还没有诊断为患有其的患者中出现所述疾病、障碍或病症；(ii)抑制所述疾病、障碍或病症，即阻止其发展；和/或(iii)缓解所述疾病、障碍或病症，即引起所述疾病、障碍和/或病症消退。在一个实施方案中，本公开提供化合物(I)的晶型。化合物(I)的这些晶型可以应用于药物组合物中，该药物组合物可以任选地包括一种或多种选自例如由如下构成的组的成分：赋形剂、载体、和不同分子结构的其它活性药物成分活性化学实体的一种。在一个实施方案中，所述晶型具有显示低于10％的相均匀性，在另一个实施方案中，所述晶型具有显示低于5％的相均匀性，在另一个实施方案中，所述晶型具有显示低于2％的相均匀性，所述百分数为占试验测量PXRD图中总峰面积的百分数，源自于模拟PXRD图中不存在的额外峰。在另一个实施方案中，所述晶型具有低于1％的相均匀性，所述百分数为占试验测量PXRD图中总峰面积的百分数，源自于模拟PXRD图中不存在的额外峰。在一个实施方案中，提供基本上由化合物(I)的晶型H-1组成的组合物。该实施方案的组合物可以包括基于组合物中化合物(I)的重量计，至少90重量％的化合物(I)的晶型H-1。其余物质包括所述化合物的其它形式和/或来自其制备的反应杂质和/或加工杂质。在另一个实施方案中，提供基本上由化合物(I)的晶型T1F-1/2组成的组合物。该实施方案的组合物可以包括基于组合物中化合物(I)的重量计，至少90重量％的化合物(I)的晶型T1F-1/2。其余物质包括所述化合物的其它形式(一种或多种)和/或来自其制备的反应杂质和/或加工杂质。可以通过本领域已知的分析技术，比如例如色谱、核磁共振谱、质谱或红外光谱确定反应杂质和/或加工杂质的存在。晶态物质的一般制备：可以通过多种方法制备晶型，所述方法包括例如由合适的溶剂结晶或重结晶、升华、从熔体中生长、从另一相的固态转化、由超临界流体结晶和喷射喷雾。用于从溶剂混合物中结晶或重结晶晶型的技术包括例如蒸发溶剂、降低溶剂混合物的温度、向分子和/或盐的过饱和溶剂混合物接种晶种、冷冻干燥溶剂混合物和将抗溶剂(反溶剂)加入溶剂混合物内。可以使用高通量结晶技术制备包括多晶型物的晶型。药物的晶体(包括多晶型物)、药物晶体的制备方法和表征讨论在Solid-StateChemistryofDrugs，S.R.Byrn，R.R.Pfeiffer，和J.G.Stowell，第2版SSCI，WestLafayette，Indiana(1999)中。对于使用溶剂的结晶技术，溶剂(一种或多种)的选择典型地取决于一种或多种因素，比如化合物的溶解度、结晶技术和溶剂的蒸气压。可以使用溶剂的组合，例如可以将化合物溶解在第一溶剂中得到溶液，接着加入抗溶剂以降低化合物在溶液中的溶解度，形成晶体。抗溶剂是所述化合物在其中具有低溶解度的溶剂。在一种制备晶体的方法中，将化合物悬浮于合适溶剂中和/或在其中搅拌以得到浆料，可将其加热促进溶解。如本文使用的术语“浆料”指化合物的饱和溶液，其还可包含附加量的化合物以在给定温度下得到所述化合物和溶剂的不均匀混合物。可以将晶种加入到任何结晶混合物中以促进结晶。可以使用晶种控制特定多晶型物的生长或控制结晶产物的粒径分布。因此，计算所需晶种的量取决于可获得的晶种的大小和平均产物颗粒的所需大小，如描述在例如“ProgrammedCoolingofBatchCrystallizers，”J.W.Mullin和J.Nyvlt，ChemicalEngineeringScience，1971，26，369-377中。一般来讲，需要小尺寸的晶种以有效控制批料中晶体生长。可以通过过筛、研磨或使较大晶体微粉化，或者通过溶液的微结晶，产生小尺寸的晶种。应注意晶体的研磨或微粉化不引起所需晶型的结晶度发生任何改变(即变为非晶形或另一种多晶型)。可以在真空下过滤冷却的结晶混合物，可以用合适的溶剂比如冷的重结晶溶剂洗涤分离的固体，并在氮气吹扫下干燥以得到期望的晶型。可以通过合适的分光技术或分析技术分析分离的固体，所述技术比如固态核磁共振、差示扫描量热法、或X射线粉末衍射等，以确保形成所述产物的优选晶型。得到的晶型典型地是以基于在结晶方法中最初使用的化合物的重量计，大于约70重量％分离产率、优选地大于90重量％分离产率的量制备的。