一种日本医蛭成虫饲喂及水蛭素可持续提取方法及专用设备与流程

本发明涉及一种中药动物药材的养殖技术，更具体的说涉及一种日本医蛭成虫饲喂及水蛭素可持续提取方法及专用设备。

技术背景

日本医蛭(学名：Hirudo nipponia)为医蛭科医蛭属的动物，俗名稻田医蛭、蚂蝗、线蚂蝗、水蛭、日本医水蛭。分布于日本、俄罗斯的远东地区、蒙古以及中国大陆的北起东北各省、内蒙古、西至四川、甘肃、南达广东等地，一般栖息于水田及其与之相通的沟渠、池塘和沼泽中以及特别是常年积水或排水不良的沤田和畈心田中数量最多。

水蛭素(Hirudin)是水蛭(Leech)或日本医蛭及其唾液腺中已提取出多种活性成分中活性最显著并且研究得最多的一种成分，它是由65-66个氨基酸组成的小分子蛋白质(多肽)。水蛭含有丰富的水蛭素，水蛭素对凝血酶有极强的抑制作用，是迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂。动物试验与临床研究表明，水蛭素能高效抗凝血、抗血栓形成，以及阻止凝血酶催化的凝血因子活化和血小板反应等进一步血瘀现象。此外，它还能抑制凝血酶诱导的成纤维细胞的增殖和凝血酶对内皮细胞的刺激。与肝素相比，它不仅用量少，不会引起出血，也不依赖于内源性辅助因子；而肝素则有引起出血的危险，在弥漫性血管内凝血的发病过程中抗凝血酶Ⅲ往往减少，这将限制肝素的疗效，采用水蛭会有较好的效果。目前从日本医蛭中提出水蛭素的方法是直接将日本医蛭处死，直接从虫体内提取；需要大量的水蛭成虫资源。

技术实现要素：

为解决上述问题本发明提供了一种日本医蛭成虫饲喂及水蛭素可持续提取方法，包括以下步骤：

1)在25-29℃环境条件下，对成年的日本医蛭进行集中饲喂，饲喂结束后清理饲料残渣；

2)将饲喂后的日本医蛭在22-25℃禁食15-20天；

3)在25-29℃环境条件下，集中禁食后的日本医蛭，用0.6-0.8％的生理盐水清洗后，将日本医蛭置于容器内，给日本医蛭喂饱诱导液，并用0.6-0.8％的生理盐水清洗再次清洗；

4)配制有硫酸锌、乙酸和水组成的催吐液，将日本医蛭平铺于特制容器中，按照日本医蛭重量与催吐液重量比1:1的比例加入催吐液；

5)对日本医蛭进行紫外光照射诱导2-3次，每次10-15min，每次诱导间隔10-15min；

6)照射诱导结束后，用喷淋0.6-0.8％的生理盐水清洗日本医蛭，并收集清洗水液作为水 蛭素提取液；

7)在水蛭素提取液加入稳定剂后，进行喷雾干燥，得到水蛭素粗提物；

8)将清洗后的日本医蛭继续饲养1个月后，重复步骤1)-7)持续提取水蛭素。

步骤2)所述的诱导液为鲜活鳝鱼提取物和葡萄糖混合的水溶液。

步骤7所述稳定剂为淀粉和壳聚糖的混合物，淀粉和壳聚糖的重量比为10:2。

一种日本医蛭成虫水蛭素可持续提取的专用设备，所述专用设备由外筒、内筒及紫外光源构成；

其中，外筒为上方开口的箱状结构或桶状结构，外筒的上方设置有支撑架外筒的底部设置有用于排水的阀门；内筒设置于外筒的内侧，内筒为上方开口的箱状结构或桶状结构，内筒(2)的底部为过滤底板构成，过滤底板为孔径20-100目的筛板或筛网，内筒上连接有挂钩；外光源设置在外筒和内筒上方开口的上方。

本发明的有益技术效果是：本发明提供了一种可持续提供水蛭素的方法，节约了日本医蛭的资源，同时本发明提供的提取催吐剂能够增加水蛭素的单次产量，具有显著的经济效益。

说明书附图

图1专用设备提起内筒的结构示意图；

图2专用设备放下内筒的结构示意图；

1外筒，1-1支撑架，1-2阀门，2内筒，2-1过滤底板，2-2挂钩；3紫外光源。

具体实施方式

实施例1专用设备的结构和使用方式

用于日本医蛭成虫水蛭素可持续提取的专用设备，由外筒1、内筒2及紫外光源3构成；其中，外筒1为上方开口的箱状结构或桶状结构，外筒1的上方设置有支撑架1-1，外筒1的底部设置有用于排水的阀门1-2；内筒2设置于外筒1的内侧，内筒2为上方开口的箱状结构或桶状结构，内筒2的底部为过滤底板2-1构成，过滤底板2-1为孔径20-100目的筛板或筛网，内筒2上连接有挂钩2-2；外光源3设置在外筒1和内筒2上方开口的上方。

