本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种人体体液中外泌体的提取方法。
背景技术：
外泌体是一种直径为30～100nm的纳米级脂质包裹体结构，内部包裹了蛋白、mRNA和microRNA等物质，包括肿瘤细胞在内的几乎所有类型的细胞，都可以产生并释放外泌体。最近研究证实，人的体液(血液、唾液、尿液、乳液等)也含有外泌体，并且还有国外研究机构指出，外泌体可能是癌症传播扩散的种子。由于外泌体于上世纪80年代才被发现，外泌体的研究还处于初级阶段，因此人们对它知之甚少，有很多特性等待人们去研究和发掘，而研究外泌体的前提是首先将其从人体体液中提取出来。
技术实现要素：
为了更好地研究外泌体，本发明公开了一种人体体液中外泌体的提取方法，包括以下步骤：
a、体液样本制备：首先在无菌条件下提取人体体液，并用PBS缓冲液进行稀释，然后通过离心筛选初步去除体液中的细胞成分和细胞碎片，制成体液样本备用；
b、体液样本纯化：通过过滤膜对步骤a中的体液样本进行过滤，进一步去除体液中的细胞残片及其他杂质，静置10～15分钟，留取沉淀物备用；
c、外泌体提取：将步骤b中所得的沉淀物用PBS缓冲液进行悬浮，使外泌体悬浮于液体上层，然后用无菌针管吸取上层含有外泌体的液体，置于-80℃储存备用。
作为本发明的进一步改进，所述PBS缓冲液由以下重量份数的物质组成：
磷酸二氢钠8～12％、磷酸氢二钠5～10％、氯化钾1～3％、胰酶0.5～1.5％，余量为水。
作为本发明的进一步改进，所述过滤膜为孔径0.2～0.4μm的混合纤维素滤膜。
本发明的有益效果是：
本发明的外泌体提取方法操作简单、提纯度高，能够简单有效地从人体体液中提取外泌体，为后续的科研活动和临床应用提供了基础保障。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明的外泌体提取工艺流程图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
如图1所示，以提取人体血液中的外泌体为例，本发明的外泌体的提取方法，包括以下步骤：
a、血液样本制备：首先在无菌条件下提取人体血液，并用PBS缓冲液进行稀释，然后通过离心筛选初步去除血液中的细胞成分和细胞碎片，制成血液样本备用；
b、血液样本纯化：通过过滤膜对步骤a中的血液样本进行过滤，进一步去除血液中的细胞残片及其他杂质，静置10～15分钟，留取沉淀物备用；
c、外泌体提取：将步骤b中所得的沉淀物用PBS缓冲液进行悬浮，使外泌体悬浮于液体上层，然后用无菌针管吸取上层含有外泌体的液体，置于-80℃储存备用。
其中，PBS缓冲液由以下重量份数的物质组成：
磷酸二氢钠8～12％、磷酸氢二钠5～10％、氯化钾1～3％、胰酶0.5～1.5％，余量为水。
过滤膜为孔径0.2～0.4μm的混合纤维素滤膜，以保证外泌体顺利通过过滤膜，而细胞残片及其他杂质会被过滤掉。
本发明的外泌体提取方法操作简单、提纯度高，能够简单有效地从人体体液中提取外泌体，为后续的科研活动和临床应用提供了基础保障。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。