如有必要，可以共同研磨所述产物或将其穿过目筛以使产物不结块(delump)。可以直接从制备化合物(I)的最后过程的反应介质中制备晶型。这可以通过例如在最后过程步骤中使用化合物(I)可以从其中结晶的溶剂或溶剂混合物获得。可选地，可以通过蒸馏或溶剂加入方法获得晶型。用于该目的的合适溶剂包括，例如前述非极性溶剂和极性溶剂，包括质子极性溶剂比如醇，和非质子极性溶剂比如酮。可以通过例如粉末X射线衍射(PXRD)或固态核磁共振谱(SSNMR)的技术检测样品中是否存在多于一种多晶型物。例如，当与模拟PXRD图比较时，试验测量的PXRD图中存在的另外峰可表明样品中存在多于一种多晶型物。可以由单晶X射线数据计算出模拟PXRD。参见Smith，D.K.，“AFORTRANProgramforCalculatingX-RayPowderDiffractionPatterns，”LawrenceRadiationLaboratory，Livermore，California，UCRL-7196(1963年4月)。表征：可以使用各种技术表征化合物(I)的晶型H-1和晶型T1F-1/2，所述技术的操作是本领域普通技术人员所熟知的。表征方法的实例包括但不限于单晶X射线衍射、粉末X射线衍射(PXRD)、模拟粉末X射线图(Yin，S.；Scaringe，R.P.；DiMarco，J.；Galella，M.和Gougoutas，J.Z.，AmericanPharmaceuticalReview，2003，6，2，80)，差示扫描量热法(DSC)、固态13CNMR(Earl，W.L.和VanderHart，D.L.，J.Magn.Reson.，1982，48，35-54)、拉曼光谱、红外光谱、吸湿等温线、热解重量分析(TGA)和热台技术。可以使用单晶X射线衍射表征和鉴别H-1晶型，单晶X射线衍射是基于晶型H-1单晶的晶胞测量。晶胞的详细说明提供在Stout&Jensen，X-RayStructureDetermination：APracticalGuide，MacmillanCo.，NewYork(1968)，第3章中，将其通过引用结合到本文中。可选地，可以根据观察到的分数原子坐标(fractionalatomiccoordinate)表征晶格内空间关系中原子的独特排列。另一种表征晶体结构的方法是粉末X射线衍射分析，其中将衍射分布图与代表纯粉末材料的模拟图相比较，两者均在相同分析温度下进行，和将目标晶型的测量值以一系列2θ值表征。本领域普通技术人员应当理解获得的X射线衍射图可能具有测量误差，其取决于使用的测量条件。特别地，一般已知X射线衍射图的强度可以根据使用的测量条件而波动。应当进一步理解相对强度也可根据实验条件变化，因此，不应当考虑强度的精确次序(exactorder)。另外，常规X射线衍射图衍射角的测量误差典型地为约5％或更小，这样的测量误差程度应当与上述衍射角相关联而加以考虑。因此，应当理解本公开的晶型不限于提供与本文公开附图描述的X射线衍射图完全相同的X射线衍射图的晶型。提供与附图公开的基本相同的X射线衍射图、DSC热分析图或SSNMR光谱的任何晶型都落在本公开范围之内。确定X射线衍射图基本相同的能力在本领域技术人员的能力范围内。实用性：可以使用单独的化合物(I)的H-1和T1F-1/2晶型或其彼此组合和/或与其它化合物的组合来治疗HCV感染。本公开还提供组合物，其包括治疗有效量的化合物(I)的晶型H-1和/或晶型T1F-1/2和至少一种可药用载体。在这样的组合物中的活性成分，即化合物(I)的晶型H-1和/或晶型T1F-1/2，典型地构成0.1重量％至99.9重量％的所述组合物，通常构成约5至95重量％。在某些情况下，可以使用可药用调节剂(比如碳酸钙和氧化镁)调节制剂的pH，以增强配制的化合物或其递送形式的稳定性。本公开的多晶型物的制剂也可以包含用于增加吸收和生物利用度的添加剂。本公开的药物组合物可以口服、肠胃外或经由植入的储库给药。如本文使用的术语肠胃外包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内和损害内注射或输注技术。所述药物组合物可以是无菌可注射制剂的形式，例如呈无菌可注射水性悬浮液或油性混悬剂。