专利名称：鸭性别快速鉴别试剂盒盒体的制作方法
技术领域：
本实用新型属于生物技术领域，提供一种快速进行鸭的性别鉴定的试剂盒，该试剂盒用于PCR-琼脂糖电泳技术。
技术背景
家禽的性别由W染色体和Z染色体决定，家禽雌性基因型为ZW型，雄性基因型为ZZ型，Z或W传递给子代的概率是一样的，均为二分之一，其遗传方式遵循孟德尔的独立分配定律和自由组合定律。到目前为止，发现有少数分布在禽类Z和W染色体上的基因，它们不出现在假常染色体区，但都是以W和Z单拷贝出现，且以性染色体两种类型的非重组部分的形式存在。最具有典型特征的是CHDlZ—CHDlff (chromodomain helicase DNA bindingprotein I)基因，研究认为它们在所有鸟类中(平胸鸟除外)分别与W或Z连锁。由于一些内含子在基因CHDIZ与CHDlW中的序列大小不同，使用保守性引物，就能通过PCR-琼脂糖电泳技术，根据PCR产物的片段大小和数量，判断雄性基因型(ZZ型，一条大的PCR产物片段)和雌性基因型(ZW型，一大一小的两条PCR产物片段)。这两种基因独立进化，使用直接PCR技术分析，为研究鸟类(除平胸鸟之外)分子性别决定提供了途径。随着鸭的胚胎学、发育生物学和分子生物学等学科研究的深入，鸭胚胎早期性别的鉴定成为一个科学问题。经过对现有国内外文献和专利的检索，至今未见有家鸭CHD基因完整序列及分子性别鉴定的研究报道。
实用新型内容本实用新型的目的是为了给鸭性别分子鉴定提供一种结构合理、价格低廉的基因分型试剂盒。本实用新型的目的是通过以下技术方案实现的，一种鸭性别快速鉴别试剂盒盒体，所述试剂盒由盒体，盒体内的衬垫，衬垫的各孔腔内分别置入的特异性引物混合物ZWp、扩增缓冲液、DNA marker和琼脂糖组成。其中ZWp详细信息如下引物混合物ZWp表示用于CHD基因PCR扩增的上下游引物混合物，引物信息如下上游引物5’- AGTGCATTGCAGAAGCAATATT - 3’，下游引物5’- GCCTCCTGTTTATTATAGAATTCAT - 3’。本试剂盒使用方法I、PCR扩增目的片段I) PCR扩增反应体系准备在200 u I的PCR薄壁管中，加入2W模板DNA(约50 ng )、12. 5W扩增缓冲液、2W引物ZffP (5uM)、和8. 5W水，PCR的反应体系为25W，充分混匀后短暂离心。2) PCR扩增反应程序设置[0015]在^pendorf PCR仪上设置PCR的反应条件为94°C预变性4 min,后94°C变性30s，55°C复性30s，72°C延伸308，35个循环，最后721延伸6 min，4°C保存备用。程序设置完毕后，将PCR反应管放入PCR仪进行反应扩增。2、鉴定基因型反应结束后，取4-lOiU反应产物在2%琼脂糖胶，IXTBE电泳液中电泳。室温下，按照电泳槽宽度X6-8V，电泳20分钟。根据电泳图谱，鉴定基因型。本实用新型由CHD基因PCR扩增的上下游弓丨物混合物ZWp、扩增缓冲液、DNAmarker和琼脂糖组成，利用PCR-琼脂糖电泳技术检测基因的基因型，具有准确性高、快速、价格低廉的优点。
图I为本实用新型鸭性别快速鉴别试剂盒的结构示意图；图2 CHD基因PCR产物分型图；图中1盒体、2衬垫、3特异性引物混合物ZWp、4扩增缓冲液、5DNA marker、6琼脂糖。
具体实施方式
结合实施例和附图作进一步说明本实用新型。应理解，这些实施例仅用于说明目的，而不用于限制本发明范围。一种鸭性别快速鉴别试剂盒，由盒体1，盒体内的衬垫2，衬垫的各孔腔内分别置入的特异性引物混合物ZWp3，扩增缓冲液4，DNA marker5和琼脂糖6组成。 运用本试剂盒对已知性别的30只13胚龄鸭胚和40只高邮鸭进行分子性别分型鉴定。I、样品采集30只13胚龄鸭胚的尿囊膜和40只高邮鸭的血液，应用传统的苯酚/氯仿法提取DNA，并将DNA浓度稀释到50ng/ U I。2、PCR扩增反应及结果I) PCR扩增反应体系准备在200 U I的PCR薄壁管中，加入2m模板DNA(约50 ng ),12. 5^1扩增缓冲液、2W引物ZffP (5uM)、和8. 5W水，PCR的反应体系为25W，充分混匀后短暂离心。2 ) PCR扩增反应程序设置在^pendorf PCR仪上设置PCR的反应条件为94°C预变性4 min,后94°C变性30s，55°C复性30s，72°C延伸308，35个循环，最后721延伸6 min，4°C保存备用。程序设置完毕后，将PCR反应管放入PCR仪进行反应扩增。3、PCR扩增产物的琼脂糖电泳鉴定反应结束后，取4-lOiU反应产物在2%琼脂糖胶，IXTBE电泳液中电泳。室温下，按照电泳槽宽度X6-8V，电泳20分钟。根据电泳图谱，鉴定基因型。在对应DNA marker 500bp下方出现的PCR产物为Z带495 bp，在对应DNA marker 250_500bp之间出现的PCR产物为W带351 bp。其中，在对应DNA marker 500bp下方出现一条PCR产物的的雄性ZZ型，在对应DNA marker 250_500bp 之间出现两条PCR产物的雌性ZW型，样品个体分子性别鉴定结果与其已知性别核对无误。
权利要求1 .鸭性别快速鉴别试剂盒盒体，其特征是，所述试剂盒由盒体(I),盒体内的衬垫(2)，衬垫的各孔腔内分别置入的特异性引物混合物ZWp (3)，扩增缓冲液(4)，DNA marker (5)和琼脂糖(6)组成。
专利摘要本实用新型公开了一种鸭性别快速鉴别试剂盒盒体，属于生物技术领域。鸭性别快速鉴别试剂盒盒体，由盒体，盒体内的衬垫，衬垫的各孔腔内分别置入的特异性引物混合物ZWp、扩增缓冲液、DNAmarker和琼脂糖组成，利用PCR-琼脂糖电泳技术检测PCR产物的片段大小，根据PCR产物的片段大小和数量鉴定个体的性别，具有准确性高、快速、价格低廉的优点。
文档编号C12Q1/68GK202808812SQ2012202861
公开日2013年3月20日 申请日期2012年6月18日 优先权日2012年6月18日
发明者胡艳, 李慧芳, 顾华兵, 徐文娟, 章明, 宋迟, 陶志云, 单艳菊, 章双杰, 陈文峰 申请人:江苏腾达源农牧有限公司, 江苏省家禽科学研究所