一种桑辛素M‑6‑O‑β‑D‑葡萄糖苷及其制备方法与应用与流程

本发明涉及医药，特别是一种桑辛素M-6-O-β-D-葡萄糖苷(SP-19-1)及其制备方法与应用。

背景技术：

桑白皮为桑科植物桑(拉丁学名：Morus alba L.)的干燥根皮，别名桑根白皮、桑根皮、桑皮、白桑皮，秋末落叶时至次春发芽前采挖根部，刮去黄棕色粗皮，纵向剖开，剥取根皮，晒干。含黄酮类成分：桑素(mulberrin)，桑皮色烯素(mulberrochromene)，环桑素(cyclomulberrin)，环桑皮色烯素(cyclomulberro-chromene)，桑根皮素(morusin)，环桑皮素(cyclomorusin)，氧化二氢桑根皮素(oxydihydromomsin)，桑黄酮(kuwanon)A、B、C、D、E、F、G(即albanin F，moracenin B)、H(即albanin G，moracenin A)、I、K、L、Y、Z，桑白皮素(moracenin)C、D，桑根酮(sffnggenone)A～P；又含桑呋喃(mulberrofuran)A、B、C、K、N、0、M、P、Q，桦皮酸；香豆素类：5,7-羟基香豆素(5,7-dihydmxycoumarin)伞形花内酯(umbelliferone)、东莨菪内酯(即东莨菪素，scopoletin)、莨菪内酯等成分。多糖类：粘液素、桑多糖、甲克素、壳聚糖；还含α-及β-香树精、谷固醇、挥发油、鞣质等。具有降压、利尿、镇静镇痛、抗炎、抗菌、抑制血小板聚集、降糖之功效，对人子宫颈癌JTC-26株的抑制率为70％左右，具有诱生干扰素作用。

LPS是内毒素的主要成分，内毒素进入机体后通过诱发过度的炎症反应可引起急性肺损伤(acute lung injury，ALI)，LPS诱导的ALI是严重创伤或感染后出现最早、发病率最高的并发症之一，肺血管内皮细胞损伤是LPS导致急性肺损伤的关键环节。因此研究血管内皮的受损及其修复对ALI的治疗和防御具有显著意义。内皮细胞功能失调受损后会分泌多种细胞因子、炎症因子，如趋化因子(MCP-1)、粘附因子(ICAM-1、VCAM-1、E-selectin)、炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)等。同时内皮细胞也能够释放各种活性物质，协调血管舒张因子及收缩因子之间的平衡，如缩血管物质ET-1及扩血管物质NO，ET-1/NO平衡的破坏是动脉内皮受损的显著特征。iNOS是一种在炎症因子刺激下产生的一种物质，它的含量可以代表血管损伤的程度，最近的研究表明，活化的AMPK能够显著改善TNF-α诱导内皮细胞损伤中NF-κB的核移位，5-aminoimidazole-4-carboxamide-1-β-d-ribofuranoside(AICAR)也能够通过激活AMPK抑制LPS诱导的炎症反应。但至今未见有从桑白皮中提取有效活性部位桑辛素M-6-O-β-D-葡萄糖苷(简称SP-19-1)并用于制备治疗LPS诱导的HPAEC损伤药物中的应用。

技术实现要素：

针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种桑辛素M-6-O-β-D-葡萄糖苷及其制备方法与应用，可有效解决从桑白皮中提取桑辛素M-6-O-β-D-葡萄糖苷(简称SP-19-1)，以及在制备治疗LPS诱导的HPAEC损伤药物中的应用问题。

本发明解决的技术方案是，所述的桑辛素M-6-O-β-D-葡萄糖苷是从桑白皮中提取的有效活性成分，分子结构式见图1所示，该桑辛素M-6-O-β-D-葡萄糖苷的制备方法是：