这些混悬剂可以根据本领域已知的技术，使用合适的分散剂或润湿剂和混悬剂来配制。关于制备这样的化合物的细节是本领域技术人员已知的。当口服给药时，本公开的药物组合物可以以任何口服可接受的剂型给药，所述剂型包括，但不限于胶囊、片剂和水性混悬剂和溶液。就用于口服使用的片剂而言，通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。也可以地加入润滑剂，比如硬脂酸镁。对于以胶囊形式口服给药而言，有用的载体/稀释剂包括乳糖、高和低分子量聚乙二醇和干燥的玉米淀粉。当口服给药水性混悬剂时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂组合。如果期望，可以加入一些甜味剂和/或矫味剂和/或着色剂。用于上述提及的组合物的其它合适的载体可以在标准药物教科书中找到，例如″Remington′sPharmaceuticalSciences″，第19版，MackPublishingCompany，Easton，Penn.，1995。关于设计和制备本公开药物组合物的合适的递送形式的更详细内容是本领域技术人员已知的。在预防和/或治疗HCV介导疾病的单疗法中，本公开化合物的剂量水平典型地为约0.05至约100毫克/千克(“mg/kg”)体重/天，更特别地为约0.1至约50mg/kg体重/天。典型地，给药本公开的药物组合物约1至约3次/天，或者可替换地连续输注。这样的给药可用于慢性或急性治疗。可以与载体组合生成单一剂型的活性成分的量将根据治疗的宿主和特定给药方式而变化。如本领域技术人员应当理解的，可能需要比上述列出的更高或更低的剂量。用于任何特定患者的具体剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括采用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状态、性别、饮食、给药时间、治疗的持续时间、排泄速率、药物组合、感染的严重性和病程、患者对感染的倾向以及治疗医师的判断。在一个实施方案中，单位剂量制剂是包含如本文上述列举的日剂量或亚剂量或其合适分数的活性成分的那些。通常，用明显低于肽最佳剂量的小剂量开始治疗。此后，以小增量增加剂量直至达到环境下的最佳效果。通常，最期望地，所述化合物以通常将获得有效的抗病毒作用而不会引起任何不良或有害副作用的浓度水平给药。当本公开的组合物包括本公开的多晶型物和一种或多种另外的治疗剂或预防剂的组合时，所述化合物和另外的试剂通常都以在单一疗法方案中正常给药剂量的约10至100％，更优选约10至80％的剂量水平存在。可以在给药本发明的多晶型物之前、之后或同时给药所述一种或多种另外的试剂。当将所述多晶型物与可药用载体一起配制时，可以将得到的组合物体内给药至哺乳动物，比如人类，以抑制NS3/4A或治疗或预防HCV病毒感染。也可以使用本发明的多晶型物和试剂的组合获得这样的治疗，所述试剂包括，但不限于：免疫调节剂，比如干扰素；其它抗病毒剂，比如利巴韦林、金刚烷胺；NS3/4A的其它抑制剂；HCV生活周期中的其它靶的抑制剂，其比如解螺旋酶、聚合酶、金属蛋白酶或体内核糖体进入部位；或其组合。可以将所述另外的试剂与本发明的多晶型物组合来制备单一剂型。可选地，可以将这些另外的试剂作为多剂型的一部分分别给药至哺乳动物。下列表1列出了可以与本发明的化合物一起给药的化合物的一些说明性实例。本发明的化合物可以与其它抗-HCV活性化合物以联合疗法形式共同或分别地给药，或者通过将所述化合物组合到组合物中给药。表1本发明的另一个方面提供通过给药本发明的多晶型物抑制患者的HCVNS3活性的方法。在一个实施方案中，这些方法用于降低患者的HCVNS3活性。如果药物组合物仅仅包括本发明的多晶型物作为活性组分，这样的方法可以另外包括给药所述患者选自如下试剂的步骤：免疫调节剂、抗病毒药、HCVNS3抑制剂、或者HCV生命周期中其它靶点的抑制剂比如例如解螺旋酶、聚合酶、蛋白酶或金属蛋白酶。可以在给药本发明的化合物之前、同时或之后，将这样的另外的试剂给药至患者。在另一个实施方案中，这些方法用于抑制患者的病毒复制。