WU多瘤病毒重组抗原及其制备方法和应用与流程

文档序号:12399241阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种WU多瘤病毒重组抗原,其特征在于:包括SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的WU多瘤病毒重组抗原,其特征在于:由核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的核酸片段和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的核酸片段表达得到。

3.一种WU多瘤病毒重组抗原的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

步骤1、将核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的WU多瘤病毒VP2核酸片段和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的WU多瘤病毒STAg核酸片段链接,得VP2-STAg核酸片段;

步骤2、将VP2-STAg核酸片段装入PGEX-20T质粒,得PGEX-20T-VP2-STAg重组质粒;

步骤3、将PGEX-20T-VP2-STAg重组质粒转入大肠杆菌,并诱导PGEX-20T-VP2-STAg重组质粒表达蛋白,蛋白纯化后即得WU多瘤病毒重组抗原。

4.根据权利要求3所述的WU多瘤病毒重组抗原的制备方法,其特征在于,步骤1中,核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的WU多瘤病毒VP2核酸片段由碱基序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物组制得,核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的WU多瘤病毒STAg核酸片段由碱基序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的引物组制得。

5.根据权利要求3所述的WU多瘤病毒重组抗原的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

步骤1、将碱基序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物组进行PCR反应,得WU多瘤病毒VP2核酸片段;将碱基序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物组进行PCR反应,得WU多瘤病毒STAg核酸片段;

步骤2、利用T4DNA连接酶将步骤1所得WU多瘤病毒VP2核酸片段和WU多瘤病毒STAg核酸片段进行平端链接,链接后用碱基序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.8的引物组进行扩增,得VP2-STAg核酸片段;

步骤3、VP2-STAg核酸片段和PGEX-20T质粒分别用BamHⅠ和Xbal进行双酶切,然后利用T4DNA连接酶进行连接反应,连接产物转化、筛选后得PGEX-20T-VP2-STAg重组质粒;

步骤4、将PGEX-20T-VP2-STAg重组质粒转入E,coli菌株BL21的感受态细胞,IPTG诱导后表达重组蛋白,蛋白纯化后即得WU多瘤病毒重组抗原。

6.权利要求1~5任一项所述的WU多瘤病毒重组抗原的应用,其特征在于:用于制备预防或治疗WU多瘤病毒感染的疫苗或药物。

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