将桑白皮煎煮提取，提取液减压浓缩得干燥物，干燥物加蒸馏水混悬，离心除去不溶物，得上清液；上清液上树脂柱，依次用水、质量浓度30％乙醇梯度洗脱，各个梯度洗脱液浓缩至干，干物用甲醇溶解，再加入硅胶，得载有样品的硅胶；将载有样品的硅胶加入到色谱柱的液面上，进行梯度洗脱，将收集的流份经过TLC分析，合并含有目标成分的流份，减压浓缩，得到含有目标成分的总样A1、A2、A3；总样A3用甲醇溶解，上Toyopearl HW-40柱，用甲醇洗脱，薄层检识，合并含相同的流份，得到子流份A3-1，减压浓缩、干燥，用甲醇溶解，上ODS柱，用甲醇洗脱，薄层检识，合并含相同的流份，减压浓缩，得到目标成分棕色粉末桑辛素M-6-O-β-D-葡萄糖苷(SP-19-1)：

该桑辛素M-6-O-β-D-葡萄糖苷对LPS诱导的HPAEC损伤有保护作用，有效用于制备治疗LPS诱导的HPAEC损伤的药物，实现桑辛素M-6-O-β-D-葡萄糖苷在制备治疗LPS诱导的HPAEC损伤药物中的应用。

本发明是从桑白皮中提取的一种有效活性成分桑辛素M-6-O-β-D-葡萄糖苷(简称SP-19-1)，其制备方法新颖独特，易操作使用，其制备的桑辛素M-6-O-β-D-葡萄糖苷作为唯一活性部位在制备治疗LPS诱导的HPAEC损伤药物中的应用，开拓了桑白皮的新用途，有良好的经济和社会效益。

附图说明

图1为本发明的桑辛素M-6-O-β-D-葡萄糖苷(简称SP-19-1)的分子结构图。

图2为本发明SP-19-1对HPAEC细胞损伤的影响图。

图3为本发明AMPK拮抗剂Compound C对SP-19-1的影响图。

图4为本发明SP-19-1对HPAEC细胞TNF-α的影响图。

图5为本发明SP-19-1对HPAEC细胞IL-1β的影响图。

图6为本发明SP-19-1对HPAEC细胞IL-6的影响图。

图7为本发明SP-19-1对HPAEC细胞ET-1的影响图。

图8为本发明SP-19-1对HPAEC细胞NO的影响图。

图9为本发明SP-19-1对HPAEC细胞iNOS的影响图。

图10为本发明SP-19-1对HPAEC细胞ICAM-1的影响图。

图11为本发明SP-19-1对HPAEC细胞VCAM-1的影响图。

图12为本发明SP-19-1对HPAEC细胞E-selectin的影响图。

图13为本发明SP-19-1对HPAEC细胞MCP-1的影响图。

具体实施方式

以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。

本发明在具体实施中，所述的桑辛素M-6-O-β-D-葡萄糖苷是从桑白皮中提取的有效活性成分，分子结构式见图1所示，该桑辛素M-6-O-β-D-葡萄糖苷的制备方法是：