这样的方法可以用于治疗或预防HCV疾病。本发明的多晶型物还可以用作实验室试剂。所述多晶型物可有助于提供用于设计病毒复制测定、证实动物测定系统的研究工具和进一步增加了解HCV疾病机制的结构生物学研究。本发明的多晶型物也可以用于治疗或预防物质的病毒污染，从而降低接触这样的材料的实验室或医务人员或患者病毒感染的危险，所述材料例如血液、组织、手术器械和衣物、实验室仪表和衣物、及血液收集或输血装置和材料。下述非限制性实施例用于阐述本发明。实施例实施例1晶型H-1/T1F-1/2的制备在室温下，在乙醇中搅拌或超声处理非晶形N-(叔-丁氧基羰基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺(根据美国6,995,174中描述的方法制备的)，浓度为8-10ml溶剂/g化合物。将固体首先立即溶于溶液中，然后，在几分钟的搅拌内形成浆液。从该浆液中得到的晶型为溶剂化物(晶型E2-2)。分离该浆液，并在50℃的真空下干燥，引起形成T1F-1/2。该T1F-1/2晶型可以转化为H-1，得到两种晶型的混合物或转化为晶型H-1，具体取决于环境湿度和温度条件。在50℃，将晶态N-(叔-丁氧基羰基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺溶于乙醇中，浓度为10-12ml溶剂/g化合物。(在该阶段中，可以在50℃将庚烷加入到所述溶液中)。将搅拌的批料逐渐地冷却至20℃，陈化以发展结晶。晶种是任选的；将其在45℃至20℃接种以形成浆液。从浆液得到的晶型是溶剂化物。然后，过滤浆液，在50℃的真空下干燥得到的固体，引起形成T1F-1/2。该T1F-1/2晶型可以转化成H-1，得到两种晶型的混合物或转化为晶型H-1，具体取决于环境湿度和温度条件。经由气-固水合的固态转化可以通过在控制条件下，经由湿空气或氮气水合来转化游离酸T1F-1/2来制备水合物H-1。经一定时期(流速300-1000ml/min，RH＞90％，在室温下24小时内)，与湿空气或氮气流接触的T1F-1/2晶型转化成水合物。还观察到，通过在环境条件(RH40-80％，室温)下，在流动的空气或氮气下，干燥从结晶分离的E2-2湿滤饼，将会最终使溶剂化物转化为水合物。结晶中水合物的浆液转化在EtOH和水的不同组合物中制备结晶，以检查获得的晶型，并评价从所述浆液中直接获得水合物的可行性。需要高水活度以在浆液转化中形成水合物：将在20-50℃经一定时间在水中再浆液化的E2-2湿滤饼转化成水合物，在该浆液中存在残留的E2-2。该程序也可以应用于在含水浆液中转化成水合物的其它醇溶剂化物(例如M-1，甲醇化物)。实施例2晶型H-1和/或T1F-1/2的另一种制备在室温下，在异丙醇中搅拌或超声处理非晶形N-(叔-丁氧基羰基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺(根据美国6,995,174中描述的方法制备的)，浓度为5-14ml溶剂/g化合物。将固体首先立即溶于溶液中，有或者没有搅拌，然后，在几分钟内形成浆液。从该浆液中得到的晶型为溶剂化物。分离该浆液，并在50℃的真空下干燥，引起形成T1F-1/2。该T1F-1/2晶型可以转化为H-1，取决于环境湿度和温度条件。该T1F-1/2晶型可以转化成H-1，得到两种晶型的混合物或转化为晶型H-1，取决于环境湿度和温度条件。在50-60℃，将晶态N-(叔-丁氧基羰基)-3-甲基-L-缬氨酰-(4R)-4-((7-氯-4-甲氧基-1-异喹啉基)氧基)-N-((1R，2S)-1-((环丙基磺酰基)氨甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-L-脯氨酰胺溶于异丙醇中，浓度为15-17ml溶剂/g化合物。(在该阶段中，可以在60℃将水加入所述溶液中)。晶种接种是任选的。将搅拌的批料逐渐地冷却至20℃，陈化以发展结晶。从浆液得到的晶型是溶剂化物。然后，过滤浆液，在50℃的真空下干燥得到的固体，引起形成T1F-1/2。该T1F-1/2晶型可以转化成H-1，取决于环境湿度和温度条件。