提取动物基因组DNA的方法与流程

技术特征：

1.一种提取动物基因组DNA的方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)样品采集：采集动物肌肉组织或毛囊，并放置在质量百分比为70％的酒精中，在-20℃进行保存；

2)细胞裂解液配制：细胞裂解液中，按浓度为3.770g/LEDTA-Na₂、1.5764g/L Tris-HCl、0.5844g/L氯化钠、2.884g/L十二烷基硫酸钠，以ddH₂O为溶剂进行配置，配置的溶液充分溶解后，在37℃孵育5min；

3)DNA萃取液配制：称取0.6041g的氯化锂溶于950mL的ddH₂O中充分溶解，然后定容至1000mL；

4)DNA提取：

a)取肌肉组织放置于的离心管中，并用充分剪碎；若是毛囊则取5-8根带毛囊的毛发，用剪去毛干部分，将毛囊置于离心管中；

b)向离心管中加入细胞裂解液，轻轻晃荡使组织样品完全浸泡在裂解液中；

c)再向离心管中加入蛋白酶K，充分吹打后，振荡18-22s，在4000-5000rpm下离心3-5s；

d)之后将离心管在20-60℃水浴10-15min；

e)向离心管中加入氯化锂，振荡10-15s，在4000-5000rpm离心下8-10s，立即冰浴10-15min；

f)在转速为13000-14000rpm离心10-15min，将上清液转移至洁净的离心管中，弃沉淀；

g)向上清液中加入预先冷冻过的无水乙醇，轻轻上下颠倒摇晃，室温静置10-15min沉淀DNA。

h)在转速为13000-14000rpm离心10-15min，弃上清，用相同体积的质量百分比为70％或75％乙醇洗涤一次；重复上述步骤；

i)弃上清，在滤纸上倒置离心管20min，使管内液体与酒精完全去除；或直接置于40-45℃烘箱烘干10min；

j)加入TE或ddH₂O溶解DNA，完成DNA的提取。

2.根据权利要求1所述的提取动物基因组DNA的方法，其特征在于：所述的预先冷冻过的无水乙醇是将无水乙醇在-20℃下放置30min以上。

3.根据权利要求1所述的提取动物基因组DNA的方法，其特征在于：所述的细胞裂解液现配现用。