将桑白皮2.4kg每次用其重量8-12倍的蒸馏水煎煮提取3次，每次60min，合并提取液，减压浓缩得干燥物，加干燥物重量体积2-3倍的蒸馏水混悬，重量体积是指固体物以g计，液体以mL计，6000r/min离心除去不溶物，得上清液；取7.0L Diaion HP-20大孔吸附树脂填料，用质量浓度95％乙醇浸泡24h装柱，用蒸馏水洗至无醇味，上清液浓缩至50℃相对密度1.2-1.4，上树脂柱，依次用水、质量浓度30％乙醇洗脱，每个梯度洗脱液用量为10个柱体积，流速为2BVh-1，各个梯度洗脱液浓缩至干，得到30％乙醇洗脱组分和粗提物，加入50mL甲醇溶解，再加入过160-200目筛的硅胶40g，45℃减压回收甲醇，得到载有样品的硅胶；取过200-300目筛的硅胶500g，加入二氯甲烷800mL，转移到80cm长×8cm内径的色谱柱中，用二氯甲烷充实柱床，将液面降至距硅胶面5cm处，再将上述载有样品的硅胶加入到色谱柱的液面上，依次加入体积比为100:3、100:5、100:10梯度的二氯甲烷-甲醇系统，每个梯度4L，进行梯度洗脱，流速为10mL·min^-1，每100mL作为1个流份收集，将收集的流份经过TLC分析，合并含有目标成分的流份，减压浓缩，得到含有目标成分的总样A1、A2、A3，所述的TLC分析中使用的吸附剂为GF254，展开剂为体积比20:1-5:1的二氯甲烷-甲醇；总样A1用质量浓度30％甲醇溶解，上Toyopearl HW-40C柱，用质量浓度30％甲醇洗脱，流速为1mL·min^-1，每2mL为一个流份，薄层检识，合并含相同的流份，得到子流份A1-1、A1-2；总样A2用质量浓度35％甲醇溶解，上Toyopearl HW-40柱，用质量浓度35％甲醇洗脱，流速为1mL·min^-1，每2mL为一个流份，薄层检识，合并含相同的流份，得到子流份A2-1、A2-2；总样A3用质量浓度50％甲醇溶解，上Toyopearl HW-40柱，用质量浓度50％甲醇洗脱，流速为1mL·min^-1，每2mL为一个流份，薄层检识，合并含相同的流份，得到子流份A3-1；所得各个子流份45℃减压浓缩，得到含有目标成分的样品；子流份A3-1用质量浓度26％甲醇溶解，上ODS柱，用质量浓度26％甲醇洗脱，流速为5mL·min^-1，每10mL为一个流份，薄层检识，合并含相同的流份，流份27-43在45℃减压浓缩，得到目标成分棕色粉末桑辛素M-6-O-β-D-葡萄糖苷(SP-19-1)：

该桑辛素M-6-O-β-D-葡萄糖苷对LPS诱导的HPAEC损伤有保护作用，有效用于制备治疗LPS诱导的HPAEC损伤的药物，实现桑辛素M-6-O-β-D-葡萄糖苷在制备治疗LPS诱导的HPAEC损伤药物中的应用。

本发明方法从桑白皮中提取的有效活性成分，经液相色谱法测定，其结构式如图1所示，命名为桑辛素M-6-O-β-D-葡萄糖苷(简称SP-19-1)，具有对LPS诱导的HPAEC损伤有保护作用，并经实验得到了充分证明，有关资料如下：

材料与方法

1实验材料

1.1细胞

HPAEC细胞株购自中国科学院细胞库。

1.2细胞培养

将HPAEC细胞培养在含体积分数为10％胎牛血清的1640培养基中(含青霉素和链霉素100kU·L^-1)，置于37℃、5％CO₂饱和湿度培养箱中培养，均取对数生长期细胞用于实验。

1.3实验药物：本发明方法制备的桑辛素M-6-O-β-D-葡萄糖苷(简称SP-19-1)。

1.4试剂

脂多糖(sigma)；醋酸地塞米松片，国药准字H12020686，生产批号13050102，(天津天药药业股份有限公司)；人TNF-α、IL-1β和IL-6ELISA试剂盒(武汉伊莱瑞特生物科技有限公司)；ICAM-1、VCAM-1、E-selectin、MCP-1ELISA(武汉伊莱瑞特生物科技有限公司)；NO，iNOS试剂盒(南京建成)；1640培养基(美国Gibco公司)；胰蛋白酶(美国Gibco公司)；胎牛血清(美国Gibco公司)；水为超纯水；PBS缓冲液等为自配；总蛋白提取试剂盒、BCA法蛋白定量试剂盒(北京普利来基因技术有限公司)；其他各种试剂均为市售分析纯。

1.5仪器

Bio Mate 3S紫外分光光度计(Thermo Fisher Scientific)；AB204-N万分之一精密分析天平(METTLER TOLEDO)；Centrifuge-5804R小型高速低温冷冻离心机(Eppendorf公司)；iMARK型酶标仪(美国BIO-RAD)。二氧化碳培养箱(上海STIK)；超净工作台(苏净集团)；iMARK型酶标仪(美国BIO-RAD公司)；Arium 611VF超级组合型超纯水器(SARTORIUS)；倒置显微镜(Nikon)；PB-10酸度计(德国赛多利斯集团)，培养皿、96孔培养板、细胞冻存管(Corning公司)。