该T1F-1/2晶型可以转化成H-1，得到两种晶型的混合物或转化为晶型H-1，取决于环境湿度和温度条件。实施例3晶型H-1的另一种制备也如下制备H-1晶体：将化合物(无定形的或晶态的)溶于甲醇中。加入水作为抗溶剂。获得棱镜状或板状晶体，其为1∶1的甲醇溶剂化物。将这些晶体静置在环境条件下，其经由晶体中的甲醇和空气中的湿气之间的缓慢溶剂交换转化成晶型H-1。实施例4T1F-1/2的另一种制备化合物C的制备在氮气下，将DMSO(264ml)加入到化合物A(6g，26.31mmol，1.0当量，96.5％效价)、化合物B(6.696g，28.96mmol，1.1当量)和KOtBu(8.856g，78.92mmol，3当量)的混合物中，并在36℃搅拌1小时。在将该深色溶液冷却至16℃之后，用水(66ml)和EtOAc(132ml)处理。在11.2-14.6℃，用1NHCl(54ml)酸化得到的双相混合物至pH4.82。相分离。用EtOAc(132ml)萃取水相一次。组合有机相，并用25％的盐水(2×132ml)洗涤。在30-40℃/50mbar下，蒸馏浓的有机相(228ml)至37.2ml。加入新制EtOAc(37.2ml)，并在30-35℃/50mbar下蒸馏至37.2ml。在加热最终EtOAc溶液(37.2ml)至50℃之后，在46-51℃加入庚烷(37.2ml)并经2小时冷却至22.5℃。用49mg的化合物C接种晶种，并保持在23℃15分钟以发展稀的浆液。在30分钟内，将其冷却至0.5℃，并保持在0.2-0.5℃3小时。在过滤之后，用庚烷(16.7ml)洗涤滤块，并在47℃/80mm下干燥15.5小时，得到呈浅褐色固体的化合物C(6.3717g，校正产率58.9％，效价99.2％，97.4AP)。化合物E的制备在氮气下，于23-25℃，将DIPEA(2.15ml，12.3mmol，1.3当量)和EDAC(2g，10.4mmol，1.1当量)依次加入到化合物C(4g，9.46mmol，效价97.4％，98.5AP)、化合物D(4.568g，11.35mmol，1.20当量)、HOBT-H2O(0.86g，4.18mmol，0.44当量)在CH2Cl2(40ml)中的混合物中。在23-25℃3小时后，反应完成。然后，用1NHCl(12ml)、水(12ml)和25％的盐水(12ml)洗涤。在25℃，向该浓的有机溶液中加入MeOH(80ml)，将其在大气压下蒸馏至～60ml，引发产物结晶。然后，在5分钟内，将结晶浆液从64℃冷却至60℃，并在60℃搅拌1小时。经1.5小时，将其进一步冷却至24℃，并保持在24℃2小时。在过滤后，用MeOH(12ml)洗涤滤块，在51℃/20-40mm干燥18小时，得到化合物E(5.33g，产率89％，效价97.7％，99.1AP)。化合物F的制备在1小时内，在75℃，将在IPA中的5-6NHCl(10.08ml，50.5mmol，当量浓度：5N)分四部分加入到化合物E(8g，12.6mmol，效价97.7％，99.1AP)在IPA(120ml)中的溶液中。在75℃搅拌1小时后，在2小时内，将得到的浆液冷却至21℃，并在21℃搅拌2小时。过滤，并用IPA(2×24ml)洗涤滤块。在45℃/House真空中干燥湿滤饼16小时，得到呈灰白色固体的化合物F(6.03g，产率84.5％，效价98.5％，100AP)。化合物(I)的制备在氮气下，在2.7-5℃，将DIPEA(9.824ml)和HATU(7.99g)依次加入到化合物F(10g，99.2％效价，99.6AP)和化合物G(4.41g)在CH2Cl2(100ml)中的搅拌混合物中。在0.2-3℃下，搅拌得到的淡褐色溶液1.5小时，在3-20℃下搅拌0.5小时，和在20-23℃下搅拌15.5小时，使反应完成。在23℃，用2NHCl(50ml)将其淬灭，并在23-24℃下搅拌20分钟。穿过硅藻土((10g)抛光过滤该双相混合物，以除去不溶性固体HOAT和HATU。用20ml的CH2Cl2洗涤滤饼。在从滤液中分离有机相之后，用2NHCl(5×50ml)和水(2×50ml)洗涤。将有机相(115ml)浓缩至～50ml，用无水EtOH(200标准强度(proof)，100ml)稀释，并再次浓缩至～50ml。