一种天冬酰胺酶突变体及其应用的制作方法

文档序号:12248877阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种天冬酰胺酶突变体,其特征在于,将天冬酰胺酶氨基酸序列的第一个柔性loop区域的氨基酸替换为IAGSAATATQTTAYKA。

2.根据权利要求1所述的天冬酰胺酶突变体,其特征在于,是将SEQ ID NO.1所示天冬酰胺酶氨基酸序列的第一个柔性loop区域17-IAGADQSKTSTTEYKA-32进行替换,获得氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的天冬酰胺酶突变体。

3.根据权利要求2所述的天冬酰胺酶突变体,其特征在于,还对SEQ ID NO.2所示天冬酰胺酶突变体第26位谷氨酰胺及29位丙氨酸进行定点饱和突变。

4.根据权利要求3所述的天冬酰胺酶突变体,其特征在于,将第26位的谷氨酰胺突变为精氨酸,第29位的丙氨酸突变为丝氨酸,获得如SEQ ID NO.3所示天冬酰胺酶突变体;或将第26位的谷氨酰胺突变为苏氨酸,第29位的丙氨酸突变为谷氨酸,获得如SEQ ID NO.4所示天冬酰胺酶突变体。

5.一种提高天冬酰胺酶酶活的方法,是将序列如SEQ ID NO.1所示天冬酰胺酶的第一个柔性loop区域的氨基酸替换为IAGSAATATQTTAYKA;所述柔性loop区域为17-IAGADQSKTSTTEYKA-32

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,再对所述第26位谷氨酰胺及29位丙氨酸进行定点突变。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述定点突变是将第26位的谷氨酰胺突变为精氨酸,第29位的丙氨酸突变为丝氨酸,获得如SEQ ID NO.3所示天冬酰胺酶突变体;或将第26位的谷氨酰胺突变为苏氨酸,第29位的丙氨酸突变为谷氨酸,获得如SEQ ID NO.4所示天冬酰胺酶突变体。

8.编码权利要求1-4任一所述天冬酰胺酶突变体的基因。

9.一种基因工程菌,其特征在于,以pP43NMK为载体,以枯草芽孢杆菌为宿主,表达权利要求8所述编码天冬酰胺酶突变体的基因。

10.权利要求9所述基因工程菌在医药领域中的应用。

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