2实验方法

2.1 LPS诱导HPAEC细胞损伤模型的建立

将HPAEC细胞培养于含10％胎牛血清的1640培养基中，待细胞贴壁后将原培养基移出，用PBS缓冲液洗一遍，更换不含血清的空白培养基饥饿12h，然后换上含1μg/mL LPS的1640培养基继续培养。24h后即形成HPAEC细胞损伤模型。

2.2 SP-19-1对HPAEC细胞损伤的影响

将HPAEC细胞用含10％胎牛血清的1640培养基接种于96孔板，待细胞完全贴壁后将原培养基移出，用PBS缓冲液洗一遍，更换不含血清的1640培养基饥饿12h后正常组换上新的1640培养基，模型组换上LPS浓度为1μg/mL的培养基，SP-19-1组换上1μg/mL LPS+SP-19-1的培养基，SP-19-1+Compound C组换上1μg/mL LPS+SP-19-1+Compound C(10μM)的培养基。培养24h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20μL，37℃继续培养4小时，吸净培养液，每孔加入150μL DMSO，震荡10分钟，使结晶物完全溶解。以DMSO调零，用酶标仪在490nm下测定各孔的吸光度A。

2.3实验分组

实验分为5组，正常对照组(NC)；模型组(M)(用含1μg/mL的LPS培养基培养细胞24h)；地塞米松组(Dex)(地塞米松，0.5μM)；SP-19-1组(1μg/mL LPS+3μM SP-19-1)；SP-19-1+C组(1μg/mL LPS+3μM SP-19-1+10μM Compound C)。

2.4 SP-19-1对HPAEC细胞TNF-α、IL-1β、IL-6的影响

取各组细胞的培养基上清液，向预先包被抗体的微孔板中加入标准品、待测样本，经过恒温温浴，加入生物素抗体工作液，恒温温浴温和洗涤后，加入酶结合工作液，恒温温浴温和洗涤后加入底物溶液(TMB)，温浴后加终止液终止反应。用酶标仪在450nm波长下检测吸光度(OD)值，通过标准曲线计算样品中这些炎症因子的活性。

2.5 SP-19-1对HPAEC细胞ICAM-1、VCAM-1、E-selectin的影响

各组细胞提取细胞总蛋白，用适当的媒介溶解之后，取制备好的细胞总蛋白溶液，用BCA法测定其蛋白浓度，调整好蛋白浓度，接着向预先包被抗体的微孔板中加入标准品、待测样本，经过恒温温浴，加入生物素抗体工作液，恒温温浴温和洗涤后，加入酶结合工作液，恒温温浴温和洗涤后加入底物溶液(TMB)，温浴后加终止液终止反应。用酶标仪在450nm波长下检测吸光度(OD)值，通过标准曲线计算各组中蛋白的表达量。

2.6 SP-19-1对HPAEC细胞趋化因子MCP-1的影响

各组细胞提取细胞总蛋白，用适当的媒介溶解之后，取制备好的细胞总蛋白溶液，用BCA法测定其蛋白浓度，调整好蛋白浓度，接着向预先包被抗体的微孔板中加入标准品、待测样本，经过恒温温浴，加入生物素抗体工作液，恒温温浴温和洗涤后，加入酶结合工作液，恒温温浴温和洗涤后加入底物溶液(TMB)，温浴后加终止液终止反应。用酶标仪在450nm波长下检测吸光度(OD)值，通过标准曲线计算各组中蛋白的表达量。

2.7 SP-19-1对HPAEC细胞ET-1的影响

取各组细胞的培养基上清液，向预先包被抗体的微孔板中加入标准品、待测样本，经过恒温温浴，加入生物素抗体工作液，恒温温浴温和洗涤后，加入酶结合工作液，恒温温浴温和洗涤后加入底物溶液(TMB)，温浴后加终止液终止反应。用酶标仪在450nm波长下检测吸光度(OD)值，通过标准曲线计算各组中ET-1蛋白的表达量。