加入无水EtOH(50ml)使最终体积达100ml。然后，将其加热至50℃，形成澄清溶液，并保持在50℃35分钟。经15分钟，将该乙醇溶液从50℃冷却至23℃，形成晶体浆液。在23℃搅拌该浆液18小时，经30分钟冷却至0.3℃，并保持在0.2-0.3℃2小时。在过滤后，用冷的EtOH(2.7℃，2×6ml)洗涤滤块，并在53℃/72mm干燥67小时，得到呈灰白色固体的晶型T1F-1/2的化合物(I)(10.49g，产率80.7％，99.6AP)。使用如下所述的一种或多种试验方法分析晶型H-1和T1F-1/2。1单晶X射线测量在室温下，使用装备有石墨-单色的MoKα放射的NoniusKappaCCD衍射仪来收集衍射数据。使用ω扫描方式收集在2θ范围内的全部数据集，使用与衍射仪系统相关的程序(KappaCCDSoftware，NoniusBV，Delft，TheNetherlands，1999)处理。使用全部数据集测定最终晶胞参数。使用SHELXTL软件包(Sheldrick，GM.1997，SHELTL。StructureDeterminationPrograms.ersion5.10，BrukerAXS，Madison，Wisconsin，USA)。通过直接法解析所有的结构，并用完全矩阵最小二乘法技术精化。在精化中最小化后的函数是∑w(|Fo|-|Fc|)2。R定义为∑||Fo|-|Fc||/∑|Fo|，而Rw＝[∑w(|Fo|-|Fc|)2/∑w|Fo|2]1/2，其中w是基于实测强度误差的合适权重函数。在所有精化阶段都检查差异Fourier图。用各向异性温度位移参数(displacementparameters)精化所有的非氢原子。与氢键键合相关的氢原子位于最终差异Fourier图中，而由具有标准键长和角度的理想几何结构计算其它氢原子的位置。为它们分配各向同性温度因子，并包括在具有固定参数的结构因子计算内。将H-1晶型的晶体数据显示在表2中。将分数原子坐标列在表3中。本领域普通技术人员应当理解，坐标的微小变化是可能的，且被认为在本公开的范围之内。表2.晶型H-1的晶体数据表3.原子坐标原子XYZ原子XYZS(1)4633(2)1649(1)6093(1)O(8)2101(3)6221(2)4962(2)N(1)4351(5)2223(2)5569(2)C(1)2870(11464(5)5759(4)N(2)3770(4)3280(2)4728(1)C(2)4303(8)668(3)5873(3)N(3)3590(4)4937(2)5607(2)C(3)3535(11137(4)6251(3)N(4)2677(6)4277(4)6916(2)C(4)5005(5)2093(3)5089(2)O(1)3677(8)1898(3)6465(2)C(5)4463(4)2547(3)4620(2)O(2)5997(7)1682(4)6230(3)C(6)5213(6)2451(3)4100(2)O(3)5891(4)1613(2)5053(2)C(7)3892(6)2041(3)4159(2)O(4)5570(3)3910(2)5093(2)C(8)3733(7)1146(4)4208(2)O(5)3215(3)3701(2)5941(1)C(9)4597(9)621(4)4048(5)O(6)1838(7)5342(6)7297(3)C(10)4385(4)3907(2)4968(2)O(7)965(8)4111(6)7476(3)C(11)3500(4)4639(2)5061(2)C(12)3970(6)5355(3)4730(2)C(30)304(8)6707(3)4469(3)C(13)3495(5)6077(3)5045(2)C(31)-584(7)6494(3)4875(3)C(14)3637(6)5819(3)5640(2)C(32)-1848(7)6620(4)4807(5)C(15)3451(5)4424(3)6021(2)C(33)-2325(15)6965(6)4310(7)C(16)3606(6)4702(3)6603(2)C(34)-1576(17)7197(