吖啶标记结合物及其制备方法、化学发光免疫检测试剂盒与流程

技术特征：

1.一种吖啶标记结合物，其特征在于，包括依次连接的吖啶取代物、连接载体、双功能交联剂和待标记物；

所述双功能交联剂为含有马来酰亚胺基及酰肼基的交联剂；

所述待标记物为含有巯基、羰基或羧基的蛋白、改性蛋白、多肽、改性多肽或碳水化合物；

所述连接载体含有氨基和羧基，所述吖啶取代物与所述连接载体上的氨基反应形成-CO-NH-结构从而将所述吖啶取代物与所述连接载体连接，所述连接载体上的羧基与所述双功能交联剂上的酰肼基反应形成-CO-NH-NH-结构从而将所述连接载体与所述双功能交联剂连接，所述双功能交联剂上的马来酰亚胺基与所述待标记物上的巯基反应形成结构从而将所述双功能交联剂与所述待标记物连接；

或者，所述连接载体含有氨基及二硫键，所述吖啶取代物与所述连接载体上的氨基反应形成-CO-NH-结构从而将所述吖啶取代物与所述连接载体连接，所述连接载体上的二硫键与所述双功能交联剂上的马来酰亚胺基反应形成结构从而将所述连接载体与所述双功能交联剂连接，所述双功能交联剂上的酰肼基与所述待标记物上的羰基或羧基反应形成-NH-NH-CO-构从而将所述双功能交联剂与所述待标记物连接。

2.根据权利要求1所述的吖啶标记结合物，其特征在于，所述吖啶取代物为吖啶酯、吖啶酸、吖啶酰胺或吖啶磺酰胺。

3.根据权利要求1所述的吖啶标记结合物，其特征在于，所述连接载体为含有氨基、羧基及二硫键的血蓝蛋白。

4.根据权利要求1所述的吖啶标记结合物，其特征在于，所述待标记物为抗原、半抗原或抗体。

5.一种权利要求1～4中任一项所述的吖啶标记结合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

用活化后的吖啶取代物与连接载体反应得到中间产物B，其中，所述中间产物B为吖啶取代物-连接载体结合物；以及

将所述中间产物B、双功能交联剂以及待标记物交联反应后得到吖啶标记结合物，其中，所述吖啶标记结合物包括依次连接的吖啶取代物、连接载体、双功能交联剂和待标记物，所述连接载体含有氨基和羧基，所述吖啶取代物与所述连接载体上的氨基反应形成-CO-NH-结构从而将所述吖啶取代物与所述连接载体连接，所述连接载体上的羧基与所述双功能交联剂上的酰肼基反应形成-CO-NH-NH-结构从而将所述连接载体与所述双功能交联剂连接，所述双功能交联剂上的马来酰亚胺基与所述待标记物上的巯基反应形成结构从而将所述双功能交联剂与所述待标记物连接；或者，所述连接载体含有氨基及二硫键，所述吖啶取代物与所述连接载体上的氨基反应形成-CO-NH-结构从而将所述吖啶取代物与所述连接载体连接，所述连接载体上的二硫键与所述双功能交联剂上的马来酰亚胺基反应形成结构从而将所述连接载体与所述双功能交联剂连接，所述双功能交联剂上的酰肼基与所述待标记物上的羰基或羧基反应形成-NH-NH-CO-构从而将所述双功能交联剂与所述待标记物连接。

6.根据权利要求5所述的吖啶标记结合物的制备方法，其特征在于，将所述中间产物B、双功能交联剂以及待标记物交联反应后得到吖啶标记结合物的操作具体包括以下步骤：

用中间产物B与双功能交联剂反应生成中间产物D，其中，所述中间产物D为吖啶取代物-连接载体-双功能交联剂结合物，所述双功能交联剂为含有马来酰亚胺基及酰肼基的交联剂，所述中间产物B中的连接载体上的羧基与所述双功能交联剂上的酰肼基反应形成-CO-NH-NH-结构从而将所述中间产物B与所述双功能交联剂连接；以及

将所述中间产物D与待标记物结合得到吖啶标记结合物，其中，所述待标记物为含有巯基、羰基或羧基的蛋白、改性蛋白、多肽、改性多肽或碳水化合物，所述中间产物D中的双功能交联剂上的马来酰亚胺基与所述待标记物上的巯基反应形成结构从而将所述中间产物D与所述待标记物连接。

7.根据权利要求5所述的吖啶标记结合物的制备方法，其特征在于，将所述中间产物B、双功能交联剂以及待标记物交联反应后得到吖啶标记结合物的操作具体包括以下步骤：

将中间产物B进行活化处理，使得所述中间产物B中的连接载体上的二硫键活化形成巯基，得到中间产物F，其中，所述中间产物F为含有巯基的吖啶取代物-连接载体结合物；

将待标记物与双功能交联剂反应生成中间产物I，其中，所述中间产物I为待标记物-双功能交联剂结合物，所述待标记物为含有巯基、羰基或羧基的蛋白、改性蛋白、多肽、改性多肽或碳水化合物，所述双功能交联剂为含有马来酰亚胺基及酰肼基的交联剂，所述双功能交联剂上的酰肼基与所述待标记物上的羰基或羧基反应形成-NH-NH-CO-构从而将所述双功能交联剂与所述待标记物连接；以及

将所述中间产物I与所述中间产物F结合得到吖啶标记结合物，其中，所述中间产物I中的双功能交联剂上马来酰亚胺基与所述中间产物F上的巯基反应形成结构从而将所述中间产物I与所述中间产物F连接。

8.根据权利要求5所述的吖啶标记结合物的制备方法，其特征在于，用活化后的吖啶取代物与连接载体反应得到中间产物B的操作中，所述活化后的吖啶取代物与所述连接载体的摩尔比为1～5000：1。

9.根据权利要求6所述的吖啶标记结合物的制备方法，其特征在于，用中间产物B与双功能交联剂反应生成中间产物D的操作中，所述双功能交联剂与所述中间产物B的摩尔比为1～10000：1。

10.一种化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～4中任一项所述的吖啶标记结合物。