2.8硝酸还原酶法检测细胞上清液中NO的含量

取各组细胞的培养基上清液，按照试剂盒的操作检测NO的含量。

2.9细胞上清液中iNOS含量的测定

取各组细胞的培养基上清液，按照试剂盒的操作检测iNOS的含量。

2.10统计方法

实验数据用均数±标准差表示，用SPSS18.0统计软件处理数据，各组间比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)，P<0.05表示有显著性意义，P<0.01表示有极显著性意义。

3结果

3.1 SP-19-1对HPAEC细胞损伤的影响

与空白对照组相比，LPS能显著损伤HPAEC细胞(P<0.01)；与模型组相比，SP-19-1组均能改善HPAEC的细胞损伤状况(P<0.01)，结果见表1、图2。

表1 SP-19-1对HPAEC细胞损伤的影响(n＝3)

注：与正常组相比，^*表示P<0.05，^**表示P<0.01；与模型组相比，#表示P<0.05，##表示P<0.01。

3.2 AMPK拮抗剂Compound C对SP-19-1的影响

与空白对照组相比，LPS能显著损伤HPAEC细胞(P<0.01)；与模型组相比，SP-19-1能改善HPAEC的细胞损伤状况(P<0.01)，SP-19-1+C组改善作用消失(P<0.01)，结果见表2、图3。

表2 AMPK拮抗剂Compound C对SP-19-1的影响(n＝3)

注：与正常组相比，^*表示P<0.05，^**表示P<0.01；与模型组相比，#表示P<0.05，##表示P<0.01。

3.3 SP-19-1对HPAEC细胞损伤TNF-α、IL-1β、IL-6的影响

与空白对照组相比，模型组TNF-α、IL-1β、IL-6水平极显著性升高(P<0.05或P<0.01)；与模型组相比，SP-19-1能降低TNF-α、IL-1β、IL-6的水平(P<0.05或P<0.01)，而SP-19-1+C组TNF-α、IL-1β、IL-6水平极显著性升高(P<0.05或P<0.01)，SP-19-1降低炎症因子的作用消失，结果见表3、图4-6。

表3 SP-19-1对HPAEC细胞TNF-α、IL-1β、IL-6的影响(n＝3)

注：与正常组相比，^*表示P<0.05，^**表示P<0.01；与模型组相比，#表示P<0.05，##表示P<0.01。

3.4 SP-19-1对HPAEC细胞ET-1，NO，iNOS的影响

与空白对照组相比，模型组ET-1，iNOS水平极显著性升高(P<0.01)，NO水平显著降低(P<0.01)；与模型组相比，SP-19-1组能降低ET-1，iNOS的水平(P<0.01)，升高NO的水平(P<0.01)；而SP-19-1+C组ET-1，iNOS水平极显著性升高(P<0.01)，NO水平显著降低(P<0.01)，SP-19-1降低ET-1，iNOS，升高NO的作用消失，结果见表4、图7-9。

表4 SP-19-1对HPAEC细胞ET-1，NO，iNOS的影响(n＝3)

注：与正常组相比，^*表示P<0.05，^**表示P<0.01；与模型组相比，#表示P<0.05，##表示P<0.01。

3.5 SP-19-1对HPAEC细胞ICAM-1、VCAM-1、E-selectin的影响

与空白对照组相比，模型组ICAM-1、VCAM-1、E-selectin蛋白的表达极显著性升高(P<0.01)；与模型组相比，SP-19-1能降低ICAM-1、VCAM-1、E-selectin蛋白的表达(P<0.01或P<0.01)，而SP-19-1+C组ICAM-1、VCAM-1、E-selectin蛋白的表达极显著性升高(P<0.01)，SP-19-1降低ICAM-1、VCAM-1、E-selectin蛋白表达的作用消失，结果见表5、图10-12。

表5 SP-19-1对HPAEC细胞ICAM-1、VCAM-1、E-selectin的影响(n＝3)