在提取水蛭素时，先将将饲喂后的成年日本医蛭在22-25℃禁食15天，然后采用专用设备在25-29℃环境条件下，提取水蛭素；具体步骤如下：

①用0.7％的生理盐水清洗后，将日本医蛭置于内筒2中，将内筒2放置在外筒1的底部，日本医蛭放置的量为内筒2底面积每0.01m²放置600g成年水蛭；

②给日本医蛭喂饱鳝鱼诱导液，然后用0.7％的生理盐水清洗，通过阀门1-2排干，至无流动水；

③关闭阀门1-2，按照日本医蛭重量与催吐液重量比1:1的比例加入催吐液；

④对日本医蛭进行紫外光照射诱导3次，每次15min，每次诱导间隔15min；

⑤提取内筒2，将连接在内筒2上的挂钩2-2挂在外筒1上的支撑架1-1上，使内筒2离开外筒1底部的液面；喷淋0.7％的生理盐水清洗日本医蛭。

⑥通过阀门1-2收集清洗液作为水蛭素提取液。

⑦在水蛭素提取液加入稳定剂后，进行喷雾干燥，得到水蛭素粗提物。

实施例2不同催吐剂对日本医蛭水蛭素提取量的影响

称取成年日本医蛭30kg，均分为3组，分别给名为A组、B组和C组，每组10kg；先将将饲喂后的成年日本医蛭在22-25℃禁食15天，然后采用专用设备在25-29℃环境条件下，参照实施例1所述的方法提取水蛭素。A组饲喂由硫酸锌、乙酸和水重量比2:5:100的催吐剂；A组饲喂由硫酸锌、95％酒精和水重量比2:5:100的催吐剂；C组饲喂硫酸锌和水重量比2:100的催吐剂。各组收集水蛭素提取液后，加入淀粉和壳聚糖的重量比为10:2组成的稳定剂的稳定剂，添加量为每组100g。立即喷雾干燥后得到水蛭素粗提物。检测各组制备得到的水蛭素粗提物。A组水蛭素粗提物中抗凝血酶的含量为1210AT-U/g，B组水蛭素粗提物中抗凝血酶的含量为1040AT-U/g，B组水蛭素粗提物中抗凝血酶的含量为870AT-U/g。

实施例3不同的诱导液日本医蛭水蛭素提取量的影响

(1)制备诱导液

称取鲜活鳝鱼1000g，切块粉碎，投入到5000ml水中，100目过滤，收集水液，并在水液中加入200g葡萄糖，制备得到鳝鱼诱导液；

称取动物肝脏1000g,切块粉碎，投入到5000ml水中，100目过滤，收集水液，并在水液中加入200g葡萄糖，制备得到内脏诱导液；

称取鲜活蚯蚓1000g,切块粉碎，投入到5000ml水中，100目过滤，收集水液，并在水液中加入200g葡萄糖，制备得到蚯蚓诱导液；

(2)诱导液的考察

称取成年日本医蛭30kg，均分为3组，分别给名为Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组，每组10kg；先将将饲喂后的成年日本医蛭在22-25℃禁食15天，然后采用专用设备在25-29℃环境条件下，参照实施例1所述的方法提取水蛭素。Ⅰ组喂饱鳝鱼诱导液、Ⅱ组喂饱内脏诱导液、Ⅲ组喂饱蚯蚓诱导液；分别清洗各组，并排除水渍。

各组分别饲喂硫酸锌、乙酸和水重量比2:10:100的催吐剂，各组收集水蛭素提取液后，加入淀粉和壳聚糖的重量比为10:2组成的稳定剂的稳定剂，添加量为每组100g。立即喷雾干燥后得到水蛭素粗提物。检测各组制备得到的水蛭素粗提物。A组水蛭素粗提物中抗凝血酶的含量为1130AT-U/g，B组水蛭素粗提物中抗凝血酶的含量为960AT-U/g，B组水蛭素粗提物 中抗凝血酶的含量为730AT-U/g。