一种GyV5新型环形病毒VP3蛋白制备方法与流程

文档序号:11126078阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种GyV5新型环形病毒VP3蛋白的制备方法,其特征在于,以pGEX-6p-1质粒以及GyV5病毒VP3基因为模板,PCR分别扩增出含pGEX-6p-1线性化载体以及GyV5病毒VP3基因片段,并利用重组酶ExnaseTM II进行快速重组克隆;阳性克隆转化到大肠杆菌,实现VP3蛋白表达。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于包括以下步骤:

1)利用下述引物,以pGEX-6p-1质粒为模板,PCR扩增出pGEX-6p-1线性化表达载体;

上游引物:5‘TAATGACGGTGAAAACCTCTGACACATGC3’;

下游引物:5‘CATGGGCCCCTGGAACAGAACTTCCAGAT3’;

2)利用下述引物,以GyV5-VP3基因为模板,PCR扩增出VP3基因;

上游引物:5‘GTTCCAGGGGCCCATGTTGGCTGACGAGTT3’;

下游引物:5‘GTTTTCACCGTCATTAAAGTTCTTCTTGTA3’;

3)利用重组酶ExnaseTM II对步骤1)和2)得到的PCR产物进行快速重组克隆;阳性克隆经IPTG诱导后进行表达鉴定与纯化。

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