注：与正常组相比，^*表示P<0.05，^**表示P<0.01；与模型组相比，#表示P<0.05，##表示P<0.01。

3.6 SP-19-1对HPAEC细胞MCP-1的影响

与空白对照组相比，模型组MCP-1蛋白的表达极显著性升高(P<0.01)；与模型组相比，SP-19-1能降低MCP-1蛋白的表达(P<0.01)，而SP-19-1+C组MCP-1蛋白的表达极显著性升高(P<0.01)，SP-19-1降低MCP-1蛋白的作用消失，结果见表6、图13。

表6 SP-19-1对HPAEC细胞MCP-1的影响(n＝3)

注：与正常组相比，^*表示P<0.05，^**表示P<0.01；与模型组相比，#表示P<0.05，##表示P<0.01。

结论

急性肺损伤时血管内皮细胞既是受损的主要靶器官，也是活跃的效应细胞，有研究显示肺血管内皮细胞(pulmonary vasculary endothelial cell，PVEC)的改变在急性肺损伤中十分重要。肺血管内皮细胞在LPS、细胞因子、氧自由基等的作用下，其通透性增高，分泌和释放各种炎性介质和细胞因子，使得促炎和抗炎介质失衡。机体出现ALI时多种炎症因子(如TNF-α、IL-1β、IL-6)、黏附分子(ICAM-1、VCAM-1、E-selectin)、趋化因子(MCP-1)的表达均显著升高。在这些介质表达调控中，核转录因子NF-κB的激活和核移位是关键因素，内毒素等作用于血管内皮细胞使胞浆中NF-κB被其抑制因子IκB释放，成为其活性形式并迅速发生核移位，寻找特定靶基因启动子区的κB位点并与之结合，指导下游基因的表达调控。很多研究表明，阻断NF-κB通路对LPS诱导小鼠的急性肺损伤有保护作用，同时AMPK也是炎症调节过程中的一个关键因素。尽管活化的AMPK被证明具有抗炎作用，但是AMPK是否能够改善LPS诱导的HPAEC细胞损伤呢？同时内皮细胞也能够释放缩血管物质ET-1及扩血管物质NO，ET-1/NO平衡的破坏是动脉内皮受损的显著特征。iNOS的含量可以代表血管损伤的程度，故本实验通过检测细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)，黏附分子(ICAM-1、VCAM-1、E-selectin)，趋化因子(MCP-1)的表达，ET-1，NO、iNOS的含量，同时检测AMPK拮抗剂Compound C对其的影响，探讨化合物SP-19-1对LPS诱导的HPAEC细胞损伤的影响，初步揭示其作用机制，为其进一步的开发应用奠定基础。

LPS是细菌内毒素的主要成分，其毒性作用主要通过激发宿主细胞产生过强的反应来体现。从实验结果我们可以看出LPS能够造成HPAEC细胞的损伤，而给予SP-19-1后能够下注改善LPS诱导的细胞损伤。同时为了阐释AMPK拮抗剂Compound C对SP-19-1改善细胞损伤的影响，实验设置了SP-19-1+C组，实验结果显示，加入AMPK拮抗剂Compound C后，SP-19-1改善细胞损伤的活性消失，这也初步证明SP-19-1改善LPS诱导的细胞损伤可能与AMPK/NF-κB通路有关。

LPS引起的HPAEC细胞损伤本质是过度炎症反应，从实验结果我们可以看出模型组TNF-α、IL-1β、IL-6的水平显著升高，给予SP-19-1后TNF-α、IL-1β、IL-6的水平显著下降，而SP-19-1+C组TNF-α、IL-1β、IL-6的水平显著升高，显示SP-19-1降低炎症因子的作用消失。