5)3918(5)C(17)5104(7)4618(4)6797(3)Cl(1)-2988(2)6335(2)5319(2)C(18)5991(7)5136(5)6512(3)C(4′)-530(14)5479(13)7544(9)C(19)5075(134835(6)7407(3)C(3′)1250(30)6541(9)7751(10)C(20)5573(8)3749(5)6748(4)C(2′)1088(19)5236(10)8267(5)C(21)1764(114565(8)7247(3)C(1′)921(17)5659(9)7735(6)C(26)1723(7)6568(3)4504(2)O(28)253(10)7631(5)3159(3)N(5)2626(8)6756(3)4152(2)C(2811165(18)7762(10)2753(6)C(27)2129(14)7105(5)3682(3)OW1760(70)6690(30)6150(30)C(28)820(19)7272(4)3590(3)C(29)-131(13)7075(3)3984(3)2.粉末X射线衍射使用BrukerC2GADDS获得X射线粉末衍射(PXRD)数据。放射为CuKα(40KV，50mA)。样品-检测器距离为15em。将粉末样品置于直径1mm或更小的密封玻璃毛细管中；在数据收集期间旋转该毛细管。收集3≤2θ≤35°数据，样品曝光时间为至少2000秒。积分得到的二维衍射弧产生常规1维PXRD图，在3至35度2θ范围内步长为0.02度2θ。将PXRD图和由晶型H-1的单晶数据计算的模拟图的结果显示在图2中。将晶型T1F-1/2的PXRD图的结果显示在图3中。图4显示了晶型T1F-1/2和晶型H-1互变的PXRD分析。表4列出了描述化合物(I)的晶型H-1和T1F-1/2的特征性PXRD峰。表4.基于用衍射仪(CuKα)收集的高质量图的在室温下的特征性衍射峰位(2θ±0.1度)，该衍射仪具有旋压毛细管(spinningcapillary)，用NIST可追踪的标准校正2θ。晶型H-1晶型T1F-1/26.37.37.19.19.410.010.310.612.711.113.812.317.515.618.720.120.620.922.527.83.差示扫描量热法用TAInstrumentsTM型号Q2000、Q1000或2920进行差示扫描量热法(DSC)试验。在铝锅中称量样品(约2-6mg)，并精确地记录至百分之一毫克，并转移到DSC。用氮气以50mL/min吹扫所述仪器。收集室温至300℃的数据，加热速率为10℃/分钟。绘制曲线图，吸热峰向下。将晶型H-1的DSC图显示在图5中。将晶型T1F-1/2的DSC图显示在图6中。4.固态NMR(SSNMR)用BrukerDSX-400，400MHzNMR光谱仪进行所有的固态C-13NMR测量。使用高功率质子去耦和TPPM脉冲序列及具有魔角旋转(MAS)在约12kHz的斜坡振幅横向极化(RAMP-CP)获得高分辨率光谱(A.E.Bennett等等.J.Chem.Phys.1995，103，6951).(G.Metz，X.Wu和S.O.Smith，J.Magn.Reson.A.，1994，110，219-227)。每次试验使用约70mg的样品，将其填充到罐-结构的氧化锆旋转器中。化学位移(d)参照外部金刚烷，其具有设定为38.56ppm的高频共振(W.L.Earl和D.L.VanderHart，J.Magn.Reson.，1982，48，35-54)。将晶型T1F-1/2的SSNMR光谱显示在图7中。5.热重分析(TGA)(开口盘)在TAInstrumentsTM型号Q500或2950中进行热重分析(TGA)试验。将样品(约10-30mg)置于之前去皮重的铂锅中。精确地测量样品重量，并用仪器纪录至千分之一毫克。用氮气以100mL/min吹扫加热炉。收集室温至300℃的数据，加热速率10℃/分钟。将晶型H-1和晶型T1F-1/2的TGA图分别显示在图9和图10中。当前第1页1 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