陆地棉转化事件ICR24001及其特异性鉴定方法与流程

文档序号:11936810阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种转基因棉花的培育方法,为将外源DNA片段插入目的棉花基因组第A11号染色体的第68405357-68405382位间,替换掉第A11号染色体的第68405357-68405382位间24bp的碱基序列,得到转基因棉花;

所述转基因棉花的纤维品质高于所述目的棉花。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:

所述外源DNA片段为含有GhKCS2基因的DNA分子。

3.根据权利要求1或2所述方法,其特征在于:

所述外源DNA片段的核苷酸序列为序列表中序列1;

所述转基因棉花的纤维品质高于所述目的棉花体现在如下B1)-B15):

B1)所述转基因棉花纤维的长度高于所述目的棉花;

B2)所述转基因棉花纤维的马克隆值低于所述目的棉花;

B3)所述转基因棉花纤维的整齐度高于所述目的棉花;

B4)所述转基因棉花纤维的伸长率低于所述目的棉花;

B5)所述转基因棉花纤维的比强度高于所述目的棉花;

B6)所述转基因棉花纤维的籽棉产量高于所述目的棉花;

B7)所述转基因棉花的株高高于所述目的棉花;

B8)所述转基因棉花的叶片长度高于所述目的棉花;

B9)所述转基因棉花的叶片宽度高于所述目的棉花;

B10)所述转基因棉花的叶柄长度高于所述目的棉花;

B11)所述转基因棉花的叶柄宽度高于所述目的棉花;

B12)所述转基因棉花的茎枝夹角低于所述目的棉花;

B13)所述转基因棉花的单铃重高于所述目的棉花;

B14)所述转基因棉花的成铃数高于所述目的棉花;

B15)所述转基因棉花的衣分高于所述目的棉花;

所述外源DNA片段通过含有所述外源DNA片段的重组载体导入所述目的棉花;

所述目的棉花为陆地棉。

4.用于检测或辅助检测待测植物样品是否来源于权利要求1-3中任一所述方法获得的转基因棉花或其后代的方法,包括如下步骤:

检测所述待测植物样品的基因组DNA中是否含有DNA片段A,

所述DNA片段A由权利要求1-3中任一所述的外源DNA片段在所述转基因棉花的上游侧翼片段、所述外源DNA片段和所述外源DNA片段在所述转基因棉花的下游侧翼片段组成;

若所述待测植物样品的基因组DNA含有所述DNA片段A,则所述待测植物样品为或候选为所述转基因棉花或其后代;

若所述待测植物样品的基因组DNA不含有所述DNA片段A,则所述待测植物样品不为或候选不为所述转基因棉花或其后代。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于:

所述方法为如下1)或2)或3):

1)直接测序;

2)用引物对1和/或引物对2对植物样品的基因组DNA进行PCR扩增,若有目的扩增产物,则所述植物样品来源于所述转基因棉花或其后代;

所述引物对1为能够扩增由所述外源DNA片段5’端和紧邻其的所述上游侧翼片段的部分或全部组成的DNA分子甲的引物对;其对应的目的扩增产物为所述DNA分子甲;

所述引物对2为能够扩增由所述外源DNA片段3’端和紧邻其的所述下游侧翼片段的部分或全部组成的DNA分子乙的引物对;其对应的目的扩增产物为所述DNA分子乙;

所述上游侧翼片段的核苷酸序列为序列表中序列2;

所述下游侧翼片段的核苷酸序列为序列表中序列3;

所述引物对1具体由序列表中序列5所示的单链DNA分子和序列表中序列6所示的单链DNA分子组成;

所述引物对2具体由序列表中序列7所示的单链DNA分子和序列表中序列8所示的单链DNA分子组成;

3)用能特异结合所述DNA分子甲或所述DNA分子乙的探针对所述待测植物样品DNA进行Southern杂交,若能杂交得到杂交片段,则所述待测植物样品来源于所述转基因棉花或其后代。

6.用于检测或辅助检测待测植物样品是否来源于权利要求1-3中任一所述方法获得的转基因棉花或其后代的试剂盒,其包括权利要求5中所述的引物对1和/或权利要求5中所述的引物对2。

7.权利要求1-3中任一所述方法获得的转基因棉花在育种中的应用。

8.一种获得纤维品质提高的棉花的方法,包括如下步骤:

(1)按照权利要求1-3中任一所述方法获得转基因棉花;

(2)将所述转基因棉花自交或杂交,得到繁育后代,按照权利要求4或5所述的方法鉴定所述繁育后代,得到目标植株。

9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于:所述转基因棉花的保藏编号为CCTCC NO:P201606。

10.用于转基因棉花的培育的产品,其为如下a)-c):

a)权利要求4或5中所述的上游侧翼片段和权利要求4或5中所述的下游侧翼片段;

b)权利要求1-3中任一所述的外源DNA片段;

c)与所述外源DNA片段相关的生物材料;

所述生物材料为下述A1)至A11)中的任一种:

A1)含有所述外源DNA片段的表达盒;

A2)含有所述外源DNA片段的重组载体;

A3)含有A1)所述表达盒的重组载体;

A4)含有所述外源DNA片段的重组微生物;

A5)含有A1)所述表达盒的重组微生物;

A6)含有A2)所述重组载体的重组微生物;

A7)含有A3)所述重组载体的重组微生物;

A8)含有所述外源DNA片段的转基因植物细胞系;

A9)含有A1)所述表达盒的转基因植物细胞系;

A10)含有A2)所述重组载体的转基因植物细胞系;

A11)含有A3)所述重组载体的转基因植物细胞系;

或,所述产品在调控植物纤维的长度和/或马克隆值和/或比强度和/或整齐度/或伸长率中的应用;

或,所述产品在调控植物株高和/或叶片长度和/或叶片宽度和/或叶柄长度和/或叶柄宽度和/或茎枝夹角和/或果枝数和/或单铃数和/或成铃数中和/或衣分中的应用。

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