NO是内皮功能稳定的关键，具有舒张血管、抑制血小板的粘附、抑制平滑肌细胞增殖、聚集以及单核细胞向内皮细胞的粘附等作用。而ET-1是目前所知作用最强的长效血管收缩剂，可以促进平滑肌细胞的增殖和巨噬细胞聚集、粘附。iNOS是一种在炎症因子刺激下产生的一种物质，其含量的多少可以代表血管损伤的程度。实验结果显示，LPS可以诱导HPAEC细胞的损伤，同时引起NO含量的降低，促进ET-1、iNOS的生成，给予SP-19-1后NO含量显著升高，ET-1、iNOS含量降低，而SP-19-1+C组NO含量降低，ET-1、iNOS含量升高，SP-19-1改善作用消失。

炎症反应产生的ICAM-1、VCAM-1、E-selectin、MCP-1等在ALI等疾病的发生发展中起了非常重要的作用，损伤的血管内皮细胞可能通过增加粘附因子、趋化因子的分泌，促进炎性细胞大量粘附于血管内皮管壁并聚集，加速炎症反应，造成血管内皮功能障碍，从实验结果我们可以看出模型组ICAM-1、VCAM-1、E-selectin、MCP-1的表达显著升高。给予SP-19-1后ICAM-1、VCAM-1、E-selectin、MCP-1表达显著降低，而加入AMPK抑制剂后Compound C，SP-19-1降低粘附因子及趋化因子的作用消失。

由上述可以看出，本发明在前期实验的基础上建立LPS诱导的HPAEC细胞损伤模型，筛选SP-19-1药物活性，并通过ELISA方法检测各组细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平，ET-1、NO、iNOS的含量，各组细胞中VCAM-1、ICAM-1、E-selectin的水平及MCP-1的表达，同时检测AMPK拮抗剂Compound C对SP-19-1的影响，研究SP-19-1对HPAEC细胞损伤的保护机制，特别是通过研究试验，桑白皮有效单体SP-19-1对脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导的人肺动脉内皮细胞(Human pulmonary artery endothelial cells，HPAEC)损伤的保护作用及作用机制。建立LPS诱导的HPAEC细胞损伤模型，检测SP-19-1对其的保护作用，同时检测各组细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)的水平，内皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(iNOS)的含量，各组细胞的细胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)、细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)、E-选择素(E-selectin)的水平及单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)的表达，同时检测AMPK拮抗剂Compound C对SP-19-1的影响，探讨SP-19-1对HPAEC损伤的保护机制。实验结果表明，LPS能够造成HPAEC细胞的损伤(P<0.01)，与正常组相比，模型组细胞TNF-α、IL-1β、IL-6的水平显著升高(P<0.05或P<0.01)，ET-1的水平及iNOS的含量升高(P<0.01)，NO的含量减少(P<0.01)，粘附分子ICAM-1、VCAM-1、E-selectin及趋化因子MCP-1的水平显著升高(P<0.01)。与模型组相比，SP-19-1能够显著改善HPAEC的细胞损伤状况(P<0.01)，降低TNF-α、IL-1β、IL-6的水平(P<0.05或P<0.01)，降低ET-1的水平及iNOS的含量(P<0.01)，升高NO的含量(P<0.01)，降低粘附分子ICAM-1、VCAM-1、E-selectin及趋化因子MCP-1的水平(P<0.01)。SP-19-1对LPS诱导的HPAEC损伤具有保护作用，且其作用机制可能与AMPK/NF-κB通路有关。

总之，SP-19-1能够显著改善LPS引起的HPAEC细胞损伤，降低炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平，升高NO含量，降低ET-1、iNOS含量，降低ICAM-1、VCAM-1、E-selectin、MCP-1表达，而加入AMPK抑制剂Compound C后，SP-19-1改善HPAEC损伤的作用消失，提示SP-19-1对LPS诱导的HPAEC细胞损伤具有保护作用，且其作用机制可能与AMPK/NF-κB有关。有效用于制备治疗LPS诱导的HPAEC损伤的药物，实现桑辛素M-6-O-β-D-葡萄糖苷(简称SP-19-1)在制备治疗LPS诱导的HPAEC损伤药物中的应用，开拓了桑白皮的药用价值和新用途，是治疗LPS诱导的HPAEC损伤药物上的创新，有良好的经济和社会效益。